CC BY
53
УДК 634.8 + 631.52 + 581.167 UDC 634.8 + 631.52 + 581.167
ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ПРОДУКТИВНЫХ ПРОТОКЛОНОВ ТРЕХ ТЕХНИЧЕСКИХ СОРТОВ ВИНОГРАДА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОСАТЕЛЛИТНЫХ МАРКЁРОВ
GENOTYPING OF THREE NEW PRODUCTIVE WINE VARIETIES WITH USING MICROSATELLITE MARKERS
Милованов Александр Валериевич учебный мастер, аспирант
Звягин Андрей Сергеевич к.б.н.
Milovanov Alexander Valerievich training master, postgraduate student
Zviagin Andrey Sergeevitch Cand.Biol.Sci.
Трошин Леонид Петрович д.б.н., профессор
Кубанский государственный аграрный университет, Краснодар, Россия
В представленной статье освещено исследование по генотипированию продуктивных протоклонов трех технических сортов винограда: Рислинг рейнский, Вердо черный и Йоханнитер
Ключевые слова: ВИНОГРАД, ПРОТОКЛОН, СОРТ, 88Я-МАРКЁР, ПЦР, МИКРОСАТЕЛЛИТЫ, ДНК, НУКЛЕОТИД
Troshin Leonid Petrovich Dr.Sci.Biol., professor
Kuban State Agrarian University, Krasnodar, Russia
In this article we have described a study of genotyping of new three productive wine grapes protoclones: Rhine Rieslin, Verdot black and Johanniter
Keywords: GRAPE, PROTOCLONE, VARIETY, SSR-MARKER, PCR, MICROSATELLITE, DNA, NUCLEOTIDE
ВВЕДЕНИЕ
Достаточно консервативное население нашей страны, привыкшее к стандартным маркам вин, с каждым годом потребляет все больше и больше винных продуктов. Один из путей решения данной проблемы -улучшение существующих «традиционных» сортов винограда, таких, как например Рислинг рейнский. В данном исследовании усовершенствование названного сорта и других шло методом клоновой селекции [1-3].
ДНК-маркеры описывают генотип независимо от фенотипа: этим обеспечивают богатство полиморфизмов, позволяющих идентифицировать сорта и строить точные генетические карты по многим высшим растениям. Высокий уровень генетического разнообразия винограда вызывает интерес к оценке генетического родства внутри подвида Vitis vinifera sativa D.C, а также необходимость улучшения распознающих систем, пригодных для идентификации виноградных сортов. Это подталкивает к попыткам
интегрировать и эксплуатировать данные генотипов, которые выявлены среди микросателлитных локусов в винограде [4-5, 11].
Молекулярные маркеры имеют огромный потенциал для поиска генетических различий между генотипами и выявления разнообразия среди генотипов. Для данных исследований ЗБЯ-маркёры являются наиболее подходящими из-за их кодоминантности, большого числа
повторов, высокой частоты и обилия в селективно нейтральной области. Для винограда создаются высоко насыщенные микросателлитные карты. Данные маркеры оказались полезными для установления «личности» генотипов, фингерпринтинга и анализа разнообразия подвоев, сортов и межвидовых гибридов [6, 10].
Первые результаты по дифференциации клонов генетическими маркерами показывают, что эта тема ограничивается количеством использованных локусов. Если использовать большое количество маркёров, вероятность найти разнообразие аллелей увеличивается. Самые разнообразные методы могут применяться для поиска полиморфизма среди культурных сортов. Для идентификации клонов только характеризующие маркеры будут проявлять ценность в анализе [9].
В текущем году на кафедре виноградарства продолжилась работа по генотипированию новых технических продуктивных протоклонов винограда, которые показали фенотипические отличия от стандарта в результате ампелографического скрининга. По морфологической схожести образцы поделены на группы для молекулярно-генетического анализа. Результаты работы приведены ниже в виде фото фореграмм (рис. 1-8).
