Функциональное состояние клеточных мембран у больных мочекаменной болезнью Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

мочекаменная болезнь

экспериментальная и клиническая урология № 2 2019 www.ecuro.ru

87

Функциональное состояние клеточных мембран у больных мочекаменной болезньЬ

С.А. Голованов, М.Ю. Просянников, Н.В. Анохин, А.В. Сивков, О.И. Аполихин

НИИ урологии и интервенционной радиологии им. Н.А.Лопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России

Сведения об авторах:

Голованов С.А. - д.м.н., руководитель группы клинической лабораторной диагностики НИИ урологии и интервенционной радиологии им. НАЛопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, sergeygoll24@mail.ru, AuthorlD 636685

Golovanov S.A. - Dr. Sc., clinical and laboratory diagnostic team leader N.A. Lopatkin Scientific Research Institute of Urology and Interventional Radiology - Branch of the National Medical Research Radiological Centre of the Ministry of Health of Russian Federation, sergeygol124@mail.ru, ORCID 0000-0003-4250-7398

Просянников М.Ю. - к.м.н., зав. отделом мочекаменной болезни НИИ урологии и интервенционной радиологии им. Н.А. Лопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, prosyannikov@gmail.com, AuthorID 79l050

Prosiannikov M. Yu. - PhD, Head of Department of urolithiasis of N.A. Lopatkin Scientific Research Institute of Urology and Interventional Radiology - Branch of the National Medical Research Radiological Centre of the Ministry of Health of Russian Federation, prosyannikov@gmail.com, ORCID 0000-0003-3635-5244

Анохин Н.В. - к.м.н., младший научный сотрудник отдела мочекаменной болезни НИИ урологии и интервенционной радиологии им. Н.А. Лопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, anokhinnikolay@yandex.ru, AuthorID 880749

Anokhin N.V. - PhD, Researcher at the Department of urolithiasis of N.A. Lopatkin Scientific Research Institute of Urology and Interventional Radiology - Branch of the National Medical Research Radiological Centre of the Ministry of Health of Russian Federation, anokhinnikolay@yandex.ru, ORCID 0000-0002-4341-4276

Сивков А.В. - к.м.н., заместитель директора научно-исследовательского института урологии и интервенционной радиологии им. Н.А. Лопаткина -филиал ФГБУ «НМИЦрадиологии» Минздрава России, uroinfo@yandex.ru, AuthorID 622663

Sivkov A.V. - PhD, assistant director of N.A. Lopatkin Scientific Research Institute of Urology and Interventional Radiology - Branch of the National Medical Research Radiological Centre of the Ministry of Health of Russian Federation, uroinfo@yandex.ru, ORCID 0000-0001-8852-6485

Аполихин О.И. - д.м.н., профессор, член-корреспондент РАН, .директор НИИ урологии и интервенционной радиологии им. Н.А. Лопаткина - филиала ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, sekr.urology@gmail.com, AuthorID 683661

Apolikhin O.I. - Dr. Sc., professor, corresponding member of the Russian Academy of Sciences. Director of N.A. Lopatkin. Scientific Research Institute of Urology and Interventional Radiology - Branch of the National Medical Research Radiological Centre of the Ministry of Health of Russian Federation, sekr.urology@gmail.com, ORCID 0000-0003-0206-043X

По современным представлениям инициация процессов камнеобразования в основном зависит от двух основных факторов: наличия бляшки/пробки Рэндалла в паренхиме почки и соотношения в моче лито-генных соединений (метаболических факторов риска), ингибиторов и промоторов процессов кристалло-и камнеобразования [1]. В конечном счете, химический состав мочи является интегральным результатом процессов избирательного транспорта, протекающего в мембранах клеток тубулярного эпителия почек. В связи с этим исследование свойств мембранного аппарата клеток эпителия канальцев имеет существенное значение для выяснения особенностей патогенеза мочекаменной болезни (МКБ).

С другой стороны, само образование камней в мочевых путях часто сопровождается нарушением уродинамики. Это способствует возникновению микроциркулятор-ных расстройств, развитию дистрофических и воспалительных процессов в почечной ткани, наруше-

нию структуры и функции клеточных мембран [2].

