CC BY
65
УДК Б18.2-022.Б-055.1-07
ГЕНОДИАГНОСТИКА ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ЖЕНШИН С РАЗЛИЧНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СФЕРЫ
Л.А. Андосова, О.В. Качалина, С.Ю. Куделькина, Е.С. Гонова,
ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»
Андосова Лариса Дмитриевна - e-mail: [email protected]
Цель исследования: оценить частоту встречаемости различными генотипами ВПЧ ВКР, вирусную нагрузку у женшин различных возрастных групп с инфекционно-воспалительными процессами
репродуктивной сферы и заболеваниями шейки матки. Материалом для исследования служили образцы содержимого цервикального канала. Вирус папилломы человека был обнаружен у 1128 обследованных (84,4%); у 208 человек (15,Б%) результаты исследования оказались отрицательными. Клинически малозначимая концентрация вируса была отмечена у Б40 пациенток (47,9%), т. е. почти у половины обследованных. Клинически значимая концентрация ВП Ч была зарегистрирована у 43Б пациенток (32,Б%), повышенная концентрация - у 2Б0 женшин (19,5%). Была проведена оценка вирусной нагрузки в различных возрастных группах - всего 555 пациенток. Было показано, что клинически малозначимая вирусная нагрузка чаше встречается у представителей старшего возраста (более 51 года), она зарегистрирована у 53,8% пациентов. Определение генотипов ВПЧ проводилось у 2ББ5 человек. Результаты анализа оказались отрицательными у 304 пациентов (11,4%); у 73 человек (2,7%) вирус был обнаружен, но генотип не определялся. Наиболее распространенными оказались генотипы 5Б, 1Б и 51. Частота выявления остальных генотипов варьировала от 1,Б до Б,8%.
Ключевые слова: папилломавирусная инфекция, ПЦР-реальное время,
генотипирование, вирусная нагрузка.
The goal of the research is to evaluate the frequency of disclosure by different genotypes of human papilloma virus of high carcinogenic risk, viral load among women of various ages with inflammatory infectious
processes of the reproductive system and neck of uterus diseases. The research material was patterns of cervical canal. The human papilloma virus were revealed among 1128 patients (84,4%); the negative results were revealed among 208 people (15,Б%). Clinically less significant virus concentration was observed among Б40 patients (47,9%), i.e. nearly half of examined women. Clinically significant human papilloma viruses concentration was registered among 43Б patients (32,Б%), increased concentration -among 2Б0 women (19,5%). The viral load was appraised in different age groups - 555 patients in all. Clinically less significant viral load frequently occurred among elder people (more than 51 age old), it was registered among 53,8% patients. Genotype determination of human papilloma virus was conducted among 2ББ5 people. 304 humans (11,4%) had a negative viral analysis test done; virus was revealed among 73 humans (2,7%), however, genotype did not determine. The most widely distributed genotypes were 5Б, 1Б and 51. Genotype 5Б was detected among 729 humans (27,4%), genotype 1Б - among 342 humans (12,8%), genotype 51 - among 294 humans (11,0%). The frequency of other genotypes detection varied from 1,Б to Б,8%.
Key words: papilloma viral infection, PCR-“real time”, genetic typing, viral load.
Поражения эпителия и слизистых оболочек, вызываемые вирусом паппиломы человека (ВПЧ), находятся в центре внимания как практических врачей, так и специалистов теоретических направлений медицинской науки и здравоохранения. Это внолне закономерно объясняется многочисленностью ВПЧ, насчитывающего более 100 серотипов, его видо- и тканеспецифичностью, особенностями жизненного цикла вириона и характером его взаимодействия с клетками-мишенями, обусловливающими значительное многообразие клинических проявлений папилломавирусной инфекции (ПВИ), вариабельность ее исхода и прогноза. В настоящее время не возникает сомнения в том, что генитальная ПВИ способна приводить к развитию рака шейки матки (РШМ) [1, 2]. Течение ПВИ имеет особенности, которые должны быть обязательно учтены при ведении пациентов. С одной стороны, известно, что около 70-80% случаев инфекции ВПЧ спонтанно излечиваются в течение 9-15 месяцев от момента заражения без проведения дополнительных лечебных процедур; опасность представляет лишь персистентная форма инфекции [3]. С другой стороны, инфекция довольно часто
