CC BY
15
DOI: 10.23868/202107007
ГЕНОМНАЯ НЕСТАБИЛЬНОСТЬ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО С СОПУТСТВУЮЩЕЙ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА
М.А. Асанов1, М.Ю. Синицкий1, А.В. Понасенко1, В.И. Минина2 Шстутп^. 17.03.2021
Принята к печати: 10.08.2021
1 Научно-исследовательский институт комплексных проблем Опублик0вана on-line: 17.08.2021 сердечно-сосудистых заболеваний, Кемерово, Россия
2 Федеральный исследовательский центр угля и углехимии СО РАН, Кемерово, Россия
GENOMIC INSTABILITY OF LYMPHOCYTES IN PATIENTS WITH LUNG CANCER WITH COMBINED ISCHEMIC HEART DISEASE
M.A. Asanov1, M.Y. Sinitsky1, A.V. Ponasenko1, V.I. Minina2
1 Research Institute for Complex Issues of Cardiovascular Diseases, Kemerovo, Russia
2 Federal Research Center of Coal and Coal Chemistry, Kemerovo, Russia
e-mail: asmaks988@gmail.com
Господствующая концепция канцерогенеза постулирует ступенчатое накопление генетических изменений, индуцированных действием различных генотоксических факторов окружающей среды: тяжелых металлов, полициклических ароматических углеводородов, радиоактивных веществ и т. д. Коморбидная патология способна вносить значимый вклад в накопление повреждений генома, влиять на эффективность лечения и определять общий прогноз выживаемости.
Цель исследования: изучение геномной нестабильности соматических клеток, оцениваемой с использованием микроядерного теста на лимфоцитах крови, у больных раком легкого с сопутствующей ишемической болезнью сердца и пациентов без сопутствующей патологии в сравнении со здоровыми индивидами.
В группу исследования были включены 50 мужчин больных раком легкого, в контрольную группу — 84 мужчины без онкопа-тологии близкого возраста, проживающие в той же местности. На лимфоцитах крови выполняли микроядерный тест. При анализе двуядерных лимфоцитов с микроядрами, протрузиями и нукле-оплазменными мостами было выявлено статистически значимое различие между двумя группами: пациенты и контроль. Было отмечено увеличение частоты встречаемости маркеров цитогене-тических нарушений у больных раком легкого. В лимфоцитах лиц контрольной группы был зарегистрирован более высокий индекс репликации. У пациентов с раком легкого и сопутствующей ишемической болезнью сердца были обнаружены отличия в частоте встречаемости одноядерных лимфоцитов с микроядрами и в уровне апоптоза от аналогичных генотоксических показателей у пациентов без сердечно-сосудистых заболеваний.
Ключевые слова: рак легкого, геномная нестабильность, микроядерный тест, микроядро, атеросклероз.
Введение
Бронхогенная карцинома или рак легкого (РЛ) — это один из наиболее часто встречающихся видов злокачественных новообразований. Ежегодно отмечается более 1,5 млн случаев заболевания [1], при этом на Россию приходится не менее 70 случаев на 100 тысяч человек. Считается, что онкологические заболевания являются результатом накопления множества генетических мутаций, вследствие которых клетка приобретает геномную нестабильность [2]. Накопленные изменения ДНК индуцируются различными генотоксическими факторами (полициклическими ароматическими углеводородами, 1\1-нитрозаминами табачного дыма, тяжелыми металлами, радиоактивными веществами и др.) [3].
Поскольку канцерогенез вызван ступенчатым накоплением генетических изменений [4], степень повреждения ДНК лимфоцитов периферической крови отражает уровень повреждений ДНК в клетках-предшественницах, непосредственно принимающих участие в канцерогенезе [5]. При изучении степени и характера повреждения
Carcinogenesis is associated with a stepwise accumulation of genetic changes induced by the action of various genotoxic environmental factors (heavy metals, polycyclic aromatic hydrocarbons, radioactive substances, and others). Comorbid pathology can make a significant contribution to the accumulation of genome damage, influence the effectiveness of treatment, and determine the overall prognosis of survival. 50 men with lung cancer were examined. The control group included 84 men without oncopath-ology of close age, living in the same area. A micronucleus assay was performed on blood lymphocytes. The analysis of binuclear lymphocytes with micronuclei, protrusions, nucleoplasmic bridges revealed a statistically significant difference between the patient groups and the control. An increase in the frequency of occurrence of these markers of cytogenetic disorders in patients with lung cancer was noted. A higher replication index was recorded in the control group. In patients with lung cancer and concomitant ischemic heart disease, differences in the frequency of mononuclear lymphocytes with micronuclei and the frequency of apoptosis were recorded as compared with patients without cardiovascular diseases.