Одним из ключевых механизмов повреждения клеток, в том числе гипоксического или воспалительного характера, считают сво-боднорадикальное окисление и, в частности, перекисное окисление липидов (ПОЛ) цитомембран [3]. Между клеточными мембранами и внеклеточной средой происходит непрерывный обмен веществ, поэтому мембраны клеток способны, с одной стороны, определять характер метаболизма в целом, а с другой -служить своеобразным отражением его состояния, его обобщенным критерием. Очевидно также, что по комплексу биохимических параметров плазмы или мочи можно судить о состоянии мембранного аппарата клеток. Сказанное относится, по-видимому, ко всем типам клеточных мембран, включая почечные, постоянно контактирующие с канальце-вой жидкостью и плазмой крови. Однако данных о том, в какой степени состояние клеточных мембран при МКБ способно отражать характер системного метаболизма не имеется.

В связи с этим, в отдельной серии исследований была сделана попытка выявить связь между функциональным состоянием клеток, точнее, физико-химическим состоянием их мембран, и метаболическими показателями мочи и крови у больных уролитиазом.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе исследованы данные 68 человек, из которых 35 пациентов (19 мужчин и 16 женщин) в возрасте от 23 до 61 лет с диагнозом МКБ, хронический пиелонефрит в стадии ремиссии. В качестве контроля исследовали мочу (33 человека) и кровь (15 человек) практически здоровых людей.

Продукты ПОЛ определяли в плазме крови, в мембранах эритроцитов и моче больных. Активность процессов ПОЛ оценивали по уровню первичных (диеновые конъюга-ты) и вторичных (малоновый диаль-дегид) продуктов липидной перокси-дации. Кроме того, выполнялся комплекс исследований для определения известных клинико-биохимических 9

экспериментальная и клиническая урология №2 2019 www.ecuro.ru

показателей (клиренса креатинина, мочевины, креатинина, электролитов, концентрации кальция, мочевой кислоты, фосфатов крови и их экскреции с мочой и других).

Для поиска связи между физико-химическим состоянием мембран клеток крови и метаболическими показателями мочи и крови у больных уролитиазом использовали мембранный флюоресцентный зонд пирен [4], который включали в гидрофобную липидную часть мембраны изолированных лимфоцитов крови [5] больных МКБ.

Исследование интенсивности флюоресценции мембранных зондов выполняли на флюоресцентном спектрофотометре Hitachi 650-10 S (Япония).

Взвесь лимфоцитов крови выделяли центрифугированием в градиенте фиколла-верографина [6]. Однородность клеточного состава контролировали микроскопически. Гидрофобный зонд пирен добавляли к взвеси лимфоцитов крови до конечной концентрации 5 мкм на 5406 клеток. Принцип метода флюоресцентных зондов основан на том, что спектр и интенсивность флюоресценции встроенных в мембрану молекул некоторых химических соединений (зондов) меняются в зависимости от физико-химического состояния клеточных мембран.

Параметры микровязкости и полярности микроокружения мембранных липидов оценивали с помощью гидрофобного зонда пирена («зонда на липиды»). Метод основан на явлении эксимеризации встроенного в биомембрану пирена. Интенсивность флюоресценции в мембране возбужденных димеров (эксиме-ров) пирена (F470 нм) пропорциональна уменьшению микровязкости липидного микроокружения биомембраны, то есть, повышению текучести мембраны.

При этом общую микровязкость мембраны, точнее ее текучесть, оценивали как отношение интенсивностей флюоресценции эксимеров и мономе-

ров пирена ^ 470 нм нм ) при волне возбуждения 337 нм. Степень эксимери-зации пирена в прибелковых зонах ли-пидного бислоя определяется как F470 нм/Б393нм при 286 нм; полярность всего бислоя - как соотношение Fз72 нм/Б393нм при 337 нм; полярность прибелковых зон липидного бислоя мемтраны - как Fз72 нм/Б393нм при 286 нм.

Определяли также глубину проникновения мембранных белков в липидный бислой по тушению пире-ном флюоресценции триптофановых остатков белковых молекул. Параметр рассчитывается как отношение флюоресценции белков при добавлении пирена ^330™) к исходному уровню флюоресценции мембранных белков ^330нм°), то есть, как Fззoнм/ Fззoнм0 и волне возбуждения 286 нм.

Полученные с помощью зондов показатели физико-химического состояния мембран лимфоцитов крови подвергали корреляционному анализу с 68 биохимическими показателями мочи и крови 24 больных МКБ.