является «скрытой» и характеризуется отсутствием жалоб у пациентов до стадии манифестации рака, а также низкой частотой выявления стадии предрака при обычном визуальном осмотре без привлечения инструментальных и лабораторных методов. В связи с описанными особенностями инфекции основным предназначением тестов, выявляющих вирус папилломы человека - ВПЧ-тестов, является четкое определение группы риска развития предраковой патологии и рака шейки матки. В настоящее время в качестве вирусологических факторов, имеющих прямое или опосредованное отношение к персистенции вируса и реализации его онко-генного потенциала, рассматриваются: инфекция, вызванная высокоонкогенными типами ВПЧ, а также инфицирование несколькими типами одновременно, высокая вирусная нагрузка, интеграция вирусной ДНК в геном клетки-хозяина. В связи с этим в последние годы в скрининге и мониторинге папилломавирусной инфекции все больше стали использоваться тесты, позволяющие выявить ДНК ВПЧ. Одним из наиболее удобных на сегодняшний день методов, позволяющих обнаружить вирус, а также дать однозначный ответ на
вопросы, каким генотипом ВПЧ произошло заражение, сколько генотипов присутствует одновременно, какова вирусная нагрузка, является метод ПЦР в режиме «реального времени» (ПЦР-РВ) [4]. Для клинического и эпидемиологического мониторинга выявленных случаев папилломави-русной инфекции важно проводить типирование онкоген-ных папилломавирусов. Генотипирование ВПЧ дает дополнительные возможности определения прогноза течения заболевания, позволяет отличить реинфицирование от персистентной инфекции при повторном визите пациента. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистентной инфекции - сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования. Подобная информация имеет важное клиническое значение, так как опасность представляет именно хроническая персистентная форма инфекции; недавнее же инфицирование, вероятно, спонтанно излечивается [5]. Еще одной важной особенностью ВПЧ-тестирования, способствующей повышению специфичности исследования, является возможность определения количества вируса и введения порога клинической значимости вирусной нагрузки. Основаниями для введения порога клинической значимости послужил ряд работ, указывающих на то, что вирусная нагрузка ниже определенного значения («порог значимости») не встречается в образцах тяжелой дисплазии и рака и ассоциирована с регрессией инфекции («клинически незначимое инфицирование»). Нагрузка выше данного порога обозначается как «клинически значимое инфицирование». Также выделяется второй порог - «порог прогрессии» [6].
Цель и задачи исследования: оценить частоту встречаемости различными генотипами ВПЧ ВКР, вирусную нагрузку у женщин различных возрастных групп с инфекционновоспалительными процессами репродуктивной сферы и заболеваниями шейки матки, используя метод полимеразной цепной реакции формата «реальное время».
Материал и методы
Материалом для исследования служили образцы содержимого цервикального канала. Изучены амбулаторные карты пациенток, проанализированы данные анамнеза, объективного исследования и лабораторных методов: микроскопического, цитологического, бактериологического, иммунологического и метода ПЦР-РВ. Последний метод включал в себя ВПЧ-скрининг на вирусы высокого канцерогенного риска, генотипирование и определение вирусной нагрузки. Материал исследовали с использованием анализатора «iQ5» Cycler («Bio-RAD», США), комплекта тест-систем ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора. Полученные данные подвергнуты статистической обработке. Оценивались следующие статистические показатели: распределение эмпирических статистических совокупностей и параметров этого распределения, промежуточные итоги в виде абсолютных величин, относительные величины.
Результаты и их обсуждение
Определение вирусной нагрузки было проведено у 1336 женщин, обратившихся в клиники Нижнего Новгорода по поводу различных гинекологических заболеваний и генитальных инфекций. Вирус папилломы человека был обнаружен у 1128 обследованных (84,4%); у 208 человек (15,6%) результаты исследования оказались отрицательными. Клинически малозначимая концентрация вируса была отме-
чена у 640 пациенток (47,9%), т. е. почти у половины обследованных. Можно предположить, что в данной группе женщин высока вероятность самостоятельного излечения без применения медикаментозных и хирургических средств. Клинически значимая концентрация ВПЧ была зарегистрирована у 436 пациенток (32,6%), повышенная концентрация
- у 260 женщин (19,5%). Была проведена оценка вирусной нагрузки в различных возрастных группах - всего 555 пациенток. Было показано, что клинически малозначимая вирусная нагрузка чаще встречается у представителей старшего возраста (более 51 года), она зарегистрирована у 53,8% пациентов. У пациентов данной возрастной группы также реже всего отмечается повышенная вирусная нагрузка (3,8% обследованных). Напротив, наибольшее число пациентов с повышенной вирусной нагрузкой (25%) - в возрастной группе до 20 лет. Также у людей данного возраста реже всего отмечается клинически малозначимая концентрация ВПЧ (37,5%). Наименьшее число отрицательных анализов на ВПЧ - также у людей младше 20 лет (таблица 1).
ТАБЛИЦА 1.
