CC BY
78
УДК 57.052.115.616.151.5
ГЕМОСТАЗ ПРИ ОТСУТСТВИИ, ДЕФИЦИТЕ И ИЗБЫТКЕ КОБАЛАМИНА У КРЫС, СОДЕРЖАЩИХСЯ НА СБАЛАНСИРОВАННОМ ПИЩЕВОМ РАЦИОНЕ
© 2009 А.Ш. Бышевский, П.Я. Шаповалов, Е.М. Шаповалова
Тюменская государственная медицинская академия, г. Тюмень Поступила 12.05.2009
Рассмотрены изменения гемостаза и липидпероксидации у животных при их содержании на сбалансированном рационе питания в зависимости от количества в нем витамина В12. Охарактеризованы зависимости между толерантностью к тромбину, внутрисосудистым свертыванием крови, липидпероксидацией и антиокси-дантным потенциалом
Ключевые слова. Витамин В12. Гемостаз. Липидпероксидация.
АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Кобаламин (витамин В12), участвует в метаболизме в виде оксикобаламина, метилкобаламина и 5-дезоксиаденозилкобаламина, содержащих разные заместители у атома кобальта (гидроксильную, метиль-ную группу или дезоксиаденозильный радикал). Ок-сикобаламин - основная транспортная форма кобала-мина (КБ), метилкобаламин и дезоксикобаламин -коферментные формы [28, 30]. Основное проявления дефицита КБ - нарушения кроветворения, ведущие к гиперхромной мегалобластической анемии, лейкопении, нейтропении и дегенерации задних и боковых стволов спинного мозга. Мегалобластическая анемия при дефиците КБ не связана с нарушениями его известных коферментных функций, и сходна с анемией, вызываемой дефицитом витамина Вс [27].
Метаболические сдвиги при дефиците КБ связаны с его ролью в обмене белков (ускорение протеолиза и замедление синтеза белка и нуклеиновых кислот). Стимулирует КБ синтез холина, защищает сульфгид-рильные соединения, регулирует отношение НАД/НАДН+, ускоряет образование акцепторов-донаторов СН3-групп, Контролирует активацию аминокислот энзимами рН-5-фракции [7].
Используют КБ в коррекции многих патологических состояний, нередко вызванных повышенным расходом витаминов В12 и Вс (спру, анемия беременных, анемии при злокачественных новообразованиях, энтероколитах, интоксикациях) [8]. Используется КБ в лечении атеросклероза, артериальной гипертензии, биллиарного цирроза [25], сахарного диабета 2 типа [4, 5], в кардиохирургии [4]. Лечебное применение и его результаты обсуждены в прошедшем столетии [17, 21] и в последние годы [23, 28, 35]. Ещё в 60-е гг. опубликован перечень состояний, включающий десятки нозологических единиц, в лечении которых КБ полезен [6]. Всё это свидетельствует о значении КБ в метаболизме и позволяют ожидать, что дефицит КБ
Бышевский Анатолий Шулимович, доктор медицинских наук, заведующий кафедрой биохимии. Тел. (345-2) 20-23-68. Шаповалов Пётр Яковлевич, доктор медицинских наук, заведующий кафедрой гигиены с курсом экологии. Тел. (345-2) 92-10-64. Шаповалова Елена Михайловна, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры аналитической и органической химии.
или избыток может отражаться и на состоянии гемостаза - важной системы жизнеобеспечения.
У здоровых людей КБ не изменяет общей свертываемости крови, а при гемофилии с избытком гепари-ноидов нормализует время свертывания, хотя на активность и потребление фактора (ф.) II не влияет [37]. Применение КБ в терапии гемофилии с замедленным потреблением ф. II нормализует время свертывания, не изменяя тромбопластической активности крови и уровня ф. II [26], т.е. влияет на свертывание крови неспецифично.
По данным ВОЗ дефицит его выявлен в разные годы у 15-45% беременных [36] с нарушениями гемостаза [20].
Показано, что введение КБ не ускоряет потребления ф. II при лучевом поражении и что В12-авитаминоз не изменяет этот процесс [1]. Введение КБ повышает концентрацию ф. Х и тромбопластиче-скую активность, однако, в иной степени и иным путем, чем витамин К [14], следовательно, механизм эффекта КБ остается не раскрытым. Обнаружилось, что при скорбуте введение КБ ограничивает тромбо-цитопению и спад тромбопластической активности тромбоцитов, способствуя росту уровня протромбо-киназы через ускорение тромбоцитопоэза [2]. Так как КБ ускоряет синтез белка [16], наблюдающийся при его введении рост уровня ф. II можно считать результатом ускорения биосинтеза протеинов [38].