Keywords: lung cancer, genomic instability, micronucleus assay, micronucleus, atherosclerosis.
ДНК в хромосомах используют такие цитогенетические методы, как анализ стабильных и нестабильных хромосомных аберраций, микроядерный тест, флуоресцентная гибридизация in situ (Fluorescence in situ hybridization, FISH) и др. Микроядерный тест является биомаркером генотоксичности, дающим одновременно информацию о различных конечных повреждениях хромосом: хромосомных разрывах, хромосомных перестройках и генетической амплификации [6, 7]. В ряде работ было показано увеличение частоты обнаружения микроядер (МЯ) в лимфоцитах под воздействием различных генотоксических факторов, таких как табачный дым [8], нитрозамин [9], угольная пыль и др. [10, 11]. Имеются данные, демонстрирующие схожесть некоторых патогенетических аспектов канцерогенеза и атерогенеза [12].
При отсутствии должного лечения РЛ прогноз неутешительный: 87% больных умирает в течение двух лет [13]. Однако эффективность лечения во многом зависит от наличия сопутствующей патологии. Остаётся открытым вопрос о диагностике и тактике лечения
РЛ с сопутствующими сердечно-сосудистыми заболеваниями, в частности ишемической болезнью сердца (ИБС), обусловленной атеросклерозом коронарных артерий. ИБС, наряду с хронической обструктивной болезнью легких, является наиболее частым сопутствующим заболеванием у больных РЛ (13,5-28%) [14]. Чаще всего в таких случаях пациенты не операбельны из-за тяжелых конкурирующих заболеваний. Главная причина отказа от операции или уменьшения резекции легочной ткани — это наличие атеросклероза аорты, сонных и коронарных артерий [15].
Целью исследования является изучение геномной нестабильности соматических клеток, оцениваемой с использованием микроядерного теста на лимфоцитах крови, у больных РЛ с сопутствующей ИБС и пациентов без сопутствующей патологии в сравнении со здоровыми индивидами.
Материал и методы
В группу исследования были включены 50 мужчин больных РЛ, проживающих в Кемеровской области (Российская Федерация). Критерии включения: этническая принадлежность — русские; отсутствие инфекционных заболеваний во время отбора проб; отсутствие зарегистрированных родственников с диагностированными онкологическими заболеваниями; отсутствие лучевой или химиотерапии до исследования. Средний возраст пациентов в группе исследования составил 60 лет. Для определения типа заболевания использовали международную классификацию злокачественных новообразований (Т1\1М).
Все больные РЛ были обследованы врачом-кардиологом и при обнаружении симптомов сердечной недостаточности направлялись на дополнительное обследование. Диагноз ИБС устанавливали согласно Национальным рекомендациям Всероссийского научного общества кардиологов по диагностике и лечению стабильной стенокардии.
В контрольную группу вошли 84 здоровых доноров-мужчин, средний возраст — 55 лет.
Полное описание когорты исследования представлено в табл. 1.
Все участники подписывали добровольное информированное согласие на участие в исследовании, которое проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации: этические принципы проведения медицинских исследований с участием людей с поправками 2000 г. и Правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными Министерством здравоохранения Российской Федерации от 19 июня 2003 г. Протокол исследования был одобрен локальным этическим комитетом ФИЦ УУХ СО РАН (протокол № 1 от 20.01.2021).
Образцы крови для цитогенетического анализа у всех участников исследования отбирали из локтевой вены в вакутейнер с Na-гепарином (Greiner Bio-One, Австрия), у больных РЛ — до проведения лечебных процедур.