Функциональную активность клеточных мембран активированных лейкоцитов цельной крови проводили по методу регистрации сверхслабой хемилюминисценции, описанной Ю.А. Владимировым и соавт., с использованием микрокристаллов сульфата бария [7,8].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты, приведенные в таблице 1, свидетельствуют о выраженной лейкоцитурии и десквама-ции тубулярного эпителия у больных МКБ. Выделение эпителиальных клеток с мочой при уролитиа-зе было в 2,5 раза более выраженным, чем у здоровых лиц, а лейкоцитов - в 19,5 раз (р<0,025), что указывает на наличие хронического воспалительного процесса в почечной паренхиме.

При этом значения эпителиу-рии и лейкоцитурии у больных также оставались высокими и составляли соответственно 0,51±0,11

и 2,71±1,31 тыс кл/мМ креатинина, по сравнению со значениями, характерными для здоровых лиц (0,16±0,04 и 0,09±0,02 тыс кл/мМ креатинина соответственно, р<0,01).

В бесклеточном супернатанте мочи больных МКБ концентрация ли-пидов превышала нормальные значения более чем в 13 раз, увеличиваясь с 7,98±1,18 мг/л до 106,4±34,3 мг/л (р<0,005). Возможно, это является следствием процессов мембрано-лиза, активно протекающих в клетках почечной паренхимы при уро-литиазе.

Наряду с указанными изменениями у больных уролитиазом отмечалась повышенная экскреция с мочой первичных продуктов липид-ной пероксидации - диеновых конь-югатов (ДК) (табл. 1). Их концентрация в моче больных более чем в 2,7 раза превышала нормальные значения, достигая 3,12±0,93 мкМ/л (р<0,05). Это свидетельствует об активации начальных этапов свободноради-кального окисления мембранных липидов в клетках тубулярного эпителия и участии липидной перокси-дации в процессах нарушения структуры и функции почечной ткани при уролитиазе.

В отличие от почечной ткани характер липидной пероксидации в плазме крови имел свои особенности. Содержание малонового диа-льдегида (МДА) в плазме крови возрастало в 1,6 раза по сравнению с нормой, достигая значений 1,26± 0,15 мкМ/л (р<0,05).

Учитывая то, что процесс ли-пидной пероксидации протекает в липидной фазе и непосредственно зависит от количества субстрата, рассчитывали также коэффициент «продукты ПОЛ плазмы крови/общие липиды плазмы крови». Величина этого соотношения для МДА также была высокой: содержание МДА плазмы в расчете на единицу концентрации липидов плазмы составляло 0,25±0,03 мкМ/г по сравнению со значением 0,14±0,008 мкМ/г, характерным для здоровых лиц (р<0,05). Однако уровень диеновых

экспериментальная и клиническая урология № 2 201 9 www.ecuro.ru

конъюгатов при этом заметно не изменялся.

В качестве одной из возможных причин обнаруженных сдвигов в процессах липидной пероксидации при МКБ следует рассматривать истощение различных звеньев антиоксидант-ных систем крови, в том числе мембранных. Исследование эритро-цитарных мембран подтвердило это предположение: уровень МДА в мембранах эритроцитов крови возрастал в 1,6 раза по сравнению с нормой, достигая 6,35±0,57 мкМ/л плотно упакованных эритроцитов (р=0,01).

Обобщая результаты корреляционного анализа можно заключить, что физико-химические свойства мембран клеток крови, в данном случае лимфоцитов, способны отражать функциональное состояние мембран клеток тубулярного эпителия почек. Действительно, такие показатели почечного метаболизма, как экскреция фосфатов, оксалатов и рН мочи имеют отчетливо выра-

женную связь с параметрами полярности липидного бислоя и глубиной проникновения в него интегральных мембранных белков (табл. 2).

Известно, что усиление интенсивности ПОЛ в биомембране ведет к повышению ее микровязкости за счет разрывов цепей полиненасыщенных жирных кислот в мембранных фосфолипидах [9]. Возможно, при МКБ активация свободно-радикального окисления (СРО) липи-дов происходит также в лимфоцитах, поскольку установлено снижение микровязкости их мембран при повышении активности ПОЛ в плазме крови и мембранах эритроцитов №=-0,332) (табл. 2).

