CC BY
25
ХИМИЧЕСКАЯ ТЕХНОЛОГИЯ ПЕРЕРАБОТКИ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
УДК 602.4:606:663.1:579.66
Хвойные бореальной зоны. 2021. Т. XXXIX, № 3. С. 232-237
ГИДРОДИНАМИЧЕСКАЯ АКТИВАЦИЯ: МЕТОД ПРЕДОБРАБОТКИ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ДЛЯ БИОКОНВЕРСИИ
В. В. Тарнопольская, О. Н. Еременко, Н. Ю. Демиденко
Сибирский государственный университет науки и технологий имени академика М. Ф. Решетнева Российская Федерация, 660037, г. Красноярск, просп. им. газ. «Красноярский рабочий», 31
Е-mail: veronichkat@mail.ru
В работе приведены данные о составе и свойствах крупнотоннажных растительных отходов (сосновые опилки и вегетативная часть топинамбура) до и после гидродинамической активации на гидроударном роторном диспергаторе. Данный вид сырья рассматривается в качестве перспективных природных субстратов для прямой биоконверсии с использованием в качестве биологических агентов представителей различных таксономических групп, обладающих высокой целлюлолитической и лигнолитической ферментативной активностью.
Отмечается, что в составе обоих видов сырья до предобработки наибольшая доля приходится на вещества лигноуглеводной природы, однако в результате предобработки доля легкодоступных компонентов углеводной природы увеличивается на 10 %. Также, результаты исследования гранулометрического состава активированного сырья свидетельствуют о значительном измельчении частиц (преобладает фракция с размером частиц 100 мкм). Помимо изменения фракционного состава, происходят изменения в структуре самих растительных частиц: деформирование волокон, частичное разрушение клеточных стенок, что приводит к снижению упорядоченности целлюлозы и увеличению поверхности контакта сырья. При проведении ферментативного гидролиза доступность углеводного комплекса сосновых опилок и вегетативной части топинамбура действию ферментного препарата существенно увеличивается по сравнению с исходным сырьем, происходит увеличение выхода редуцирующих веществ (более 4 % для активированных сосновых опилок и более 28 % для активированной вегетативной части топинамбура) в процессе ферментолиза.
Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о значительных изменениях в составе лигноугле-водного комплекса активированных материалов и, как следствие, повышении их биодоступности, что подтверждает целесообразность проведения гидродинамической активации растительного сырья в качестве предобработки для последующей прямой биоконверсии.
Ключевые слова: гидродинамическая активация, сосновые опилки, вегетативная часть топинамбура, лиг-ноуглеводный комплекс, предобработка, биоконверсия.
Conifers of the boreal area. 2021, Vol. XXXIX I, No. 3, P. 232-237
HYDRODYNAMIC ACTIVATION: A METHOD OF PLANT RAW MATERIAL PRETREATMENT FOR BIOCONVERSION
V. V. Tarnopol'skaya, O. N. Eryomenko, N. Yu. Demidenko
Reshetnev Siberian State University of Science and Technology 31, Krasnoyarskii rabochii prospekt, Krasnoyarsk, 660037, Russian Federation Е-mail: veronichkat@mail.ru
This paper presents experimental data on composition and properties of bulk plant waste (pine sawdust and vegetative part of Jerusalem artichoke) before and after hydrodynamic activation in water hummer rotary dispenser. This type of raw material is considered as promising natural substrate for direct bioconversion using representatives of various taxonomic groups with high cellulolytic and lignolytic enzymatic activity as biological agents.
It is noted that in the composition of both types of raw materials before pretreatment, the largest share falls on substances of a ligno-carbohydrate nature, however, as a result of pretreatment, the share of readily available components of carbohydrate nature increases by 10 %. Also, the results of granulometric composition study of the activated raw materials indicate a significant grinding of particles (the fraction with 100 ¡m particle size prevails). In addition to changes in the fractional composition, changes occur in the structure of plant particles themselves: both
deformation of fibers and partial destruction of cell walls lead to a decrease in the ordering of cellulose and simultaneous increase of the contact surface of the raw material. During enzymatic hydrolysis, the availability of the carbohydrate complex of pine sawdust and the vegetative part of Jerusalem artichoke to the action of the enzyme preparations significantly increases compared to the initial raw material, an increase in the yield of reducing substances occurs (more than 4 % for activated pine sawdust and more than 28% for the activated vegetative part of Jerusalem artichoke).
