CC BY
3
УДК 636.5:612.111:311.14 Код ВАК 4.2.1 DOI: 10.32417/1997-4868-2024-24-01-59-85
Дата поступления статьи: 02.06.2023, дата рецензирования: 10.11.2023, дата принятия: 20.11.2023.
СtQ
a
b
h-i«
О
Г+
П>
0 ¡3
1
СtQ h-
n>
СЛ
Функциональные морфоденситометрические параметры хроматина ядра и цитоплазмы эритробластов и эритроцитов птиц в постэмбриональном онтогенезе
Е. А. Колесник1^, М. А. Дерхо2, М. Б. Ребезов3 4
1 Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К. А. Тимирязева, Москва, Россия
2 Южно-Уральский государственный аграрный университет, Троицк, Россия
3 Федеральный научный центр пищевых систем им. В. М. Горбатова Российской академии наук, Москва, Россия
4 Уральский государственный аграрный университет, Екатеринбург, Россия
ME-mail: [email protected]
Аннотация. Цель - характеристика развития синтетической активности полихроматофильных эритробластов и эритроцитов, в частности статуса гемоглобин-синтезируемой функции клеток эритроидного ряда птиц в раннем постэмбриональном онтогенезе. Методы. Экспериментальная часть исследования была выполнена в условиях ООО «Чебаркульская птица» (Чебаркульский район Челябинской области, Россия). Изучалась цельная кровь кур-бройлеров Hubbard ISA F15 четырех возрастных групп (n = 40): I группа -1-суточные птенцы; II - 7-суточные цыплята; III - 23-суточные бройлеры; IV - 42-суточные куры. Научная новизна. Цитофизиологические и эпигенетические параметры синтеза гемоглобина эритробластами и юными эритроцитами важны в выяснении регуляции функций клеток крови в норме, адаптации и при нарушениях. Критерии синтетической активности эритробластов и созревающих эритроцитов животных и человека - это оптическая плотность как показатель концентрации эухроматина и метаболической динамики цитоплазмы, а также площадь, как показатель распределения эухроматина в строме ядра и размера цитоплазмы. Результаты. На модельном организме бройлерных кур по результатам расчета спектральных, морфометрических и оптикометрических величин ядерного хроматина, цитоплазмы и их индексируемых соотношений для полихроматофильных эритробластов и эритроцитов - был охарактеризован синтез гемоглобина в раннем постэмбриональном онтогенезе. По результатам определения геометрических (n = 30) и оптических (n = 300) параметров эухроматина, гетерохроматина ядра и цитоплазмы были рассчитаны их © соотношения и индексы для полихроматофильных эритробластов, полихроматофильных эритроцитов и ^ зрелых эритроцитов в мазках периферической крови (n = 158), окрашенных по Паппенгейму. Цитохими- l ческие реакции, отражающие физиолого-биохимические взаимосвязи эритробластов и эритроцитов, - это g основа комплексного морфоденситометрического теста уровня активности синтеза гемоглобина клетками к эритроидного ряда в раннем постнатальном онтогенезе. W
Ключевые слова: эритробласты, эритроциты, эухроматин, гетерохроматин, цитоплазма, гемоглобин, мор- .
фоденситометрические параметры, эпигенетика, оптическая плотность. d
e k
Для цитирования: Колесник Е. А., Дерхо М. А., Ребезов М. Б. Функциональные морфоденситометриче- o ские параметры хроматина ядра и цитоплазмы эритробластов и эритроцитов птиц в постэмбриональном онтогенезе // Аграрный вестник Урала. 2024. Т. 24, № 01. С. 59-85. DOI: 10.32417/1997-4868-2024-24-0159-85.
о
e
ft
b
ft
N О
v
И
2 О
to
s s
(-4
о R О
к
и
<и н о S
VO
S ÖJ S
U
о
о S IQ
о
со
<D Ю <D
Рч
Functional morpho-densitometric parameters of chromatin of the nucleus and cytoplasm of erythroblasts and red blood cells of birds in postembryonic ontogenesis
E. A. KolesniklH, M. A. Derkho2, M. B. Rebezov3 4
1 Russian State Agrarian University - Moscow State Agricultural Academy named after K. A. Timiryazev, Moscow, Russia
2 South Ural State Agrarian University, Troitsk, Russia
3 V. M. Gorbatov Federal Research Center for Food Systems of the Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia
4 Ural State Agrarian University, Ekaterinburg, Russia
^E-mail: [email protected]
Abstract. The purpose is to characterize the development of the synthetic activity of polychromatophilic erythroblasts and erythrocytes, in particular the status of the hemoglobin-synthesized function of avian erythroid cells in early postembryonic ontogenesis. Methods. The experimental part of the study was carried out in the conditions poultry farm of "Chebarkul'skaya ptitsa" (Chebarkul district of the Chelyabinsk region, Russia). The whole blood of Hubbard ISA F15 broiler chickens of four age groups (n = 40) was studied: group I - 1-day-old chicks; II - 7-day-old chickens; III - 23-day-old broilers; IV - 42-day-old chickens. The scientific novelty. Functional morpho-densitometric parameters of chromatin of the nucleus and cytoplasm of erythroblasts and red blood cells of birds in postembryonic ontogenesis. Cytophysiological and epigenetic parameters of hemoglobin synthesis by erythroblasts and young erythrocytes are important in elucidating the regulation of the functions of blood cells in normal, adaptation and disorders. Criteria for the synthetic activity of erythroblasts and maturing erythrocytes of animals and humans are optical density as an indicator of the concentration of euchromatin and the metabolic dynamics of the cytoplasm, as well as area as an indicator of the distribution of euchromatin in the stroma of the nucleus and the size's of the cytoplasm. Results. According to the results of calculation of spectral, morphometric and opticometric values of nuclear chromatin, cytoplasm and their indexed ratios for polychromatophilic erythroblasts and erythrocytes, hemoglobin synthesis in early postembryonic ontogenesis is characterized on a model organism of broiler chickens. According to the results of determining the geometric (n = 30) and optical (n = 300) parameters of euchromatin, heterochromatin of the nucleus and cytoplasm, their ratios and indices were calculated for polychromatophilic erythroblasts, polychromatophilic erythrocytes and mature erythrocytes in peripheral blood smears (n = 158) stained by Pappenheim. Cytochemical reactions reflecting the physiological and biochemical interrelations of erythroblasts and erythrocytes are the basis of a complex morpho-densitometric test of the activity level of hemoglobin synthesis by erythroid cells in early postnatal ontogenesis.
Keywords: erythroblasts, red blood cells, euchromatin, heterochromatin, cytoplasm, hemoglobin, morpho-densito-<n metric parameters, epigenetics, optical density.
<N
W For citation: Kolesnik E. A., Derkho M. A., Rebezov M. B. Funktscional'nye morfodensitometricheskie param-^ etry khromatina yadra i tsitoplazmy eritroblastov i eritrocitov ptits v postembrional'nom ontogeneze [Functional и morpho-densitometric parameters of chromatin of the nucleus and cytoplasm of erythroblasts and red blood cells of birds in postembryonic ontogenesis] // Agrarian Bulletin of the Urals. 2024. Vol. 24, No. 01. Pp. 59-85. DOI: 10.32417/1997-4868-2024-24-01-59-85. (In Russian.)
^ Date ofpaper submission: 02.06.2023, date of review: 10.11.2023, date of acceptance: 20.11.2023.
s
g Постановка проблемы (Introduction) За счет генетического материала, полученного
& Известны общие физиолого-биохимические из красных клеток крови кур Gallus gallus L., кол-
„ и морфофункциональные закономерности строе- лективами авторов были выполнены сравнительно
< ния, динамики состояния и активности фракций новые общебиологические исследования стадий
W хроматина ядра, цитоплазмы и их генетически об- образования физиологически активной фракции
§ условленной синтетической активности клеток ор- ядерного хроматина - эухроматина [8], а также мо-
¡5 ганизма животных и человека [1-4], среди которых делирование транскрипционной активности эухро-
ч особая роль, учитывая интегрирующие функции, матина в процессах синтеза белков в цитоплазме
принадлежит клеткам крови [5-7]. клеток животных и человека [1; 8-10].
В основе механизмов, обеспечивающих реализацию регуляторных функций эухроматина как физиологически активной фракции ядерного хроматина [2; 3; 9], а также трансформационного изменения эухроматина путем спирализации и компактизации хроматиновых фибрилл в неактивный гетерохро-матин, и обратных процессов преобразования факультативного гетерохроматина в эухроматин [1; 8; 9; 11] осуществляются эпигенетические реакции [1; 12; 13].
Адаптивные изменения физиологической нормы реакции, то есть клеточных реакций как иммунной, так и систем обмена веществ, репаративных процессов метаболической модуляции, начинаются на субклеточном уровне, с функциональной реорганизации хроматина [11; 14; 15], то есть с эпигенетических изменений, проявляющихся в конденсации, а также форме и пространственной локализации генетического материала в ядре [13; 16; 17].
При рассмотрении регуляции синтетических функций может быть полезной динамика соотношений фракций активного и неактивного, в том числе факультативного хроматина и клеточного ядра в целом [10; 18-21].
На модельных организмах - домашней курицы (Gallus gallus domesticus), японского перепела (Coturnix japonica) и зяблика (Fringilla coelebs) -проведены экспериментальные исследования, показывающие, что эпигенетические механизмы, то есть морфофизиологические и морфобиохимиче-ские механизмы регуляции экспрессии генотипа, не изменяют первичную структуру дезоксирибонукле-иновой кислоты (DNA). При этом эпигенетические модификации функциональной активности генов могут наследоваться компетентными клетками [12].
Известно, что содержание хроматина в соматических клетках стабильно. При этом в процессе активации клетки структурная упорядоченность интерфазного хроматина претерпевает разнообразные конформационные превращения, в результате которых изменяются физико-химические и, соответственно, оптические (анизотропия) свойства фракций хроматина [22].
По данным [22], коэффициент преломления всех компонентов субклеточных структур в среднем составляет 1,088. Однако его величина может меняться в зависимости от степени конденсации хроматина: при уменьшении размера комплекса белков DNA и RNA (рибонуклеиновой кислоты) снижается и коэффициент преломления [22].
В свою очередь, по модельным организмам -птицам- установлено что степень и качество упаковки (компактизация хроматина), то тесть плотность DNA хроматина, регулируется коровыми гистонами нуклеосом, а также территориями DNA, включающими сигнальные метилированные остатки цитозина [12].
Морфологическим проявлением метилирования DNA как основного эпигенетического феномена является состояние оптической плотности ядер и диапазон ее изменчивости, обусловленный отношением конденсации к деконденсации хроматина [23; 24].
Также по новым данным известна роль ацетили-рования гистона Н4 по остатку лизина в положении 16 (H4K16-Ac) в энхансер-промоторном взаимодействии в обеспечении декомпактизации хроматино-вой фибриллы при образовании физиологически активного ядерного эухроматина [1; 9].
На основе специально подготовленного in vitro, очищенного трипсином ядерного хроматина из эритроцитов кур Gallus gallus L. изучались особенности процесса ацетилирования гистонов, ответственных за декомпактизацию факультативного гетерохроматина, то есть высококонденсированно-го хроматина в транскрипционно-компетентный эухроматин [9].
Следовательно, снижение уровня анизотропии ядра клеток крови (соответственно, понижение оптической плотности эухроматина) может интерпретироваться как показатель, свидетельствующий о переходе факультативного гетерохроматина в эух-роматин, что указывает на биологическую активацию хроматина и служит предпосылкой для появления матричной активности DNA [22].
Поэтому сущность эпигенетических механизмов в генотипе индивидуума заключается в степени и качестве упаковки наследственного материала, от уровня которой зависит регуляция и доступность генетической информации для транскрипционного аппарата клетки [1; 2; 6; 12; 13].
Реализация транскрипционного аппарата клетки направлена на синтез рибонуклеиновых кислот (RNA), которые в дальнейшем перемещаются из ядра в цитоплазму для осуществления синтетических процессов [5; 24; 25], в том числе синтеза компонентов гемоглобина и, собственно, самих молекул гемоглобина гемопоэтическими компетентными клетками [6; 25-28].
Так, синтез гема происходит в митохондриях [7; 15], глобина на рибосомах [4] - в цитоплазме по-лихроматофильных эритробластов.
Гем регулирует синтез глобина, митохондриаль-ный синтез гема предшествует началу синтеза гло-биновых цепей [6; 25; 29].
Биогенез гема происходит стадийно от проэри-тробластов и завершается в базофильных эритро-бластах [25].
Собственно, молекулярная сборка гемоглобина наиболее активно осуществляется на полирибосомах в цитоплазме полихроматофильных эритроцитов [5; 6; 27].
Синтез mRNA (информационная RNA: messenger RNA) завершается до стадии ортохромного нормо-
CTQ
a t¡ Съ
b
h-i«
О
г+
п>
0 b
1
CTQ h-
п>
сл
s s
и
о к о к
и
<и н о S ю
s «
s
и
о R О
s т
бласта (эритробласта). Отмечается, что в организме цыплят необходимая для синтеза гемоглобина mRNA образуется в базофильных эритробластах, которая (mRNA), далее в последующих формах эри-тробластов расходуется на синтез глобина на рибосомах (глобиновых полирибосомах) [27].
Подчеркивается, что синтез глобиновых цепей осуществляется в уже «коммитированных» в направлении эритроидного ростка бластов, содержащих заранее синтезированную глобиновую mRNA. При этом установлено, что по мере созревания эри-тробластов и уменьшения синтеза глобина в них количество глобиновых полирибосом в цитоплазме постепенно убывает [27].
Необходимо подчеркнуть, что расходование аккумулируемого гема по принципу обратной отрицательной связи приводит к прекращению синтеза и глобиновых цепочек и, соответственно, прекращению транскрипции RNA [6], так как сам гем является одним из основных сигнальных факторов синтеза глобина [6; 25].
В итоге в цитоплазме полихроматофильных эритробластов по мере синтеза гемоглобина уменьшается число глобиновых полирибосом и молекул RNA соответственно [27].
Данные процессы отражаются в характере окраски цитоплазмы эритроидных клеток [6; 19; 30; 31], в частности, перехода от выраженной базофи-лии (синевы) окраса цитоплазмы у базофильных эритробластов к сиреневому окрасу цитоплазмы у полихроматофильных эритробластов и появлению розово-сиреневого окраса цитоплазмы у полихро-матофильных эритроцитов [15; 28; 30] обусловленного, с одной стороны, прекращением синтеза гема и глобина, с другой - наиболее активным синтезом собственно гемоглобина с соответственным расходованием накопленных гема и глобина [4; 6]. Данные процессы приводят к окончательному переходу розово-сиреневого окраса цитоплазмы полихрома-тофильных эритроцитов к эозинофильному (розовому) окрасу цитоплазмы у зрелых эритроцитов птиц [30; 32].
Согласно исследованиям [2], выполненным на модели домашней курицы (Gallus gallus L.), была установлена четкая пространственная дифференциация конфигурации ядерного интерфазного хроматина на гетерохроматиновые и эухроматиновые участки (зоны).
Акцентируется, что терминальная эритроидная дифференцировка сопровождается обширной конденсацией хроматина [6].
Фактически ядерный эухроматин эритробластов поэтапно подвергается компактизации, следствием которой является завершение его регуляторной гемоглобин-синтезирующей активности по мере созревания эритроцитарных предшественников в зрелые эритроциты [6; 31].
Подчеркивается, что параметр оптической плотности ядерного хроматина позволяет количественно и качественно анализировать состояние и динамику ядерного хроматина и, таким образом, характеризовать и оценивать метаболическое, физиологическое и патофизиологическое, патобиохимическое состояние клеток в мазках от образцов клинической биопсии тканей, поскольку существует прямая связь между уровнями оптической плотности цифрового изображения и количественной конденсацией (ком-пактизацией) хроматина [33-35].
