Генетические нарушения при рецидивирующих гемобластозах: потеря гетерозиготности, однородительская дисомия и ее прогностическое значение Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019

Н. В. Рисинская1, В. А. Васильева1, А. Б. Судариков1, Ю. Г. Жусина2, Е. В. Аксенова2, И. В. Канивец2, Н. С. Кострица3, А. А. Юшкова1, Е. Е. Никулина1, Ю. А. Чабаева1, С. М. Куликов1, Л. А. Кузьмина1, Е. Н. Паровичникова1, В. Г. Савченко1

1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский медицинский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва

2 Лаборатория молекулярной патологии ООО "Геномед"

3 Факультет фундаментальной медицины, Федеральное государственное образовательное учреждение высшего образования «Московский Государственный Университет имени М. В. Ломоносова», г. Москва

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ ПРИ РЕЦИДИВИРУЮЩИХ ГЕМОБЛАСТОЗАХ: ПОТЕРЯ ГЕТЕРОЗИГОТНОСТИ, ОДНОРОДИТЕЛЬСКАЯ ДИСОМИЯ И ЕЕ ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Введение. Изменения в геноме опухолевой клетки можно обнаружить различными методами. В частности, при мониторинге хи-меризма у пациентов с гемобластозами после трансплантации аллогенных гемопоэтических клеток (алло-ТГСК) детектируется потеря гете-розиготности в локусах коротких тандемных повторов ^ТЯ) в случае рецидивов. Потеря гетерозиготности (ПГ) в геноме бластных клеток объясняется либо делецией соответствующего фрагмента или всей хромосомы, что подтверждается цитогенетически, либо однородительской дисомией (ОРД). Это нарушение цитогенетический анализ не выявляет, поскольку при таком варианте потери гетерозиготности происходит дупликация гомологичного участка второй хромосомы, либо всей хромосомы, таким образом сохраняется нормальная копийность региона ПГ.

Цель. Оценить частоту возникновения ПГ и ОРД при рецидивах у пациентов с ОМЛ и ОЛЛ после алло-ТГСК и возможную связь ПГ в локусах STR с другими геномными изменениями в опухолевых клетках.

Материалы и методы. Был проведен анализ БТЯ-профилей у 46 пациентов (27 ОМЛ, 17 ОЛЛ (4 В-ОЛЛ, 8 Т-ОЛЛ, 5 РЬ+ ОЛЛ), 2 острых лейкоза смешанного фенотипа) после алло-ТГСК в период между 2012 и 2018 гг на базе ФГБУ «НМИЦ гематологии», Москва. Пациенты были разделены на две группы: «без рецидива в анамнезе» (26 пациентов: 16 ОМЛ, 4 РЬ+ ОЛЛ, 3 В-ОЛЛ, 2 Т-ОЛЛ, 1 острый лейкоз смешанного фенотипа) и группа пациентов с костномозговыми рецидивами или рецидивами центральной нервной системы (20 больных: 9 ОМЛ, 10 ОЛЛ, 1 острый лейкоз смешанного фенотипа). У 40 больных образцы ДНК были выделены из костного мозга в момент диагностики заболевания, у 6 пациентов «дебютных» образцов не было, так как этим больным индукционную

терапию проводили в других медицинских учреждениях. У всех больных с костномозговым рецидивом ДНК выделялась из костного мозга, при нейрорецидиве — из спинномозговой жидкости. Содержание бластных клеток в образцах костного мозга и спинномозговой жидкости определялось морфологически и цитогенетически. Контрольные образцы ДНК были выделены из костного мозга тех же пациентов в стадии ремиссии. STR-профили оценивали, проводя ПЦР с использованием мультиплексного набора COrDIS Plus (Gordiz Ltd, Россия) с последующим фрагментным анализом на генетическом анализаторе ABI3130. Обработка данных была выполнена с использованием программного обеспечения GeneMapper v.4-0. Частота встречаемости гетерозигот для STR-локусов D3S1358, TH01, D12S391, D1S1656, D10S1248, D22S1045, D2S441, D7S820, D13S317, FGA, TPOX, D18S51, D16S539, D8S1179, CSW118, D8S11S, D8S11S, D8S11S, D33S, D5S, D11S, D5S, D11S, D5S, D11S была исследована на когорте пациентов НМИЦ гематологии и их доноров, по 120 человек в каждой. Хромосомный микроматричный анализ (ХМА) высокого разрешения на платформе Affimetrix CytoscanTM HD был выполнен для подтверждения ПГ и оценки изменений копийности в геноме. Обработку данных осуществляли с использованием п/о GEN0SCAN3000, версия для сборки генома hg19, GRCh37 Genome Reference Consortium Human Reference 37, https://genome. ucsc. edu/.