Еще одно подтверждение системного характера мембранных нарушений при уролитиазе было получено при исследовании функциональной активности лейкоцитов крови методом хемилюминесцен-ции.

Обнаружено, что высота ам-

плитуды вспышки люминесценции (У у больных была значительно ниже, чем у здоровых лиц, составляя 4,08±0,77 против 19,1±2,64 усл. ед. (р<0,001). Поскольку интенсивность свечения зависит от количества лейкоцитов в образце крови, определяли нормированную величину хемилюминесценции, в расчете на 1000 лейкоцитов. Этот показатель также был ниже у больных уролитиазом - 1,11 ±0,24 усл. ед., тогда как у здоровых лиц он составлял 4,04±0,39 усл.ед. (р<0,001).

ОБСУЖДЕНИЕ

Полученные данные свидетельствуют, что при МКБ наблюдается угнетение ответа фагоцитов крови на стимуляцию микрокристаллами сернокислого бария. Как известно, пусковым моментом в развитии полноценной фагоцитарной реакции является взаимодействие чужеродной поверхности В

Таблица 1. Показатели перекисного окисления липидов и результаты микроскопии осадка мочи у здоровых лиц и больных МКБ

Показатель Единицы измерения Здоровые лица ДО ± П Больные уролитиазом ДО ± п Р

Сыворотка крови

МДА мкМ/л 0,79 ± 0,05 15 1,26 ± 0,15 35 < 0,05

ДК мкМ/л 15,60 ± 2,21 15 21,01 ± 3,89 35 н.д.

ОЛ г/л 5,75 ± 0,09 15 5,37 ± 0,08 35 < 0,01

МДА/ОЛ мкМ/г 0,14 ± 0,008 15 0,25 ± 0,03 35 < 0,05

ДК/ОЛ мкМ/г 2,68 ± 0,35 15 3,96 ± 0,78 35 н.д.

Эритроциты крови

МДА мкМ/л 3,98 ± 0,15 15 6,35 ± 0,57 35 0,01

ДК мкМ/л 8,40 ± 0,46 15 6,95 ± 0,70 35 н.д.

Моча

МДА мкМ/л 7,04 ± 0,57 33 6,50 ± 2,09 35 н.д.

ДК мкМ/л 1,14 ± 0,15 33 3,12 ± 0,93 35 < 0,05

ОЛ мг/л 7,98 ± 1,18 33 106,4 ± 34,3 35 < 0,005

МДА/ОЛ мкМ/мг 2,26 ± 0,66 33 0,12 ± 0,06 35 < 0,01

ДК/ОЛ мкМ/мг 0,33 ± 0,15 33 0,16 ± 0,10 35 н.д.

Креатинин мМ/л 10,58 ± 0,79 33 7,99 ± 0,71 35 < 0,05

МДА/креатини мкМ/мМ 0,67 ± 0,05 33 0,70 ± 0,11 35 н.д.

ДК/креатинин мкМ/мМ 0,12 ± 0,02 33 0,41 ± 0,10 35 < 0,01

ОЛ/креатинин мг/мМ 0,89 ± 0,16 33 15,17 ± 4,70 35 < 0,001

Эпителий тыс кл/мл 1,30 ± 0,27 33 3,19 ± 0,54 35 < 0,001

Лейкоциты тыс кл/мл 0,86 ± 0,19 33 16,75 ± 8,77 35 < 0,025

Эпителий//креатинин тыс кл/мМ 0,16 ± 0,04 33 0,51 ± 0,11 35 < 0,001

Лейкоциты//креатинин тыс кл/мМ 0,09 ± 0,02 33 2,71 ± 1,31 35 < 0,01

Примечание: МДА - малоновый диальдегид; ДК - диеновые конъюгаты; ОЛ - общие липиды; Р - статистический показатель достоверности различия; н.д. - не достоверно (отсутствие статистически значимого различия); п - число наблюдений в группах

экспериментальная и клиническая урология №2 2019 www.ecuro.ru

с плазматической мембраной фагоцита. Принимая во внимание, сказанное ранее о развитии при уролитиазе функциональных нарушений мембран в клетках различного типа (канальцевого эпителия, эритроцитов, лимфоцитов), можно полагать, что подобные мембранные изменения возникают также и в фагоцитах крови.