При введении КБ в дозе, эквивалентной лечебной, находили угнетение фибринолиза в эуглобулиновой фракции и в цельной плазме, снижение общей анти-тромбиновой активности. Одинаковая степень угнетения фибринолиза в эуглобулиновой фракции и в нефракционированной плазме исключает влияние КБ на антиплазмины, отсутствующие в эйглобулиновой фракции, не раскрывая механизмов эффекта [7]. Противоречивы эффекты КБ на холестеролемию и течение атеросклероза [6, 25, 30].
Однако можно констатировать зависимость состояния гемостаза от обеспеченности организма КБ, реализующаяся, возможно, за счет влияния КБ на тромбоцитопоэз и коагулоактивность тромбоцитов. Малое число и противоречивость фактических данных, касающихся механизма действия КБ, позволяет лишь допускать, что его избыток снижает один из интегральных показателей состояния гемостаза - толерантность к тромбину. Не внесли ясности и данные последних лет о влиянии КБ на гемостаз через гипер-
гомоцистеинемию, повышающую риск тромбообра-зования [11, 18, 27, 32].
В целом приведенные нами сведения о связи КБ с гемостазом не позволяют сделать уверенных выводов. Выделим лишь то, что представляется достаточно обоснованным: 1. Состояние гемостаза зависит от обеспеченности организма КБ, влияющим на тромбо-цитопоэз, коагулоактивность тромбоцитов и плазми-новую систему; 2. Известны заболевания, сопровождающиеся гемостатическими сдвигами и В12-гиповитаминозом, а обогащение организма больных КБ ограничивает сдвиги; 3. Результаты, полученные в эксперименте и клинике обнаружили влияние нагрузок КБ на небольшое число про-, антикоагулянтов и отдельных компонентов плазминовой системы, однако нельзя ответить на вопрос о том, как влияет дефицит или избыток КБ на гемостаз, как систему в целом или на ее субкомпоненты; 4. Представительны данные о роли КБ в развитии гипергомоцистеинемии, что предполагает возможность влияния витамина В12 на гемостаз, поскольку связь нарушений обмена гомоци-стеина (метаболита протеиногенной аминокислоты метионина) с гиперкоагуляционными сдвигами несомненна, хотя и нуждается в уточнении; 5. Нет данных о влиянии КБ на интегральные показатели состояния гемостаза - непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (НВСК) и толерантность к тромбину (ТкТР). Следовательно, есть основания для изучения связи витамин В12 - гемостаз с использованием приемов, позволяющих интегрально оценивать состояние системы свертывания крови.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Опыты проведены на белых крысах (300 особей, 145±12.2 г), получавших сбалансированный казеино-во-крахмальный рацион, содержащий минералы и витамины согласно суточной потребности [15]. Пробы крови брали в шприц с 3,8% раствором цитрата натрия (9:1 по объему) из обнаженной v. jugularis у наркотизированных и фиксированных на препаровочном станке животных. Рану закрывали 2-3 швами (кетгут). В плазме определяли содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген, отражающее интенсивность НВСК [12, 34]:
1. Продукты деградации фибрина (ПДФ) - по описанию [9], 2. Уровень растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ) - фенантролиновым тестом [19], 3. Уровень D-димеров - латексной агглютинацией (набор «D-dimer test", Roche), 4. Уровень ф. Р3 и Р4 в плазме в описании [3]), Оба фактора - косвенные маркеры НВСК (их уровень в плазме пропорционален тромбинемии, ускоряющей реакцию высвобождения тромбоцитов [24]), 5. Концентрацию в плазме осаждаемого тромбином фибриногена, снижение которой при других признаках ускоренного ВТФ говорит об активации НВСК [39], определяли спектрофо-тометрически. Толерантность к тромбину определяли по описанию [10]. Перекисное окисление липидов в тромбоцитах и их антиоксидантный потенциал оценивали, определяя: 1. Содержание первичных липид-пероксидов - диеновых конъюгат (ДК), 2. Содержание
вторичных липидпероксидов - продуктов, взаимодействующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), 3. Период индукции (ПИ) и 4. Скорость окисления (СО). Все названные определения проводили согласно описанию [22]. Схемы опытов приведены ниже и повторены в таблицах.
Анализ результатов проводили с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03, используя метод вариационной статистики для малых рядов наблюдений и вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (m) и среднеквадратическое отклонение (о). Для оценки достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стъюдента (t) и степень вероятности (р). Сопоставляя интенсивные показатели, использовали альтернативное варьирование, рассчитывая такие же статистические показатели. Взаимосвязи переменных анализировали методом ранговой корреляции Спирмена. Различия считали достоверными при значениях р < 0.05.