В исследованиях функциональной морфологии тканей животных и человека посредством определения морфоденситометрических показателей клеточных структур, была установлена достоверная связь динамики периметра и площади фракций ядерного хроматина с оптической плотностью и физиологическим состоянием хроматина, реакциями образования эухроматина из гетерохроматина в ядре клеток [20; 33; 36; 37].
Компоненты гистологического протокола по Паппенгейму (Artur Pappenheim), включающего схемы окрашивания мазков клеток по Маю - Грюн-вальду (Richard May, Ludwig Grünwald) и по Романовскому - Гимзе (Дмитрий Л. Романовский, Gustav Giemsa), применяют для определения параметров оптической плотности и характеристики ядерного хроматина и цитоплазмы клеток крови [19; 38; 39] и других тканей [20; 40].
Путем определения величины оптической плотности ядерного хроматина исследовали конденсацию хроматина и ядерную организацию нормальных эритропоэтических клеток в мазках костного мозга, окрашенных по Маю - Грюнвальду - Гимзе [33].
Установлено цитохимическое сродство компонентов красителей схемы по Маю - Грюнвальду -Гимзе к ядерному хроматину и синтезируемым цитоплазматическим компонентам гемоглобина проэритробластов и базофильных, полихромато-фильных и ортохроматических нормобластов (эри-тробластов) [15; 33]; для математической обработки полученных данных и интерпретации результатов применяли методы спектрального картирования подобия и анализа главных компонент (факторный анализ) [33].
Эозин и гематоксилин применяли для субклеточной дифференциации в световой микроскопии ядерных участков эухроматина и гетерохроматина в мазках эндоцервикальных клеток шейки матки, с последующим изучением спектральных и морфологических характеристик эухроматина и гетерох-роматина в цветовой модели RGB [20].
Эозин и метиленовый синий (входящие в схему окрашивания по Паппенгейму) применяют для оценки динамики концентрации гемоглобина в цитоплазме эритроцитов в результате определения оп-
тическои плотности и геометрических параметров красных клеток крови в стандартно изготовленных и окрашенных мазках периферической крови [15; 41; 42].
Параметры оптической плотности структур ядра и цитоплазмы клеток крови в мазках периферической крови применяют для разработки новой гиперспектральной дифференциальной диагностики групп гранулярных, агранулярных лейкоцитов путем компьютерного моделирования гиперспектральных характеристик лейкоцитов на основе компьютерной денситометрии клеток [43].
Эти исследования основаны и, в свою очередь, подтверждают гипотезу о том, что компоненты с аналогичным биохимическим составом будут иметь сходные спектральные характеристики. А различия в спектральных характеристиках клеточных структур могут быть измерены как репрезентативные характеристики [15; 20; 43].
Подчеркивается, что классификация лейкоцитов может выиграть от микроскопии гиперспектральных изображений в сочетании с методами обработки изображений и математической статистики [43].
Таким образом, параметр оптическая плотность как показатель концентрации эухроматина [16; 22; 36; 37; 40; 44-48] и метаболической динамики цитоплазмы [40; 47-49], а также, площадь как показатель величины пространственного распределения эухроматина в строме ядра [39; 48; 52] и размера цитоплазмы [39; 42], являются ведущими валидными критериями оценки синтетической активности, в частности, реализации основной гемоглобин-синтетической функции эритробластами и созревающими эритроцитами в развивающихся организмах животных и человека.
Целью исследования являлась характеристика развития синтетической активности полихромато-фильных эритробластов и эритроцитов, в частности, статуса гемоглобин-синтезируемой функции клеток эритроидного ряда птиц в раннем постэмбриональном онтогенезе.
Задачи заключались в определении спектральных, морфометрических и оптикометрических параметров эухроматина, гетерохроматина ядра и цитоплазмы с расчетом соотношений функциональных величин фракций хроматина и цитоплазмы, показывающих синтетическую активность клеток эритрона птенцов.
Методология и методы исследования (Methods)
Этическое заявление
Данное исследование было разработано и реализовано в соответствии с рекомендациями комитета по биоэтике Южно-Уральского государственного аграрного университета (Троицк, Челябинская область, Россия), а также было согласовано с ветеринарной службой сельскохозяйственной компании.
Животные, дизайн исследования
Экспериментальная часть исследования была выполнена в условиях ООО «Чебаркульская птица» (Чебаркульский район Челябинской области, Россия). Данное птицеводческое предприятие специализируется на выращивании цыплят-бройлеров.
Избранный объект исследования
Высокопродуктивный имеющий широкое распространение птичий кросс мясной селекции кур-бройлеров Hubbard ISA F15 выращивался в клетках промышленным стадом в цехе бройлеров - генеральная совокупность исследуемой птицы, из которой согласно принципам случайной выборки и сбалансированных групп сформировывали четыре опытные группы (n = 40) в зависимости от возраста:
I группа - 1-суточные птенцы;
II - 7-суточные цыплята;
III - 23-суточные бройлеры;
IV - 42-суточные куры (бройлеры).
Экспериментальные группы кур Gallus gallus L.
по Anamnesis vitae клинически (status praesens) соответствовали fusce sanitas status (статусу здоровых животных). Кормление и содержание подопытной птицы осуществляли в соответствии с алиментарными и зоогигиеническими нормами согласно рекомендациям (руководство Hubbard ISA, http:// hubbardbreeders.com).
Материал и цитологический протокол исследования. Исследования световой микроскопией
Материалом исследований служила цельная кровь, которую получали путем декапитации птицы в 1- и 7-суточном возрасте и прижизненно из подкрыльцовой вены у 23- и 42-суточных цыплят; кровь собирали в стандартизированные вакуумные пробирки со стабилизатором EDTA (этилендиамин-тетраацетат) [53]. Изготовляли мазки крови, которые окрашивали по комбинированному гистологическому протоколу по Паппенгейму, включающему процедуру окраски по Маю - Грюнвальду и по Романовскому - Гимзе [53; 54]. Выполняли микрофотографии клеток эритроидного ряда на большом биологическом микроскопе МББ-1А (ЛОМО, Россия) [44] микрографической окулярной видеокамерой с матрицей разрешением 5 мегапикселей (Full HD High resoltuion HAYEAR CMOS 5.0 Megapixel microscope video camera, China), с визуализацией, в программе ToupView (ToupTek Photonics, China, http://www.touptek.com) [53; 54], с построенной светодиодной системой освещения микропрепаратов белым спектром по принципу Келера (A. Köhler) [55].
Для получения наиболее качественных изображений применяли микроскопный 90-кратный апохроматический объектив масляной иммерсии с апертурой 1,3 (ЛОМО, Россия). Калибровку видеокамеры производили по шкале объекта-микрометра для проходящего света с ценой деления 0,01 мм (ЛОМО, Россия) в программе ToupView.
CTQ
a ¡=
b
h-i«
О
г+
п>
0 b ¡3
1
CTQ h-
п>
сл
s s
(-4
о к о к
и
<и н о S
VO
s «
s
(-4
о R О
s IQ
Калибровка спектральной чувствительности цифровых микрофотографий эритроидных клеток периферической крови
Учитывая цвет цитоплазмы и хроматина эри-тробластов и эритроцитов, инструментальное вычисление оптической плотности клеточных структур по микрофотографиям мазков крови начинали с калибровки спектральной чувствительности изображений по комбинации тонов синего, красного и оттенков фиолетового цветов [20; 56-60] в стандартизированных спектрограммах.
Данные спектрограммы получали при извлечении градиентов формата RGB из участков микрофотографий в условиях программного обеспечения Adobe Color (Adobe Inc., США, https://color.adobe. com/ru/create/color-wheel).
Для этого выполняли спектральный анализ и оценку оптических характеристик в построенных моделях спектра полихроматических картин фракций ядерного хроматина и цитоплазмы полихрома-тофильных эритробластов, полихроматофильных эритроцитов и зрелых эритроцитов с помощью Adobe Color.
Для построения моделей спектра полихроматических изображений клеточных структур крови, изображения клеток крови регистрировали цифровой микрографической камерой HAYEAR 5.0 MP (Китай) в цветовой модели RGB [20; 56-60].
После регистрации устройством цифровой записи микрофотографий, в Adobe Color (США) выполняли обработку экспериментальных полихроматических изображений клеток крови, выделяли необходимые для измерительного контроля, стандартизации и калибровки области изображений.
При компьютерном анализе изображений для определения цвета пикселей необходим упорядоченный набор трех значений интенсивности базисных цветов аддитивной, то есть комбинированной опорной модели [20; 56-60]. При этом каждый пиксель полученного изображения содержал информацию о значении интенсивности каждого из основных цветов - красного (R), зеленого (G) и синего (B).
Были приняты следующие обозначения:
- R - минимальная величина красного спектра;
mm r г '
- R - максимальная величина красного спек-
max г
тра;
- R..„ % - процент различия минималь-
dmer.-mm-max, r г
ных от максимальных значений красного спектра;
- G - минимальная величина зеленого спектра;
min г '
- G - максимальная величина зеленого спек-
max
тра;
- G..„ % - процент различия минималь-
dmer.-mm-max, r г
ных от максимальных значений зеленого спектра;
- B - минимальная величина синего спектра;
min
- B - максимальная величина синего спектра;
max
- B % - процент различия минималь-
dmer.-mm-max, r г
ных от максимальных значений синего спектра.
Морфометрия и денситометрия эритроидных клеток периферической крови
В компьютерной программе PhotoM 1.21 (Россия) [16; 61] по микрофотографиям осуществляли стехиометрическую морфометрию и денситоме-трию параметров полихроматофильных эритро-бластов (PolychromEBCs), полихроматофильных эритроцитов (PolychromRBCs) и зрелых эритроцитов (RBCs): определяли площадь (мкм2, дт2) ядра клетки, эухроматина ядра и цитоплазмы; площадь ядерного гетерохроматина (мкм2, дт2) определяли вычитанием площади эухроматина (мкм2, дт2) из площади ядра клетки (мкм2, дт2); определяли оптическую плотность (денситометрия) ядра клетки, эухроматина, гетерохроматина и цитоплазмы [16; 62; 63].
Всего в исследуемых возрастных группах птиц были проанализированы цитофизиологические показатели по 158 единицам (n = 158) микрофотографий.
В программе Microsoft Office Excel 2007 (Microsoft Corporation, США) выполняли корректировку абсолютных числовых значений показателя оптической плотности (OD) введением в расчет поправочного коэффициента путем вычисления произведения D на 100: (OD = D х 100), где D - показатель оптической плотности учитываемых структур на микрофотографиях; 100 - поправочный коэффициент.
Были приняты следующие обозначения:
- S. t . « , дт2 - площадь гетерохроматина;
heterochromatm' г ' ^ г г ?
- S , , , дт2 - площадь эухроматина;
euchrornatm' г ^^^ j г ?
- S , , дт2 -
nucleus' г
площадь ядра;
- S . , , дт2 - площадь цитоплазмы;
cytoplasrn' г ^^^ '
Dheterochrornatm
матина;
Deш;hromatin
оптическая плотность гетерохро-
оптическая плотность эухроматина;
- D t , - оптическая плотность цитоплазмы.
cytoplasm
Расчет спектральных, морфогеометрических и морфоденситометрических индексов эритроидных клеток периферической крови
В программе Microsoft Office Excel 2007 (Microsoft Corporation, США) рассчитывали индексы
Polychrom EBCs, PolychromRBCs и RBCs:
L CSRGB-difler.-min-max, % - ПрОЦРНТ ра3личия минимальных от максимальных значений цветового спектра (Color Spectrum, CS) в модели RGB - по формуле:
CS„
RGB-differ._mm-max
_ тзх^Ув x1QQ _ jqq (1),
CS»
где maxCSRGB - максимальная величина цветового спектра в модели RGB;
CS - минимальная величина цветового
min RGB ^
спектра в модели RGB.
По формуле (1) рассчитывали процент различия минимальных от максимальных значений цветового спектра (Color Spectrum, CS) для каждого цвета
ядерных [20] и цитоплазматических структур эри-троидных клеток периферической крови в модели RGB [20; 56-60].
2. P , % - процент различия мини-
nucleus-differ.-min-max, А А
мальных от максимальных значений площади ядра клетки - по формуле:
P
nucleus-differ.-min-max
= Snucleus-max Х 100 — Ю0 (2)
S .
N/C Ratio =
S,
_ nucleus
S
(4),
где Snu
S
cytoplasm
площадь ядра клетки, дш2; площадь цитоплазмы, дш2.
P
N/C Ratio-max Х 100 100
N/C Ratio-min
где N/C Ratio-max - максимальное значение ядерно-цитоплазматического соотношения клетки;
N/C Ratio- . - минимальное значение ядерно-цитоплазматического соотношения клетки.
6. E/N Ratio - индекс соотношения площади эухроматина к площади ядра [20]:
E/N Ratio = °d~" (6)
S
^ nucleus
где Seuchiomatin - площадь эухроматина ядра клетки, цш2;
Snucleus - площадь ядра клетки, цш2.
7. H/N Ratio - индекс соотношения площади ге-
терохроматина к площади ядра [20]:
S
H/N Ratio =
heterochromatin
(7),
S
где Sheterochromatin
клетки, дш2; S
9. Р Б , . % - процент различия
— еисЬтотатт^пег.-тт-тах, А А
минимальных от максимальных значений оптической плотности эухроматина ядра клетки - по фор-
муле: P D
_ euchromatin -differ .-min -max
D h t. x100
euchromatin-max
D
-100 (9),
euchromatin-min
где S , - максимальная площадь ядра клетки,
nucleus-max '
цш2;
S - минимальная площадь ядра клетки,
nucleus-min ^
цш2.
3. P л . ..„ % - процент различия мини-
cytoplasm-differ.-min-max, А А
мальных от максимальных значений площади цитоплазмы клетки - по формуле:
р = Scytoplasm-max Х 100 (3),
cytoplasm-differ .-min-max s
cytoplasm_min
где S - максимальная площадь цитоплазмы
cytoplasm-max
клетки, цш2;
S - минимальная площадь цитоплазмы
cytoplasm-min
клетки, цш2.
4. N/C Ratio - величина ядерно-цитоплазматиче-ского соотношения [15; 21]:
где Б , - максимальное значение оптиче-
еисЬгошаип-шах
ской плотности эухроматина ядра клетки;
Б , . - минимальное значение оптической
еисЬгошаип-шт
плотности эухроматина ядра клетки.
10. Р Б „ , , ,.„. % - процент разли-
— neterochгoшatm-dlffeг.-шm-шax, А А
чия минимальных от максимальных значений оптической плотности гетерохроматина ядра клетки -по формуле:
Р Б
heterochromatin-di ffer. -min -max
heterochromatin -max Х 100 _1QQ (10)
D
heterochromatin-min
cytoplasm
5. PN/C Ratio % - процент различия минимальных от максимальных значений N/C Ratio - по формуле:
(5),
DECI =
100
(12),
площадь гетерохроматина ядра
ECMI =
nucleus - площадь ядра клетки, цш. 8. E/H Ratio - индекс соотношения площади эухроматина к площади гетерохроматина [18; 20]:
S
E / H Ratio =—"Асш"1П
S (8),
heterochromatin
где Seuchromatin - площадь эухроматина ядра клетки, цш2;
S, „ , . - площадь гетерохроматина ядра
heterochromatin ^^^ r г ^^г
клетки, цш2.
100
где Б, t , . - максимальное значение оптиче-
heterochromatin-max
ской плотности гетерохроматина ядра клетки;
Б t , , - минимальное значение оптиче-
heterochromatin-mm
ской плотности гетерохроматина ядра клетки.
