CC BY
24
ГИСТОХИМИЧЕКСИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЖЕЛТОЧНИКОВ ТРЕМАТОД, ПАРАЗИТИРУЮЩИХ В ОДНОЙ ЭНДОСТАЦИИ У РАЗНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ
Начева Л.В., Гребенщиков В.М.
ГБОУ ВПО Кемеровская государственная медицинская академия Минздрава России
Введение. Гистохимические исследования желточников трематод имеют большое значение для понимания функциональной морфологии этих гельминтов, в частности формирования яиц. Большое число яиц, вырабатываемых трематодами, связано с мощным развитием желточников, секрет которых идет на построение эмбрионов и скорлупы яиц. Ранее было установлено, что при окрашивании трематод бромфеноловым синим на белки, в желточных клетках интенсивный синий цвет проявляется в желточных гранулах, что может свидетельствовать о накоплении суммарных белков [4]. У трематод бромфенолофилия может проявляться зелёным цветом окраски желточных гранул, что указывает на наличие кислых белков [2]. При окрашивании срезов суданом чёрным «В» наблюдается разная степень суданофилии половой системы трематод, но наиболее интенсивно окрашиваются желточники разных видов трематод [1]. У трематод желточные гранулы не содержат гликогена, но между гранулами в желточных клетках определяется небольшое количество мелких точечных зерен этого полисахарида, например, у Eurytrema pancreaticum, Corrigia corigia [3] или у Azygia robusta. Постановка Шик-реакции на гликоген показала, что реактивность желточных клеток на окрашивание не одинаковая у трематод, что авторы связывают с разной стадией вителлогенеза [5].
Цель исследования. Провести гистохимические исследования желточников у трематод, паразитирующих в одной эндостации хозяина и проанализировать распределение белков, кислых мукополисахаридов и липидов в желточных фолликулах.
Материалы и методы. Материалом для исследований служили трематоды, обитающие в одной эндостации (желчные протоки печени) различных позвоночных животных. Учитывая, что эндостация - это для паразита среда первого порядка, то мы этих сосальщиков в соответствии с их паразитарной нишей в организме хозяина называем группой гепатотрематоды.
Трематоды были при вскрытии животных в разных регионах России и ближнего зарубежья. Виды набранных сосальщиков: Dicrocoelium lanceatum (Stiles et Hassall, 1896) из желчных протоков печени овец при разделке туш на мясокомбинате в г.Алма-Аты; Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884), взяты при вскрытии бродячих и больных кошек в г.Кемерово; Clonorchis sinensis (Cobbold, 1875), набраны в Хабаровском крае при вскрытии бездомных кошек; Pegosomum saginatum (Ratz, 1898), получены из печени цапли на территории Украины. Материал был обработан стандартными гистологическими и
гистохимическими методами: гематоксилином - Карацци - эозином, по Маллори, бромфеноловым синим на белки (БФС), ШИК - реакция по Мак-Манусу на гликоген и мукопротеиды с соответствующим контролем, толуидиновым синим (ТС) и альциановым синим (АС) для выявления гексозаминогликанов, окраской суданом чёрным В (СЧ) на липоидный компонент, реакция по Фёльгену на ДНК. Ферри-феррицианидный метод на 8Ы - группы по Шевремону и Фредерику.
Результаты и обсуждение. Гистохимические реакции показали, что у трематод, обитающих в желчных протоках печени, при реакции по Фёльгену на ДНК определялось интенсивное окрашивание ядер желточных клеток, что даёт возможность считать их генетически полноценными клетками. При изучении результатов окрашивания БФС было установлено, что цитоплазма желточных клеток приобретает голубой цвет, а гранулы зелёно-синий. Это указывает на наличие в желточных клетках белков, в гранах - кислые, а в цитоплазме - основные. Известно, что кислые свойства белков обусловлены преобладанием кислых аминокислот (аспарагиновая и глутаминовая). В то же время основные свойства белков обеспечиваются преобладанием в них основных аминокислот (лизин, аргинин, гистидин). Заряд белковой молекулы зависит от содержания в ней кислых и основных аминокислот, а точнее, от ионизации кислых и основных групп бокового радикала этих аминокислот. Наличие разных белков в желточных клетках трематод с одной стороны указывает на разные стадии вителлогенеза, а с другой на участие желточных гранул в формировании яиц и обеспечении в них эмбриогенеза сосальщиков. Данные о свойствах кислых и основных белков и наличии их в желточных клетках на разных стадиях развития могут дать возможность для создания антигельминтиков с новым более эффективным механизмом действия, направленного на разрушение белков и блокировку эмбриогенеза.