В работе использовали: 1. Тромбин и фибриноген бычьей крови («Технология-стандарт»), 2. Тромбо-пластин (кадаверный лиофильно высушенный, «Технология-стандарт»). 3. Каолин (легкая фракция, «Технология-стандарт»), 4. Набор «D-dimer test" («Roche»), 5. Изопропанол - ч. (дополнительная очистка простой перегонкой), 6. Хлорбензол - ч. (дополнительная очистка простой перегонкой), 7. Бутанол -х. ч. , 8. Ацетат свинца х. ч. 9. Хлорид кальция х. ч. 10. Буфер Михаэлиса (вероналовый буфер) «Технология-стандарт», 11. Цианокобаламин в ампулах по 1 мл -200 мкг/мл (ЗАО «Уфавит»), 12. Ацетат свинца х.ч., 13. Синтетический антиоксидант димефосфон (Казань).
ПОЛУЧЕННЫЕ ДАННЫЕ
Влияние на липидпероксидацию (ЛПО), антиокси-дантный потенциал (АОП) и гемостаз отсутствия витамина В12 и его введения в количествах, составляющих часть суточной потребности или превышающих её, проведены на 9 группах крыс: контрольная группа получала рацион с КБ в количестве, равном суточной потребности (1 мкг/кг), крысы одной из подопытных групп КБ не получали (В12-авитаминный рацион), крысы остальных подопытных групп получали КБ в количестве, составляющем 50% от суточной потребности или в дозах, превышающих суточную потребность в 2, 4, 6 и 12 раз (2, 4, 6 или 12 мкг/кг массы тела соответственно). Число наблюдений (n) на этапах приводится в таблицах.
Таблица 1. Изменения ЛПО и АОП в тромбоцитах крыс, неполучавших КБ, получавших его в количестве, равном суточной потребности, ниже потребности и в превышающих потребность в 2, 4, 8 и 16 раз (строки 1,2 и 3 соответственно через 4, 6 и 8 недель)
Показатели Контроль (получали кобаламин по 1.0 мкг /кг), n=12 Животные получали КБ (мкг/кг):
0.0 0.5 2.0 4.0 8.0 16.0
ДК, А/мг ЛП 0.053±0.002 0.056±0.002* 0.063±0.003* 0.068±0.003* 0.056±0.004 0.058±0.002* 0.065±0.003* 0.051±0.001 0.048±0.001* 0.048±0.003* 0.049±0.005 0.049±0.003* 0.045±0.002* 0.047±0.004* 0.042±0.003* 0.035±0.003* 0.047±0.001* 0.038±0.002* 0.033±0.001*
ТБК, ед./мг ЛП 0.70±0.03 0.77±0.03* 0.79±0.03* 0.86±0.04* 0.73±0.03* 0.75±0.02* 0.81±0.03* 0.68±0.03 0.67±0.03* 0.65±0.03* 65±0.03* 0.56±0.03* 0.51±0.02* 0.66±0.02* 0.57±0.01* 0.48±0.01* 0.59±0.03* 0.53±0.02* 0.40±0.0*
ПИ, мин/мл 45.7±1.2 41.3±1.4* 39.4±1.1* 36.2±1.1* 43.9±1.3 42.3±1.1* 42.6±1.1* 47.1±1.4 50.3±1.1* 55.0±1.2* 47.9±0.8* 47.2±1.2* 42.9±1.0* 45.4±1.1 48.0±0.8* 51.1±1.0* 47.9±0.8* 51. 7± 1.2* 58.9±0.9*
СО, мм3/мл/мин 0.75±0.03 0.80±0.02* 0.85±0.04* 0.89±0.03* 0.78±0.04 0.80±0.03* 0.78±0.02* 0.74±0.02 0.67±0.02* 0.69±0.01* 0.69±0.02* 0.64±0.03* 0.56±0.04* 0.63±0.02* 0.58±0.02* 0.49±0.03* 0.60±0.03* 0.52±0.01* 0.44±0.04*
Обозначения: ДК - диеновые конъюгаты, ЛП - липид, ТБК - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой, ПИ -период индукции, СО - скорость окисления; знак * - достоверное отличие от контроля
Таблица 2. Маркеры НВСК в плазме, фибринолиз и ТкТР у крыс, неполучавших витамина В12, получавших его соответственно суточной потребности, в количествах ниже потребности и превышающих потребность в 2, 4, 8 и 16 раз
Показатели Контроль (получали кобаламин по 1.0 мкг Животные получали КБ (мкг/кг):