Вирусная нагрузка ВПЧ, ^ (ВПЧ на 100 тыс. клеток) в различных возрастных группах
Возраст (годы) Вирусная нагрузка Всего обсле- довано
< 3 03.05.11 > 5 отрицательные
Абс. % Абс. % Абс. % Абс. %
До 20 9 37,50% 7 29,20% 6 25,00% 2 8,30% 24
21-25 66 42,90% 34 22,10% 26 16,90% 28 18,20% 154
26-30 78 43,60% 45 25,10% 20 11,20% 36 20,10% 179
31-35 38 48,70% 12 15,40% 5 6,40% 23 29,50% 78
36-40 21 46,70% 9 20,00% 9 20,00% 6 13,30% 45
41-50 25 51,10% 8 16,30% 2 4,10% 14 28,60% 49
Более 51 14 53,80% 6 23,10% 1 3,80% 5 19,20% 26
ТАБЛИЦА 2.
Частота выявления различных генотипов ВПЧ ВКР
Частота выявления Типы ВПЧ ВКР
16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 Отрицательные Не типируются
Абс. 342 76 181 92 42 124 78 294 135 729 95 100 304 73
% 12,8 2,9 6,8 3,5 1,6 4,7 2,9 11 5,1 27,4 3,6 3,8 11,4 2,7
Полученные данные вполне согласуются с утверждением,
что ВПЧ является маркером сексуальной активности. Анализ распределения вирусной нагрузки в других возрастных группах показал, что, действительно, с возрастом наблюдается тенденция к снижению частоты встречаемости повышенной вирусной нагрузки. Вместе с тем, процент людей с клинически малозначимой концентрацией вируса в более старших возрастных группах выше. Определение генотипов ВПЧ проводилось у 2665 человек. Результаты анализа оказались отрицательными у 304 пациентов (11,4%); у 73 человек (2,7%) вирус был обнаружен, но генотип не определялся. Наиболее распространенными оказались генотипы 56, 16 и 51. Г енотип 56 был выявлен у 729 человек (27,4%), генотип 16
- у 342 человек (12,8%), генотип 51 - у 294 человек (11,0%) (таблица 2).
Частота выявления остальных генотипов варьировала от 1,6 до 6,8%. По результатам исследования установлено, что 16 генотип, который является генотипом высокого канцерогенного риска, занимает второе место по распространенности среди определяемых генотипов.
Выводы
Полученные данные подтверждают высокий уровень
инфицированности ВПЧ у женщин с инфекционновоспалительными процессами репродуктивной сферы и заболеваниями шейки матки, что свидетельствует о необходимости проведения лабораторных исследований методом ПЦР-РВ на ВПЧ высокого канцерогенного риска при обследовании женщин. Определение вирусной нагрузки является новым подходом в диагностике папилломавирусной инфекции, поэтому заслуживает особого внимания. Показано, что лидирующими по частоте встречаемости вирусами папилломы человека среди вируспозитивных женщин различных возрастных групп являются генотипы 16, 51, 56, 31. Данные отечественной и зарубежной литературы по ВПЧ-инфицированию весьма противоречивы, однако ряд отечественных работ не противоречат полученным результатам [2, 7]. Генодиагностика урогенитальной папилломавирусной инфекции позволяет выявлять этиологический фактор возможной патологии, персистенцию онкогенных папиллома-
вирусов, определять группы повышенного риска по онкозаболеваниям урогенитального тракта у женщин. ^
ЛИТЕРАТУРА
1. Катханова О. Роль ВПЧ в генезе неопластических процессов шейки матки. Оптимизация лечебной тактики. М.: Врач, 2009. № 3. С. 23-26.
2. Роговская С.И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки.М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. С. 49-69.
3. Киселев В.И. Молекулярные механизмы патогенеза гиперпластических и диспластических заболеваний репродуктивной системы и пути их фармакологической коррекции. В кн.: Патология шейки матки и генитальной инфекции. М.: МЕДпресс-информ, 2008. С. 53-86.
4. Куевда Д.А., Шипулина О.Ю. Сравнение аналитических характеристик различных молекулярно-биологических тестов для диагностики папиллома-вирусной инфекции. Генодиагностика инфекционных болезней: В сб. тр.: 5-й Всероссийской научно-практической конференции. М. 2004. Т. I. С. 325-331.
5. Верчейчик Г.И., Ситрибук Ж.А., Еремин В.Ф. Определение доминантных генотипов онкогенных папилломавирусов. В сб. тр.: Сборник трудов VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. М. 2010. С. 358-360.
6. Куевда Д.А., Шипулина О.Ю., Минкина Г.Н. и др. Количественный подход в диагностике генитальной папилломавирусной инфекции. Генодиагностика инфекционных болезней: В сб. тр. 6-й Всероссийской научно-практической конференции. М. 2007. Т. III. С. 120-124.
7. Абрамова О.С., Зотова М.А., Телешева Л.Ф., и др. Вирусная нагрузка при эктопии шейки матки, ассоциированной с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска. В сб. тр.: Сборник трудов VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. М. 2010. С. 350-352.
