CC BY
36
УДК 615.32.-092:616.61
А.О. Занданов Т.А. Ажунова 2, А.И. Бартанов 3
ГЕПАТОЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «МАНУ-ШИ-ТАН»
1 Бурятский государственный университет, Улан-Удэ
2 Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, Улан-Удэ
3 Центр восточной медицины, Улан-Удэ
Биологически активные вещества, содержащиеся в комплексном растительном средстве, улучшают барьерную функцию биомембран, препятствуют, развитию синдромов цитолиза и. холестаза. Изученное растительное средство предупреждает, гистоэнзимологические нарушения в гепатоцитах, что обусловлено его антиоксидантним, и. антинекротическим действием..
Ключевые слова: гепатит, антиоксидантное и антинекротическое действие, цитолиз, холестаз
HEPATOPROTECTIVE EFFECT OF A PLANT REMEDY «MANU-SHI-TAN»
A.O. Zandanov 1, T.A. Azhunova 2, A.I. Bartanov 3
1 Buryat State University, Ulan-Ude
2 Institute of General and Experimental Biology, SB RAS, Ulan-Ude
3 Center of Oriental Medicine, Ulan-Ude
Biologically active substances from the complex plant remedy improve the barrier function of biomembranes, prevent the development of cytolysis and holestasis. The remedy also prevents hystoenzymologic distortions in hepatocytes which, are explained, by its antioxidative and antinecrotic activity.
Key words: hepatitis, antioxidative and antinecrotic activity, cytolysis, holestasis
В настоящее время в Российской Федерации болезни органов пищеварения занимают третье место по распространенности среди основных классов болезней сразу после болезней органов дыхания и системы кровообращения [2, 4]. В последние три года заболеваемость вирусными гепатитами (ВГ) в России составляет 18,1—21,9 случая на 100 тыс. населения. Однако регистрируемая заболеваемость составляет только часть истинной, т. к. не диагностируются безжелтушные формы ВГ, которые в 5 — 6 раз превышают число желтушных. При этом болезни желчного пузыря и желчевыводящих путей (холецистит, желчнокаменная болезнь, билиарная дисфункция) являются одними из наиболее распространенных заболеваний органов пищеварения: их частота колеблется от 26,6 до 45,5 случаев на 1000 населения [7]. Ухудшение экологической ситуации, химизация народного хозяйства и быта обусловливают токсические и аллергические повреждения печени, в патогенезе которых немаловажную роль имеют и лекарственные средства, в особенности у больных с хроническими заболеваниями. Кроме того, 10 — 15 % осложнений медикаментозной терапии составляют гепатиты, клинически проявляясь чаще холестатическими повреждениями печени [11]. К этому следует добавить, что любая тяжелая экзоагрессия, проявляющаяся инфекционным, химическим или другим воздействием на организм, сопровождается нарушением функций печени и билиарной системы. Несмотря на достижения современной органической химии, биотехнологии, которые обеспечивает нас все большим количеством синтетических лекарственных препаратов, доля медикаментов растительного происхождения
на фармацевтических рынках развитых стран достигает в настоящее время 50 % [10]. В то же время, к настоящему времени фармакологическая активность исследована только у 15 % растений, растущих на Земле [9]. В связи с этим, возрастает актуальность поиска новых лекарственных препаратов, обладающих гепатопротекторными свойствами, в частности, фитопрепаратов, которые имеют широкий диапазон действия и обладают такими важными преимуществами, как малая токсичность, высокая эффективность, доступность, взаимозаменяемость и возможность длительного применения без побочных проявлений. При применении фитопрепаратов действует целый комплекс биологически активных веществ, которые находятся в оптимальных сочетаниях, что обеспечивает благотворное влияние на все системы и функции организма.
В Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН получено новое гепатозащитное средство, включающее корни и корневища девясила высокого (Inula helenium L.), корни софоры желтоватой (Sophora flavescens Soland.), корни и корневища имбиря лекарственного (Zingiber officinalis Roskol.) и цветки бузины сибирской (Sambucus sibirica Nakai) — «ману-ши-тан».
Цель исследования — определить фармако-терапевтическую эффективность комплексного растительного средства «ману-ши-тан» при экспериментальном тетрахлорметановом гепатите.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Опыты проведены на крысах линии Wistar с исходной массой 160—170 г. Острый токсический
гепатит вызывали у крыс путем введения четыреххлористого углерода (СС14, тетрахлорметан) в виде 50% (V\V) масляного раствора при подкожном введении — в объеме 4,0 мл/кг массы (четырехкратно, 1 раз в сутки) [5]. Содержание животных и проведение экспериментальных исследований осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (Страсбург, 1986).