Материалы и методы
Для анализа были отобраны листья сортов и протоклонов винограда (табл. 1). Сбор образцов для молекулярно-генетического анализа
производился на участках учхоза «Кубань» Кубанского
госагроуниверситета и в насаждениях агрофирмы «Фанагория»
Темрюкского района Краснодарского края. Для сохранения листья нижеперечисленных генотипов были помещены в морозильную камеру при - 20 0С.
Таблица 1. - Исследуемые протоклоны и сорта винограда
1 Рислинг 130
2 Рислинг 143143111
3 Рислинг 245-5
4 Рислинг 245-7
5 Рислинг 31411111
6 Рислинг 3142092
7 Рислинг 3144111
8 Рислинг 3144111
9 Рислинг 314991
10 Рислинг 492
11 Рислинг 7111891
12 Рислинг 7121431
13 Рислинг 712-201 15-11-24-15
14 Рислинг 7151077п
15 Рислинг 830
16 Рислинг 964
17 Рислинг 991
18 Рислинг Алькадар 34 б
19 Рислинг Алькадар 34г
20 Рислинг клон
21 Вердо черный 7-2
22 Вердо черный 7-6
23 Йоханнитер 79-4
24 Йоханнитер 80-6
Выделение ДНК из свежих листьев осуществляли модифицированным СТАБ-методом [1-3]. ПЦР проводилась по параметрам, описанным в монографии А.С.Звягина «Молекулярногенетические исследования полиморфизма винограда» [11-13]. Для анализа генетического разнообразия были использованы 6 нейтральных
микросателлитных маркеров (праймеров): VrZag62, VrZag79, VVMD5, VVMD7, VVMD27 и VVS2 [7-8, 12-14].
Разделение продуктов амплификации проводили методом электрофореза в 6% акриламидном геле. Далее пластины вымачивались в течение 10-15 минут в бромистом этидии и фотографировались в ультрафиолетовом свете. Анализ полученных фотоснимков проводили в программе Gel-Pro Analyser [1-5].
Задача исследований - поиск фенотипических сходств и генетических различий среди представленных в табл. 1 образцов по 6 аллелям.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Результаты исследований представлены в виде фотографий фореграмм и таблицы 2 с данными, полученными после их анализа.
Ниже приводятся восемь фото фореграмм локусов (рис. 1-8). Всего описывалось 24 образца из общего количества в 56, которые составили макрогруппу технических протоклонов и сортов, произрастающих в Темрюкском районе Краснодарского края.
mw К* 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 mw 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 mw**
*- где К - отрицательный контроль;
**- - маркер молекулярного веса.
Рис. 1. Результат разделения фрагментов ПЦР-реакции, проведенной с использованием нейтрального микросателлитного праймера VrZag62
ш¥ 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 ш¥ 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 ш¥
Рис. 2. Результат разделения фрагментов ПЦР-реакции, проведенной с использованием нейтрального микросателлитного праймера VrZag62
ш¥ К 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 ш¥ 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 ш¥
Рис. 3. Результат разделения фрагментов ПЦР-реакции, проведенной с использованием нейтрального микросателлитного праймера VrZag79
mw 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 mw 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 mw
Рис. 4. Результат разделения фрагментов ПЦР-реакции, проведенной с использованием нейтрального микросателлитного праймера VVMD5
mw 30 29 28 27 26 25 mw 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 K mw
Рис. 5. Результат разделения фрагментов ПЦР-реакции, проведенной с использованием нейтрального микросателлитного праймера VVMD7
mw 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 mw 50 51 52 53 54 55 56 mw
Рис. 6. Результат разделения фрагментов ПЦР-реакции, проведенной с использованием нейтрального микросателлитного праймера VVMD7
mw 30 29 28 27 26 25 mw 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 k
mw
Рис. l. Результат разделения фрагментов ПЦР-реакции, проведенной с использованием нейтрального микросателлитного праймера VVMD27
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 mw 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Рис. 8. Результат разделения фрагментов ПЦР-реакции, проведенной с использованием нейтрального микросателлитного праймера VVS2
В качестве ссылок-«камертонов» в наших исследованиях, согласно дескриптору 01У, были использованы сорта Каберне-Совиньон и Пино гри (Пино серый).