/кг) 0.0 0.5 2.0 4.0 8.0 16.0
Ф. Р3,% 87.9±1.1 90.0±1.0 94.1±1.2* 95.4±1.5* 90.2±1.7 94.1±1.6 97.1±1.6* 86.9±1.9 83.9±1.6 90.8±1.9 85.3±1.6 88.1±1.2 91.2±1.0* 82.9±1.4 87.1±1. 93.1±1.1* 85.9±1.7 89.1±1.9 98.7±1.2*
Ф. Р4, с 3.3±0.01 3.5±0.04 4.0±0.02* 4.8±0.03* 3.5±0.05 3.6±0.02* 4.1±0.03* 3.3±0.04 3.5±0.01 3.8±0.02 3.4±0.04 3.5±0.04 3.8±0.04* 3.6±0.05 4.0±0.09* 4.5±0.04* 3.5±0.04 4.2±0.09* 4.7±0.08*
ФГ, г/л 2.1±0.02 2.3±0.08 2.0±0.07 1.7±0.07* 2.1±0.12 2.3±0.08 1.8±0.06 2.2±0.07 2.0±0.05 2.1±0.08 2.2±0.06 2.0 ±0.03 2.1±0.06 2.3±0.07 2.1±0.04 2.0±0.05 2.0±0.05 2.3±0.05 2.1±0.04
ПДФ, мг% 15.6±0.8 16.5±1.4 19.0±1.1* 23.9±1.2* 16.5±1.2 17.4± 1. 2 19.3±1.1* 14.9±0.9 17.8±0.4 18.9±0.7 14.9±0.8 15.6±0.6 16.6±0.5* 4.5±0.9 15.7±0.9 17.8±0.4* 14.9±0.8 15.8±0.7 19.6±0.6*
РКМФ, мкг/мл 24.0±1.0 24.0±0.9 30.0±0.8* 34.5±0.9* 25.4±0.9 26.1±1.0* 27.0±0.3* 20.7±1.5 26.8±0.4 27.1±0.9 23.9±1.2 25.8±0.9 28.0±0.7* 27.0±1.3 25.1±0.9 28.8±0.8* 27.1±1.6 26.2±1.9 31.5±0.8*
D-Д, мкг/мл 0.21±0.007 0.22±0.008 0.26±0.005* 0.30±0.010* 0.21±0.014 0.24±0.006 0.27±0.005* 0.18±0.015 0.23±0.010 0.24±0.007 0.19±0.009 0.21±0.012 0.24±0.008 0.18±0.014 0.20±0.012 0.25±0.008* 0.19±0.015 0.23±0.010* 0.27±0.011*
Ф^Па-зависимый фибринолиз, мин 8.2±0.02 8.4±0.07 7.8±0.05 7.9±0.08 8.6±0.09 9.1±0.05 8.9±0.04 8.1±0.05 7.3±0.05 6.4±0.03* 7.9±0.07 6.5±0.07 5.9±0.04* 7.8±0.08 7.5±0.06 5.4±0.03* 7.9±0.07 7.7±0.09 5.1±0.06*
ТкТР, % 100±2.4 89.8±1.9 88.0±1.3* 85.8±1.2* 98.7±1.4 91.9±1.1* 89.0±1.3* 109±2.2 114±2.0* 119±1.9* 108±2.7 112±2.1* 122±1.8* 113±5.8 121±2.7 128±1.5* 115±5.7 119±4.6 134±1.9*
(строки 1,2, 3 и 4 - соответственно после 2, 4, 6 и 8 недель) Обозначения здесь и далее: Ф. - фактор, ФГ - фибриноген, ПДФ - продукты деградации фибрина, РКМФ - растворимые комплексы мономерного фибрина, D-Д - D-димеры; ТкТР - толерантность к тромбину; * - достоверное отличие от контроля
Согласно данным табл. 1, отсутствие КБ в рационе приводит к нарастающему ускорению ЛПО и снижению АОП, начиная с 4-й недели - возросли уровень липидпероксидов ДК, ТБК и увеличилась скорость
окисления (СО), удлинился период индукции (ПИ).
При введении КБ в дозе, составляющей 50% от суточной потребности, эти сдвиги ослабевали, но значения показателей не достигали величин, найденных в
контроле.
Здесь же видно, что 2-кратное (по отношению к потребности) количество КБ предупреждает сдвиги липипероксидации, выявлявшиеся при В12-авитаминном рационе, а через 6 и 8 недель снижает её скорость и удлиняет период индукции (ПИ), т.е. угнетает перекисное окисление липидов и повышает ан-тиоксидантный потенциал.
Такова же динамика ЛПО и АОП при 4-кратном количестве КБ в рационе с той разницей, что в этом случае торможение ЛПО и рост АОП выявляется быстрее - уже через 4 недели от начала опыта, и заметнее прогрессирует в более поздние сроки.
При введении восьми- и шестнадцатикратного количества КБ динамика такова же, но более выражена: сдвиги происходят в том же направлении, что и при меньшем избытке витамина, но оказываются значительнее.