11. P Б ^ , % - процент различия
— cytoplasm-differ.-min-max, А А
минимальных от максимальных значений оптической плотности цитоплазмы клетки - по формуле:
D t , х100
= cytoplasm-max__ю0 (Ц)
Dcytoplasm-min
- максимальное значение оптической
P D
— cytoplasm-differ .-min-max
где D
cytoplasm-max
плотности цитоплазмы клетки;
D ^ , - минимальное значение оптической
cytoplasm-min
плотности цитоплазмы клетки.
Расчет комплексных морфоденситометриче-ских индексов клеток периферической крови
На основании выполненных исследований в программе Microsoft Office Excel 2007 (США) рассчитывали комплексные индексы PolychromEBCs, Polychrom RBCs и RBCs:
12. Денситометрический эухроматино-цито-плазматический индекс (ДЭЦИ, DECI) в условных единицах по формуле:
ОБеЮБс
где ОБе - оптическая плотность эухроматина; ОБс - оптическая плотность цитоплазмы; 100 - поправочный коэффициент. 13. Эухроматино-цитоплазматический морфо-денситометрический индекс (ЭЦМИ, ЕСМ1) в условных единицах по формуле:
(ОБе х8е)х(ОБс х£с), (13)
CTQ
a C3 Сь
b
h-i«
О
Г+
n>
0 b C3
1
CTQ h-
П)
СЛ
где ОБе - оптическая плотность эухроматина; 5е - площадь эухроматина, цш2; ОБс - оптическая плотность цитоплазмы; 8с - площадь цитоплазмы, цш2; 100 - поправочный коэффициент. Статистический анализ
Все цифровые данные измеренных и проанализированных значений изучаемых параметров объ-
s
S
о R О
к
и
<и н о S ю
S «
S
о
о S
т
екта исследования представлены средним арифметическим (X) и стандартной ошибкой среднего: Standard Error Mean (±SEM).
Для проверки гипотезы, что случайные величины морфогеометрических и морфоденситометри-ческих параметров распределены нормально (распределение Гаусса), применяли критерий Шапиро -Уилка в программе STATISTICA 8.0 (StatSoft Inc., США).
Степень и достоверность различий для величин морфоденситометрических показателей оценивали с помощью параметрического /-критерия Стьюден-та для парных сравнений в программе IBM SPSS Statistics, version 20 (США).
Критический уровень значимости различия значений при проверке статистических гипотез был принят за р < 0,05.
Результаты (Results) Морфофизиология эритроидных клеток периферической крови
В процессе созревания предшественников эритроцитов в зрелые эритроциты количественно и качественно изменялись геометрические и морфо-денситометрические параметры клеточных и субклеточных структур ядра и цитоплазмы.
Базофильная (фиолетовая) окраска цитоплазмы полихроматофильных эритробластов (Polychrom_
EBCs) (рис. 1.1) в ходе созревания становилась слабо-базофильной (светло-фиолетовой) у полих-роматофильных эритроцитов (PolychromRBCs) (рис. 1.3). Слабо-базофильная окраска цитоплазмы Polychrom_RBCs превращалась в ацидофильную (розовую) у зрелых эритроцитов (RBCs) птиц (рис. 1.5).
Ядерный гетерохроматин у PolychromEBCs был базофильным с элементами ацидофильной окраски (рис. 1.2). Эухроматин PolychromEBCs был ближе к ацидофильному цвету окраски (рис. 1.2). У Poly-chromRBCs гетерохроматин получает более базо-фильную окраску (рис. 1.4), эухроматин становится ближе к светло-базофильному цвету (рис. 1.4). Отличительной особенностью окраски фракций хроматина RBCs птиц являются насыщенная базо-филия для гетерохроматина и светло-базофильный окрас для эухроматина ядра (рис. 1.6).
Спектральная чувствительность эритроидных клеток периферической крови на микрофотографиях
С учетом физико-химических свойств клеточных и субклеточных структур различно воспринимать пигменты из протокола окрашивания для анализа спектрограмм эритробластов и эритроцитов были выбраны опорные цветовые каналы из вычисленных моделей RGB (рис. 2.1-2.6).
Рис. 1. Гетерохроматин и эухроматин ядра полихроматофильных эритробластов (1.1 - 1-е сут.), полихроматофильных эритроцитов (1.3 - 7-е сут.) и зрелых эритроцитов (1.5 - 7-е сут.) периферической крови кур Gallus gallus L. в раннем онтогенезе. Окраска по Паппенгейму. Стрелкой показаны обозначаемые объекты. Рамкой выделены территории с цифровым увеличением в масштабе: 1.2 - 9:1, 1.4 - 9:1 и 1.6 - 8:1 соответственно, крестиком (X) отмечены структуры гетерохроматина (темные участки), галочкой (V) отмечены участки эухроматина (светлая зона). Цена деления масштабной линейки 10 микрометров (pm) Fig. 1. Heterochromatin and euchromatin of the nucleus of polychromatophilic erythroblasts (1.1 - 1st day), polychromato-philic red blood cells (1.3 - 7th day) and mature red blood cells (1.5 - 7th day) of peripheral blood of chickens Gallus gallus L.
in the early ontogenesis. Coloring according to Pappenheim. The arrow shows the designated objects. The frame highlights the territories with digital zoom to scale: 1.2 - 9:1, 1.4 - 9:1 and 1.6 - 8:1 respectively, the cross (X) marks the heterochromatin structures (dark areas), the tick (V) marks the euchromatin areas (light zone). Scale bar division value is 10 micrometers (pm)
2.1
Polychromatophilic Erythroblast
I
I
750 Ш11
700 650 600 550 500 450 400
¡0
Color Gradient / Color Density
ROB 91:0:33
RGB 99 : 0 : 66
RGB 143 : 24 : 176
RGB 143 : 57 : 206
RGB 170: 48 : 192
Coefficient
ofthe
Color
Spectrum /
Hue
Balance
Color Contrast Ratio
Heterochromatin (X) Heterochromatin (X) Euchromatin (V)
R 98 102 ^^^Шв^^Н
1 l
В 34 НИ^^^^Н 69
38 40
Euchromatin (V) Euchromatin (V) 141 140
27 185 73
P 47 197 77
143
29
177
69
2.2
Polychromatophilic Red Blood Cell
I
I
Рис. 2.1. Модель спектра полихроматического изображения участков ядерного хроматина полихроматофильного эритробласта бройлерных кур. Модель отображает аддитивную структуру спектра включающую: изображение клетки крови с выделенными кругами территорий гетерохроматина (X) и эухроматина (V), опорный спектральный круг фракций хроматина, стандартную нанометровую спектральную шкалу, шкалу цветового градиента и плотности цвета фракций хроматина, RGB-шкалу с коэффициентами интенсивности цветового спектра, балансом цветового оттенка и коэффициентами цветового контраста фракций хроматина Fig. 2.1. Model of the spectrum of polychromatic image of nuclear chromatin sites of polychromatophilic erythroblast of broiler
chickens. The model displays an additive spectrum structure including: an image of a blood cell with highlighted circles of heterochromatin (X) and euchromatin (V) territories, a reference spectral circle of chromatin fractions, a standard nanometer spectral scale, a scale of color gradient and color density of chromatin fractions, an RGB-scale with color spectrum intensity coefficients, color shade balance and color contrast coefficients fractions of chromatin
CTQ
a
b
h-i«
О
Г+
n>
0 b
1
CTQ h-
п>
сл
Color Gradient / Color Density
RGB 63 ' 0 : 68
RGB 79 : 0 : 87
RGB 120 : 20 : 145
RGB 132 : 16 : 148
RGB 140 : 24 : 165
Coefficient
of the R
Color
Spectrum / G
Hue
Balance .В
Color Contrast
Heterochromatin (X) Heterochromatin (X) Euchromatin (V) Euchromatin (V) Euchromatin (V)
Ratio
64
2
67 26
73 0
74 29
122 33 141 55
141
24 165 65
125 25 149 58
Рис. 2.2. Модель спектра полихроматического изображения участков ядерного хроматина полихроматофильного эритроцита бройлерных кур. Модель отображает аддитивную структуру спектра включающую: изображение
клетки крови с выделенными кругами территорий гетерохроматина (X) и эухроматина (V), опорный спектральный круг фракций хроматина, стандартную нанометровую спектральную шкалу, шкалу цветового градиента и плотности цвета фракций хроматина, RGB-шкалу с коэффициентами интенсивности цветового спектра, балансом цветового оттенка и коэффициентами цветового контраста фракций хроматина Fig. 2.2. Model of the spectrum of polychromatic image of nuclear chromatin sites of polychromatophilic erythrocyte of broiler
chickens. The model displays an additive spectrum structure including: an image of a blood cell with highlighted circles of heterochromatin (X) and euchromatin (V) territories, a reference spectral circle of chromatin fractions, a standard nanometer spectral scale, a scale of color gradient and color density of chromatin fractions, an RGB-scale with color spectrum intensity coefficients, color shade balance and color contrast coefficients fractions of chromatin
s s
(-4
о к о к
и
<и н о S
VO
s «
s
(-4
о R О
s IQ
2.3
Red Blood Cell
I
E
750 nm 700 650 600 550 500
S
Color Gradient / Color Density
RGB 96^9: 104 RGB93:11:102 RGB 112 : 51 : 143 RGB 137 : 49 : 162 RGB 156 : 65 : 181
Heterochromatin (X) Heterochromatin (X) Euchromatin (V)
Euchromatin (V) Euchromatin (V)
Coefficient
of the R
Color
Spectrum / G
Hue
Balance В
Color Contrast
87 7
92 36
97 15
97 38
106 48 133 52
123 57 157 62
153 57 167 65
Рис. 2.3. Модель спектра полихроматического изображения участков ядерного хроматина зрелого эритроцита бройлерных кур. Модель отображает аддитивную структуру спектра включающую: изображение клетки крови с выделенными кругами территорий гетерохроматина (X) и эухроматина (V), опорный спектральный круг фракций хроматина, стандартную нанометровую спектральную шкалу, шкалу цветового градиента и плотности цвета фракций хроматина, RGB-шкалу с коэффициентами интенсивности цветового спектра, балансом цветового оттенка и коэффициентами цветового контраста фракций хроматина Fig. 2.3. Model of the spectrum of polychromatic image of nuclear chromatin sites of mature erythrocyte of broiler chickens. The model displays an additive spectrum structure including: an image of a blood cell with highlighted circles of heterochromatin (X) and euchromatin (V) territories, a reference spectral circle of chromatin fractions, a standard nanometer spectral scale, a scale of color gradient and color density of chromatin fractions, an RGB-scale with color spectrum intensity coefficients, color shade balance and color contrast coefficients fractions of chromatin
2.4
Polychromatopliilic Erythroblast
I
i
750 m 700 650 600 550 500 450
П) ГЛ о
Color Gradient / Color Density
1 RGB 148 : 97 : 189 RGB 156 : 105 : 19S RGB 165 : 113 : 214 RGB 181 : 222 RGB 162 : 93 : 195
CYTOPLASM
CYTOPLASM
CYTOPLASM
CYTOPLASM
Coefficient ofthe 170
Color Spectrum /
G 88 11 98 120 ^П 105
Hue
Balance 182 199 Я 204 ^H« 207
Color Contrast 71 7s 80 81
CYTOPLASM
: 162 S5 1191
Рис. 2.4. Модель спектра полихроматического изображения участков цитоплазмы полихроматофильного эритробласта бройлерных кур. Модель отображает аддитивную структуру спектра включающую: изображение клетки крови с выделенными кругами территорий цитоплазмы, опорный спектральный круг цитоплазмы, стандартную нанометровую спектральную шкалу, шкалу цветового градиента и плотности цвета цитоплазмы, RGB-шкалу с коэффициентами интенсивности цветового спектра, балансом цветового оттенка и
коэффициентами цветового контраста цитоплазмы Fig. 2.4. Model of the spectrum of polychromatic imaging of cytoplasm sites of polychromatophilic erythroblast of broiler chickens. The model displays an additive spectrum structure including: an image of a blood cell with highlighted circles of cytoplasmic territories, a reference spectral circle of cytoplasm, a standard nanometer spectral scale, a scale of color gradient and color density of cytoplasm, an RGB-scale with color spectrum intensity coefficients, color shade balance and color contrast coefficients of cytoplasm
2.5
Polychromatophilic Red Blood Cell
Щ)
t
i
750 nm 700 650 600 550 500
-o-•-о— *—о—« •—о—•—о—
Color Gradient / Color Density
RGB 156 : 85 : 181 RGB 154 : 93 : 170 RGB 165 : 108 : 181 RGB 1S1 : 134 : 198 RGB 176 : 135 : 184 A.
Coefficient
of the R
Color
Spectrum ! G
Hue
Balance В
color connut
CYTOPLASM
CYTOPLASM
CYTOPLASM
CYTOPLASM
CYTOPLASM
Ratio
Рис. 2.5. Модель спектра полихроматического изображения участков цитоплазмы полихроматофильного эритроцита бройлерных кур. Модель отображает аддитивную структуру спектра включающую: изображение клетки крови с выделенными кругами территорий цитоплазмы, опорный спектральный круг цитоплазмы, стандартную нанометровую спектральную шкалу, шкалу цветового градиента и плотности цвета цитоплазмы, RGB-шкалу с коэффициентами интенсивности цветового спектра, балансом цветового оттенка и
коэффициентами цветового контраста цитоплазмы Fig. 2.5. A model of the spectrum of the polychromatic image of the cytoplasm sites of the polychromatophilic erythrocyte of broiler chickens. The model displays an additive spectrum structure including: an image of a blood cell with highlighted circles of cytoplasmic territories, a reference spectral circle of cytoplasm, a standard nanometer spectral scale, a scale of color gradient and color density of cytoplasm, an RGB-scale with color spectrum intensity coefficients, color shade balance and color
contrast coefficients of cytoplasm
CTQ
a
b
h-i«
О
Г+
n>
0 b
1
CTQ h-
п>
сл
Рис. 2.6. Модель спектра полихроматического изображения участков цитоплазмы зрелого эритроцита бройлерных кур. Модель отображает аддитивную структуру спектра включающую: изображение клетки крови
с выделенными кругами территорий цитоплазмы, опорный спектральный круг цитоплазмы, стандартную нанометровую спектральную шкалу, шкалу цветового градиента и плотности цвета цитоплазмы, RGB-шкалу с коэффициентами интенсивности цветового спектра, балансом цветового оттенка и коэффициентами
цветового контраста цитоплазмы Fig. 2.6. Model of the spectrum of polychromatic image of the cytoplasm sites of mature erythrocyte of broiler chickens. The model displays an additive spectrum structure including: an image of a blood cell with highlighted circles of cytoplasmic territories, a reference spectral circle of cytoplasm, a standard nanometer spectral scale, a scale of color gradient and color density of cytoplasm, an RGB-scale with color spectrum intensity coefficients, color shade balance and color contrast coefficients of cytoplasm
Таблица 1
Значения аддитивной цветовой модели RGB фракций хроматина и цитоплазмы полихроматофильных эритробластов, полихроматофильных эритроцитов и зрелых
эритроцитов бройлерных кур в микрофотографиях
Параметр R min R max R.iff i % ditter.-mm-max, B min B max Bdiff i % ditter.-min-max, i G min G max G i % ditter.-min-max,
Фракции х роматина
Polychrom EBCs 91 170 86,81 33 206 524,24 0 57 -
Polychrom RBCs 63 140 122,22 68 165 142,65 0 24 -
RBCs 93 156 67,74 102 181 77,45 9 65 622,22
Цитоплазма
Polychrom EBCs 148 181 22,30 189 222 17,46 93 121 30,11
Polychrom RBCs 154 181 17,53 170 198 16,47 85 135 58,82
RBCs 173 198 14,45 189 211 11,64 117 159 35,90
Table 1
Values of the additive RGB color model of chromatin fractions and cytoplasm of polychromatophilic erythroblasts, polychromatophilic erythrocytes and mature erythrocytes
of broiler chickens in microphotographs
Parameter R min R mem ■ % aiffer.-met-mm, B mm B mem B.v ■ % aiffer.-mm-mnc, G mm G mim G ■ % differ. -m-n-max,
Fractions of chromatin
Polychrom EBCs 91 170 86.81 33 206 524.24 0 57 -
Polychrom RBCs 63 140 122.22 68 165 142.65 0 24 -
RBCs 93 156 67.74 102 181 77.45 9 65 622.22
Cytoplasm
Polychrom EBCs 148 181 22.30 189 222 17.46 93 121 30.11
Polychrom RBCs 154 181 17.53 170 198 16.47 85 135 58.82
RBCs 173 198 14.45 189 211 11.64 117 159 35.90
Опорный для фракций хроматина В синий цветовой канал имел тенденцию к существенному снижению величин от Polychrom_EBCs к Polychrom_ RBCs с последующим ростом у RBCs (рис. 2.1-2.3, таблица 1). Схожая тенденция динамики величин регистрировалась для R - красного цветового канала (рис. 2.1-2.3, таблица 1). При этом процент различия минимальных от максимальных значений цветового канала В имел стабильную тенденцию к снижению для фракций хроматина от Polychrom_ EBCs к RBCs (таблица 1). Процент различия минимальных от максимальных значений - цветового канала для фракций хроматина отличался ростом от Polychrom_EBCs к Polychrom_RBCs с последующим снижением для RBCs (таблица 1).