Анализ хромосомных повреждений проводили с помощью микроядерного теста в лимфоцитах периферической крови в условиях цитокинетического блока [16]. В культуральный флакон с 3,0 мл культуральной среды RPMI-1640 (ПанЭко, Россия), содержащей 20% сыворотки крупного рогатого скота (ПанЭко, Россия) и 100 Ед/мл ампицилина, добавляли 200 мкл венозной крови, 30 мкг фитогемагглютенина (ПанЭко, Россия), инкубировали в течение 44 ч. при температуре 37 °C, вносили 24 мкл цитохалазина Б (ПанЭко, Россия), инкубировали еще 24 ч., после чего препараты обрабатывали гипотоническим раствором KCl, фиксатором Карнуа, окрашивали 2% раствором красителя Гимза (ПанЭко, Россия) и анализировали на микроскопе Nikon Eclipse 80i (Nikon Corp., Япония) при увеличении х1000. Критерии отбора лимфоцитов, включаемых в анализ, а также критерии регистрируемых цитогенетических повреждений соответствовали общепринятым рекомендациям [17]. На каждом препарате анализировали ядра 1000 лимфоцитов, в которых выявляли МЯ, нуклеоплазменные мосты и ядерные протрузии (рис. 1). Кроме этого, учитывали
Таблица 1. Характеристика изучаемой когорты (n)
Характеристика Больные раком легкого Контрольная группа
Средний возраст (лет) 60 48
Статус курения:
Курящие 40 44
Некурящие 10 40
Стаж курения:
<10 лет 0 4
10-24 лет 7 31
>25 лет 33 9
TNM классификация —
O, I, II 22
III, IV 28
Тип злокачественного —
новообразования:
мелкоклеточный РЛ 14
немелкоклеточный РЛ 36
Стадия заболевания: —
I-II 22
III-IV 28
Сопутствующие заболевания —
сердечно-сосудистой системы:
ИБС 24
A
% *V
V,
V*-
Рис. 1. Цитогенетические аномалии: А — нуклеоплазменный мост; Б — протрузия; В — микроядро. Окраска: по Гимзе. Ув. х1000
цитогенетические показатели: уровень апоптоза и митоза. Для подсчета доли завершённых циклов клеточного деления использовали репликационный индекс [18].
Статистический анализ
Статистический анализ проводили с помощью программы StatSoft Statistics 10.0. Методом Колмогорова-Смирнова определяли распределение данных всех изучаемых параметров на соответствие нормальному. Учитывая распределение количественных признаков, отличное от нормального, для сравнения групп использовали непараметрические методы: U-критерий Манна-Уитни для межгрупповых сравнений. Для групповых характеристик рассчитывали медиану и квартильный размах (Me ± QR). Эффекты цитогенетических показателей, связанных с риском развития РЛ, изучали с использованием бинарной модели логистической регрессии. Отношение шансов (OR) рассчитывали с поправками на такие конфаундеры как возраст, пол и статус курения; 95% доверительный интервал (CI) рассчитывали для всех полученных значений. Уровнем статистической значимости различий считали р <0,05.
Результаты и обсуждение
Канцерогенез — сложный патологический процесс, включающий негеномные и геномные механизмы такие, как повреждения, перестройки, амплификация ДНК [19]. Частота хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови оказалась надёжным биомаркером воздействия генотоксичных ксенобиотиков на организм человека [20]. После обнаружения у пациентов с вновь диагностированным раком повреждения генома, сходного с описанным у лиц, подвергшихся воздействию генотоксических агентов, было показано, что хромосомные аберрации являются прогностически значимым биомаркером повышенного риска
возникновения рака [21]. Повреждение хромосомы отражает критические события для канцерогенеза: нарушение способности удалять поврежденную ДНК или неспособность правильно восстановить поврежденные разрывы ДНК. Повышенная частота повреждения хромосом в циркулирующих лимфоцитах считается показателем повышенного риска развития рака [22, 23]. В ряде работ была продемонстрирована связь между повышенным уровнем хромосомных аберраций и риском возникновения РЛ [20, 24]. Было доказано, что количество МЯ в лимфоцитах коррелирует с возникновением ранней канцерогенной активности в тканях-мишенях, степенью хромосомных изменений и риском развития онкологических заболеваний [25].