The data obtained show significant changes in ligno-carbohydrate complex of activated materials and consequent increase in their bioavailability, thus proving advisability of hydrodynamic activation of plant raw material as pretreatment step for further direct bioconversion. Lingo-carbohydrate.
Keywords: hydrodynamic activation, pine sawdust, vegetative part of Jerusalem artichoke, ligno- carbohydrate complex, bioconversion.
ВВЕДЕНИЕ
Перспектива прямой биоконверсии растительного сырья открывает широкие возможности для его полезного использования в производстве белковых продуктов, кормопроизводстве, производстве ферментных и биопрепаратов и др. В основе процесса микробиологической переработки растительного сырья, наряду с трансформацией структуры и состава исходного субстрата, лежит конверсия его компонентов культурами - продуцентами, сопровождающаяся значительным приростом биомассы продуцента и выделением им ряда биологически активных веществ.
Площадь лесного фонда Красноярского края составляет 168,1 млн га. Леса покрывают 69 % территории. Запасы промышленной древесины оцениваются в 14,4 млрд м3, что составляет 18 % общероссийских запасов древесины. Леса края на 88 % состоят из хвойных пород. Несмотря на развитие, лесная промышленность признается малоэффективной по управлению отходами: из общего количества образующихся в результате переработки остатков древесины используется вторично только 15 % [1].
Крупнотоннажными растительными отходами, ежегодно образующимися на территории Красноярского края, являются опилки хвойных древесных растений, среди которых значительная доля традиционно приходится на опилки сосны [2]. Не менее актуальна задача рационального использования сельскохозяйственных отходов растительного происхождения, которые по своей сути представляют собой возобновляемый ресурс промышленной биотехнологии. В этой связи интерес представляет вегетативная часть топинамбура, как культуры, повсеместно произрастающей не только на территории края, но и соседних регионов, дающей высокий урожай зеленой биомассы. Биомасса топинамбура может служить сырьем для использования не только в сельскохозяйственных целях как кормовая культура, но и для промышленной биотехнологии [3].
Следует отметить, что реакционная способность исходных природных целлюлозосодержащих материалов относительно невысока, поэтому одним из необходимых условий подготовки растительного сырья к биодеградации является увеличение его удельной поверхности, наряду с трансформацией микрофибриллярной структуры целлюлозы. Для решения этой задачи в технологии биоконверсии целесообразно использовать эффективную подготовку растительного сырья на предферментационной стадии, повы-
шающую доступность его лигноцеллюлозного комплекса действию ферментативной системы продуцента, увеличивающую степень утилизации сырья и выход продукта, а также сокращающую продолжительность конверсии [1].
В ряде работ [4-6] отмечается, что одним из эффективных способов предварительной подготовки сырья является механическое измельчение, при котором достигается уменьшение размера частиц, приводящее к увеличению удельной поверхности субстрата. Однако в настоящее время для более тонкого измельчения различных видов сырья активно применяются установки гидродинамического размола и кавитаци-онного воздействия [6-10]. Данный процесс можно использовать, как ключевой фактор усовершенствования процесса размола. Кавитация (холодное кипение) - явление образования паровых каверн в жидкости при достаточном понижении давления, развития и последующего их замыкания при повышении давления. От обычного кипения кавитация отличается тем, что при ней процесс предопределяется изменением давления вне каверны, а при кипении давление растет внутри каверны [11]. Установки гидродинамического размола могут быть использованы для обработки различных лигноцеллюлозных материалов. Можно ожидать, что предобработка растительного сырья на такой установке будет оказывать не только размалывающее действие, но также изменять структуру и свойства обрабатываемых материалов. Необходимым условием эффективной биотрансформации является контакт между ферментной системой организма-продуцента и увеличенной удельной поверхностью субстрата, следовательно, применение подобного рода предобработки растительного сырья на предфер-ментационной стадии биотехнологического производства можно рассматривать как активацию сырья для дальнейшей биоконверсии [1].
Целью данной работы явилось исследование состава и свойств растительного сырья (сосновые опилки, вегетативная часть топинамбура) до и после гидродинамической активации и установление его пригодности для биоконверсии.