При оценке данных, приведенных в табл. 2, можно заметить, что в условиях питании В12-авитаминным рационом у животных через 6 и особенно через 8 недель от начала опытов растет в плазме уровень фф. Р3 и Р4. Примерно в таком же темпе увеличивается плазменный уровень ПДФ, РКМФ и Б-димеров. В те же сроки наблюдается снижение толерантности к тромбину, а активность фибринолиза не изменяется.
При введении с рационом КБ в количестве, составляющем 50% от суточной потребности, все эти сдвиги менее выражены.
При введении витамина В12 в двукратном против потребности количестве уровень маркеров НВСК не отличается от контрольного, обнаруживая тенденцию к росту лишь через 8 недель (о тенденции, несмотря на статистическую недостоверность сдвигов можно говорить потому, что уровень каждого из маркеров через 8 недель был выше контрольного значения, примерно на одинаковую величину).
Фибринолиз и толерантность к тромбину через 8 недель увеличились достоверно.
При введении КБ в 4-кратной дозе выявился прирост уровня маркеров НВСК к концу опытов, что стало намного заметнее при введении витамина в 8- и 16-кратном количестве. Фибринолиз у этих животных с увеличением дозы ускорялся к концу наблюдений, увеличивалась у животных и толерантность к тромбину.
Данные, полученные в рассмотренной выше серии экспериментов, не позволяют однозначно решить реализуются ли его эффекты на гемостаз благодаря антиоксидантным свойствами кобаламина. В связи с этим мы провели опыты с введением КБ на фоне про-или антиоксиданта (свинца или димефосфона соответственно), пытаясь установить, влияет ли изменение скорости липидпероксидации на ответную реакцию организма, вызываемую отсутствием или избытком витамина В12 в питании. В этих опытах одновременно с КБ животным ежедневно вводили с рационом
ацетат свинца (50 мг/кг) или димефосфон (1 г/кг в день соответственно), изучая эффекты КБ на липид-пероксидацию, антиоксидантный потенциал и гемостаз
Схема опыта: 1-я группа получала рацион без КБ (В12-авитаминный), 2-я - рацион с витамином В12 (1,0 мг/кг), 3-я - рацион с ацетатом свинца (50 мг/кг), не содержащий витамина В12,
Группа 4-я получала ту же дозу ацетата свинца одновременно с КБ (1,0 мкг/кг); 5-я группа - диме-фосфон (1 г/кг) с В12-авитаминным рационом; 6-я -димефосфон (1 г/кг) и витамин В12 (1,0 мкг/кг).
Здесь, сопоставляя сдвиги показателей в 3-й группе со сдвигами в 1-й группе, судили о влиянии проок-сиданта на липидпероксидазцию и антиоксидантный потенциал при В12-авитаминном питании. Сопоставляя сдвиги в группе 4-й и 2-й, судили об эффекте про-оксиданта при его введении с рационом, содержащим КБ в количестве, равном его суточной потребности. Сравнивая сдвиги в 5-й и 1-й группах, судили об эффекте антиоксиданта у крыс, получавших В12-авитаминный рацион.
Сравнение сдвигов в группах 6-й и 2-й позволяло выявить эффект прооксиданта в условиях, когда рацион содержал КБ в соответствии с суточной потребностью. Отбор проб проводили через 6 и 8 недель (т.е. на высоте эффекта, вызываемого введением КБ).
Результаты опытов приведены в табл. 3. Сопоставляя здесь цифры, представленные в столбцах 1 и 2, видим, что В12-авитаминное питание ускоряет липид-пероксидацию, снижает антиоксидантный потенциал, интенсифицирует НВСК, не влияет на фибринолиз и несколько снижает толерантность к тромбину, как это было установлено предыдущим экспериментом (табл. 1 и 2) и воспроизвелось в обсуждаемом опыте (степень отклонения данных таблиц 1 и 2 от соответствующих данных табл. 3 составляет 2-4%, что ниже, чем пределы ошибки определений).
Сравнивая данные столбцов 3 и 1, видим, что введение прооксиданта (свинца) усиливает сдвиги, возникающие при отсутствии в рационе КБ. Сопоставляя данные столбцов 4 и 3, видим, что эффект свинца на фоне витамина В12, вводимого в количестве, равном потребности, ограничивается витамином.