Следует сказать, что отсутствие аллелей остается спорным фактом ввиду отсутствия более продвинутого оборудования и химических реактивов. Также следует заметить, что ввиду погрешности акриламидного геля существенным не считалось различие в 3 и менее нуклеотидов, хотя различие и в 4-5 тоже, зачастую, вызывает вопросы.
Таблица 2. - Размер микросателлитных аллелей исследуемых протоклонов и сортов винограда
У^62 У^62 У^79 У^79 УУ82 УУ82 УУЫБ5 УУЫБ5 УУЫБ7 УУЫБ7 УУЫБ27 УУЫБ27
1 184* 190 244 282 133 149 227 232 264 264 172 172
2 192 198 233 276 135 149 224 229 243 253 172 172
3 192 200 233 262 135 151 225 234 264 264 172 172
4 188 192 233 268 128 143 223 223 264 264 * * 5Й Н/Д
5 190 196 258 264 135 149 224 224 241 241 172 172
6 184 190 244 250 128 147 227 232 264 264 172 172
7 194 200 238 275 133 147 225 225 245 264 172 172
8 192 198 233 240 135 151 223 223 247 247 172 172
9 192 196 267 273 135 151 225 225 241 241 172 172
10 184 188 262 267 133 149 265 259 268 268 172 172
11 188 194 258 264 135 149 225 232 245 264 172 172
12 192 198 244 276 Н/Д Н/Д 227 232 Н/Д Н/Д Н/Д Н/Д
13 175 182 242 248 135 147 Н/Д Н/Д 241 241 Н/Д Н/Д
14 192 198 262 267 135 151 225 229 243 243 174 174
15 184 192 270 276 135 151 229 238 245 257 174 174
16 184 188 244 288 133 139 227 243 253 253 172 172
17 192 196 267 273 135 153 224 232 241 241 176 176
18 184 192 254 290 133 139 229 234 264 264 172 172
19 186 190 262 267 133 145 223 223 239 237 172 172
20 184 190 240 246 133 149 227 234 264 264 Н/Д Н/Д
21 192 198 230 244 135 153 225 232 245 249 172 172
22 184 194 266 272 126 143 261 250 262 262 Н/Д Н/Д
23 Н/Д Н/Д Н/Д Н/Д 135 143 234 253 Н/Д Н/Д Н/Д Н/Д
24 188 188 238 244 133 151 Н/Д Н/Д 268 268 172 172
*- размер аллелей указан в парах нуклеотидов; **- Н/Д (нет данных) аллель не амплифицировалась после четырех-пяти кратного повтора.
http://ej.kubagro.ru/2014/04/pdf/77.pdf
Обсуждение
Для удобства, протоклоны по фенотипической схожести были поделены на четыре блока.
1. В блоке «Рислинг» контрольным образцом был Рислинг 492. От него протоклон Рислинг 130 отличается по аллелям VrZag79 и УУМБ5, на 18 и 15, 38 и 27 нуклеотидов. Рислинг 143143111 отличается от контроля по аллелям VrZag62, VrZag79, УУМБ5 и УУМБ7 на 8 и 10, 29 и 9, 41 и 30, а также 25 и 15 нуклеотидов. Рислинг 245-5 отличается по локусам VrZag62, VrZag79 и УУМБ5 на 8 и 12, 29 и 5, 40 и 25 нуклеотидов. Рислинг 245-7 отличается по аллелям VrZag62, VrZag79, УУБ2, УУМБ5, на 6, 29, 6, 32 и 26 нуклеотидов. Локус УУМБ27 не обнаружен. Рислинг 31411111 отличается по аллелям VrZag62, УУМБ5 и УУМ07 на 6, 41 и 35, 27 нуклеотидов. Рислинг 3142092 отличается по локусам VrZag79 и УУМБ5 на 18 и 17, а также 38 и 27 нуклеотидов. Рислинг 3144111 отличается по микросателлитам VrZag62, VrZag79, УУМБ5 и УУМБ7 на 10 и 12, 24 и 8, 40 и 34 нуклеотидов. Рислинг 3144111 отличается по аллелям VrZag62, VrZag79, УУМБ5 и УУМБ7 на 8 и 10, 29 и 27, 42 и 36, 21 нуклеотид. Рислинг 314991 отличается по локусам VrZag62, УУМБ5 и УУМБ7 на 8 и 8, 40 и 34, 27 нуклеотидов. Рислинг 7111891 отличается по микросателлитам УУМБ5 и УУМБ7 на 40 и 27, 23 нуклеотида. Рислинг 7121431 отличается по аллелям VrZag62, VrZag 79 и УУМБ5 на 8 и 10, 18 и 9, 38 и 28 нуклеотидов, аллели УУБ2, УУМБ7 и УУМБ27 не были обнаружены. Рислинг 7-12-201 15-11-24-15 отличается по