А.А. Мельников (2012) с соавт. при исследовании больных злокачественными новообразованиями околоушных слюнных желёз выявили, что средняя частота обнаружения двуядерных лимфоцитов с МЯ составила 0,72, что в разы меньше по сравнению с больными РЛ [26]. Однако в другом исследовании при изучении цитогенетического статуса больных раком желудка было показано, что частота встречаемости клеток с МЯ равнялась 4,8 [22], что почти в 3 раза меньше частоты обнаружения МЯ в лимфоцитах больных РЛ в настоящем исследовании.
Нами было установлено, что частота встречаемости двуядерных лимфоцитов с МЯ у больных РЛ значительно превышала соответствующий показатель контрольной группы (табл. 2). Следует отметить, что в контрольной группе частота обнаружения лимфоцитов с МЯ была в несколько раз выше (табл. 2), чем в аналогичной группе другого исследования [26]. Вероятно, такие различия связаны с высокой генотоксической нагрузкой окружающей среды крупного промышленного региона с химической и угольной промышленностью, которым является Кузбасс.
Ранее нами был проведен мета-анализ, включающий данные различных исследований по содержанию МЯ в лимфоцитах больных РЛ и хронической обструктив-ной болезнью легких [27], и результаты, представленные
Таблица 2. Частота обнаружения двуядерных лимфоцитов с микроядрами, мостами и протрузиями (Ме ± QR)
Показатель
Больные раком лёгкого (n=50)
Контрольная группа (n=84)
ыт
ни рц
ео дф
яф
ум ви а ^
с 1 МЯ с 2 МЯ всего с МЯ
Двуядерные лимфоциты с протрузией Двуядерные лимфоциты с мостом
11± 7
1± 2
13 ± 8
20 ± 13 5,0 ± 3,5
6 ± 3* 0 ± 1*
7 ± 2*
16 ± 6* 2,0 ± 1,5*
Примечание: * — все указанные значения различаются между группами на уровне р<0,05.
Б
в настоящей работе, согласуются с результатами других авторов в мета-анализе.
В настоящем исследовании было показано повышение частоты встречаемости нуклеоплазменных мостов в лимфоцитах больных РЛ (табл. 2). Мосты являются физическим проявлением таких хромосомных изменений, как анеуплоидия, делеции и транслокации [20]. Хромосомные изменения могут быть связаны с нарушениями в клеточном цикле, а также с двойными разрывами цепи, вызванными окислительным стрессом, и ошибками в механизмах восстановления повреждений ДНК (негомологичное соединение концов и гомологичная рекомбинация) [28]. Все вышеперечисленные нарушения ассоциированы с риском развития РЛ. В работе S.M. Lloyd c соавт. (2013) при оценке с помощью спектрального кариотипирования типа хромосомного повреждения в МЯ и мостах, и определении их связи с риском возникновения РЛ было обнаружено, что как в МЯ, так и в мостах, в повреждении участвуют хромосомы, содержащие гены, важные для онкотрас-формации лёгких [9].
Протрузии в нашем исследовании также чаще регистрировали в лимфоцитах у больных РЛ, чем у здоровых людей. Известно, что протрузии образуются путём амплификации ДНК, которая локализуется на специфических сайтах на периферии ядра. Амплификация специфических участков ДНК тесно связана с развитием онкологических заболеваний [22]. На основании вышеизложенного и учитывая природу образования протрузий, мы предполагаем, что данный цитогенети-ческий показатель также может являться биомаркером повышенного риска развития РЛ.
При оценке частоты обнаружения МЯ, протрузий и нуклеоплазменных мостов в лимфоцитах у курящих и некурящих мужчин статистически значимых различий выявлено не было (р>0,05).
Было обнаружено, что имеются межгрупповые отличия в процентном соотношении лимфоцитов с разным количеством ядер (табл. 3), а количество двуядерных лимфоцитов у здоровых лиц было выше, чем у больных с РЛ. В лимфоцитах лиц контрольной группы индекс репликации был выше, чем у пациентов с РЛ.
Клетки эукариотических организмов в клеточном цикле имеют несколько контрольных точек, по которым детектируется нормальное или патологическое состояние клетки. Клеточный цикл останавливается, если белками системы репарации нуклеиновых кислот были обнаружены повреждения ДНК или поврежденные фрагменты хромосом, возникающие в случае блокирования репликации. Уровень генетического повреждения в лимфоцитах отражает аналогичные события в клетках-предшественницах канцерогенных процессов [5], что объясняет более низкую репликационную активность лимфоцитов больных РЛ в сравнении со здоровыми людьми.