Сравнивая данные столбцов 5 и 1, видим, что ан-тиоксидант (Димефосфон) ослабил изменения, вызы-выемые потреблением В12-авитаминного рациона по всем показателям, сблизив, хотя и не выровняв их значения с контрольными. Сравнивая столбцы 6 и 2, находим, что димефосфон снизил интенсивность ли-пидпероксидации, повысил антиоксидантный потенциал, снизил уровень маркеров НВСК, повысил толерантность к тромбину - т.е. оказал воздействие, противоположное влиянию на эти величины прооксидан-та, не изменив активности фибринолиза. Рассмотренные данные, их математический анализ (вариационная
Таблица 3. Сдвиги ЛПО, АОП, уровня маркеров НВСК, фибринолиза и толерантности к тромбину при введении прооксиданта или антиоксиданта на фоне В12-авитаминного рациона и рациона, содержащего витамин В12 в соответствии с суточной потребностью (верхняя строка - через 6, нижняя - через 8 недель от начала опыта)
Показатели Группа 1 (без КБ), n=11 Группа 2 (1,0 мкг/кг КБ), n=6 Группа 3 (без КБ+ свинец) n=6 Группа 4 (1,0 мг/кг КБ+ свинец), n=6 Группа 5 (без КБ +димефос-фон), n=6 Группа 6 (1,0 мкг/кг КБ+димефосфон ),n=6
ДК, А/мг ЛП 0.066±0.002* 0.070±0.004* 0.054±0.002 0.053±0.003 0.092±0.004» 0.101±0.007» 0.061±0.004+ 0.063±0.002+ 0.062±0.004л 0.068±0.007л 0.050±0.004# 0.045±0.004#
ТБК, ед./мг ЛП 0.60±0.03* 0.87±0.03* 0.70±0.03 0.073±0.004 1.37±0.06» 1.58±0.07» 0.83±0.07+ 0.83±0.07+ 0.87±0.05л 0.89±0.007л 0.55±0.03# 0.69±0.04#
ПИ, мин/мл 39.2±1.0* 35.9±1.2* 45.5±1.3 46.0±1.9 26.3±1.3» 22.9±1.8» 35.3±1.7+ 42.1±1.6+ 37.0±0.6л 34.8±1.1л 46.7±1.1# 48.9±1.0#
СО, мм3/мл/мин 0.86±0.06* 0.91±0.04* 0.76±0.03 0.75±0.04 1.27±0.06» 1.51±0.004» 0.86±0.09+ 0.96±0.05+ 0.78±0.06л 0.88±0.076л 0.70±0.02# 0.68±0.04#
Ф. Рз,% 94.3±1.1* 95.6±1.2* 99.1±1.5 99.0±1.4 108± 1.4» 126±2.0» 103±1.5+ 112±1.8+ 95.0±1.3л 95.9±1.3л 85.5±1.2# 83.9±1.0#
Ф. Р4, с 4.0±0.02* 4.8±0.03* 3.6±0.05 4.0±0.04 4.7±0.05» 5.9±0.09» 4.2±0.06+ 4.7±0.06+ 3.7±0.06 4.4±0.02л 3.1±0.01# 2.8±0.02#
ФГ, г/л 2.0±0.07 1.7±0.07* 2.0±0.08 1.9±0.01 1.6±0.04» 1.0±0.04» 2.0 ±0.03 2.2±0.04 2.1±0.03 1.7±0.03 2.1 ±0.03 2.0±0.03
ПДФ, мг% 19.0±1. 1 * 23.9±1.2* 17.3±1.1 19.9±1.0* 22.9±1.3» 29.9±1.5» 22.5±0.7+ 23.8±1.6+ 18.0±0.3л 19.8±0.1л 14.2±0.6# 13.7±0.4#
РКМФ, мкг/мл 30.0±0.8* 34.5±0.9* 26.4±1.2 27.4±0.8 34.8±1.9» 40.4±1.9» 26.8±0.9+ 29.0±0.5+ 28.0±0.7л 32.9±0.5л 20.3±0.7# 19.4±0.5#
D-Д, мкг/мл 0.26±0.005* 0.30±0.010* 0.25±0.003 0.28±0.005 0.35±0.008» 0.37±0.003» 0.24±0.006+ 0.30±0.008+ 0.24±0.008 0.27±0.003л 0.21±0.005# 0.18±0.002#
Ф.ХПа- зависимый фибрино-лиз, мин 7.8±0.05 7.9±0.08 8.2±0.02 8.8±0.09 15.8±0.06* 16.3±0.05* 14.0±0.08* 13.9±0.08* 7.9±0.07 8.4±0.04 8.5±0.04 8.4±0.01
ТкТР, % 88.0±1.3* 85.8±1.2* 100±1.5 100±1.6 66.0±1.2» 52.9±1.5» 69.0±1.3+ 65.1±1.6+ 99.5±1.1 96.8±2.7 109±1.7 121±1.5#
Обозначения: как в табл. 1 и 2-й; знак * - достоверные отличия от величин, найденных в соответствующие сроки в группе 2-й от группы 1-й, знак » - в группе 3-й от группы 1-й, знак + - в группе 4-й от группы 2-й, знак Л - в группе 5-й от группы 1-й, знак # - в группе 6-й от группы 2-й. КБ - кобаламин (витамин В12).