Отвар многокомпонентного растительного средства «ману-ши-тан» готовили по требованиям Государственной фармакопеи Х1 издания и вводили внутрижелудочно в объеме 10 мл/кг 1 раз в сутки в течение 21 дня. Исследования проводили через 7 и 14 суток от начала эксперимента.
Содержание МДА в сыворотке крови определяли при использовании 2-тиобарбитуровой кислоты [8]. Активность индикаторных ферментов цитолитического синдрома — аланинаминотранс-феразы (АлТ) и аспартатаминотрансферазы (АсТ), экскреционного фермента — маркера холеста-за — щелочной фосфатазы (ЩФ); концентрацию Р-липопротеидов и общего, прямого и непрямого билирубина, холестерина, общего белка в сыво-
ротке крови определяли с использованием стандартных наборов реактивов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск).
Для оценки морфофункционального состояния печени подопытных животных использовали ряд гистологических, гистоэнзимологических и гистохимических методов [3]. Для суждения о влиянии растительных средств на репаративную регенерацию печени после токсического повреждения печени исследовалась митотическая активность гепатоцитов (митотический индекс), количество двуядерных и гипертрофированных печеночных клеток [1].
Полученные данные обработаны статистически с использованием критерия Манна-Уитни [6]. Различия считали достоверными при Р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
У животных опытной группы, получавших отвар «ма-ну-ши-тан» уже через 7 суток наблюдали достоверное снижение уровня активностей маркерных ферментов синдрома цитолиза, а также снижение активности щелочной фосфатазы на 32, 28 и 28 % соответственно по сравнению с показателями у животных контрольной группы (табл. 1).
Таблица 1
Влияние растительного средства «ма-ну-ши-тан» на биохимические показатели сыворотки крови крыс при остром гепатите, вызванном тетрахлорметаном
Показатели Группы животных
Интактная Контрольная (СС14) Опытная (СС14 + «ма-ну-ши-тан»)
7 сутки
Общий белок, г/л 7,43±0,48 4,80± 0,10 6,20± 0,07*
Тимоловая проба,ед. 1,85± 0,19 4,56± 0,40 2,70± 0,20*
АлТ, ед/л 59,30± 4,30 199,00± 9,25 96,00± 8,96*
АсТ, ед/л 139,00± 10,30 296,00± 10,10 216,00± 2,02*
Холестерин, мМ/л 1,40± 0,09 2,58± 0,24 1,53± 0,10*
Щелочная фосфатаза, ед/л 137,00± 10,80 518,00± 48,40 374,00± 3,50*
Общий билирубин, мМ/л 5,15± 0,50 16,40± 1,10 11,20± 1,20*
Прямой билирубин, мМ/л 1,88± 0,11 6,38± 0,40 4,18± 0,30*
Непрямой билирубин, мМ/л 3,72± 0,39 10,70± 1,00 7,12± 0,60*
в - липопротеиды, усл. ед. 0,97± 0,02 1,68± 0,04 1,17± 0,02
14 сутки
Общий белок, г/л 7,43±0,48 4,80± 0,40 7,00± 0,07*
Тимоловая проба, ед. 1,85± 0,19 4,06± 0,12 2,10± 0,15*
АлТ, ед/л 59,30± 4,30 88,30± 2,60 69,70± 1,80*
АсТ, ед/л 139,00± 10,30 168,50± 9,40 125,00± 5,80*
Холестерин, мМ/л 1,40± 0,09 3,05± 0,29 1,82± 0,14*
Щелочная фосфатаза, ед/л 137,00± 10,80 .303,00± 16,00 180,90± 17,80*
Общий билирубин, мМ/л 5,15± 0,50 10,50± 1,50 7,51± 0,60*
Прямой билирубин, мМ/л 1,88± 0,11 3,18± 0,37 2,04± 0,10*
р-липопротеиды, усл. ед. 0,97± 0,02 1,38± 0,37 0,87± 0,02*
Примечание: * - здесь и далее разница достоверна по сравнению с контролем при Р < 0,05.
Наряду с этим, снижение содержания общего, прямого и непрямого билирубина в сыворотке крови (на 22, 35 и 34 % соответственно) также свидетельствовало, что «ма-ну-ши-тан» способствует предупреждению развития холестаза в поврежденном органе. «Ма-ну-ши-тан» способствовал нормализации белкового и липидного обмена. Результаты исследований по влиянию отвара «ма-ну-ши-тан» на содержание малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови крыс с токсическим гепатитом представлены в таблице 2. Как следует из таблицы
2, «ма-ну-ши-тан» достоверно снижал содержание МДА в сыворотке крови через 14 суток — на 48 % по сравнению с данными в контроле. При патоморфологическом исследовании печени животных, получавших отвар «ма-ну-ши-тан», на 7 сутки эксперимента отмечали преобладание количества гепатоцитов с явлениями белковой (зернистой) дистрофии. В некротизированных участках печени выявлялись отдельные зерна липофусцина, однако такие участки с зернами липофусцина выявлялись реже, чем в контроле, а также в меньшей степени была выражена клеточная инфильтрация. Через 14 суток от начала эксперимента отмечалась умеренно выраженная клеточная инфильтрация, которая располагалась преимущественно по ходу сосудов и в области триад, тогда как в печени контрольных крыс клеточные инфильтраты располагались по всей дольке по ходу синусов. Также уменьшалось по сравнению с контролем количество очажков с гидропической дистрофией гепатоцитов.