Опорными для цитоплазмы эритроидных клеток являлись цветовые каналы R и В. Цветовой канал R цитоплазмы имел стабильные величины от Polychrom_EBCs к Polychrom_RBCs (рис. 2.4, 2.5, таблица 1), и повышался для RBCs (рис. 2.6, таблица 1). Динамика цветового канала В цитоплазмы отличалась снижением от Polychrom_EBCs к Poly-chrom_RBCs (рис. 2.4, 2.5, таблица 1), и некоторым ростом у RBCs (рис. 2.6, таблица 1). Проценты различия минимальных от максимальных значений цветовых каналов R и В имели тенденцию к снижению от Polychrom_EBCs к RBCs (таблица 1).
Тенденцию стабилизации структуры ядра и цитоплазмы в ряду от Polychrom_EBCs к RBCs показы-
вала стагнационная динамика процентов различия минимальных от максимальных значений цветовых каналов спектрограмм (таблица 1). Величины зеленого цветового канала G хроматина и цитоплазмы изменялись (рис. 2.1-2.6, таблица 1), их роль может быть интересна в последующих исследованиях.
Динамика морфогеометрических и морфо-денситометрических параметров развития эри-троидных клеток в связи с регуляцией синтеза гемоглобина
В таблицах 2-3 и рис. 3.1-3.6 представлены стохастические абсолютные и индексируемые геометрические и оптические данные по морфологии клеток эритроидного рядя бройлерных кур в раннем постэмбриональном онтогенезе.
При созревании от полихроматофильных эри-тробластов (Polychrom_EBCs) к полихроматофиль-ным эритроцитам (Polychrom_RBCs) в связи со статистически значимым уменьшением оптической плотности эухроматина на 41,82 %, p < 0,001 и цитоплазмы на 39,38 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.1) существенно уменьшалась стабильность структуры эухроматина и цитоплазмы у Polychrom_RBCs. Процент различия минимальных от максимальных значений оптической плотности у эухроматина Polychrom_RBCs возрастал до 248,23 %, p < 0,001, у цитоплазмы Polychrom_RBCs повышался до 161,73%, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.3). При этом структура гетерохроматина Polychrom_RBCs стабилизировалась.
Таблица 2
Морфогеометрические параметры полихроматофильных эритробластов, полихроматофильных эритроцитов и зрелых эритроцитов бройлерных кур
в постэмбриональном онтогенезе (X ± SEM)
Показатель Polychrom_EBCs Polychrom_RBCs RBCs
S heterochromatin, ¡m2 (n = 30) 9,00 ± 0,46 7,98 ± 0,47 7,55 ± 0,29
S euchromatin, ¡¡m2 (n = 30) 8,20 ± 0,39 7,95 ± 0,43 6,43 ± 0,33**
S nucleus, im2 (n = 30) 17,19 ± 0,68 15,93 ± 0,82 13,98 ± 0,45
S nucleus, im2 14,85 11,61 11,93
S nucleus, im2 21,95 19,59 15,96
47,81 68,73 33,78
S cytoplasm, ¡m2 (n = 30) 53,27 ± 2,78 67,27 ± 3,05* 75,76 ± 2,94
S cytoplasm, am2 33,22 54,39 63,71
S cytoplasm, am2 62,9 80,82 91,18
89,34 48,59* 43,12
N/C Ratio 0,32 ± 0,02 0,24 ± 0,01** 0,18 ± 0,01**
N/C Ratio . mm 0,26 0,19 0,17
N/C Ratio max 0,47 0,29 0,23
P % N/C Ratio. 80,77 52,63** 35,29**
E/N Ratio 0,48 ± 0,01 0,50 ± 0,01 0,46 ± 0,01
H/N Ratio 0,52 ± 0,01 0,50 ± 0,01 0,54 ± 0,01
E/H Ratio 0,91 ± 0,06 1,01 ± 0,05 0,85 ± 0,05
Примечание. ** - уровни значимости различий средних значений статистически значимы по t-критерию в парном сравнении: PolychromEBCs и PolychromRBCs, PolychromRBCs и RBCs соответственно приp < 0,05;p < 0,01.
Table 2
Morpho-geometricparameters of polychromatophilic erythroblasts, polychromatophilic erythrocytes and mature erythrocytes of broiler chickens in postembryonic ontogenesis (X ± SEM)
Parameter Polychrom_EBCs Polychrom_RBCs RBCs
S heterochromatin, /m2 (n = 30) 9.00 ± 0.46 7.98 ± 0.47 7.55 ± 0.29
S euchromatin, /m2 (n = 30) 8.20 ± 0.39 7.95 ± 0.43 6.43 ± 0.33**
S nucleus, im2 (n = 30) 17.19 ± 0.68 15.93 ± 0.82 13.98 ± 0.45
S . nucleus, um2 14.85 11.61 11.93
S nucleus, um2 21.95 19.59 15.96
P ■ % nucleus-amer. -mm-max, 47.81 68.73 33.78
S cytoplasm, jim2 (n = 30) 53.27± 2.78 67.27 ± 3.05* 75.76 ± 2.94
S . cytoplasm, am2 mm— y r ' r 33.22 54.39 63.71
S cytoplasm, am2 max— y r ' r 62.9 80.82 91.18
P , , . ■ % 89.34 48.59* 43.12
N/C Ratio 0.32 ± 0.02 0.24 ± 0.01** 0.18 ± 0.01**
N/C Ratio . 0.26 0.19 0.17
N/C Ratio 0.47 0.29 0.23
PN/C Ratio % 80.77 52.63** 35.29**
E/N Ratio 0.48 ± 0.01 0.50 ± 0.01 0.46 ± 0.01
H/N Ratio 0.52 ± 0.01 0.50 ± 0.01 0.54 ± 0.01
E/H Ratio 0.91 ± 0.06 1.01 ± 0.05 0.85 ± 0.05
Note. *, ** - the significance levels of differences in mean values are statistically significant according to the t-criterion in a pair comparison: Polychrom EBCs and Polychrom RBCs, Polychrom RBCs and RBCs, respectively, atp < 0.05;p < 0.01.
Таблица 3
Морфоденситометрические параметры полихроматофильных эритробластов, полихроматофильных эритроцитов и зрелых эритроцитов бройлерных кур
в постэмбриональном онтогенезе (X ± SEM)
Показатель Polychrom_EBCs Polychrom_RBCs RBCs
D heterochromatin (n = 300) 4,85 ± 0,35 4,51 ± 0,36 3,02 ± 0,20***
D heterochromatin 0,02 0,12 0,14
D heterochromatin 16,40 18,30 9,67
P_D. t . t % 81,9 x 103 15,15 x 103 68,07 x 103***
D euchromatin (n = 300) 3,18 ± 0,28 1,85 ± 0,14*** 2,67 ± 0,19***
D euchromatin 0,05 0,07 0,07
D euchromatin 12,50 6,14 8,73
P_D h t .■_ % 24,90 x 103 86,71 x 103*** 12,37 x 103***
D_cytoplasm (n = 300) 1,60 ± 0,12 0,97 ± 0,09*** 1,24 ± 0,10
D cytoplasm 0,03 0,01 0,01
D cytoplasm 4,89 4,25 4,22
P_D % 16,20 x 103 42,40 x 103*** 42,10 x 103
DECI 19,67 ± 1,63 55,39 ± 4,51*** 30,28 ± 2,21***
ECMI 22,19 ± 1,29 9,66 ± 0,56*** 16,09 ± 0,90***
Примечание. *** - уровень значимости различий средних значений статистически значим по t-критерию в парном сравнении: PolychromEBCs и PolychromRBCs, PolychromRBCs и RBCs соответственно приp < 0,001.
Table 3
Morpho-densitometricparameters of polychromatophilic erythroblasts, polychromatophilic erythrocytes and mature erythrocytes of broiler chickens in postembryonic ontogenesis (X ± SEM)
Parameter Polychrom_EBCs Polychrom_RBCs RBCs
D heterochromatin (n = 300) 4.85 ± 0.35 4.51 ± 0.36 3.02 ± 0.20***
D . heterochromatin 0.02 0.12 0.14
D heterochromatin max— 16.40 18.30 9.67
P—D heterochromatin-differ.-min-max, % 81.9 x 103 15.15 x 103 68.07 x 103***
D euchromatin (n = 300) 3.18 ± 0.28 1.85 ± 0.14*** 2.67 ± 0.19***
D . euchromatin mm— 0.05 0.07 0.07
D euchromatin 12.50 6.14 8.73
P—D h „ . ■ % 24.90 x 103 86.71 x 103*** 12.37 x 103***
D cytoplasm (n = 300) 1.60 ± 0.12 0.97 ± 0.09*** 1.24 ± 0.10
D . cytoplasm 0.03 0.01 0.01
D cytoplasm 4.89 4.25 4.22
P—D , l . ■ % 16.20 x 103 42.40 x 103*** 42.10 x 103
DECI 19.67 ± 1.63 55.39 ± 4.51*** 30.28 ± 2.21***
ECMI 22.19 ± 1.29 9.66 ± 0.56*** 16.09 ± 0.90***
Note: *** the significance level of differences in mean values are statistically significant according to the t- criterion in a pair comparison: Polychrom EBCs and Polychrom RBCs, Polychrom RBCs and RBCs, respectively, atp < 0.001.
При созревании Polychrom_RBCs в зрелые эритроциты (RBCs) статистически значимо возрастала оптическая плотность эухроматина RBCs до 44,32 %, р < 0,001; и существенно снижалась оптическая плотность гетерохроматина RBCs до 33,04 %, р < 0,001 (таблица 3, рис. 3.1). Процент различия минимальных от максимальных значений оптической плотности у эухроматина RBCs снижался до 85,73 %, р < 0,001 (таблица 3, рис. 3.3). Процент различия минимальных от максимальных значений оптической плотности у гетерохроматина
72
RBCs повышался до 349,31%, р < 0,001 (таблица 3, рис. 3.3). Поэтому происходили существенная стабилизация структуры эухроматина RBCs и значительное уменьшение стабильности структуры ге-терохроматина RBCs, в том числе факультативного гетерохроматина RBCs.
У цитоплазмы RBCs оптическая плотность и процент различия минимальных от максимальных значений статистически не изменялись (таблица 3, рис. 3.3). Соответственно, структура цитоплазмы RBCs стабилизировалась.
7-testresult for pairwise comparison, at ***p <0.001 in "IBM SPSS Statistics", v. 20.
I - error bar with ± SEM
о J3
й
с
о ■d
"(3
a О
5 i
3 i
2 ^
0
I D_heterochromatin 3 D_euchromatin S D_cytoplasm
RBCs
Polychrom_EBCs Polychrom_RBCs
Рис. 3.1. Значения оптической плотности (D) гетерохроматина, эухроматина ядра и цитоплазмы полихроматофильных эритробластов (Polychrom_EBCs), полихроматофильных эритроцитов (Polychrom_RBCs) и зрелых эритроцитов (RBCs) в периферической крови бройлерных кур в раннем постэмбриональном онтогенезе.
±SEM - стандартная ошибка средней Fig. 3.1. Optical density (D) of heterochromatin, euchromatin of the nucleus and cytoplasm of polychromatophilic erythro-blasts (Polychrom_EBCs), polychromatophilic red blood cells (Polychrom_RBCs) and mature red blood cells (RBCs) in the peripheral blood of broiler chickens in early postembryonic ontogenesis. ±SEM - standard error of the mean
7-test result for pairwise comparison, at **p <0.01 in "IBM SPSS Statistics", v. 20.
I - error bar with ± SEM
0.4 q
0.3
0.2 i
0.1 i
**
**
1N/C Ratio
Polychrom_EBCs Polychrom_RBCs RBCs
Рис. 3.2. Значения ядерно-цитоплазматического соотношения (ЯЦС) полихроматофильных эритробластов (Polychrom_EBCs), полихроматофильных эритроцитов (Polychrom_RBCs) и зрелых эритроцитов (RBCs) в периферической крови бройлерных кур в раннем постэмбриональном онтогенезе. ±SEM - стандартная ошибка средней Fig. 3.2. Nuclear-cytoplasmic ratio (N/C Ratio) of polychromatophilic erythroblasts (Polychrom_EBCs), polychromatophilic red blood cells (Polychrom_RBCs) and mature red blood cells (RBCs) in the peripheral blood of broiler chickens in early post-
embryonic ontogenesis. ±SEM - standard error of the mean
« 7-test result for pairwise comparison, at ***p <0.001 in "IBM SPSS Statistics", v. 20
5 S , £ "3 3 15 ^ о
=n
К Я <S
w « s
H e &
^ "в
■e m —
% я 8
8 я 55
u й & M Я о
я а
Й Я
S -а —
••j
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
***
CTQ
a сз
Сь
b
h-i«
О
Г+
П>
0 b C3
1
CTQ h-
П)
СЛ
***
***
***
9 P D heterochromatin-differ. - min-max, %
ä P D euchromatin-differ. - min-max, %
□ P_D cytoplasm-differ. - min-max, %
Polychrom_EBCs Polychrom_RBCs
RBCs
Рис. 3.3. Процент различия минимальных от максимальных значений P оптической плотности D (хЮ3) (%) гетерохроматина, эухроматина ядра и цитоплазмы полихроматофильных эритробластов (Polychrom_EBCs), полихроматофильных эритроцитов (Polychrom_RBCs) и зрелых эритроцитов (RBCs) в периферической крови бройлерных кур в раннем постэмбриональном онтогенезе Fig. 3.3. Percentage of difference between the minimum and maximum values P of the optical density D (X103) (%) of heterochromatin, euchromatin of the nucleus and cytoplasm of polychromatophilic erythroblasts (Polychrom_EBCs), polychromatophilic red blood cells (Polychrom_RBCs) and mature red blood cells (RBCs) in peripheral blood of broiler chickens in early
postembryonic ontogenesis 73
6
4
1
s s
и
о к о к
и
<и н о S ю
s «
s
и
о R О
s т
* I
о .я ^
8 g о
я S "-S
<u <s
fc ai
С is и
° a ^
- ¡Z
15 g .
a ■— «
M 13 JS
2 S £
IS B >
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Polychrom_EBCs
Polychrom_RBCs
RBCs
Рис. 3.4. Процент различия минимальных от максимальных значений P ядерно-цитоплазматического соотношения N/C Ratio (%) полихроматофильных эритробластов (Polychrom_EBCs), полихроматофильных эритроцитов (Polychrom_RBCs) и зрелых эритроцитов (RBCs) в периферической крови бройлерных кур в раннем
постэмбриональном онтогенезе Fig. 3.4. Percentage of difference between the minimum and maximum values P of the nuclear-cytoplasmic ratio N/C Ratio (%) of polychromatophilic erythroblasts (Polychrom_EBCs), polychromatophilic red blood cells (Polychrom_RBCs) and mature red blood cells (RBCs) in the peripheral blood of broiler chickens in early postembryonic ontogenesis
Динамика величин ядерно-цитоплазматическо-го соотношения у клеток эритроидного ряда имела статистически значимый нисходящий тренд. N/C Ratio у PolychromRBCs на 25,0 %, p < 0,01 меньше N/C Ratio для PolychromEBCs. N/C Ratio у RBCs на 25,0 %, p < 0,01 меньше N/C Ratio для Polychrom_ RBCs (таблица 2, рис. 3.2). Аналогично с изменением N/C Ratio динамика процента различия минимальных от максимальных значений N/C Ratio отличалась снижающимся трендом. Так, процент различия минимальных значений N/C Ratio для PolychromRBCs от максимальных был на 34,84 %, p < 0,01 меньше, чем у Polychrom EBCs (таблица 2, рис. 3.4). Процент различия минимальных значений N/C Ratio для RBCs от максимальных был на 32,95 %, p < 0,01 меньше, чем у Polychrom RBCs (таблица 2, рис. 3.4).