микросателлитам VrZag62, VrZag79 и УУМБ7 на 9 и 6, 20 и 19, 27 нуклеотидов, аллели УУМБ5 и УУМБ27 не были обнаружены. Рислинг 7151077п отличается по локусам VrZag62, УУМБ5 и УУМБ7 на 8 и 10, 40 и 30, 25 нуклеотидов. Рислинг 830 отличается от контроля по микросателлитам VrZag79, УУМБ5 и УУМБ7 на 8 и 9, 44 и 21, 23 и 9
нуклеотидов. Рислинг 964 отличается по локусам VrZag79 и УУМБ5 на 18 и 21, 42 и 16 нуклеотидов. Рислинг 991 отличается от контроля по локусам VrZag62, УУМБ5 и УУМБ7 на 8 и 12, 21 и 27, 27 нуклеотидов. Рислинг клон отличается по аллелям VrZag79 и УУМБ5 на 22 и 21, 38 и 25 нуклеотидов, локус УУМБ27 не обнаружен.
2. Рислинг Алькадар 34б отличается от Рислинга Алькадар 34г по локусам VrZag79, УУМБ5 и УУМБ7 на 12 и 23, 6 и 11, 25 и 27 нуклеотидов.
3. Вердо черный 7-2 отличается от Вердо черный 7-6 по локусам VrZag62, VrZag79, УУБ2, УУМБ5 и УУМБ7 на 8, 36 и 28, 9 и 10, 44 и 18 нуклеотидов, аллель УУМБ27 в Вердо черный 7-6 не обнаружена.
4. Протоклон Йоханнитер 79-4 отличается от протоклона Йоханнитер 80-6 по локусу УУБ2 на 8 нуклеотидов. Аллели VrZag62, VrZag79, УУМБ7 и УУМБ27 не амплифицировались у Йоханнитер 79-4. У протокдлона Йоханнитер 80-6 локус УУМ05 не выявлен.
Следует напомнить, что если аллель не обнаружена, то это не значит, что ее нет. Ответить на вопрос: «что же произошло?», может только секвенатор или же анализ на наличие БКР.
Выводы
По результатам многолетнего ампелографического скрининга технических популяций вышеназванных трех сортов винограда и подкрепленного молекулярно-генетическим анализом их выделенных продуктивных протоклонов на государственные испытания в разные годы были переданы следующие сорта-клоны: Рислинг Алькадар, Рислинг анапский, Рислинг Джемете, Рислинг прикубанский и Рислинг фанагорийский.
Литература
1. Звягин А.С. Выделение ДНК из гербарных листьев Vitis vinifera / Звягин А.С. // Научный журнал КубГАУ. - 2010. - № 58 (04).
2. Милованов А.В. Выделение ДНК при помощи peqgold plant dna mini kit / А.В. Милованов, Л.П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. - Краснодар: КубГАУ, 2013. - № 06 (090). - С. 167 - 176. - IDA [article ID]: 0901306011. - Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2013/06/pdf/11.pdf, 0,625 у.п.л., импакт-фактор РИНЦ=0,581.
3. Милованов А.В. Генотипирование сортов винограда по молекулярным маркёрам / А.В. Милованов, Л.П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. - Краснодар: КубГАУ, 2014. - № 02 (096). - С. 53 - 65. - IDA [article ID]: 0961402005. -Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2014/02/pdf/05.pdf, 0,812 у.п.л., импакт-фактор РИНЦ=0,346.