Для определения влияния ишемии миокарда на цитогенетические повреждения у больных РЛ оценивали частоту обнаружения полиядерных лимфоцитов, микроядер в лимфоцитах, уровни апоптоза и митоза лимфоцитов [29].
Было установлено, что такая цитогенетическая аномалия, как наличие МЯ в одноядерных лимфоцитах, статистически значимо чаще встречается у больных РЛ с атеросклерозом коронарных артерий, по сравнению с больными РЛ без сопутствующих заболеваний сердечно-сосудистой системы (табл. 4).
Уровень апоптоза лимфоцитов был выше у больных РЛ, имеющих атеросклеротическое поражение сосудов сердца и хроническую ишемию миокарда, по сравнению с пациентами без сопутствующей сердечно-сосудистой патологии. Биологический ответ на гипоксию включает в себя репликативный стресс, который вызывает остановку репликации ДНК, приводит к увеличению
Таблица 3. Репликационный индекс (Me ± QR)
Показатель Больные раком лёгкого Контрольная группа
1-ядерные клетки, % 31,9 ± 11,2 21,7 ± 9,1
2-ядерные клетки, % 41,4 ± 11,0 50,2 ± 5,5
3-ядерные клетки, % 4,5 ± 2,8 5,4 ± 1,7
4- ядерные клетки, % 13,0 ± 6,6 14,6 ± 4,9
Индекс репликации 1,881 ±0,262* 2,015 ± 0,146*
Примечание: * — р<0,05.
Таблица 4. Цитогенетические показатели больных раком легкого в зависимости от статуса заболеваемости сердечно-сосудистой системы (Ме ± 013)
Показатель
Больные РЛ с ИБС (n=24)
Больные РЛ без ИБС (n=26)
Одноядерные лимфоциты с МЯ Одноядерные лимфоциты с протрузией Двуядерные лимфоциты с МЯ
Двуядерные лимфоциты с протрузией Двуядерные лимфоциты с мостом Апоптоз Митоз
Примечание: * — р<0,05.
1*
1,000± 0,599
13,0 ± 8,5
20 ± 13 5,0 ± 3,5
2,4* 2,9 ± 1,3
0*
1,000± 0,699
13 ± 6
17,5 ± 7,0 4 ± 4 1* 2,7 ± 1,4
уровня повреждения генетического материала и, возможно, к последующей гибели клетки. Учитывая, что атеросклероз коронарных артерий ассоциирован с гипоксией [30], данную патологию можно рассматривать в качестве дополнительного фактора генотоксиче-ского риска, усугубляющего геномную нестабильность у больных РЛ, что в свою очередь утяжеляет течение онкологического заболевания.
Заключение
Установлено, что пациенты с РЛ имеют более высокий уровень геномной нестабильности по сравнению со здоровыми жителями той же местности, что согласуется с выводами ранее выполненных исследований. В нашей работе впервые были отмечены отличия цитоге-нетических показателей у больных РЛ с сопутствующей ИБС и пациентов без коморбидной патологии. Ранее геномную нестабильность у больных РЛ с сердечно-сосудистыми заболеваниями не изучали. Вместе с тем, ИБС, обусловленная атеросклерозом коронарных артерий,
ЛИТЕРАТУРА [REFERENCES]:
1. Ramalingam S.S., Owonikoko T.K., Khuri F.R. Lung cancer: New biological insights and recent therapeutic advances. CA: Cancer J. Clin. 2011; 61(2): 91-112.
2. Лыжко Н.А. Молекулярно-генетические механизмы инициации, промоции и прогрессии опухолей. Российский биотерапевтический журнал 2017; 16(4): 7-17. [Lyzhko N.A. Molecular-genetic mechanisms of initiation, promotion and progression of tumors. Russian Journal of Biotherapy 2017; 16(4): 7-17].
3. Smythe W.R., Estrera A.L., Swisher S.G. et al. Surgical resection of non-small cell carcinoma after treatment for small cell carcinoma. Ann. Thorac. Surg. 2001; 71(3): 962-6.