Статистически значимый прирост величины денситометрического эухроматино-цитоплазмати-ческого индекса от полихроматофильных эритро-бластов к полихроматофильным эритроцитам составил 181,59 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.5), последующее снижение ДЭЦИ от полихроматофиль-ных эритроцитов к зрелым эритроцитам составило 82,92 %,p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.5).
Статистически достоверное снижение значения эухроматино-цитоплазматического морфоденсито-метрического индекса от полихроматофильных эри-тробластов к полихроматофильным эритроцитам составило 129,71 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.6). Дальнейшее возрастание величины ЭЦМИ при созревании полихроматофильных эритроцитов в сформированные нормоциты составило 66,56 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.6).
Обсуждение и выводы (Discussion and Conclusion)
Стехиометрические и оптикометрические изменения размеров и их соотношений у клеточных и субклеточных структур цитоплазмы и ядра клеток красного ростка происходили в зависимости от развития интенсивности синтетических нагрузок гемоглобиновой функции крови в ювенальном онтогенезе птиц. Структурно-функциональные изменения цитоплазмы и фракций хроматина у созревающих клеток эритроидного ряда отражаются в их физико-химическом статусе [8-10; 21; 47] и цитохимической окраске [2; 6; 15; 18-20; 30; 33; 41] (рис. 1.1-1.6).
Пигменты в составе цитологического протокола по Паппенгейму представляют собой красители, имеющие стабильный pH (водородный показатель). Так, эозин имеет кислую реакцию среды; азур, окислы азура и метиленовый синий имеют щелочную реакцию среды. В связи с этим в зависимости от плотности упаковки, пространственной локализации и реакции среды (pH), обусловленных функциональными нагрузками, неактивный гете-рохроматин и синтетически активный эухроматин имели различную оптическую плотность и дифференцированное окрашивание (рис. 1.2, 1.4, 1.6).
Так, ядерный хроматин в целом состоит из де-зоксирибонуклеиновой, рибонуклеиновой кислот, гистоновых октамеров и белковой оболочки. Стро-ма (матрикс) ядра представлена в основном белковыми структурами.
Поэтому гетерохроматин и эухроматин получали дифференцированную окраску и оптическую плотность у предшественников эритроцитов и зрелых эритроцитов птиц. При этом в ядерном хроматине отмечались хромоцентры - участки с наиболее интенсивной окраской и физико-химической плотностью (рис. 1.2, 1.4, 1.6).
T-test result for pairwise comparison, at *** p < 0.001 in "IBM SPSS Statistics"
I - error bar with ± SEM
v. 20.
и X 70
•с -в
.в
= У 60
с g
'сл Ç2 Ю 50
= та -у
тз,'я
"Ö з 3 40
-С ? 5 30
s*- Я ° *3 °
О IS
!/3 & S 20
с
"<я ■я 10
> и S
0
***
iSfe;
0DECI
*** rite
Polychrom_EBCs
Polychrom_RBCs
RBCs
Рис. 3.5. Значения денситометрического эухроматино-цитоплазматического индекса (ДЭЦИ) (усл. ед.) полихроматофильных эритробластов (Polychrom_EBCs), полихроматофильных эритроцитов (Polychrom_RBCs) и зрелых эритроцитов (RBCs) в периферической крови бройлерных кур в раннем постэмбриональном онтогенезе.
±SEM - стандартная ошибка средней Fig. 3.5. Densitometric euchromatin-cytoplasmic index (DECI) (conv. units) of polychromatophilic erythroblasts (Polychrom_ EBCs), polychromatophilic red blood cells (Polychrom_RBCs) and mature red blood cells (RBCs) in the peripheral blood of broiler chickens in early postembryonic ontogenesis. ±SEM - standard error of the mean
S §
J * ft =
о о
Б ü.
.a S
« =
о -
.=
и
s
25
20
15
10
=
13
I
о л ft
5
0
T-test result for pairwise comparison, at ***p <0.001 in "IBM SPSS Statistics"
I - error bar with ± SEM
***
v. 20.
ECMI
***
RBCs
^ g Polychrom_EBCs Polychrom_RBCs
Рис. 3.6. Значения эухроматино-цитоплазматического морфоденситометрического индекса (ЭЦМИ) (усл. ед.) полихроматофильных эритробластов (Polychrom_EBCs), полихроматофильных эритроцитов (Polychrom_RBCs) и зрелых эритроцитов (RBCs) в периферической крови бройлерных кур в раннем постэмбриональном онтогенезе.
±SEM - стандартная ошибка средней Fig. 3.6. Euchromatic-cytoplasmic morpho-densitometric index (ECMI) (conv. units) of polychromatophilic erythroblasts (Polychrom_EBCs), polychromatophilic red blood cells (Polychrom_RBCs) and mature red blood cells (RBCs) in the peripheral blood of broiler chickens in early postembryonic ontogenesis. ±SEM - standard error of the mean Схожие механизмы окраски и оптической плот-
ности реализовывались в цитоплазме эритроидных клеток в ходе их созревания. Поэтапный синтез гема, глобина, сборка и кумуляция гемоглобина в пространственно и динамично разобщенных клеточных и субклеточных структурах обуславливали различную окраску и оптическую плотность цитоплазмы у клеток эритроидного ряда - от оптически плотной базофильной цитоплазмы у полихроматофильных эритробластов (рис. 1.1) до полихрома-тофильной цитоплазмы с переменной оптической плотностью у полихроматофильных эритроцитов (рис. 1.3) и сравнительно оптически плотной цитоплазмы у зрелых эритроцитов птиц (рис. 1.5).
В раннем постэмбриональном онтогенезе птиц такие параметры хроматина, как величина оптической плотности, процент различия минимальных
CTQ
a t¡ Съ
b h-
О
г+
п>
0 b t¡
1
CTQ h-
п>
сл
от максимальных значений оптической плотности, отражают уровень стабильности структуры активных, конститутивных и факультативных фракций хроматина клеточного ядра в ходе эритропоэза.
Статистически значимый рост величины процента различия минимальных от максимальных значений оптической плотности эухроматина и цитоплазмы от полихроматофильных эритробла-стов к полихроматофильным эритроцитам был показателем уменьшения стабильности структуры эухроматина и цитоплазмы полихроматофильных эритроцитов.
Учитывая установленный статистически значимый рост оптической плотности эухроматина и существенное снижение таковой у гетерохромати-на, а также значимое снижение процента различия минимальных от максимальных значений оптиче-
s
S
о R О
к
и
<и н о S ю
S «
S
о
о S
т
ской плотности эухроматина и обратную ситуацию по гетерохроматину в ходе превращения полихроматофильных эритроцитов в зрелые эритроциты, возможно, констатировать для зрелых эритроцитов выраженную стабилизацию структуры эухромати-на со значительным уменьшением стабильности структуры факультативного гетерохроматина.
Интересна тенденция сближения величин соотношения площади эухроматина к площади гетерохроматина (E/H Ratio), соотношения площади эухроматина к площади ядра (E/N Ratio) у Poly-chromEBCs и RBCs (таблица 2). В связи с этим обращает на себя внимание динамика процента различия минимальных от максимальных значений площади ядра с ростом от PolychromEBCs к PolychromRBCs и снижением у RBCs (таблица 2).
Данные тенденции E/H Ratio, E/N Ratio и процента различия минимальных от максимальных значений площади ядра хотя и не имеют статистически значимых различий, но подчеркивают изменчивость вовлеченности разных фракций хроматина в синтетических процессах.
Динамика процента различия минимальных от максимальных значений площади ядра акцентирует наибольшую синтетическую активность у Polychrom_RBCs.
Синхронное изменение у эритроидных клеток динамики N/C Ratio и процента различия минимальных от максимальных значений N/C Ratio характеризует высокий уровень взаимосвязи соотношения структуры ядра со структурой цитоплазмы.
Так как от полихроматофильных эритробластов к полихроматофильным эритроцитам и зрелым эритроцитам статистически значимо уменьшался процент различия N/C Ratio, следовательно, возрастал уровень структурно-функциональных взаимосвязей ядра и цитоплазмы у клеток эритроидно-го ряда - от полихроматофильных эритробластов к зрелым эритроцитам.
Индекс ДЭЦИ на денситометрическом уровне, согласно данным авторов [2; 5; 6; 15; 25; 27], связан с началом активного синтеза гемоглобина в цитоплазме полихроматофильных эритроцитов и его завершением в цитоплазме зрелых эритроцитов. Так, величина ДЭЦИ у Polychrom_RBCs возрастала до 181,59 %, p < 0,001, для RBCs ДЭЦИ снижался до 82,92 %,p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.5).
Комплексный индекс ЭЦМИ на интегральном морфоденситометрическом уровне в соответствии с литературными данными [5; 6; 15; 25-27], связан со значительным снижением свободной рибонуклеиновой кислоты (RNA) в цитоплазме полихроматофильных эритроцитов. Снижение ЭЦМИ Polychrom RBCs достигало 129,71 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.6) в связи с тем, что RNA обратно связывалась протеидами в нуклеопротеиды ядра, которые имеют щелочную реакцию среды (pH).
Таким образом, цитохимическая реакция компонентов цитоплазмы полихроматофильных эритроцитов с азуром и его солями в реакции окрашивания по схеме протокола Паппенгейма приводит к переходу базофильного синего цвета цитоплазмы (высокая концентрация свободных синтетически активных форм RNA [5-7; 25]), характерного для полихроматофильных эритробластов (рис. 1.1), к голубому окрашиванию цитоплазмы, свойственному полихроматофильным эритроцитам (рис. 1.3).
Фактически окрашивание цитоплазмы полихроматофильных эритроцитов в голубой цвет объясняется тем, что, во-первых, значительно снижается концентрация RNA (связывается обратно ядерными нуклеопротеидами) в цитоплазме данных клеток; во-вторых, тем, что в цитоплазме полихромато-фильных эритроцитов только начинается активный синтез собственно гемоглобина из гема от митохондрий и глобина, синтезируемого на рибосомах. Поэтому цитоплазма данных эритроцитов, с одной стороны, слабо воспринимает азур и его соли (почти уже нет свободных форм RNA), с другой, начальная низкая концентрация гемоглобина определяет невысокий уровень реакции с эозином.
В зрелых эритроцитах именно эозин (по протоколу Паппенгейма) как краситель с кислой реакцией среды (pH) окрашивает концентрированный щелочной гемоглобин в цитоплазме (рис. 1.5), рост величины индекса ЭЦМИ составил 66,56 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.6).
Результаты расчета индекса ДЭЦИ (в усл. ед.) показали, что при снижении оптической плотности ядерного эухроматина полихроматофильных эритроцитов до 71,89 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.1, 3.5) в сравнении с полихроматофильными эритро-бластами, соответственно, повышении регулятор-ной активности хроматина в синтезе компонентов гемоглобина и начале сборки молекул гемоглобина от полихроматофильных эритробластов к полихро-матофильным эритроцитам, а также, при снижении оптической плотности цитоплазмы полихромато-фильных эритроцитов до 64,94 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.1) в сравнении с полихроматофильными эритробластами в связи с падением концентрации в цитоплазме активных форм RNA величины ДЭЦИ составляли 19,67-55,39 усл. ед. (таблица 3, рис. 3.5).
При росте оптической плотности ядерного эухроматина зрелых эритроцитов до 44,32 %, p < 0,001 в сравнении с полихроматофильными эритроцитами (таблица 3, рис. 3.1), соответственно, физиологическом снижении регуляторной активности дезоксирибонуклеиновой кислоты (DNA) хроматина в синтезе компонентов гемоглобина величины ДЭЦИ составляли 55,39-30,28 усл. ед. (таблица 3, рис. 3.5).
Результаты расчета комплексного индекса ЭЦМИ (в усл. ед.) показали, что при росте площа-
ди цитоплазмы полихроматофильных эритроцитов до 26,28 %, p < 0,05 в сравнении с полихромато-фильными эритробластами (таблица 2) в связи с началом активного синтеза собственно молекул гемоглобина в цитоплазме полихроматофильных эритроцитов и при снижении оптической плотности эухроматина полихроматофильных эритроцитов до 71,89 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.1), а также при снижении оптической плотности цитоплазмы полихроматофильных эритроцитов до 64,94 %, p < 0,001 (таблица 3, рис. 3.1) в сравнении с полихрома-тофильными эритробластами в обеспечении гебо-глобин-синтетических процессов величины ЭЦМИ составляли 22,19-9,66 усл. ед. (таблица 3, рис. 3.6).
При снижении площади эухроматина до 23,63 %, p < 0,01 (таблица 2) и росте оптической плотности эухроматина до 44,32 %, p < 0,001 зрелых эритроцитов (таблица 3, рис. 3.1), в сравнении с полих-роматофильными эритроцитами. Соответственно, при компактизации DNA функционально-активного хроматина и перехода его в неактивное состояние в связи с завершением ядерной регуляции и синтеза собственно гемоглобина в зрелых эритроцитах величины ЭЦМИ составляли 9,66-16,09 усл. ед. (таблица 3, рис. 3.6).
Индекс ДЭЦИ представляет собой произведение значений оптической плотности: физиологически активной формы ядерного хроматина (эухрома-тина) и функционального выражения воздействия эухроматина, то есть структурной основы клетки -цитоплазмы клеток эритроидного ряда, отражающей ведущую функцию по синтезу газообменного и буферного белка гемоглобина.
При этом индекс ЭЦМИ интегрирует морфо-функциональное соотношение ядерного хроматина и клетки в целом на основе произведения оптико-метрической (оптической плотности) и геометрической (площади) величин эухроматина и цитоплазмы полихроматофильных эритробластов, полихро-матофильных эритроцитов и зрелых эритроцитов.
Прикладное значение индексов ДЭЦИ и ЭЦМИ заключается в том, что произведения величин оптической концентрации и пространственного распространения активного хроматина ядра и структурной основы клетки - цитоплазмы - статистически достоверно отражают характер метаболитной направленности, динамики и напряженности процесса синтеза гемоглобина клетками эритроидного ряда.