4. Трошин Л.П. Ампелографическая и селекционная научно-исследовательская работа Кубанского госагроуниверситета / Л.П. Трошин // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. - Краснодар: КубГАУ, 2012. - № 07 (081). - С. 524 - 544. - IDA [article ID]: 0811207039. -Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2012/07/pdf/39.pdf, 1,312 у.п.л., импакт-фактор РИНЦ=0,581.
5. Трошин Л.П., Радчевский П.П. Виноград: иллюстрированный каталог.
Районированные, перспективные, тиражные сорта. - Ростов н/Д: Феникс, 2010.
- 271 с.: ил. - (Мир садовода).
6. Ajitpal Singh, Krishan Kumar, ManavIndra Singh Gill 1, Parveen Chhuneja, Naresh Kumar Arora and Kuldeep Singh. Genotype identification and inference of genetic relatedness among different purpose grape varieties and rootstocks using microsatellite markers // African Journal of Biotechnology, 9 January 2013. - Vol. 12 (2). - P. 134-141.
7. Bowers J.E., Dangl G.S. and Meredith C.P. Development and characterization of additional microsatellite DNA markers for grape // Am. J. Enol. Vitic. - 1999. - V. 50, № 30. - P. 243-246.
8. Bowers J.E., Dangl G.S., Vignani R. and Meredith C.P. Isolation and characterization of new polymorphic simple sequence repeat loci in grape (Vitis vinifera L.) // Genome. - 1996. - V. 39. - P. 628-633.
9. Regner F., Hack R. and Santiago J. L. Highly variable Vitis microsatellite loci for the identification of Pinot Noir clones // HBLA u. BA fur Wein und Obstbau, Klosterneuburg, Austria. - Vitis, 45 (2), 85-91 (2006).
10. Zulini L., Russo M. and Peterlunger E. Genotyping wine and table grape cultivars from Apulia (Southern Italy) using microsatellite markers // Dipartimento di Produzione Vegetale e Tecnologie Agrarie (Universitа di Udine, Udine, Italia). -Vitis, 41 (4), 183-187 (2002).
11. Maria Stella Grando, Claudia Frisinghelli. Grape microsatellite markers: Sizing of DNA alleles and genotype analysis of some grapevine cultivars // Istituto Agrario di San Michele all'Adige (San Micheleall'Adige, Italia). - Vitis, 37 (2), 79-82 (1998).
12. Sefc K.M., Regner F., Tureschek E., Glossl J. and Steinkellner H. Identification of microsatellite sequences in Vitis riparia and their application for genotyping of different Vitis species // Genome. - 1999. - V. 42. - P. 367-373.
13. Thomas M.R. and Scott N.S. Microsatellite repeats in grapevine reveal DNA polymorphism when analysed as sequence-tagged sites (STSs) // Theor. Appl. Genet.
- 1993. - V. 86. - P. 985-990.
14. Thomas M.R., Matsumoto S., Cain P. and Scott N.S. Repetitive DNA of grapevine: classes present and sequences suitable for cultivar identification // Theor. Appl. Genet. - 1993. - V. 86. - P. 173-180.
References
1. Zvjagin A.S. Vydelenie DNK iz gerbarnyh list'ev Vitis vinifera / Zvjagin A.S. // Nauchnyj zhurnal KubGAU. - 2010. - № 58 (04).
2. Milovanov A.V. Vydelenie DNK pri pomoshhi peqgold plant dna mini kit / A.V. Milovanov, L.P. Troshin // Politematicheskij setevoj jelektronnyj nauchnyj zhurnal Kubanskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta (Nauchnyj zhurnal KubGAU) [Jelektronnyj resurs]. - Krasnodar: KubGAU, 2013. - № 06 (090). - S. 167 - 176. - IDA [article ID]: 0901306011. - Rezhim dostupa: http://ej.kubagro.ru/2013/06/pdf/11.pdf, 0,625
u.p.l., impakt-faktor RINC=0,581.