Отмечено, что у гепатотрематод, гликоген выявляется в паренхиме в целом, но в паренхиме, окружающей желточники, не обнаружен, тогда как желточные клетки фолликулов содержали некоторое количество мелких ШИК положительных зерен не только гликогеновой природы, но и благодаря наличию других мукополисахаридов, что подтверждалось контрольной реакцией с диастазой слюны. При этом характерное ярко-малиновое окрашивание у гепатотрематод проявлялось в стенке желточных фолликулов и ячейках паренхимы, прилежащей к ним. В связи с этим можно считать, что эти структуры содержат мукопротеиды, а это уже сложные белки, среди которых можно выделить хондромукопротеиды и гиаломукопротеиды. Присутствие последних подтверждалось при окраске с ТС. Толуидинофилия была характерна для стенки желточников, что указывает на наличие в ней гиалуроновой кислоты. Сравнивая реактивность желточников при этих способах окрашивания, можно с большей долей вероятности утверждать, что мукопротеиды в желточниках играют защитную роль.
Гистохимические реакции показали, что скорлуповые гранулы Б. 1апсваШш состоят из основных белков с 88 и БЫ- группами, выявление которых указывает на участие в процессах кератизации скорлуповой оболочки
291
яиц. Желточные фолликулы у P. saginatum наиболее интенсивно окрашиваются БФС и ТС. ШИК-реакция у пегосом проявляется неравномерной окраской желточных клеток, что, видимо, связано с разной стадией развития желточных фолликулов, а так же распределением сложных композиций из углеводов и белков. При окрашивании суданом чёрным «В» обнаружено, что липиды у гепатотрематод сосредоточены в скорлуповых гранулах желточных клеток.
Положительная фуксинофилия в желточных фолликулах у трематод, паразитирующих в желчных протоках печени, в частности в желточных клетках и их гранулах, свидетельствует о том, что следует проводить сравнительный гистохимический анализ всех методов окрашивания, чтобы выяснить распределение углеводно-белковых и липопротеиновых комплексов.
Заключение. Гистохимические исследования показали, что желточники гепатотрематод на разных стадиях вителлогенеза состоят из клеток, содержащих желточные гранулы, которые с разной силой проявляют положительные реакции на кислые и основные белки, гиаломукопротеиды, гликоген и липиды.
Литература: 1. Гребенщиков В.М., Начева Л.В. Микроморфология и гистохимия половой системы и гаметогенеза трематод в норме и при действии антигельминтиков. Кемерово, 2008. - 118 с. 2. Гребенщиков В.М., Начева Л.В., Буданцов Д.А. // В сб. «Теоретические и практические вопросы паразитологии» Кемерово - Москва, 2011.-С. 28-29. 3. Начева Л. В., Гребенщиков В.М.// Российский паразитологический журнал. -2008.- №1.-С. 19-234. 4. Начева Л. В., Гребенщиков В.М. //Российский паразитологический журнал. -2009.- №2.- С. 24-26. 5. Начева Л.В., Гребенщиков В.М., Волобаев В.П.// Сб. матер. научн.конф. «Теория и практика паразитарных болезней животных».-2013.-Вып.14. - C. 266-268.
Histochemical investigation of vitelline gland of trematodes parasitizing in one endostation in different species of animals. Nacheva L.V., Grebenshchikov V.M. Kemerovo State Medical Academy.
Summary. As a result of the provided histochemical investigation it has been shown that hepatic trematode vitelline gland being at different stages of vitellogenesis composed of cells containing yolk granules which exhibit a different level of positive response to acidic and basic proteins, hialomucoproteids, glycogen and lipids.