В частности, индексы ДЭЦИ и ЭЦМИ выражают физиологическую характеристику этапов синтеза гемоглобина (то есть синтеза гема в митохондриях, глобина на рибосомах в цитоплазме) под регуляцией ядерного эухроматина полихроматофильных эритробластов.
Индексы ДЭЦИ и ЭЦМИ показывают активность стадий синтеза гемоглобина в цитоплазме по-
лихроматофильных эритроцитов в ядерной регуляции и цитоплазматической кумуляции гемоглобина, отражают прекращение синтеза гемоглобина в зрелых эритроцитах цыплят-бройлеров.
Поэтому применение индексов ДЭЦИ и ЭЦМИ возможно для изучения развития полиэтиологич-ной анемии.
Закономерности функций предшественников зрелых эритроцитов, а именно физиолого-биохими-ческие взаимосвязи и их цитохимические реакции в стадиях синтеза гемоглобина полихроматофиль-ными эритробластами и эритроцитами, а также закономерности завершения синтеза гемоглобина и его накопления в цитоплазме зрелых эритроцитов включены в основу комплексного морфоденсито-метрического теста определения уровня синтетической активности полихроматофильных эритробла-стов и эритроцитов, в частности, для определения статуса гемоглобин-синтезируемой функции клеток эритроидного ряда птиц в раннем постэмбриональном онтогенезе.
Расчет ДЭЦИ показал, что при снижении оптической плотности эухроматина полихроматофильных эритроцитов до 71,89 %, р < 0,001 в сравнении с полихроматофильными эритробластами, снижении оптической плотности цитоплазмы полихроматофильных эритроцитов до 64,94 %, р < 0,001 в сравнении с полихроматофильными эритробласта-ми величины ДЭЦИ составили 19,67-55,39 усл. ед. При росте оптической плотности эухроматина зрелых эритроцитов до 44,32 %, р < 0,001 в сравнении с полихроматофильными эритроцитами величины ДЭЦИ составили 55,39-30,28 усл. ед.
Расчет ЭЦМИ показал, что при росте площади цитоплазмы полихроматофильных эритроцитов до 26,28 %, р < 0,05 в сравнении с полихромато-фильными эритробластами, снижении оптической плотности эухроматина полихроматофильных эритроцитов до 71,89 %, р < 0,001, снижении оптической плотности цитоплазмы полихроматофильных эритроцитов до 64,94 %, р < 0,001 в сравнении с полихроматофильными эритробластами величины ЭЦМИ составили 22,19-9,66 усл. ед. При снижении площади эухроматина до 23,63 %, р < 0,01 и росте оптической плотности эухроматина до 44,32 %, р < 0,001 зрелых эритроцитов в сравнении с полихроматофильными эритрцитами величины ЭЦМИ составили 9,66-16,09 усл. ед.
Исследования синтетической активности полих-роматофильных эритробластов и эритроцитов птиц на основе объединенного изучения морфологических и денситометрических параметров хроматина ядра и цитоплазмы способствует автоматизации качественного и количественного анализа физиологической зрелости, обмена веществ эритробластов, созревающих и зрелых эритроцитов птиц.
CTQ
a
b
h-i«
О
г+
п>
0 b
1
CTQ h-
n>
сл
s s
и
о R О
к
и
<u н о s
VO
s
R
s
и
о R О
s
IQ
Библиографический список
1. Григорьев С. А., Попова Е. Ю. Сродство подобий: механизмы самоассоциации и компартментализа-ции эукариотического хроматина // Молекулярная биология. 2019. № 53 (6). С. 933-953. DOI: 10.1134/ S0026898419060053.
2. Хабарова А. А., Рыжкова А. С., Баттулин Н. Р. Реорганизация хроматина в процессе эритроидной диффе-ренцировки // Вавиловский журнал генетики и селекции. 2019. № 23 (1). С. 95-99. DOI: 10.18699/VJ19.467.
3. Sanders T. J. et al. Extended Archaeal Histone-Based Chromatin Structure Regulates Global Gene Expression in Thermococcus kodakarensis // Frontiers in Microbiology. 2021. No. 12. Article number 681150. DOI: 10.3389/ fmicb.2021.681150.
4. Ржепаковский И. В., Тимченко Л. Д., Писков С. И., Аванесян С. С., Сизоненко М. Н., Шахбанов М. Ш., Нагдалян А. А., Ребезов М. Б. Трехмерная рентгеновская микротомография сердца куриного эмбриона в раннем периоде эмбриогенеза // Аграрная наука. 2023. № 1 (10). С. 24-29. DOI: 10.32634/0869-8155-2023375-10-24-29.
5. Bell S. G. An introduction to hemoglobin physiology // Neonatal Network. 1999. No. 18 (2). Pp. 9-15. DOI: 10.1891/0730-0832.18.2.9.
6. Ponka P. et al. Erythropoiesis, Hemoglobin Synthesis, and Erythroid Mitochondrial Iron Homeostasis // In: Handbook of Porphyrin Science: with Applications to Chemistry, Physics, Materials Science, Engineering, Biology and Medicine. Santa Barbara: World Scientific, 2013. № 27. Pp. 41-84. DOI: 10.1142/9789814407755_0011.
7. Kumari A. Heme Synthesis (Chapter 8) // In: Sweet Biochemistry: Remembering Structures, Cycles, and Pathways by Mnemonics. London: Academic Press, Elsevier Science, 2018. Pp. 33-36. DOI: 10.1016/B978-0-12-814453-4.00008-X.
8. Ryzhkova A., Taskina A., Khabarova A., Fishman V., Battulin N. Erythrocytes 3D genome organization in vertebrates // Scientific Reports. 2021. No. 11 (1). Article number 4414. DOI: 10.1038/s41598-021-83903-9.
9. Низовцева Е. В., Герасимова Н. С., Студитский В. М. Влияние ацетилирования гистона Н4 на дистанционные взаимодействия в хроматине // Вестник Московского университета. Серия 16: Биология. 2019. № 74
(4). С. 308-312. DOI: 10.3103/S0096392519040114.
10. Takahata S., Murakami Y. Opposing Roles of FACT for Euchromatin and Heterochromatin in Yeast // Biomol-ecules. 2023. No. 13. Article number 377. DOI: 10.3390/biom13020377.
11. Gasparotto M., Lee Y.-S., Palazzi A., Vacca M., Filippini F. Nuclear and Cytoplasmatic Players in Mitochondria-Related CNS Disorders: Chromatin Modifications and Subcellular Trafficking // Biomolecules. 2022. No. 12
(5). Article number 625. DOI: 10.3390/biom12050625.
12. Красикова А. В., Куликова Т. В. Распределение маркеров гетерохроматина в хромосомах типа ламповых щеток у птиц // Генетика. 2017. № 53 (9). С. 1077-1085. DOI: 10.7868/S0016675817090077.
13. Zhang Z., Zhang R., Xiao K., Sun X. G4Beacon: An In Vivo G4 Prediction Method Using Chromatin and Sequence Information // Biomolecules. 2023. No. 13 (2). Article number 292. https://doi.org/10.3390/biom13020292.
14. Gasser S. M. Visualizing Chromatin Dynamics in Interphase Nuclei. Science. 2002. No. 296 (5572). Pp. 14121416. DOI: 10.1126/science.1067703.
15. Yeo J. H., Lam Y. W., Fraser S. T. Cellular dynamics of mammalian red blood cell production in the erythroblastic island niche // Biophysical Reviews. 2019. No. 11 (6). Pp. 873-894. DOI: 10.1007/s12551-019-00579-2.
16. Мантейфель В. М., Кару Т. Й. Снижение компактизации конденсированного хроматина в лимфоцитах человека под влиянием низкоинтенсивного излучения He-Ne лазера // Известия Российской академии наук. Серия биологическая. 2009. № (6). С. 654-661. DOI: 10.1134/S1062359009060028.
17. Антонова Е. И. [и др.] Особенности реорганизации хроматина ядер и показателей клеточного цикла гепатоцитов печени рыб после воздействия высокой внешней температуры [Электронный ресурс] // Современные проблемы науки и образования. 2012. No. 6. URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=7469 (дата обращения: 05.09.2022).
18. Lehmann R. R., Nienhaus R. H., Dénes R. M., Steinbach T. Changes of euchromatin/heterochromatin ratios in cell nuclei of the aortic adventitia in diabetic rats // Artery. 1987. No. 14 (2). Pp. 66-75.
19. De la Iglesia Inigo S., Moreno-Carralero M.-I., Lemes-Castellano A., Molero-Labarta T., Méndez M., Morán-Jiménez M.-J. A case of congenital dyserythropoietic anemia type IV // Clinical Case Reports. 2017. No. 5 (3). Pp. 248-252. DOI: 10.1002/ccr3.825.
20. Kimura F. et al. Image quantification technology of the heterochromatin and euchromatin region for differential diagnosis in the lobular endocervical glandular hyperplasia // Diagnostic Cytopathology. 2019. No. 47 (6). DOI: 10.1002/dc.24155.
21. Schreier S., Budchart P., Borwornpinyo S., Arpornwirat W., Triampo W. Circulating erythroblast abnormality associated with systemic pathologies may indicate bone marrow damage // Journal of Circulating Biomarkers. 2021. No. 10. Pp. 14-19. DOI: 10.33393/jcb.2021.2220.
22. Гаспарян С. А., Попова О. С., Василенко И. А., Хрипунова А. А., Метелин В. Б. Оценка фенотипа интерфазных ядер лимфоцитов методом количественного фазового имиджинга (QPI) у пациенток с эндо-метриоидными кистами яичников // Альманах клинической медицины. 2017. № 45 (2). С. 109-117. DOI: 10.18786/2072-0505-2017-45-2-109-117.
23. Козовый Р. В., Перцович В. М., Ковальчук Л. E., Багрий М. М. Анализ морфоденситометрические показателей состояния генома лимфоцитов перифериеской крови долгожителей Прикарпатья // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2013. № 11 (2). С. 29-32.
24. Wickramasinghe S. N., Pippard M. J. Studies of erythroblast function in congenital dyserythropoietic anaemia, type I: evidence of impaired DNA, RNA, and protein synthesis and unbalanced globin chain synthesis in ultrastructurally abnormal cells // Journal of Clinical Pathology. 1986. No. 39 (8). Pp. 881-890. DOI: 10.1136/ jcp.39.8.881.
25. Doty R. T., Phelps S. R., Shadle C., Sanchez-Bonilla M., Keel S. B., Abkowitz J. L. Coordinate expression of heme and globin is essential for effective erythropoiesis // The Journal of Clinical Investigation. 2015. No. 125 (12). Pp. 4681-4691. DOI: 10.1172/JCI83054.
26. Липунова Е. А., Скоркина М. Ю. Система красной крови: Сравнительная физиология. Белгород: Издательство Белгородского государственного университета, 2004. 216 с.
27. Гаврилов О. К. [и др.] Нормальное кроветворение и его регуляция / Под ред. Н. А. Федорова. Москва: Медицина, 1976. 543 с.
28. Rosse C., Trotter J.A. A Cytochemical and Radioautographic Analysis of Erythropoiesis at the Ultrastructural Level // American Journal of Anatomy. 1974. No. 141 (1). Pp. 41-72. DOI: 10.1002/aja.1001410104.
29. Yap K. N., Zhang Y. Revisiting the question of nucleated versus enucleated erythrocytes in birds and mammals // American journal of physiology. Regulatory, integrative and comparative physiology. 2021. No. 321. Pp. 547-557. DOI: 10.1152/ajpregu.00276.2020.
30. Kolesnik E. A., Derkho M. A., Strizhikov V. K., Strizhikova S. V., Gizatullina F. G., Ponomaryova T. A. Differential morphophysiological characteristics of erythrocyte precursors and mature erythroid cells in early postnatal ontogenesis of birds // International Journal of Biology and Biomedical Engineering. 2020. No. 14. Pp. 101-108. DOI: 10.46300/91011.2020.14.15.
31. Колесник Е. А., Дерхо М. А. Характеристика проблематики морфофизиологии клеток крови неона-тального онтогенеза кур. Сообщение I. Особенности постэмбрионального кроветворения, различия в подходах и проблематика морфофункционального анализа крови птиц (обзор) // АПК России. 2019. № 26 (4). С. 637-643. DOI: 10.5281/zenodo.4385556.
32. Колесник Е. А., Дерхо М. А. Характеристика проблематики морфофизиологии клеток крови неонаталь-ного онтогенеза кур. Сообщение II. Характеристика дифференциальных морфофизиологических маркеров форменных элементов крови птиц // АПК России. 2019. № 26 (4). С. 644-652. DOI: 10.5281/zenodo.4385940.
33. Rothmann C., Cohen A. M., Malik Z. Chromatin Condensation in Erythropoiesis Resolved by Multipixel Spectral Imaging: Differentiation Versus Apoptosis // The Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 1997. No. 45 (8). Pp. 1097-1108. DOI: 10.1177/002215549704500807.
34. Heidarian A., Yousefi E., Somma J. Digital Image Analysis of Nuclear Morphometry in Thyroid Fine Needle Biopsies // Journal of the American Society of Cytopathology. 2017. No. 6 (5). P. S76. DOI: 10.1016/j. jasc.2017.06.189.
35. Hidalgo D. T., Diaz Rojas P. A., Batista M. T., Anta A. S. La densidad óptica nuclear como indicador diagnóstico en el carcinoma papilar de tiroides [e-resource] // Revista Cubana de Investigaciones Biomédicas. 2020. No. 39 (3). URL: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-03002020000300013&lng=en&nr m=iso&tlng=es (date of reference: 14.09.2022).
36. Danukalo M. V., Melnikova O. V. Arterial hypertension as a predictor of morpho-densitometric changes development in rats' solitary-vagal complex // Journal of Education, Health and Sport. 2019. No. 9 (10). Pp. 132-142. DOI: 10.5281/zenodo.3497436.
37. Shalamay U., Voronych-Semchenko N., Kovalchuk L., Bagriy M. Peculiarities of Morphodensitometric Indices of Epitheliocytes of the Oral Cavity Mucous Membrane in Children with Latent Iron Deficiency and Mild Iodine Deficiency // Journal of Pharmacy and Pharmacology. 2020. No. 8. Pp. 18-23. DOI: 10.17265/23282150/2020.01.004.
38. Потапова С. Г. [и др.] Результаты компьютерной эритроцитометрии при макроцитарной анемии // Цито-морфометрия в медицине и биологии: фундаментальные и прикладные аспекты: материалы II Московской региональной научно-практической конференции (c международным участием). Москва, 2009. C. 69-71.
39. Мильто И. В., Шевцова Н. М., Иванова В. В., Серебрякова О. Н., Тахауов Р. М., Суходоло И. В. Гемо-поэтические клетки костного мозга крыс после внутривенного введения модифицированных хитозаном наночастиц магнетита // Цитология. 2020. № 62 (6). С. 418-427. DOI: 10.31857/S0041377120060061.
OQ
a t¡ Сь
b
h-i«
O
Г+
n>
0 b t¡
1
CTQ h-
n>
СЛ
s ^
о R О
к
и
<u н о s ю
s
R
s ^
о R о s m
40. Глушен С. В., Иванова М. А., Гордиенко Н. С. Фрактальная площадь клеточного ядра в цитометрии опухолей щитовидной железы // Медицинский журнал. 2005. № 4 (14). С. 39-40.
41. Минашкина Т. А. Морфологическая характеристика эритроцитов при экспериментальном гипервита-минозе А // Морфология. 2011. № 139 (2). С. 41-44.
42. Ломановская Т. А., Боронихина Т. В., Яцковский А. Н. Изменения морфологии эритроцитов при передозировке ретинола пальмитата // Оперативная хирургия и клиническая анатомия (Пироговский научный журнал). 2020. № 4 (1). С. 46-51. DOI: 10.17116/operhirurg2020401146.