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ
ИССЛЕДОВАНИЯ
В работе использовали воздушно-сухие сосновые опилки с размером частиц 1-5 мм и вегетативная часть топинамбура, собранная в конце периода вегетации (сентябрь 2014 и 2015 гг.) в пригородной зоне
г. Красноярска, измельченная на механической мельнице, с размером частиц до 10 мм.
Гидродинамическую активацию (обработку) растительного сырья проводили на кавитационном гидроударном диспергаторе: радиус ротора 277 мм, частота вращения 3000 об/мин, производительность 25 м3/ч, в водной среде в течение 30 мин, содержание сухих веществ в суспензии - до 10 % по массе [12]. Для определения фракционного состава и размера частиц исходного сырья применяли набор сит с диаметром отверстий от 1 до 5 мм; для аналогичного исследования гидродинамически активированного сырья - аналитическую просеивающую машину Retsch AS 200 control (Германия) с диапазоном измерения от 20 мкм до 2 мм [1].
Ферментативный гидролиз растительного сырья (сосновых опилок и вегетативной части топинамбура) проводили препаратом «Брюзайм BGX» (компания «Русфермент», Россия) в течение трех суток при температуре 45-55 оС и рН 5,0, концентрации сухих веществ 15 г/л, расход фермента - 0,5 мл/г а.с.м. [1].
Статистическую обработку данных выполняли с использованием программы MS Excel. В работе приведены средние арифметические значения пяти аналитических повторностей экспериментов. Оценка значимости различий проведена сравнением средних значений по критерию Стьюдента при доверительной вероятности P = 0,95.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Для оценки воздействия гидродинамической активации на свойства сосновых опилок и вегетативной части топинамбура был исследован химический состав исходного сырья, а также сырья после предобработки на кавитационном гидродинамическом диспер-гаторе в течение 30 мин при содержании сухого вещества 10 % по массе.
Результаты исследования химического состава различных видов сырья приведены в табл. 1.
Анализируя данные таблицы, можно отметить, что в составе обоих видов сырья до предобработки наибольшая доля приходится на вещества лигноуглевод-ной природы. Однако в составе лигноуглеводных комплексов наблюдаются существенные различия: в сосновых опилках доминируют трудногидролизуемые полисахариды и лигнин, их общая доля достигает 70 %; в вегетативной части топинамбура эти компоненты также преобладают, но их суммарное содержание на 25 % ниже. Совокупное содержание легкодоступных углеводов - моносахаридов и легкогидролизуемых полисахаридов - у топинамбура почти вдвое превышает таковое в сосновых опилках.
После гидродинамической активации исходное сырье претерпевает существенные изменения: в сосновых опилках содержание легкогидролизуемых полисахаридов повышается на 7 % от исходного, а в вегетативной части топинамбура - почти на 10 %. Столь значительное увеличение, вероятно, связано с частичным разрушением волокон целлюлозы, в первую очередь, более лабильной аморфной ее части, под воздействием кавитации [1]. Это предположение подтверждается соответствующим снижением содержа-
ния трудногидролизуемых полисахаридов: в активированных опилках до 8 %, в топинамбуре - на 6 %, по сравнению с исходным сырьем. Заметно уменьшение содержания водорастворимых веществ, в частности, содержание моносахаридов уменьшается до ничтожно малого уровня. При этом доля лигнина в составе пре-добработанного сырья возрастает на 5-7 %. Это связано с экстракцией водорастворимых веществ, протекающей непосредственно в процессе гидродинамической активации, и переходе их в водную часть суспензии [1].
Таким образом, полученные экспериментальные данные свидетельствуют о качественных изменениях в составе лигноуглеводного комплекса обоих видов растительного сырья в результате гидродинамической активации. Очевидно, что при использовании сосновых опилок и вегетативной части топинамбура в качестве субстратов для прямой биоконверсии, целесообразно проведение такой предобработки сырья в целях повышения его биодоступности, а, следовательно, и глубины конверсии биологическими агентами, относящимися к различным таксономическим группам (бактерии, микро- и макроскопические грибы).
На следующем этапе работы был исследован фракционный состав активированного сырья. Результаты экспериментов приведены в табл. 2.