При курсовом введении крысам отвара «ма-ну-шит-ан» происходило повышение содержания общего белка в сыворотке крови соответственно срокам исследования на 29 и 45 % по сравнению с данными в контроле; как следует из таблицы 1,
показатели тимоловой пробы, которые отражают степень диспротеинемии, также снижались при введении испытуемого средства. При гистохимическом исследовании печени крыс, получавших тетрахлорметан и указанный отвар растительного средства, наблюдали повышение содержания гликогена в печени, который выявлялся чаще в виде овальных гранул, заполнявших печеночные клетки, а в печени животных, которым вводили только тетрахлорметан, гликоген выявлялся в виде хлопьев, конгломератов неправильной формы или в пылевидном состоянии. При введении крысам только тетрахлорметана наблюдалось значительное накопление нейтральных жиров в клетках печени; а при введении отвара «ма-ну-ши-тан» на фоне острого токсического гепатита жировая инфильтрация органа проявлялась в виде капель средних и мелких размеров, в то время как в печени животных контрольной группы крупные капли жира сливались в вакуоли и заполняли практически все дольки печени. При изучении влияния отвара «ма-ну-ши-тан» на течение репаративной регенерации печени крыс при остром СС14- гепатите по цито-фотометрическим показателям было установлено, что на 7 сутки наблюдения в печени животных, получавших испытуемое средство на фоне тетрах-лорметанового гепатита, количество диплоидных клеток (2п) составляло 28,6 %, тогда как у крыс контрольной группы оно соответствовало 36,6 %. При этом количество тетраплоидных клеток (4п) в группе животных, получавших «ма-ну-ши-тан», составляло 20,0 %, что почти в 4 раза превышало их количество в контроле (4,6 %) (табл. 3)
Наблюдали также увеличение количества клеток, содержащих октоплоидное число (8п) ДНК, в печени крыс опытной группы. В этот же
Таблица 2
Влияние растительного средства «ма-ну-ши-тан» на содержание малонового диальдегида (мкМ/мл мин)
в сыворотке крови крыс при остром СС14-гепатите
Группы животных Сроки исследования, сутки
7 14
Интактная 2,04 ± 0,10 -
Контрольная (СС14) 3,06 ± 0,30 3,84 ± 0,38
Опытная (СС14 + «ма-ну-ши-тан») 2,46 ± 0,21* 2,01 ± 0,22*
Таблица 3
Влияние растительного средства «ма-ну-ши-тан» на распределение ядер гепатоцитов по классам плоидности
(%) в печени крыс при остром СС14-гепатите
Сроки исследования, сутки Группы животных Плоидность
7 п^2п 2п 2п^4п 4п 4п^8п 8п 8п^16п 16п
Контрольная (СС14) 18,6 36,6 30,0 4,6 3,3 - - -
Опытная (СС14+ «ману-ши-тан») 16,0 28,6 20,6 20,0 10,6 1,0 1,0 -
14 Контрольная (СС14) 22,0 31,3 31,3 9,3 3,3 2,7 - -
Опытная (СС14+ «ману-ши-тан») 18,0 22,7 28,7 16,7 9,3 4,7 - -
Таблица 4
Влияние растительного средства «ма-ну-ши-тан» на показатели регенерации в печени крыс по плоидности
ядер и содержанию ДНК при остром СС14-гепатите
Группы животных Сроки исследования, сутки
7 14
Содержание ДНК в ядрах гепатоцитов (отн. ед.)