3. Milovanov A.V. Genotipirovanie sortov vinograda po molekuljarnym markjoram /
A.V. Milovanov, L.P. Troshin // Politematicheskij setevoj jelektronnyj nauchnyj zhurnal Kubanskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta (Nauchnyj zhurnal KubGAU) [Jelektronnyj resurs]. - Krasnodar: KubGAU, 2014. - № 02 (096). - S. 53 - 65. - IDA [article ID]: 0961402005. - Rezhim dostupa: http://ej.kubagro.ru/2014/02/pdf/05.pdf, 0,812 u.p.l., impakt-faktor RINC=0,346.
4. Troshin L.P. Ampelograficheskaja i selekcionnaja nauchno-issledovatel'skaja rabota Kubanskogo gosagrouniversiteta / L.P. Troshin // Politematicheskij setevoj jelektronnyj nauchnyj zhurnal Kubanskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta (Nauchnyj zhurnal KubGAU) [Jelektronnyj resurs]. - Krasnodar: KubGAU, 2012. - № 07 (081). - S. 524 - 544.
- IDA [article ID]: 0811207039. - Rezhim dostupa: http://ej.kubagro.ru/2012/07/pdf/39.pdf,
1,312 u.p.l., impakt-faktor RINC=0,581.
5. Troshin L.P., Radchevskij P.P. Vinograd: illjustrirovannyj katalog. Rajonirovannye, perspektivnye, tirazhnye sorta. - Rostov n/D: Feniks, 2010. - 271 s.: il. - (Mir sadovoda).
6. Ajitpal Singh, Krishan Kumar, ManavIndra Singh Gill 1, Parveen Chhuneja, Naresh Kumar Arora and Kuldeep Singh. Genotype identification and inference of genetic relatedness among different purpose grape varieties and rootstocks using microsatellite markers // African Journal of Biotechnology, 9 January 2013. - Vol. 12 (2). - P. 134-141.
7. Bowers J.E., Dangl G.S. and Meredith C.P. Development and characterization of additional microsatellite DNA markers for grape // Am. J. Enol. Vitic. - 1999. - V. 50, № 30. -P. 243-246.
8. Bowers J.E., Dangl G.S., Vignani R. and Meredith C.P. Isolation and characterization of new polymorphic simple sequence repeat loci in grape (Vitis vinifera L.) // Genome. -1996. - V. 39. - P. 628-633.
9. Regner F., Hack R. and Santiago J. L. Highly variable Vitis microsatellite loci for the identification of Pinot Noir clones // HBLA u. BA fur Wein und Obstbau, Klosterneuburg, Austria. - Vitis, 45 (2), 85-91 (2006).
10. Zulini L., Russo M. and Peterlunger E. Genotyping wine and table grape cultivars from Apulia (Southern Italy) using microsatellite markers // Dipartimento di Produzione Vegetale e Tecnologie Agrarie (Universita di Udine, Udine, Italia). - Vitis, 41 (4), 183-187 (2002).
11. Maria Stella Grando, Claudia Frisinghelli. Grape microsatellite markers: Sizing of DNA alleles and genotype analysis of some grapevine cultivars // Istituto Agrario di San Michele all'Adige (San Micheleall'Adige, Italia). - Vitis, 37 (2), 79-82 (1998).
12. Sefc K.M., Regner F., Tureschek E., Glossl J. and Steinkellner H. Identification of microsatellite sequences in Vitis riparia and their application for genotyping of different Vitis species // Genome. - 1999. - V. 42. - P. 367-373.
13. Thomas M.R. and Scott N.S. Microsatellite repeats in grapevine reveal DNA polymorphism when analysed as sequence-tagged sites (STSs) // Theor. Appl. Genet. - 1993.
- V. 86. - P. 985-990.
14. Thomas M.R., Matsumoto S., Cain P. and Scott N.S. Repetitive DNA of grapevine: classes present and sequences suitable for cultivar identification // Theor. Appl. Genet. -1993.- V. 86. - P. 173-180.