Из данных табл. 2 видно, что в исходных сосновых опилках преобладает крупная (с размером частиц более 2 мм) фракция, в то время как в вегетативной части топинамбура - средняя (с размером частиц 1-2 мм).
Анализируя результаты, полученные после гидродинамической обработки сырья, необходимо отметить, что у сосновых опилок наибольшую долю в общей массе составляет фракция, проходящая через сито с размером ячейки 100 мкм. У вегетативной части топинамбура распределение частиц по фракциям имело аналогичный характер, однако доля самой крупной фракции (100 мкм) несколько выше, чем у сосновых опилок.
Очевидно, что столь значимое уменьшение размеров частиц в ходе гидродинамической обработки носит благоприятный характер для дальнейшей биоконверсии.
Помимо изменения фракционного состава, были отмечены изменения в структуре самих растительных частиц: деформирование волокон, частичное разрушение клеточных стенок, что приводит к снижению упорядоченности целлюлозы и увеличению поверхности контакта сырья [6; 10]. Очевидно, что мелко измельченное, разволокненное растительное сырье с увеличенной удельной поверхностью может более эффективно участвовать в процессах микробиологической переработки [1].
Таким образом, к достоинствам гидродинамического метода предобработки растительного сырья стоит отнести увеличение активной поверхности за счет существенного уменьшения размеров растительных частиц (до 20-100 мкм), значительного разволок-нения частиц при увеличении доли легкогидролизуе-мых полисахаридов за счет частичной деградации трудногидролизуемой целлюлозы.
Для подтверждения эффективности гидродинамической активации растительного сырья с точки зрения доступности фрагментов макромолекул полисахаридов мультиферментному комплексу биологических агентов, используемых в процессах биоконверсии, было проведена оценка действия ферментного препа-
Таблица 1
Химический состав растительного сырья
Наименование Содержание, % от а.с.м. сырья
показателя опилки опилки топинамбур топинамбур
исходные активированные исходный активированный
РВ, в том числе: 9,40 6,40 23,10 16,46
моносахариды 0,59 0,15 9,01 0,70
ЛГП 14,20 21,12 18,69 28,26
ТГП 40,20 31,96 26,32 20,36
Лигнин 32,10 35,10 18,91 22,29
Белок - - 3,61 3,24
Зола 3,42 3,20 3,07 3,02
Перевариваемость 21,85 25,60 33,68 39,82
Примечание. Приведены средние результаты трех параллельных экспериментов, относительная стандартная ошибка опыта не превышала 5 %.
Таблица 2
Фракционный состав растительного сырья до и после гидродинамической активации
Разделение исходного сырья ситовым методом
фракция, мм опилки исходные, % топинамбур исходный, %
0-1 12,00 16,50
1-2 35,50 58,25
более 2 52,50 25,25
Разделение гидродинамически активированного сырья на ситовой машине Retsch AS 200 control
ячейка сетки, мкм опилки активированные, % топинамбур активированный, %
100 70,34 82,67
80 1,59 2,64
63 4,66 1,63
40 4,53 1,35
20 3,92 2,17
менее 20 14,95 9,54
Примечание. Приведены средние результаты трех параллельных экспериментов, относительная стандартная ошибка опыта не превышала 5 %.
Таблица 3
Изменение содержания редуцирующих веществ в растворе в процессе ферментативного гидролиза
Продолжительность Содержание, % от а.с.м. сырья
процесса, ч опилки исходные опилки активированные топинамбур исходный топинамбур активированный
0 0,59 0,35 9,01 5,70
24 1,02 1,16 11,72 16,12
48 2,38 3,04 12,25 19,38
72 3,12 4,18 13,14 28,40
Примечание. Приведены средние результаты трех параллельных экспериментов, относительная стандартная ошибка опыта не превышала 5 %.
рата «Брюзайм БвХ» (продукция компании «Русфер-мент»), способного комплексно разрушать целлюлозы и гемицеллюлозы, на углеводный комплекс предобра-ботанного сырья.
Результаты исследования представлены в табл. 3.