43. Wang Q., Wang J., Zhou M., Li Q., Wen Y., Chu J. A 3D attention networks for classification of white blood cells from microscopy hyperspectral images // Optics and Laser Technology. 2021. No. 139. Article number 106931. DOI: 10.1016/j.optlastec.2021.106931.
44. Каде М. А., Евглевский А. А., Галенко-Ярошевский П. А. Морфометрическая характеристика нейронов спинного мозга и спинальных ганглиев при субарахноидальном введении бупивакаина, мексидола и их сочетания // Кубанский научный медицинский вестник. 2009. № 8 (113). С. 44-48.
45. Могильная Г. М., Дурлештер В. М., Могильная В. Л. Сравнительная характеристика ядер эпителиоци-тов пищевода Барретта в зоне «полей эффекта» при различных формах метаплазии // Кубанский научный медицинский вестник. 2013. № 1 (136). С. 125-127.
46. Hubner B. et al. Remodeling of nuclear landscapes during human myelopoietic cell differentiation maintains co-aligned active and inactive nuclear compartments // Epigenetics & Chromatin. 2015. No. 8 (47). DOI: 10.1186/ s13072-015-0038-0.
47. Imai R. et al. Density imaging of heterochromatin in live cells using orientation-independent-DIC microscopy // Molecular Biology of the Cell. 2017. No. 28 (23). Pp. 3349-3359. DOI: 10.1091/mbc.E17-06-0359.
48. Kaminskyi V. Morphodensitometric features of peripheral blood lymphocytes in patients with primary glomerulonephritis // Nephrology Dialysis Transplantation. 2020. Vol. 35. Iss. Supplement_3. DOI: 10.1093/ndt/ gfaa142.P0454.
49. Луценко М. Т. Динамика оптической плотности гемоглобина в эритроцитах периферической крови больных бронхиальной астмой // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2010. № 35. С. 29-30.
50. Ветровой О. В., Тюлькова Е. И., Стратилов В. А., Баранова К. А., Самойлов М. О. Особенности метилирования ДНК и гистона Н3 в мозге крыс в ответ на тяжелую гипобарическую гипоксию и гипоксическое посткондиционирование // Цитология. 2019. № 61 (10). С. 837-844. DOI: 10.1134/S0041377119080078.
51. Тюлькова Е. И., Ватаева Л. А., Стратилов В. А., Барышева В. С., Ветровой О. В. Особенности метилирования ДНК и гистона Н3 в гиппокампе и неокортексе крыс, переживших патологические воздействия в пре-натальном периоде развития // Нейрохимия. 2020. № 37 (1). С. 64-74. DOI: 10.31857/S1027813320010197.
52. Белик И. А. Влияние высокой дозы тартразина на изменение ультрамикроскопических показателей селезенки и тимуса половозрелых крыс-самцов // Морфологический альманах имени В. Г. Ковешникова. 2020. № 18 (4). С. 6-12.
53. Owen J. C. Collecting, processing, and storing avian blood: a review // Journal of Field Ornithology. 2011. No. 82 (4). Pp. 339-354. DOI: ]10.1111/j.1557-9263.2011.00338.x.
54. Mulisch M. Romeis Mikroskopische Technik. 19. Auflage / Edited by M. Mulisch, U. Welsch. Berlin, Heidelberg: Springer Spektrum, 2015. 611 p. DOI: 10.1007/978-3-642-55190-1.
55. Markaki Y. Light Microscopy. Methods and protocols. Series: Methods in molecular biology / Edited by Y. Markaki, H. Harz. New York: Humana Press - Springer Protocols, 2017. 285 p. DOI: 10.1007/978-1-49396810-7.
56. Кириллова И. А., Кириллов Д. В. Репродуктивная биология Platanthera bifolia (L.) Rich. (Orchidaceae) на северной границе ареала (Республика Коми) // Вестник Томского государственного университета. Биология. 2017. № 38. С. 68-88. DOI; 10.17223/19988591/38/4.
57. Abushmmala F., Alhanjouri M. Colour Based Segmentation of Red Blood Cells using K-means and Image Morphological Operations // International Journal of Advanced and Innovative Research. 2013. No. 2 (11). Pp. 344-350.
58. Zhang C. et al. White Blood Cell Segmentation by Color-Space-Based K-Means Clustering // Sensors. 2014. No. 14. Pp. 16128-16147. DOI: 10.3390/s140916128.
59. Bailo O., Ham D.-S., Min Shin Y. Red blood cell image generation for data augmentation using Conditional Generative Adversarial Networks // arXiv:1901.06219v2 [cs.CV]. 2019. DOI: 10.48550/arXiv. 1901.06219.
60. Дьяченко А. А., Рябухо В. П. Цветовые модели представления полихроматических интерференционных изображений тонких слоистых объектов в оптической микроскопии // Компьютерная оптика. 2019. № 43 (6). С. 956-967. DOI: 10.18287/2412-6179-2019-43-6-956-967.
61. Соколова И. Б., Полынцев Д. Г. Эффективность применения мезенхимных стволовых клеток для улучшения микроциркуляции в коре головного мозга спонтанно гипертензивных крыс // Цитология. 2017. № 59 (4). С. 279-284.
62. Жукоцкий А. В., Строгалов А. С., Коган Э. М., Николаева Е. А., Анисимов М. П., Якубова Н. И. O проблеме объективизации цитологической диагностики с помощью оптоэлектронных систем (морфоденсито-метрический метод) // Интеллектуальные системы. 1998. № 3 (3-4). С. 233-250.
63. Chiarini-Garcia H. Light Microscopy. Methods and protocols. Series: Methods in molecular biology / Edited by H. Chiarini-Garcia, R. C. N. Melo. New York: Humana Press - Springer Protocols, 2011. 244 p. DOI: 10.1007/978-1-60761-950-5.
Об авторах:
Евгений Анатольевич Колесник1, доктор биологических наук, профессор кафедры физиологии, этологии и биохимии животных, ORCID 0000-0002-2326-651X, AuthorID 791884; +7 952 528-33-29, [email protected]
Марина Аркадьевна Дерхо2, доктор биологических наук, профессор, заведующая кафедрой естественнонаучных дисциплин, ORCID 0000-0003-3818-0556, AuthorID 310613; +7 908 047-10-30, [email protected]
Максим Борисович Ребезов3, 4, доктор сельскохозяйственных наук, кандидат ветеринарных наук, профессор, главный научный сотрудник3, профессор кафедры биотехнологии и пищевых продуктов4, ORCID 0000-0003-0857-5143, AuthorID 419764; +7 999 900-23-65, [email protected]
1 Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К. А. Тимирязева, Москва, Россия
2 Южно-Уральский государственный аграрный университет, Троицк, Россия
3 Федеральный научный центр пищевых систем им. В. М. Горбатова Российской академии наук, Москва, Россия
4 Уральский государственный аграрный университет, Екатеринбург, Россия
CTQ a
t¡
Съ
b
h-i«
О
г+
п>
0 b t¡
1
CTQ h-
п>
сл
References
1. Grigor'ev S. A., Popova E. Yu. Srodstvo podobiy: mekhanizmy samoassotsiatsii i kompartmentalizatsii eu-karioticheskogo khromatina [Affinity of similarities: mechanisms of self-association and compartmentalization of eukaryotic chromatin] // Molecular biology. 2019. No. 53 (6). Pp. 933-953. DOI: 10.1134/S0026898419060053. (In Russian.)
2. Khabarova A. A., Ryzhkova A. S., Battulin N. R. Reorganizatsiya khromatina v protsesse eritroidnoy differen-tsirovki [Reorganization of chromatin in the process of erythroid differentiation] // Vavilov Journal of Genetics and Selection. 2019. No. 23 (1). Pp. 95-99. DOI: 10.18699/VJ19.467. (In Russian.)
3. Sanders T. J. et al. Extended Archaeal Histone-Based Chromatin Structure Regulates Global Gene Expression in Thermococcus kodakarensis // Frontiers in Microbiology. 2021. No. 12. Article number 681150. DOI: 10.3389/ fmicb.2021.681150.
4. Rzhepakovskiy I. V, Timchenko L. D., Piskov S. I., Avanesyan S. S., Sizonenko M. N., Shakhbanov M. Sh., Nagdalyan A. A., Rebezov M. B. Trekhmernaya rentgenovskaya mikrotomografiya serdtsa kurinogo embriona v rannem periode embriogeneza [Three-dimensional X-ray microtomography of the heart of a chicken embryo in the early period of embryogenesis] // Agrarian Science. 2023. No. 1 (10). Pp. 24-29. DOI: 10.32634/0869-81552023-375-10-24-29. (In Russian.)
5. Bell S. G. An introduction to hemoglobin physiology // Neonatal Network. 1999. No. 18 (2). Pp. 9-15. DOI: 10.1891/0730-0832.18.2.9.
6. Ponka P. et al. Erythropoiesis, Hemoglobin Synthesis, and Erythroid Mitochondrial Iron Homeostasis // In: Handbook of Porphyrin Science: with Applications to Chemistry, Physics, Materials Science, Engineering, Biology and Medicine. Santa Barbara: World Scientific, 2013. №» 27. Pp. 41-84. DOI: 10.1142/9789814407755_0011.
7. Kumari A. Heme Synthesis (Chapter 8) // In: Sweet Biochemistry: Remembering Structures, Cycles, and Pathways by Mnemonics. London: Academic Press, Elsevier Science, 2018. Pp. 33-36. DOI: 10.1016/B978-0-12-814453-4.00008-X.
8. Ryzhkova A., Taskina A., Khabarova A., Fishman V., Battulin N. Erythrocytes 3D genome organization in vertebrates // Scientific Reports. 2021. No. 11 (1). Article number 4414. DOI: 10.1038/s41598-021-83903-9.
9. Nizovtseva E. V., Gerasimova N. S., Studitskiy V. M. Vliyanie atsetilirovaniya gistona N4 na distantsion-nye vzaimodeystviya v khromatine [The influence of histone H4 acetylation on long-distance interactions in chromatin] // Herald of Moscow University. Series 16. Biology. 2019. No. 74 (4). Pp. 308-312. DOI: 10.3103/ S0096392519040114. (In Russian.)
s ^
о R О
к
и
<u н о s ю
s
R
s ^
о R о s m
10. Takahata S., Murakami Y. Opposing Roles of FACT for Euchromatin and Heterochromatin in Yeast // Biomo-lecules. 2023. No. 13. Article number 377. DOI: 10.3390/biom13020377.
11. Gasparotto M., Lee Y.-S., Palazzi A., Vacca M., Filippini F. Nuclear and Cytoplasmatic Players in Mitochondria-Related CNS Disorders: Chromatin Modifications and Subcellular Trafficking // Biomolecules. 2022. No. 12 (5). Article number 625. DOI: 10.3390/biom12050625.
12. Krasikova A. V., Kulikova T. V. Raspredelenie markerov geterokhromatina v khromosomakh tipa lampovykh shchetok u ptits [Distribution of heterochromatin markers in lampbrush chromosomes in birds] // Genetics. 2017. No. 53 (9). Pp. 1077-1085. DOI: 10.7868/S0016675817090077. (In Russian.)
13. Zhang Z., Zhang R., Xiao K., Sun X. G4Beacon: An In Vivo G4 Prediction Method Using Chromatin and Sequence Information // Biomolecules. 2023. No. 13 (2). Article number 292. https://doi.org/10.3390/biom13020292.
14. Gasser S. M. Visualizing Chromatin Dynamics in Interphase Nuclei. Science. 2002. No. 296 (5572). Pp. 14121416. DOI: 10.1126/science.1067703.
15. Yeo J. H., Lam Y. W., Fraser S. T. Cellular dynamics of mammalian red blood cell production in the erythroblastic island niche // Biophysical Reviews. 2019. No. 11 (6). Pp. 873-894. DOI: 10.1007/s12551-019-00579-2.
16. Manteyfel' V. M., Karu T. Y. Snizhenie kompaktizatsii kondensirovannogo khromatina v limfotsitakh che-loveka pod vliyaniem nizkointensivnogo izlucheniya He-Ne lazera [Reduced compaction of condensed chromatin in human lymphocytes under the influence of low-intensity radiation from a He-Ne laser] // Proceedings of the Russian Academy of Sciences. Series Biological. 2009. No. 6. Pp. 654-661. DOI: 10.1134/S1062359009060028. (In Russian.)
17. Antonova E. I. et al. Osobennosti reorganizatsii khromatina yader i pokazateley kletochnogo tsikla gepatotsi-tov pecheni ryb posle vozdeystviya vysokoy vneshney temperatury [Features of nuclear chromatin reorganization and cell cycle indicators of fish liver hepatocytes after exposure to high external temperature] [e-resource] // Modern Problems of Science and Education. Surgery. 2012. No. 6. URL: https://science-education.ru/ru/article/ view?id=7469 (date of reference: 05.09.2022). (In Russian.)
18. Lehmann R. R., Nienhaus R. H., Dénes R. M., Steinbach T. Changes of euchromatin/heterochromatin ratios in cell nuclei of the aortic adventitia in diabetic rats // Artery. 1987. No. 14 (2). Pp. 66-75.
19. De la Iglesia Inigo S., Moreno-Carralero M.-I., Lemes-Castellano A., Molero-Labarta T., Méndez M., Morán-Jiménez M.-J. A case of congenital dyserythropoietic anemia type IV // Clinical Case Reports. 2017. No. 5 (3). Pp. 248-252. DOI: 10.1002/ccr3.825.
20. Kimura F. et al. Image quantification technology of the heterochromatin and euchromatin region for differential diagnosis in the lobular endocervical glandular hyperplasia // Diagnostic Cytopathology. 2019. No. 47 (6). DOI: 10.1002/dc.24155.
21. Schreier S., Budchart P., Borwornpinyo S., Arpornwirat W., Triampo W. Circulating erythroblast abnormality associated with systemic pathologies may indicate bone marrow damage // Journal of Circulating Biomarkers. 2021. No. 10. Pp. 14-19. DOI: 10.33393/jcb.2021.2220.
22. Gasparyan S. A., Popova O. S., Vasilenko I. A., Khripunova A. A., Metelin V. B. Otsenka fenotipa interfaznykh yader limfotsitov metodom kolichestvennogo fazovogo imidzhinga (QPI) u patsientok s endometrioidnymi kistami yaichnikov [Evaluation of the phenotype of interphase nuclei of lymphocytes using the quantitative phase imaging (QPI) method in patients with endometrioid ovarian cysts] // Almanac of Clinical Medicine. 2017. No. 45 (2). Pp. 109-117. DOI: 10.18786/2072-0505-2017-45-2-109-117. (In Russian.)
23. Kozovyy R. V., Pertsovich V M., Koval'chuk L. E., Bagriy M. M. Analiz morfodensitometricheskie pokazateley sostoyaniya genoma limfotsitov periferieskoy krovi dolgozhiteley Prikarpat'ya [Analysis of morphoden-sitometric indicators of the state of the genome of peripheral blood lymphocytes in long-livers of the Carpathian region] // Mezhdunarodnyy zhurnal prikladnykh i fundamental'nykh issledovaniy. 2013. No. 11 (2). Pp. 29-32. (In Russian.)
24. Wickramasinghe S. N., Pippard M. J. Studies of erythroblast function in congenital dyserythropoietic anaemia, type I: evidence of impaired DNA, RNA, and protein synthesis and unbalanced globin chain synthesis in ultrastructurally abnormal cells // Journal of Clinical Pathology. 1986. No. 39 (8). Pp. 881-890. DOI: 10.1136/ jcp.39.8.881.