Контрольная (СС14) 11,95 ± 0,22 16,91 ± 0,50
Опытная (СС14 + «ма-ну-ши-тан») 15,18 ± 0,32* 17,65 ± 0,33
Количество пролиферирующих гепатоцитов (%)
Контрольная (СС14) 33,3 34,6
Опытная (СС14 + «ма-ну-ши-тан») 32,2 38,0
Количество полиплоидных гепатоцитов (%)
Контрольная (СС14) 4,6 12,0
Опытная (СС14 + «ма-ну-ши-тан») 21,0 21,6
срок наблюдения в печени крыс, получавших исследуемое фитосредство, отмечалось повышение содержания ДНК в гепатоцитах на 27 % по сравнению с контролем (табл. 4). Таким образом, к 7 и 14 суткам исследования клетки печени опытной и контрольной групп были представлены классами плоидности от 2п до 8п. При этом распределение ядер гепатоцитов у крыс, получавших «ма-ну-ши-тан», было сдвинуто вправо благодаря меньшему содержанию диплоидных клеток (2п), повышению процента ядер, принадлежащих к тетраплоидному классу (4п) и появлению гепатоцитов с плоид-ностью 8п. Выявленное на 7 сутки наблюдения увеличение суммарного количества гепатоцитов с плоидностью 4п и 8п у крыс, получавших отвар испытуемого средства, может свидетельствовать о стимуляции процессов репаративной регенерации печени при СС14-гепатите.
Таким образом, анализ показателей репаративной регенерации печени крыс после ее токсического повреждения свидетельствует, что повышение уровней полиплоидизации и пролиферации гепатоцитов, увеличение общего содержания ДНК в клетках печени крыс, получавших «ма-ну-ши-тан», способствует ускорению морфофункционального восстановления печени, так как известно, что полиплоидная клетка в виду особенностей своего образования обладает высокой функциональной активностью. Растительное средство оказывает благоприятное действие на течение воспалительного процесса при остром токсическом СС14-гепатите, а также стимулирует регенераторные процессы в печени. Указанное средство предупреждает развитие экссудативных процессов в печени при экспериментальном токсическом гепатите, на фоне его введения происходит более быстрое нивелирование отечных и дистрофических изменений, обусловливает снижение выраженности жировой инфильтрации печени. Курсовое назначение испытуемого растительного средства предупреждает развитие признаков цитолитического и холестати-ческого синдромов. Кроме того, отвар «ма-ну-ши-
тан» стимулирует белковосинтетическую функцию печени, предупреждает развитие мезенхимальновоспалительной реакции, повышает содержание гликогена в печени. «Ма-ну-ши-тан» стимулирует образование гипертрофированных и двуядерных гепатоцитов, повышает содержание ДНК в печени крыс с токсическим гепатитом.
По всей видимости, биологически активные вещества, содержащиеся в комплексном растительном средстве, улучшают барьерную функцию биомембран, препятствуют развитию синдромо-цитолиза и холестаза. Наряду с этим, изученное растительное средство предупреждает гистоэн-зимологические нарушения в гепатоцитах, что обусловлено его антиоксидантным и антинекро-тическим действием.
ЛИТЕРАТУРА
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия / Г.Г. Автандилов. — М., 1990. — 384 с.
2. Биологически активные вещества растительного происхождения. — М., 2001 —2002. — Т. 1. — 350 с.; Т. 2. - 764 с.; Т. 3. - 216 с.
3. Микроскопическая техника: руководство для врачей и лаборантов. — М., 1996. — 544 с.
4. Полонский В.М. Применение препарата ЛИВ.52 при токсических, алкогольных и лекарственных поражениях печени / В.М. Полонский // Фар-матека. — 2005. — № 7. — С. 23 — 29.
5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2000. — 398 с.
6. Сергиенко В.И. Математическая статистика в клинических исследованиях / В.И. Сергиенко, И.Б. Бондарева. — М., 2000. — 256 с.
7. Сологуб Т.В. Комбинированная терапия хронического вирусного гепатита В и ее влияние на качество жизни / Т.В. Сологуб, М.Г. Романцев, С.Н. Коваленко и др. // Вестн. СПб. Гос. мед. академии. — 2006. — № 1. — С. 7—14.
8. Темирбулатов Р.А. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления
липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение / Р.А. Темирбулатов, Е.И. Селезнев // Лаб. дело. — 1981. — № 4. — С. 209 — 211.
9. Фитотерапия с основами клинической фармакологии. — М., 1999. — 192 с.
10. Brhun J.C. The use of natural products in modern medicines / J.C. Brhun // Acta Pharm. Nord. 1989. - N 1. - P. 117-130.
11. Kuntz E. Hepatology. Principles and Practice / E. Kuntz, H-D. Kuntz // Springer, Berlin, Heiden-berg. - 2002. - P. 700-703.
Сведения об авторах
Занданов Александр Октябрьевич - заместитель министра здравоохранения Республики Бурятия, декан медицинского факультета Бурятского государственного университета, к.м.н., доцент.
Ажунова Татьяна Александровна - Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, ведущий научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии, д.б.н., 670042, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6. р.т. 43-34-63. E-mail: t.azhunova@mail.ru.
Бартанов Алексей Иосифович - заместитель главного врача Центра восточной медицины Министерства здравоохранения Республики Бурятия.