Результаты эксперимента убедительно доказывают эффективность гидродинамической активации растительного сырья; это наглядно демонстрирует увеличение выхода редуцирующих веществ (более 4 % для активированных сосновых опилок и более 28 % для активированной вегетативной части топинамбура) в процессе ферментолиза. Необходимо отметить, что доступность углеводного комплекса сосновых опилок и вегетативной части топинамбура действию ферментного препарата существенно увеличивается по сравнению с исходным сырьем.
Таким образом, проведение активирующей гидродинамической предобработки в установке кавитаци-онного воздействия значительно повышает потенциал сосновых опилок и вегетативной части топинамбура для использования в качестве субстрата в процессах прямой биоконверсии. Данный вид воздействия существенно повышает биодоступность компонентов субстрата действию ферментативной системы биологического агента, и, следовательно, глубину биоконверсии.
ВЫВОДЫ
Проведенные экспериментальные исследования убедительно свидетельствуют о целесообразности применения гидродинамической активации растительного сырья в качестве предобработки для последующей прямой биоконверсии. Данный метод может быть рекомендован для широкого применения на биотехнологических производствах при подготовке растительных отходов к переработке.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Тарнопольская, В. В. Технология микробиологической переработки растительного сырья с использованием культур Pleurotus для получения кормовых продуктов : дис. ... канд. техн. наук : 05.21.03 / Тарнопольская Вероника Валентиновна. Красноярск, 2016. 157 с.
2. Матвеева, Р. Н. Интеграция исследований Сиб-ГТУ и ИЛ СО РАН по изучению биоразнообразия основных лесообразующих видов Сибири / Р. Н. Матвеева, Л И. Милютина, О. Ф. Буторова // Интеграция фундаментальной науки и высшего лесотехнического образования по проблемам ускоренного воспроизводства, использования и модификации древесины. Воронеж : ВГЛТА, 2000. Т. 1. С. 265-269.
3. Ковалев, А. А. Комплексная переработка топинамбура с получением биоэтанола/ А. А. Ковалев, Т. В. Рязанова, Н. А. Чупрова; Сиб. гос. технол. ун-т // Решетневские чтения: материалы XX юбилейной Международной конференции научно-практической конференции. Красноярск: СибГАУ, 2016. Ч. 2. С. 312-313.
4. Панфилов, В. И. Биотехнологическая конверсия углеводсодержащего растительного сырья для получения продуктов пищевого и кормового назначения : дисс. ... д-ра техн. наук : 03.00.23 / Панфилов Виктор Иванович. М., 2004. 359 с.
5. Hu, F. Pretreatment and lignocellulosic chemistry / F. Hu, A. Ragauskas // Bioengineering Resources. - 2012. № 5. P. 1043-1066.
6. Алашкевич, Ю. Д. Гидродинамические явления при безножевой обработке волокнистых материалов, Красноярск. 2004. 80 с.
7. Баяндин, М. А. Влияние механоактивации на аутогезионные свойства древесины / М. А. Баяндин, В. Н. Ермолин, С. Г. Елисеев // Хвойные бореальной зоны. 2013. Т. 31, № 1-2. С. 159-163.
8. Марченко, Р. А. Сравнительная оценка показателей размола при ножевом и безножевом способах / Р. А. Марченко, Ю. Д. Алашкевич, Н. С. Решетова // Химия растительного сырья. 2012. № 1. С. 191-198.
9. Катраков, И. Б. Получение пресс-масс и плитных материалов на основ кавитированного растительного сырья / И. Б. Катраков, В. И. Маркин, Н. Г. Базарнова // Известия АлтГУ. 2014. Т. 1. № 3. С. 204-208.
10. Изменение химического состава древесины при механохимической обработке/ И. В. Микушина [и др.] //Химия в интересах устойчивого развития. 2002. Т. 10, № 4. С. 443-447.
11. Мохирев, А.П. Анализ процесса гидроиднами-ческого воздействия на сырье из отходов лесозаготовок при получении древесной массы / А.П. Мохирев, М. А. Зырянов, Е.В. Булаев // Universum: Технические науки. Москва, 2019. №11(68). С. 67-69.
12. Кавитационный гидроударный диспергатор : пат. 138045 Рос. Федерация : МПК В06В1/00 / В. Г. Мозговой; заявитель и патентообладатель Мозговой В. Г. № 2013148691/28; заявл. 31.10.2013; опубл. 27.02.2014, Бюлл. № 6.