4. Hahn W.C., Weinberg R.A. Rules for making human tumor cells. N. Engl. J. Med. 2002; 347(20): 1593-603.
5. Hagmar L., Bonassi S., Stromberg U. et al. Chromosomal aberrations in lymphocytes predict human cancer: a report from the European Study Group on Cytogenetic Biomarkers and Health (ESCH). Cancer Res. 1998; 58(18): 4117-21.
6. Fenech M. Cytokinesis-Block Micronucleus Cytome Assay Evolution into a More Comprehensive Method to Measure Chromosomal Instability. Genes (Basel) 2020; 11(10): 1203.
7. Bakhoum S.F., Cantley L.C. The Multifaceted Role of Chromosomal Instability in Cancer and Its Microenvironment. Cell 2018; 174: 1347-60.
8. El-Zein R.A., Lopez M.S., D'Amelio A.M., Jr. et al. The cytokinesis-blocked micronucleus assay as a strong predictor of lung cancer: extension of a lung cancer risk prediction model. Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2014; 23(11): 2462-70.
9. Lloyd S.M., Lopez M., El-Zein R. Cytokinesis-blocked micronucleus cytome assay and spectral karyotyping as methods for identifying chromosome damage in a lung cancer case-control population. Genes Chromosomes Cancer 2013; 52(7): 694-707.
10. Matzenbacher C.A., Garcia A.L., Dos Santos M.S. et al. DNA damage induced by coal dust, fly and bottom ash from coal combustion evaluated using the micronucleus test and comet assay in vitro. J. Hazard Mater. 2017; 324(Pt B): 781-8.
11. Kirsch-Volders M., Fenech M., Bolognesi C. Validity of the Lymphocyte Cytokinesis-Block Micronucleus Assay (L-CBMN) as biomarker for human exposure to chemicals with different modes of action: A synthesis of systematic reviews. Mutat. Res. Genet. Toxicol. Environ. Mutagen. 2018; 836: 47-52.
12. Kaluzhskiy L., Ershov P., Yablokov E. et al. Human Lanosterol 14-Alpha Demethylase (CYP51A1) Is a Putative Target for Natural Flavonoid Luteolin 7,3'-Disulfate. Molecules 2021; 26(8): 2237.
13. Карамова Д.А., Толстова А.В., Кудинова А.И. и др. Выживаемость больных раком легких после оперативного лечения. Современные медицинские исследования 2018; 26-9. [Karamova D.A., Tolstova A.V., Kudinova A.I. et al. Survival of patients with lung cancer after surgery. Modern medical research 2018; 26-9].
14. Базаров Д.В., Выжигина М.А., Бабаев М.А. и др. Хирургическое лечение рака легкого в сочетании с распространенным атеросклерозом в условиях внутриаортальной баллонной контрпульсации. Хирургия 2018; 1: 64-7. [Bazarov D.V., Vyzhigina M.A., Babaev M.A. et al. Surgical treatment of lung cancer combined with advanced atherosclerosis under intra-aortic balloon counterpulsation. Surgery 2018; 1: 64-7].
15. Chiu C.L., Mansor M., Majid A. Anaesthetic management of high-risk cardiac patients undergoing thoracic surgery with the support of intra-aortic balloon pump. Br.J. Anaesth. 2005; 94: 688-9.
усугубляет течение онкологического заболевания и опосредованно связана с увеличением частоты цитоге-нетических аномалий.
Микроядерный тест может быть использован для оценки риска развития РЛ и влияния коморбидности на течение данного заболевания. В дополнение к микроядерному тесту для получения механистической информации о происхождении МЯ, протрузий и нуклеоплаз-менных мостов можно применять молекулярные зонды, которые выявляют центромеры, теломеры и белки ответа на повреждение ДНК.
Благодарности
Исследование выполнено при поддержке комплексной программы фундаментальных научных исследований СО РАН в рамках фундаментальной темы НИИ КПССЗ № 0546-2019-0003 «Мультифокальный атеросклероз и коморбидные состояния. Особенности диагностики, управления рисками в условиях крупного промышленного региона Сибири».
