CC BY
139
Фуллерены и оксидативный стресс
М.А. Орлова1, Т.П. Трофимова1, А.П. Орлов2, О.А. Шаталов3,
А.А. Свистунов3, Ю.К. Наполов3, В.П. Чехонин2
1Химический факультет, кафедра радиохимии ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова»;
2медико-биологический факультет, кафедра медицинских нанобиотехнологий ГБОУ ВПО «Российский научно-исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва;
3фармацевтический факультет, кафедра фармакологии ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский
университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России
Контакты: Марина Алексеевна Орлова [email protected]
Многие представители обширного семейства водорастворимых аддуктов фуллеренов и наночастиц на их основе привлекают серьезное внимание как противовирусные агенты, противоопухолевые агенты и средства адресной доставки лекарств. Сегодня получено огромное количество таких производных фуллерена С6. Однако для внедрения фуллереновых производных в медицинскую практику необходимо понимание причин и механизмов прямых и отдаленных последствий их эффектов in vivo. В первую очередь это касается их влияния на регуляцию процессов пролиферации, апоптоза и некроза. Огромное значение имеют способ получения, функционализации и морфология фуллереновых наночастиц (их размеры, форма, рельеф поверхности, аффинность к клеточным структурам), т. е. параметры, в зависимости от которых биологические эффекты наночастиц могут меняться от цитопро-текторного до цитотоксического. Одним из основных эффектов фуллеренов на живые системы считается индукция образования активных форм кислорода. В данной лекции содержится анализ современных представлений о влиянии фуллеренов и их производных на образование активных форм кислорода и модуляции процессов пролиферации и апоптоза нормальных и опухолевых клеток.
Ключевые слова: фуллерены, апоптоз, оксидативный стресс
Fullerene and oxidative stress
M.A. Orlova1, T.P. Trofimova1, A.P. Orlov2, O.A. Shatalov3, A.A. Svistunov3, Yu.K. Napolov3, V.P. Chekhonin2
M.V. Lomonosov Moscow State University;
2N.I. Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow;
3I.M. Sechenov Moscow State Medical University
Fullerene derivatives superfamily attracts a serious attention as antiviral and anticancer agents and drug delivery carriers as well. A large number of such fullerene C0 derivatives obtained to date. However, there is an obvious deficit of information about causes and mechanisms of immediately and long-term consequences of their effects in vivo which is a true obstacle on the way leading to their practical medical using. First, this concerns their impact on the proliferation, apoptosis and necrosis regulation. Fullerene nanoparticle functionalization type, their sizes and surface nanopathology are of great importance for further promoting of either cytoprotective or cytotoxic effects. One of the main effects of fullerenes on living systems is the reactive oxygen species (ROS) formation induction. This lecture provides a modern concept analysis regarding fullerenes effects on ROS formation and modulation of proliferation and apoptosis in normal and tumor cells.
Key words: fullerenes, apoptosis, oxidative stress
Одним из основных факторов воздействия внешней среды, влияющих на апоптоз, является оксидативный стресс, выражающийся в образовании активных форм кислорода (АФК), среди которых наибольшее действие производят синглетный кислород, супероксид-анион-радикал, пероксид водорода и гидроксильные радикалы, дополнительно появляющиеся в катализируемых металлами реакциях Фентона и Хабера-Вейса. АФК участвуют в запуске как рецепторного, так и нерецепторного механизмов апоптоза, аутофагии, перекисного окисления липидов и опосредованно влияют на многие сигнальные пути молекулярно-биологических реакций [1,2]. Известно, что основное воздействие наночастиц вообще и фул-лереновых в частности заключается как раз в индук-
ции оксидативного стресса, возникающего при их попадании в организм [3]. Конкретные последствия воздействия наночастиц сильно зависят от их физикохимических свойств: размера, формы, диспергирован-ности в растворителе, растворимости в воде, состава боковых цепей и т. д. Их действие варьирует в широком диапазоне - от токсического до протективного. Концентрационная зависимость является одним из важнейших показателей, определяющих последствия введения фуллеренов.
Благодаря своей уникальной сферической структуре С60 имеет возможность принимать до 6 электронов [4]. Эти электроны быстро двигаются вокруг структуры (фуллереновой сетки) за счет дипольных моментов. Когда С60 находится под воздействием
4 ’201 2
4 ’201 2
света, электрон поднимается на более высокий энергетический уровень, продуцируя возбужденный синглетный С60, который реагирует с молекулой кислорода (О2) с образованием синглетного кислорода (1О2) - кислорода со свободным электроном на внешней орбите. Фуллерены являются чрезвычайно эффективными генераторами синглетного кислорода с квантовым выходом Ю2, близким к единице. Они сильно поглощают свет в ультрафиолетовой и умеренно в видимой области спектра [5], что позволяет использовать их в фотодинамической терапии.