Анализ полученных данных дает основание утверждать, что активация ПОЛ в плазме у больных МКБ сопровождается усиленной липидной пероксидацией в мембранах других клеток: эпителия почечных канальцев, эритроцитов, лимфоцитов и нейтрофилов крови. На это указывает также положительная корреляция между нарастанием продуктов ПОЛ в плазме крови и накоплением их в эритро-цитарных мембранах, повышением экскреции продуктов липидной пе-роксидации с мочой, а также снижением функциональной активностью стимулированных лейкоцитов.

Таким образом, при МКБ наблюдаются множественные мем-

бранные нарушения, которые можно рассматривать как системную мембранную патологию. Одной из причин этого является системная активация перекисного окисления липидов с вовлечением в процесс, как плазменных липидов, так и мембранных липидов клеток почечного эпителия, эритроцитов и, по-видимому, лейкоцитов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При уролитиазе можно выделить три главных патогенетических звена: активация ПОЛ - мембранные нарушения - нарушения метаболизма. Эти звенья взаимно влияют друг на друга и весьма тесно связаны между собой, поэтому их причинно-следственные отношения нуждаются в отдельном изучении. По-видимому, мембранные перестройки, возникающие в силу ряда причин, в том числе под влиянием перекисного окисления липидов, способны приводить к изменениям обмена веществ, характерным для МКБ.

Можно полагать, что перекис-ное окисление липидов первоначально активируется в почечной паренхиме как местный процесс, локализуясь некоторое время на клеточном или органном уровне. В дальнейшем активная липидная пе-роксидация может приводить к ослаблению антиоксидантной защиты организма в целом, приобретая, таким образом, системный характер. Об этом свидетельствует нарастание содержания продуктов ПОЛ в плазме крови и эритроцитарных мембранах.

Пока не ясно, является ли активация ПОЛ при МКБ первичным звеном в развитии мембранной патологии или представляет собой дополнительный патогенетический фактор, поддерживающий вторичную клеточную альтерацию, воспаление и нарушение почечной функции. Этот вопрос требует дальнейшего изучения. Тем не менее, можно полагать, что в комплексном лечении МКБ определенное внимание должно быть уделено выявлению нарушений антиоксидантной системы и их коррекции. □

Таблица 2. Коэффициенты корреляции параметров микровязкости, полярности микроокружения лимфоцитов крови и метаболических показателей при мочекаменной болезни

Показатель Текучесть всего бислоя Текучесть прибелковой зоны Полярность всего бислоя Полярность прибелкового бислоя Глубина проникновения белков в бислой

Кровь

Глобулины 0,555

Билирубин -0,436

Глюкоза 0,578 -0,489

Осмолярность -0,823

ХС-ЛПВП 0,455

ОЛ -0,511

СМ254 -0,551

МДА/ОЛ -0,332** -0,833

МДА -0,416

Эритроциты крови

Фосфаты -0,572

рН 0,769 -0,747

Оксалаты -0,645

Моча

МДА -0,413*

Примечание: коэффициенты корреляции приведены при р<0,05. Сокращения: ХС-ЛПВП - холестерин липопротеидов высокой плотности; СМ254 - среднемоле-кулярные токсины («средние молекулы») при спектроскопии 254 нм. Остальные сокращения те же, что и в таблице 1. * - Р=0,056; ** - P=0,078

Ключевые слова: мочекаменная болезнь, патогенез, активация перекисного окисления липидов, мембранные нарушения, нарушения метаболизма.

tey words: urolithiasis, pathogenesis, activation of lipid peroxidation, membrane disorders, metabolic disorders. DOI: 10.29188/2222-8543-2019-11-2-87-91

экспериментальная и клиническая урология № 2 201 9 www.ecuro.ru

Резюме:

Изучали зависимость между метаболическими показателями мочи и крови и физико-химическим состоянием клеточных мембран у больных уролитиазом.

Материалы и методы. Обследовано 35 пациентов (19 мужчин и 16 женщин) в возрасте от 23 до 61 лет с диагнозом МКБ. В качестве контрольной группы были исследованы 33 практически здоровых человека. Микровязкость клеточных мембран у больных уролитиазом и здоровых лиц оценивали методом мембранных флюоресцентных зондов с помощью гидрофобного зонда пирена. Определяли уровень первичных (диеновые конъюгаты) и вторичных (малоновый диальдегид) продуктов липидной пероксидации в сыворотке крови и моче.