REFERENCE
1. Tarnopol'skaya, V. V. Tekhnologiya mikrobiologicheskoy pererabotki rastitel'nogo syr'ya s ispol'zovaniyem kul'tur Pleurotus dlya polucheniya kormovykh produktov : diss. ... kand. tekhn. nauk : 05.21.03 / Tarnopol'skaya Veronika Valentinovna. Krasnoyarsk, 2016. 157 с.
2. Matveyeva, R. N. Integratsiya issledovaniy SibGTU i IL SO RAN po izucheniyu bioraznoobraziya osnovnykh lesoobrazuyushchikh vidov Sibiri / R. N. Matveyeva, L I. Milyutina, O. F. Butorova // Integratsiya fundamental'noy nauki i vysshego lesotekhnicheskogo obrazovaniya po problemam uskorennogo vosproizvodstva, ispol'zovaniya i modifikatsii drevesiny. - Voronezh: VGLTA, 2000. Vol. 1. P. 265-269.
3. Kovalev, A, A. Kompleksnaya pererabotka topinambura s polucheniyem bioetanola / A.A. Kovalev, T. V. Ryazanova, N. A. Chuprova; Sib. gos. tekhnol. un-t // Reshetnevskiye chteniya: materialy XX yubileynoy konferentsii nauchno-prakticheskoy konferentsii. -Krasnoyarsk: SibGAU, 2016. P. 2. P. 312-313.
4. Panfilov, V. I. Biotekhnologicheskaya konversiya uglevodsoderzhashchego rastitel'nogo syr'ya dlya polucheniya produktov pishchevogo i pishchevogo naznacheniya: diss. ... d-ra tekhn. nauk: 03.00.23 / Panfilov Viktor Ivanovich. M., 2004. 359 p.
5. Hu, F. Pretreatment and lignocellulosic chemistry / F. Hu, A. Ragauskas // Bioengineering Resources. 2012. № 5. P. 1043-1066.
6. Alashkevich, Yu. D. Gidrodinamicheskiye yavleniya pri beznozhevoy obrabotke voloknistykh materialov, Krasnoyarsk. 2004. 80 p.
7. Bayandin, M. A. Vliyaniye mekhanoaktivatsii na autogezionnyye svoystva drevesiny / M. A. Bayandin, V. N. Yermolin, S. G. Yeliseyev // Khvoynyye boreal'noy zony. 2013. Vol. 31 № 1-2. P. 159-163.
8. Marchenko, R. A. Sravnitel'naya otsenka pokazateley razmola pri nozhevom i beznozhevom sposobakh / R. A. Marchenko, Yu. D. Alashkevich, N. S. Reshetova // Khimiya rastitel'nogo syr'ya. 2012. № 1. P. 191-198.
9. Katrakov, I. B. Polucheniye press-mass i plitnykh materialov na osnove kavitirovannogo rastitel'nogo syr'ya / I. B. Katrakov, V. I. Markin, N. G. Bazarnova // Izvestiya AltGU. 2014. Vol. 1, № 3. P. 204-208.
10. Izmeneniye khimicheskogo sostava drevesiny pri mekhanokhimicheskoy obrabotke / I. V. Mikushina [i dr.]
// Khimiya v ustoychivom razvitii. 2002. Vol.10, № 4. P. 443-447.
11. Mokhirev, A.P. Analiz protsessa gidroidnamiches-kogo vozdeystviya na syr'ye iz otkhodov lesozagotovok pri poluchenii drevesnoy massy / A.P. Mokhirev, M. A. Zyryanov, Ye.V. Bulayev // Universum: Tekhni-cheskiye nauki. Moskva, 2019. № 11 (68). P. 67-69.
12. Kavitatsionnyy gidroudarnyy dispergator: pat. 138045 Ros. Federatsiya: MPK V06V1 / 00 / V. G. Moz-govoy; zayavitel' i patentoobladatel' Mozgovoy V. G. № 2013148691/28; zayavl. 31.10.2013; opubl. 27.02.2014, Bull. № 6.
© Тарнопольская В. В., Еременко О. Н., Демиденко Н. Ю., 2021
Поступила в редакцию 16.03.2021 Принята к печати 19.07.2021