16. Fenech M., Bonassi S. The effect of age, gender, diet and lifestyle on DNA damage measured using micronucleus frequency in human peripheral blood lymphocytes. Mutagenesis 2011; 26(1): 43-9.
17. Villarini M., Moretti M., Fatigoni C. et al. Evaluation of primary DNA damage, cytogenetic biomarkers and genetic polymorphisms for CYP1A1 and GSTM1 in road tunnel construction workers. J. Toxicol. Environ. Health A 2008; 71(21): 1430-9.
18. ГОСТ 32635-2014. Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Микроядерный тест на клетках млекопитающих in vitro, https://www.rts-tender.ru/poisk/gost/32635-2014. [State standard 32635-2014. OECD guidelines for the testing of chemicals. In Vitro Mammalian Cell Micronucleus Test, https://www. rts-tender.ru/poisk/gost/32635-2014].
19. Блинова С.А., Орипов Ф.С., Хамидова Ф.М. Клеточные и молекулярные механизмы развития пороков легких. Гены и Клетки 2021; 16(1): 24-8. [Blinova S.A., Oripov F.S., Hamidova F.M. Cellular and molecular mechanisms of development of lung defects. Genes and Cells 2021; 16(1): 24-8].
20. Bonassi S., El-Zein R., Bolognesi C. et al. Micronuclei frequency in peripheral blood lymphocytes and cancer risk: evidence from human studies. Mutagenesis 2011; 26(1): 93-100.
21. Vodicka P., Polivkova Z., Sytarova S. et al. Chromosomal damage in peripheral blood lymphocytes of newly diagnosed cancer patients and healthy controls. Carcinogenesis 2010; 31(7): 1238-41.
22. Бяхова М.М., Сычева Л.П., Журков В.С. и др. Цитогенетический статус больных раком желудка. Злокачественные опухоли 2013; 3(7): 10-5. [Byakhova M.M., Sycheva L.P., Zhurkov V.S. et al. Cytogenetic status in patients with gastric cancer. Malignant tumours 2013; 3(7): 10-5].
23. Rao C.V., Asch A.S., Yamada H.Y. Emerging links among Chromosome Instability (CIN), cancer, and aging. Mol. Carcinog. 2017; 56(3): 791-803.
24. El-Zein R.A., Etzel C., Munden R.F. The cytokinesis-blocked micro-nucleus assay as a novel biomarker for selection of lung cancer screening participants. Transl. Lung Cancer Res. 2018; 7(3): 336-46.
25. Kirsch-Volders M., Plas G., Elhajouji A. et al. The in vitro MN assay in 2011: origin and fate, biological significance, protocols, high throughput methodologies and toxicological relevance. Arch Toxicol. 2011; 85(8): 873-99.
26. Мельников А.А., Васильев С.А., Смольникова Е.В. и др. Динамика хромосомных аберраций и микроядер в лимфоцитах больных злокачественными новообразованиями при нейтронной терапии. Сибирский онкологический журнал 2012; 4: 52-6. [Melnikov A.A., Vasilyev S.A., Smolnikova E.V. et al. Dynamics chromosomal aberrations and micronuclei in lymphocytes of patients with malignant neoplasms in neutron therapy. Siberian Journal of Oncology 2012; 4: 52-6].
27. Asanov M., Bonassi S., Proietti S. et al. Genomic Instability in Chronic Obstructive Pulmonary Disease and Lung cancer: A Systematic Review and Meta-analysis of studies using the Micronucleus Assay. Mutation Research — Reviews in Mutation Research 2021; 787: 108344.
28. Masuda A., Takahashi T. Chromosome instability in human lung cancers: possible underlying mechanisms and potential consequences in the pathogenesis. Oncogene 2002; 21(45): 6884-97.
29. Bolognesi C., Fenech M. Micronucleus Cytome Assays in Human Lymphocytes and Buccal Cells. Methods Mol. Biol. 2019; 2031: 147-63.
30. Гетман С.И., Задионченко В.С., Ялымов А.А. Комплексная терапия ИБС: в фокусе антигипоксанты. РМЖ 2016; 24(14): 917-22. [Getman S.I., Zadionchenko V.S., Yalymov A.A. Management of coronary artery disease: focus on antihypoxants. RMJ 2016; 24(14): 917-22].