Результаты. В бесклеточном супернатанте мочи больных МКБ концентрация липидов превышала нормальные значения более чем в 13 раз, увеличиваясь с 7,98±1,18 мг/л до 106,4±34,3 мг/л (р<0,005). Отмечена повышенная экскреция с мочой первичных продуктов липидной пероксидации - диеновых коньюгатов. Содержание вторичных продуктов липидной пероксидации, которое оценивали по концентрации малонового диальдегида, в плазме крови и в эритро-цитарных мембранах у больных МКБ было в 1,6 выше, по сравнению со здоровыми лицами (р<0,05), что указывало на развитие оксидатив-ного стресса при уролитиазе.

Обсуждение. Известно, что усиление интенсивности перекисного окисления липидов в биомембране ведет к повышению ее микровязкости за счет разрывов цепей полиненасыщенных жирных кислот в мембранных фосфолипидах. С помощью флюоресцентного зонда пирена, способного встраиваться в гидрофобную внутреннюю часть ли-пидного бислоя биомембран, показано возрастание микровязкости клеточных мембран лимфоцитов крови пациентов с МКБ, обусловленное, по-видимому, системной активацией процессов ПОЛ. Те же процессы свободнорадикального окисления, очевидно, лежат в основе нарушения функциональной активности лейкоцитов крови, стимулированных контактом с микрокристаллами сернокислого бария. Высота амплитуды вспышки люминесценции, отражающей фагоцитарную активность этих клеток, у больных МКБ была в 3,6 раза ниже, чем у здоровых лиц (р<0,001). Это подтверждает важную роль состояния плазматической мембраны в патогенезе МКБ.

Заключение. Таким образом, при МКБ наблюдаются множественные мембранные нарушения как клеток крови (эритроцитов, лимфоцитов, гранулоцитов), так и клеток канальцевого эпителия почек, что следует рассматривать как проявление системной мембранной патологии, развивающейся у больных на фоне оксидативного стресса. Можно полагать, что системная активация процессов свободно-радикального окисления, сопровождающаяся нарушением функционального состояния клеточных мембран, является одним из важных звеньев патогенеза МКБ

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Summary:

The functional state of cell membranes in patients with urolithiasis

S.A. Golovanov, M.Yu. Prosyannikov, N.V. Anokhin, A.V. Sivkov, O.I. Apolikhin

We studied the association between metabolic parameters of urine and blood in relationship with physical and chemical state of cell membranes in patients with urolithiasis.

Materials and Methods-Thirty five patients (19 men and 16 women) aged between 23 and 61 years with urolithiasis were evaluated. Microviscosity of cell membranes in patients with urolithiasis and healthy subjects was assessed by fluorescent membrane probes using pyrene as a hydrophobic probe. Level of primary (diene conjugates) and secondary (malondialdehyde) products of lipid per oxidation in blood serum and urine was determined.

Results. Acellular urine supernatant in urolithiasis patients had lipid concentration (15,17 ± 4,70 mg per mmol of creatinine) which surpassed normal values (0,89 ± 0,16 mg per mmol of creatinine) 17 times, which reflected the destruction of membranes of renal epithelial cells in urolithiasis. An increased excretion of primary products of lipid peroxidation (diene conjugates) was found. Presence of secondary products of lipid per-oxidation, which was assessed by concentration of malondialdehyde, in blood plasma and erythrocyte membranes in patients with urolithiasis was 1.6 times higher when compared with healthy subjects (p < 0.05), which hinted at oxidative stress in urolithiasis.

Discussion. It is known that intensification of lipid peroxidation in biological membrane leads to an increase in microviscosity due to breaks in chains of polyunsaturated fatty acids in membrane phospholidis. Using pyrene as a fluorescent probe able to introduce itself into hydrophobic inner part of lipid double layer of biomembranes, we demonstrated an increase in microviscosity of cell membranes of blood lymphocytes in patients with urolithiasis which was seemingly related to a systemic activation of lipid peroxidation. The same process of free radical oxidation obviously leads to a decrease in functional activity of white blood cells stimulated by barium sulphate microcrystals. Amplitude of luminescence flash, which reflects the phagocytic activity of these cells, was 3.6 times lower in urolithiasis patients when compared to healthy subjects (p < 0,001). This reflects and important role of state of plasma membranes in pathogenesis of urolithiasis.