25. Doty R. T., Phelps S. R., Shadle C., Sanchez-Bonilla M., Keel S. B., Abkowitz J. L. Coordinate expression of heme and globin is essential for effective erythropoiesis // The Journal of Clinical Investigation. 2015. No. 125 (12). Pp. 4681-4691. DOI: 10.1172/JCI83054.
26. Lipunova E. A., Skorkina M. Yu. Sistema krasnoy krovi: Sravnitel'naya fiziologiya [Red blood system: Comparative physiology]. Belgorod: Izdatel'stvo Belgorodskogo gosudarstvennogo universiteta 2004. 216 p. (In Russian.)
27. Gavrilov O. K. et al. Normal'noe krovetvorenie i ego regulyatsiya [Normal hematopoiesis and its regulation] / Ed. by N. A. Fedorova. Moscow: Meditsina, 1976. 543 p. (In Russian.)
28. Rosse C., Trotter J.A. A Cytochemical and Radioautographic Analysis of Erythropoiesis at the Ultrastructural Level // American Journal of Anatomy. 1974. No. 141 (1). Pp. 41-72. DOI: 10.1002/aja.1001410104.
29. Yap K. N., Zhang Y. Revisiting the question of nucleated versus enucleated erythrocytes in birds and mammals // American journal of physiology. Regulatory, integrative and comparative physiology. 2021. No. 321. Pp. 547-557. DOI: 10.1152/ajpregu.00276.2020.
30. Kolesnik E. A., Derkho M. A., Strizhikov V. K., Strizhikova S. V., Gizatullina F. G., Ponomaryova T. A. Differential morphophysiological characteristics of erythrocyte precursors and mature erythroid cells in early postnatal ontogenesis of birds // International Journal of Biology and Biomedical Engineering. 2020. No. 14. Pp. 101-108. DOI: 10.46300/91011.2020.14.15.
31. Kolesnik E. A., Derkho M. A. Kharakteristika problematiki morfofiziologii kletok krovi neonatal'nogo onto-geneza kur. Soobshchenie I. Osobennosti postembrional'nogo krovetvoreniya, razlichiya v podkhodakh i proble-matika morfofunktsional'nogo analiza krovi ptits (obzor) [Characteristics of the problems of morphophysiology of blood cells of neonatal ontogenesis of chickens. Message I. Features of postembryonic hematopoiesis, differences in approaches and problems of morphofunctional analysis of bird blood (review)] // Agro-Industrial Complex of Russia. 2019. No. 26 (4). Pp. 637-643. DOI: 10.5281/zenodo.4385556. (In Russian.)
32. Kolesnik E. A., Derkho M. A. Kharakteristika problematiki morfofiziologii kletok krovi neonatal'nogo on-togeneza kur. Soobshchenie II. Kharakteristika differentsial'nykh morfofiziologicheskikh markerov formennykh elementov krovi ptits [Characteristics of the problems of morphophysiology of blood cells of neonatal ontogenesis of chickens. Message II. Characteristics of differential morphophysiological markers of blood cells in birds] // Agro-Industrial Complex of Russia. 2019. No. 26 (4). Pp. 644-652. DOI: 10.5281/zenodo.4385940. (In Russian.)
33. Rothmann C., Cohen A. M., Malik Z. Chromatin Condensation in Erythropoiesis Resolved by Multipixel Spectral Imaging: Differentiation Versus Apoptosis // The Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 1997. No. 45 (8). Pp. 1097-1108. DOI: 10.1177/002215549704500807.
34. Heidarian A., Yousefi E., Somma J. Digital Image Analysis of Nuclear Morphometry in Thyroid Fine Needle Biopsies // Journal of the American Society of Cytopathology. 2017. No. 6 (5). P. S76. DOI: 10.1016/j. jasc.2017.06.189.
35. Hidalgo D. T., Diaz Rojas P. A., Batista M. T., Anta A. S. La densidad óptica nuclear como indicador diagnóstico en el carcinoma papilar de tiroides [e-resource] // Revista Cubana de Investigaciones Biomédicas. 2020. No. 39 (3). URL: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-03002020000300013&lng=en&nr m=iso&tlng=es (date of reference: 14.09.2022).
36. Danukalo M. V., Melnikova O. V. Arterial hypertension as a predictor of morpho-densitometric changes development in rats' solitary-vagal complex // Journal of Education, Health and Sport. 2019. No. 9 (10). Pp. 132-142. DOI: 10.5281/zenodo.3497436.
37. Shalamay U., Voronych-Semchenko N., Kovalchuk L., Bagriy M. Peculiarities of Morphodensitometric Indices of Epitheliocytes of the Oral Cavity Mucous Membrane in Children with Latent Iron Deficiency and Mild Iodine Deficiency // Journal of Pharmacy and Pharmacology. 2020. No. 8. Pp. 18-23. DOI: 10.17265/23282150/2020.01.004.
38. Potapova S. G. et al. Rezul'taty komp'yuternoy eritrotsitometrii pri makrotsitarnoy anemii [Results of computer erythrocytometry for macrocytic anemia] // Tsitomorfometriya v meditsine i biologii: fundamental'nye i prikladnye aspekty: materialy II Moskovskoy regional'noy nauchno-prakticheskoy konferentsii (c mezhdunarod-nym uchastiem). Moscow, 2009. Pp. 69-71. (In Russian.)
39. Mil'to I. V., Shevtsova N. M., Ivanova V. V., Serebryakova O. N., Takhauov R. M., Sukhodolo I. V. Gemopoet-icheskie kletki kostnogo mozga krys posle vnutrivennogo vvedeniya modifitsirovannykh khitozanom nanochastits magnetite [Hematopoietic cells of rat bone marrow after intravenous administration of chitosan-modified magnetite nanoparticles] // Cytology. 2020. No. 62 (6). Pp. 418-427. DOI: 10.31857/S0041377120060061. (In Russian.)
40. Glushen S. V., Ivanova M. A., Gordienko N. S. Fraktal'naya ploshchad' kletochnogo yadra v tsitometrii opukholey shchitovidnoy zhelezy [Fractal area of the cell nucleus in cytometry of thyroid tumors] // Meditsinskiy zhurnal. 2005. No. 4 (14). Pp. 39-40. (In Russian.)
41. Minashkina T. A. Morfologicheskaya kharakteristika eritrotsitov pri eksperimental'nom gipervitaminoze A [Morphological characteristics of erythrocytes in experimental hypervitaminosis A] // Morphology. 2011. No. 139 (2). Pp. 41-44. (In Russian.)
42. Lomanovskaya T. A., Boronikhina T. V, Yatskovskiy A. N. Izmeneniya morfologii eritrotsitov pri peredoz-irovke retinola pal'mitata [Changes in the morphology of erythrocytes with an overdose of retinol palmitate] // Russian Journal of Operative Surgery and Clinical Anatomy. 2020. No. 4 (1). Pp. 46-51. DOI: 10.17116/oper-hirurg2020401146. (In Russian.)
43. Wang Q., Wang J., Zhou M., Li Q., Wen Y., Chu J. A 3D attention networks for classification of white blood cells from microscopy hyperspectral images // Optics and Laser Technology. 2021. No. 139. Article number 106931. DOI: 10.1016/j.optlastec.2021.106931. 83
CTQ
a
!=s a
b ho
rift)
0 b
1
CTQ h-1*
rt)
Vi
s ^
о R О
к
и
<u н о s ю
s
R
s ^
о R о s m
44. Kade M. A., Evglevskiy A. A., Galenko-Yaroshevskiy P. A. Morfometricheskaya kharakteristika neyronov spinnogo mozga i spinal'nykh gangliev pri subarakhnoidal'nom vvedenii bupivakaina, meksidola i ikh sochetaniya [Morphometric characteristics of neurons of the spinal cord and spinal ganglia during subarachnoid administration of bupivacaine, Mexidol and their combinations] // Kuban Scientific Medical Bulletin. 2009. No. 8 (113). Pp. 44-48. (In Russian.)
45. Mogil'naya G. M., Durleshter V. M., Mogil'naya V L. Sravnitel'naya kharakteristika yader epiteliotsitov pishchevoda Barretta v zone "poley effekta" pri razlichnykh formakh metaplazii [Comparative characteristics of the nuclei of epithelial cells of Barrett's esophagus in the zone of "effect fields" in various forms of metaplasia] // Kuban Scientific Medical Bulletin. 2013. No. 1 (136). Pp. 125-127. (In Russian.)
46. Hubner B. et al. Remodeling of nuclear landscapes during human myelopoietic cell differentiation maintains co-aligned active and inactive nuclear compartments // Epigenetics & Chromatin. 2015. No. 8 (47). DOI: 10.1186/ s13072-015-0038-0.
47. Imai R. et al. Density imaging of heterochromatin in live cells using orientation-independent-DIC microscopy // Molecular Biology of the Cell. 2017. No. 28 (23). Pp. 3349-3359. DOI: 10.1091/mbc.E17-06-0359.
48. Kaminskyi V. Morphodensitometric features of peripheral blood lymphocytes in patients with primary glomerulonephritis // Nephrology Dialysis Transplantation. 2020. Vol. 35. Iss. Supplement_3. DOI: 10.1093/ndt/ gfaa142.P0454.
49. Lutsenko M. T. Dinamika opticheskoy plotnosti gemoglobina v eritrotsitakh perifericheskoy krovi bol'nykh bronkhial'noy astmoy [Dynamics of the optical density of hemoglobin in the erythrocytes of peripheral blood of patients with bronchial asthma] // Bulletin of Physiology and Pathology of Respiration. 2010. No. 35. Pp. 29-30. (In Russian.)
50. Vetrovoy O. V., Tyul'kova E. I., Stratilov V A., Baranova K. A., Samoylov M. O. Osobennosti metil-irovaniya DNK i gistona N3 v mozge krys v otvet na tyazheluyu gipobaricheskuyu gipoksiyu i gipoksicheskoe postkonditsionirovanie [Features of DNA methylation and histone H3 in the brain of rats in response to severe hypobaric hypoxia and hypoxic postconditioning] // Cytology. 2019. No. 61 (10). Pp. 837-844. DOI: 10.1134/ S0041377119080078. (In Russian.)
51. Tyul'kova E. I., Vataeva L. A., Stratilov V. A., Barysheva V. S., Vetrovoy O. V. Osobennosti metilirovaniya DNK i gistona N3 v gippokampe i neokortekse krys, perezhivshikh patologicheskie vozdeystviya v prenatal'nom periode razvitiya [Features of DNA methylation and histone H3 in the hippocampus and neocortex of rats that survived pathological influences in the prenatal period of development] // Neyrokhimiya. 2020. No. 37 (1). Pp. 64-74. DOI: 10.31857/S1027813320010197. (In Russian.)
52. Belik I. A. Vliyanie vysokoy dozy tartrazina na izmenenie ul'tramikroskopicheskikh pokazateley selezenki i timusa polovozrelykh krys-samtsov [Effect of a high dose of tartrazine on changes in ultramicroscopic parameters of the spleen and thymus of mature male rats] // Morfologicheskiy al'manakh imeni V G. Koveshnikova. 2020. No. 18 (4). Pp. 6-12. (In Russian.)
53. Owen J. C. Collecting, processing, and storing avian blood: a review // Journal of Field Ornithology. 2011. No. 82 (4). Pp. 339-354. DOI: ]10.1111/j.1557-9263.2011.00338.x.
54. Mulisch M. Romeis Mikroskopische Technik. 19. Auflage / Edited by M. Mulisch, U. Welsch. Berlin, Heidelberg: Springer Spektrum, 2015. 611 p. DOI: 10.1007/978-3-642-55190-1.
55. Markaki Y. Light Microscopy. Methods and protocols. Series: Methods in molecular biology / Edited by Y. Markaki, H. Harz. New York: Humana Press - Springer Protocols, 2017. 285 p. DOI: 10.1007/978-1-4939-6810-7.
56. Kirillova I. A., Kirillov D. V Reproduktivnaya biologiya Platanthera bifolia (L.) Rich. (Orchidaceae) na severnoy granitse areala (Respublika Komi) [Reproductive biology of Platanthera bifolia (L.) Rich. (Orchidaceae) on the northern border of the range (Komi Republic)] // Tomsk State University Journal of Biology. 2017. No. 38. Pp. 68-88. DOI: 10.17223/19988591/38/4. (In Russian.)
57. Abushmmala F., Alhanjouri M. Colour Based Segmentation of Red Blood Cells using K-means and Image Morphological Operations // International Journal of Advanced and Innovative Research. 2013. No. 2 (11). Pp. 344-350.
58. Zhang C. et al. White Blood Cell Segmentation by Color-Space-Based K-Means Clustering // Sensors. 2014. No. 14. Pp. 16128-16147. DOI: 10.3390/s140916128.
59. Bailo O., Ham D.-S., Min Shin Y. Red blood cell image generation for data augmentation using Conditional Generative Adversarial Networks // arXiv:1901.06219v2 [cs.CV]. 2019. DOI: 10.48550/arXiv. 1901.06219.
60. D'yachenko A. A., Ryabukho V. P. Tsvetovye modeli predstavleniya polikhromaticheskikh interferentsion-nykh izobrazheniy tonkikh sloistykh ob"ektov v opticheskoy mikroskopii [Color models for representing polychromatic interference images of thin layered objects in optical microscopy] // Computer Optics. 2019. No. 43 (6). Pp. 956-967. DOI: 10.18287/2412-6179-2019-43-6-956-967. (In Russian.)
61. Sokolova I. B., Polyntsev D. G. Effektivnost' primeneniya mezenkhimnykh stvolovykh kletok dlya uluchsh-eniya mikrotsirkulyatsii v kore golovnogo mozga spontanno gipertenzivnykh krys [Efficiency of using mesenchymal stem cells to improve microcirculation in the cerebral cortex of spontaneously hypertensive rats] // Cytology. 2017. No. 59 (4). Pp. 279-284. (In Russian.)
62. Zhukotskiy A. V, Strogalov A. S., Kogan E. M., Nikolaeva E. A., Anisimov M. P., Yakubova N. I. O probleme ob'ektivizatsii tsitologicheskoy diagnostiki s pomoshch'yu optoelektronnykh sistem (morfodensitometricheskiy metod) [About the problem of objectification of cytological diagnostics using optoelectronic systems (morphoden-sitometric method)] // Intelligent systems. 1998. No. 3 (3-4). Pp. 233-250. (In Russian.)
63. Chiarini-Garcia H. Light Microscopy. Methods and protocols. Series: Methods in molecular biology / Edited by H. Chiarini-Garcia, R. C. N. Melo. New York: Humana Press - Springer Protocols, 2011. 244 p. DOI: 10.1007/978-1-60761-950-5.
Autors' information:
Evgeniy A. Kolesnik1, doctor of biological sciences, professor of the department of physiology, ethology and biochemistry of animals, ORCID 0000-0002-2326-651X, AuthorID 791884; +7 952 528-33-29, [email protected]
Marina A. Derkho2, doctor of biological sciences, professor, head of the department of natural sciences, ORCID 0000-0003-3818-0556, AuthorID 310613; +7 908 047-10-30, [email protected] Maksim B. Rebezov3, 4, doctor of agricultural sciences, candidate of veterinary sciences, professor, chief researcher3, professor of the department of biotechnology and food products4, ORCID 0000-0003-0857-5143, AuthorID 419764; +7 999 900-23-65, [email protected]
1 Russian State Agrarian University - Moscow State Agricultural Academy named after K. A. Timiryazev, Moscow, Russia
2 South Ural State Agrarian University, Troitsk, Russia
3 V. M. Gorbatov Federal Research Center for Food Systems of the Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia
4 Ural State Agrarian University, Ekaterinburg, Russia
CtQ
a
!=s a
b i—
o
rift)
0 b
1
CtQ i—1*
rt)
Vi