статистика, альтернативное варьирование и метод ранговой корреляции Спирмена) позволяют или сделать следующие выводы:
1. Отсутствие и дефицит в сбалансированном рационе КБ пропорционально длительности воздействия снижают антиоксидантный потенциал, ускоряют ЛПО, НВСК и уменьшает толерантность к тромбину.
2. Избыток КБ в количестве, эквивалентном лечебным дозам, замедляет ЛПО, НВСК, ускоряет Ха-геман-зависимый фибринолиз и увеличивает толерантность к тромбину.
3. Интенсивность НВСК в отсутствии или избытке КБ тесно отрицательно ассоциирована со скоростью ЛПО и с толерантностью к тромбину, а толерантность к тромбину тесно положительно ассоциирована с фибринолизом.
Таким образом, витамин В12, обладающий антиок-сидантными свойствами, модифицирует липидперок-сидацию в тромбоцитах, синтезирующих и депонирующих ряд факторов, способных инициировать ги-перкоагулемию, ускорять внутрисосудистое свертывание крови и снижать способность организма реагировать на тромбин и на воздействия, ускоряющие тромбиногенез. Следовательно, необходимо продолжить углубленные исследования связи между В12-витаминной обеспеченностью организма и эффекты КБ при заболеваниях, сопровождающихся наклонностью к тромбофилии и кровоточивости, тем более что в их лечение нередко включают этот витамин.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Андреенко Г.В., Кудряшов Б А. Изменения тромбопластиче-
ской активности крови при введении в организм животных витамина В12 / ДАН СССР. 1955. Т.102, № 4. С. 787-789
2. Андреенко Г.В., Сытина Н.П. Зависимость тромбопластиче-
ской активности крови морских свинок от поступления аскорбиновой кислоты // Пробл. свертывания и переливания крови. 1959. № 10. С. 26-29.
3.Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. Томск: ТГУ, 1980. 310 с.
4. Баркаган З.С. и др. Нарушение обмена гомоцистеина у
больных сахарным диабетом 2 типа // Тромбоз, гемостаз и реология. 2006. № 3(27). С. 20-24.
5. Баркаган З.С. и др. Гипергомоцистеинемия как самостоя-
тельный фактор риска поражения и тромбирования кровеносных сосудов // Патология кровообращения и кардиохирургия. 2002. № 1. С.65-71
6. Бременер СМ. Витамины. М.: Медицина, 1966. 420 с
7. Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция. Свердловск:
Средне-Уральское книжное издательство, 1978. 124 с
8. Бышевский А.Ш., Кожевников ВН. Витамины и здоровье
женщины. Красноярск: КГУ, 1991. 192 с
9. Бышевский А.Ш. и др. Способ определения содержания про-
дуктов деградации фибрина: А.С. № 1659855, 1.03. 1991 г, публикация в Бюлл. № 24, 30.06. 1991
10.Бышевский А.Ш. и др. Способ определения толерантности животных к тромбину. Патент РФ № 2219546, 20.12.2003
11. Васильев С А., Виноградов В. Л. Роль наследственности в развитии тромбозов // Тромбоз, гемостаз и реология. 2007. № 3. С. 3-14.
12. Зубаиров ДМ. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования. Казань: ФЭН АНТ, 2000. 367 с
13. Кудряшов Б А. Биологические проблемы регуляции жидкого
состояния крови. М.: Медицина, 1975. 488 с.
14. Кудряшов Б А. и др. Изменения тромбопластической активности и концентрации протромбина в крови животных при введении им повышенных доз витамина В12 // Научн. доклады Высшей школы. Биол. Н.. 1960. № 4. С. 97-99
15. Курцинь О.Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс // Институт питания АМН ССР. М., 1952- 5 с
16. Лавров Б А. Роль витаминного фактора в установлении реактивных способностей организма // Современные вопросы медицинской науки. М., 1957. С. 26-27.
17.Мецлер Д. Биохимия. М.: Мир, 1980. Т. II. С 606.
18. Мирсаева ГХ. и др. Влияние ПОЛ на сосудисто-тромбоцитарный гемостаз в раннем восстановительном периоде ишемического инсульта // Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов. 2002. № 1. Приложение № 1. С.92-93
19. Момот А.П. и др. Методика и клиническое значение пара-коагуляционного фенантролинового теста Клин. лабор. Диагностика. 1999. № 4. С. 17-20.
20. Репина МА. Системная энзимотерпия в акушерстве и гинекологии. С-Петербург, 1996. 42 с.