Conclusion: Thus, multiple membrane disorders of blood cells (ery-throcytes, lymphocytes, granulocytes) and cells of renal tubular epithelium are observed in urolithiasis, and this may be interpreted as a manifestation of systemic membrane disorder in patients with oxidative stress. It may be suggested, that systemic activation of free radical oxidation, accompanied by an impairment of functional state of cell membranes, is one of the most important components in pathogenesis of urolithiasis.

Authors declare lack of the possible conflicts of interests.

ЛИТЕРАТУРА

1. Taylor ER, Stoller ML. Vascular theory of the formation of Randall plaques. Urolithiasis 2015; 43:41-45. doi: 10.1007/s00240-014-0718-4.

2. Просянников М.Ю., Анохин Н.В., Голованов С.А., Кирпатовский В.И., Сивков А.В., Константинова О.В., Иванов К.В., Аполихин О.И. Мочекаменная болезнь и сердечнососудистые заболевания: только статистическая связь или общность патогенетических механизмов? Экпериментальная и клиническая урология 2018;(3):34-41.

3. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., Франк Г.М. (ред.) Перекисное окисление липидов в биологических мембранах М.: Наука, 1972. 252 с.

4. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопро-теинов. М.: Наука. 1989. 277 с.

5. Boym A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest 1968. 97:7.

6. Boym A. Isolation of mononuclearcells and granulocytes from humanlood. Isolation of monuclear cells by one centrifugation, and of granulocytes by combining centrifugation and sedimentation at 1 g. Scand J Clin Lab Invest 1968:97:77-89.

7. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Пирязев А.П. Стимулированная кристаллами сульфата бария хемилюминесценция лейкоцитов цельной крови. Биофизика 1989;XXXIV(6): 1051-1054.

8. Добрецов Г.Е., Петров В.А., Борщевская Т. А., Деев А.И., Владимиров Ю.А. Влияние перекисного окисления на физическую структуру фосфолипидных мембран. Вопросы медицинской химии. 1977;23(6):818-822.

9. Yanagawa K, Takeda H, Egashira T, Sakai K, Takasaki M, Matsumiya T. Age-related changes in alpha-tocopherol dynamics with relation to lipid hydroperoxide content and fluidity of rat erythrocyte membrane. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 1999;54(9): B379-83

FERENCES (2-4, 7, 8)

2. Prosyannikov M.YU., Anokhin N.V., Golovanov S.A., Kirpatovskiy V.I., Sivkov A.V., Kon-stantinova O.V., Ivanov K.V., Apolikhin O.I. Mochekamennaya bolezn serdechno-sosudistyye zabolevaniya: tol'ko statisticheskaya svyaz' ili obshchnost' patogenet icheskikh mekhanizmov? [Urolithiasis and cardiovascular diseases: only a statistical link or a common pathogenetic mechanism?] Ekperimentalnaya i klinicheskaya urologiya2018;(3):34-41. (In Russian)

3. Vladimirov YU.A., Archakov A.I., Frank G.M.[Editors] Perekisnoye okisleniye lipidov v bi-ologicheskikh membranakh. [Lipid peroxidation in biological membranes]. M.: Nauka, 1972. 252 p. (In Russian)

4. Dobretsov G.Ye.. Fluorestsentnyye zondy v issledovanii kletok, membran i lipoproteinov.

M.: Nauka. 1989. 277 p. (In Russian)

7. Vladimirov YU.A., Sherstnev M.P., Piryazev A.P. Stimulirovannaya kristallami sul'fata bariya khemilyuminestsentsiya leykotsitov tsel'noy krovi. [Stimulated by barium sulfate crystals chemiluminescence of whole blood leukocyte]. Biofizika 1989;XXXIV(6): 1051-1054. (In Russian)

8. Dobretsov G.Ye., Petrov V.A., Borshchevskaya T.A., Deyev A.I., Vladimirov YU.A. Vliyaniye perekisnogo okisleniya na fizicheskuyu strukturu fosfolipidnykh membran. [The effect of peroxidation on the physical structure of phospholipid membranes]. Voprosy meditsinskoy khimii. 1977;23(6):818-82. (In Russian)