Результаты. Высокая гетерозиготность (от 70 % до 95 %) исследуемых локусов STR была установлена в предварительном эксперименте. В группе «без рецидивов» ПГ по локусам STR в бластах была выявлена у трех пациентов (11,5 %): у двух с ОМЛ и у одного пациента с T-ОЛЛ. Во второй группе ПГ в STR-локусах была выявлена у 10 пациентов из 20, и дополнительно у трех пациентов ПГ была определена

VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»

с помощью ХМА (65 %): 5 пациентов с ОМЛ,7 ОЛЛ и один пациент с острым лейкозом смешанного фенотипа. Для всех пациентов этой группы с ПГ в дебюте этот же паттерн подтверждался в рецидиве. У одной пациентки с В-ОЛЛ в дебютной опухолевой ДНК была установлена ПГ в 10 из 15 гетерозиготных локусов, этот же STR-профиль с ПГ воспроизводился в образцах из всех рецидивов: 3 костномозговых и 4 нейрорецидива. ХМА показал, что ПГ в локусах STR является результатом ОРД, захватывающей плечо или всю хромосому, в 20 случаях, и результатом делеции в 10 случаях ПГ. Для двух пациентов с рецидивом ОМЛ и мутацией РКГ3-1ТО (13q12.11) ОРД длинного плеча

Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.

13 хромосомы обеспечивала гомозиготность этой мутации. Для одной пациентки с Т-ОЛЛ ПГ в регионе 1р36.3-1р35.3 привела к появлению гомозиготного генотипа резус-фактора RH*CwCwDee в рецидиве.

Выводы. Частота ПГ в локусах STR значительно выше в группе пациентов с рецидивами. ОРД объясняет появление гомозиготных генотипов в дебюте и рецидиве заболевания. ХМА позволяет выявить гены-кандидаты в области ОРД или регионе изменения копийности (делеции, дупликации), вовлеченные в онкогенез у определенного пациента, что может помочь в выборе эффективной таргетной терапии.

Н. Р. Рябчикова1, Г. Ш. Сафуанова1, Э. К. Хуснутдинова2 И. Р. Минниахметов2,3,В.

И. Никуличева1, А. У. Багаутдинова4, А. Ф. Яхина4

1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Уфа

2 Институт биохимии и генетики — обособленное структурное подразделение Федерального государственного бюджетного научного учреждения Уфимского федерального исследовательского центра Российской академии наук, г. Уфа

3 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Республиканский медико-генетический центр, Уфа

4 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Республиканская клиническая больница им Г. Г. Куватова, Уфа

ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ HOCT1 И ABCG2 НА ТЕРАПИЮ И ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ЖИЗНИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ

Введение. За последние десятилетия исследователи достигли огромных успехов в понимании молекулярно-биологических основ патогенеза и отработки механизмов диагностики и мониторирования таргетной терапии хронического миелолейкоза (ХМЛ). Научные работы свидетельствуют о замечательных результатах лечения этого наиболее распространенного миелопроли-феративного заболевания ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) 1 и 2 поколения. В то же время, все чаще встречаются исследования по изучению развития резистентности или недостаточного эффекта при лечении ИТК. Особое место занимает дальнейшее изучение генетики этого миелопролиферативного заболевания и поиск прогностических маркеров полиморфных вариантов различных генов для понимания индивидуализированного ответа на лечение и продолжительности жизни пациентов. На сегодняшний день существует мало исследований экспрессии генов переносчиков органических катионов, участвующих в метаболизме ингибиторов

тирозинкиназ: И0СТ1 ЛВС02 на клинических образцах ХМЛ, а также влияния их экспрессии в определении исхода лечения.

Цель. Оценить влияние полиморфных вариантов генов ЬОСТ1 и ЛВС02 на терапию и продолжительность жизни больных ХМЛ.

Материалы и методы. Генетические исследования проводились у 114 пациентов с клинически и цитогенетически установленным диагнозом ХМЛ в хронической стадии, находившихся под наблюдением гематологов Республиканской клинической больницы. Мужчин было 55, женщин 59, медиана возраста составила 43 года (от 14 до 76 лет). Все больные получали лечение ИТК (согласно национальным клиническим рекомендациям и ELN). Сравниваемые группы по ответу на лечение рандомизированы и сопоставимы по полу и возрасту. Анализ полиморфных ДНК-локусов генов hOcT1 и ЛВСв2 осуществляли методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и ПДРФ-анализом с последующим электрофорезом в 7-8 % полиакрила-мидном геле. Статистическая обработка полученных данных проводилась на персональном