21. Спиричев В Б. Врожденные нарушения обмена витаминов. М.: Медицина, 1977. 216 с
22. Ушкалова ВН. и др. Свободнорадикальное окисление липи-дов в эксперименте и клинике. Тюмень: ТГУ, 1997. С. 5-21
23. Шараев ПН. Витамины и здоровье. Ижевск: «Экспертиза», 2004. 108 с
24. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз. Санкт-Петербург, 2000. 222 с
25. Biagini M.R e.a. Hyperhomocysteinemia and hypercoagulability in primary biliary cirrhosis // World J. Gastroenterol. 2006. V. 14. № 12(10). P. 1607-1612
26. Camera A., Baffi E. Sullempiego della vitamin B12 in alcuni emofilici // Boll.soc. ital. Sperim. 1955. V. 31. № 6. P. 612-614
27. Corti R e.a. Fenofibrate induces plaque regression in hypercholesterolemic atherosclerotic rabbits: in vivo demonstration by high-resolution MRI // Atherosclerosis. 2007. V 190(1). P. 106-113.
28. Durga J. e.a. Effect of 3-year folic acid supplementation on cognitive function in older adults in the FACIT trial: a
randomised, double blind, controlled trial // Lancet. 2007. V. 20. 369(9557). P. 208-216.
29. Gonin J.M. e.a. Controlled trials of very high dose folic acid, vitamins B12 and B6, intravenous folinic acid and serine for treatment of hyperhomocysteinemia in ESRD Gonin // J. Nephrol. 2003. № 16(4). Р. 522-534.
30. Herrmann W. e.a. Vitamin B12-status, particularly holotranscobalamin II and methylmalonic acid concentrations, and hyperhomocysteinemia in vegetarians // Am. J. Clin. Nutr. 2003 № 78(1). Р.131-136.
31. Klerk M. e.a. Effect of homocysteine reduction by B-vitamin supplementation on markers of clotting activation Verbruggen // Thromb. Haemost. 2002. № 88(2). P.230-235
32. Khan S, Dickerman J.D. Hereditary thrombophilia // Thromb. J. 2006. № 4. P. 15-38.
33. Koehler K.M. e.a. Vitamin supplementation and other variables affecting serum homocysteine and methylmalonic acid concentrations in elderly men and women // J. Am. Coll. Nutr. 1996. № 5(4). P.364-376.
34. Levi M. e.a. New treatment strategies for disseminated intravascular coagulation based on current understanding of the pathophysiology // Ann. Med. 2004. V. 36. № 1. P.41-49
35. Morel C.F. e.a. Combined methylmalonic aciduria and homocystinuria (cblC): phenotype-genotype correlations and ethnic-specific observations // Mol. Genet. Metab. 2006. № 88(4). - P. 315-421.
36. Murphy M.M. e.a. Longitudinal study of the effect of pregnancy on maternal and fetal cobalamin status in healthy women and their offspring // J. Nutr. 2007. № 137(8). P. 863-867.
37. Sotgiu G., Lenzi G Effecto antiemofilice della B12 // Haematol. 1953. № 37. P.321-328
38. Tsai.S.Y. e.a. Injury-induced Janus kinase/protein kinase C-dependent phosphorrylation of growth-associated protein 43 and signal transducer and activator of transcription for neurite growth in dorsal root ganglion.. // Neurosci. Res. 2007. 1. 85(2). P. 321-331.
39. Wada H. e.a. The diagnosis and treatment of the DIC-syndrome // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. № 1. С. 16-22.
HEMOSTASIS AT ABSENCE, DEFICIENCY AND SURPLUS VITAMIN B12 AT THE RATS CONTAINED
OF THE BALANCED DIET
© 2009 A.S. Byshevsky, P.J. Shapovalov, E.M. Shapovalova
Tyumen state medical academy, c. Tyumen
Changes of a hemostasis and peroxidation of lipids at animals are considered at their maintenance on the balanced diet depending on quantity{amount} in it of vitamin. Dependences between tolerance to thrombin, intravascular curtailing of blood, peroxidation of lipids and antioxidant in potential are characterized Key words. Vitamin B12. Hemostasis. Peroxidation of lipids.
Byshevsky Anatoly Shulimovich, the doctor of medical sciences managing faculty of biochemistry. Ph. (345-2) 20-23-68. Shapovalov Peter Jacovlevich, the doctor of medical sciences managing faculty of hygiene with a rate of ecology. Ph. (345-2) 92-10-64. Shapovalova Elena Mihajlovna, the candidate of pharmaceutical sciences, the senior lecturer of faculty of analytical and organic chemistry. Ph. (345-2) 92-10-64. 625023.