Увеличение количества функциональных групп, добавленных к фуллерену, приводит к снижению квантового выхода синглетного кислорода и АФК-опосредованной цитотоксичности [6]. Токсичность заметно снижена или даже полностью отсутствует и у гидрофильных фуллеренов [7]. Производные фул-лерена способны контролировать как экзогенные, так и эндогенные АФК [8].
Токсичность С60 оценивалась в разных экспериментах на клеточных культурах и экспериментальных животных [9-13]. Практически во всех экспериментах цитотоксического эффекта не было, либо он был минимальным, однако во многих экспериментах отмечалось снижение пролиферативного потенциала клеток.
Чтобы модулировать токсичность наночастиц п-С60 и улучшить возможности их медицинского применения, фуллерены различными способами пытаются сделать либо реально, либо псевдорастворимыми в воде. Этот процесс помимо прочих свойств влияет на способность к агрегации и сильно зависит от типа боковых цепей, при этом образуются морфологически различные структуры: стержни, пузырьки, шарики, мембраны и линейные структуры [14, 15]. Морфология агрегатов производных С60 в основном связана с гидрофобными взаимодействиями и водородными
связями. Различия в сродстве к электрону и физические свойства (степень агрегации) сильно влияют на биологическую и биомедицинскую активность кон-формационных производных фуллеренов [16]. Такие изменения могут способствовать увеличению сродства к радикалам.
Для приготовления растворимых образцов С60 используют различные методы придания фуллерену функции растворимости: гидро- и амфифильности, которые в разной степени влияют на их последующую гено- и цитотоксичность (рис. 1) [5].
1. Химическая модификация фуллеренового каркаса путем присоединения различных гидрофильных функциональных групп (дериватизация или функцио-нализация фуллерена) [17].
2. Включение фуллерена в водорастворимые суп-рамолекулярные структуры с помощью поливинил-пирролидона-РУР [18], каликсаренов или циклодекстринов (СБ) [19-21], когда ядро фуллерена полностью покрыто модификатором и не имеет контакта с водой.
3. Метод обмена растворителей (МОР) [22, 23] использует летучие, смешивающиеся с водой растворители, которые растворяют фуллерен, а после добавления воды испаряются, оставляя суспензию п-С60 [24].
4. Длительное (более 2 недель) перемешивание чистого С60 с водой. Однако при этом могут образовываться крупные агрегаты, а концентрация фуллерена снижается [25].
Ранее считалось, что более сильные растворители способствуют более высокой токсичности. Биологические эффекты С60, суспендированного в растворе, определяли на культурах Е. евН. По этим данным, наиболее безопасным растворителем при необходимости биосовместимости оказался К,К-диметил-формамид, причем растворимость не связана напрямую с цитотоксичностью, зато озонирование п-С60
О О
Рис. 1. Основные способы солюбилизации аддуктов фуллерена С60
явно и значительно увеличивало инактивацию Е. евИ [26, 27].
При изучении противоопухолевого действия п-С60 (МОР в диметилсульфоксиде) в высокой концентрации (1 цг/мл п-С60) на клетках глиомы человека (линия и251) и клетках глиомы крыс (линия С6) наблюдали индукцию оксидативного стресса, приводящего к некрозу с повреждением мембраны, опосредованному внеклеточной сигнал-регулируемой киназой (БЯК), и смерти клеток [28]. Аналогичная картина наблюдалась в клетках саркомы у мышей. При низкой концентрации (0,25 цг/мл п-С60) имела место аутофагия и остановка пролиферации в 02/М-фазе. Концентрационно-зависимым образом С60 влияет и на диффе-ренцировку мышиных эмбриональных стволовых клеток [29].
В определенных условиях нано-С60 способны вызывать лизис эритроцитов человека дозо- и время-зависимым образом, который мог быть остановлен применением К-ацетил-Ь-цистеина (КЛС), что указывает на роль АФК в этом процессе [30].
Введение С60 может изменять токсическое действие других микропримесей. В клетках, культивируемых с добавлением С60 и Лб(Ш), содержание Лб(Ш) было выше (эффект «троянского коня»), так как благодаря фуллерену не происходило повышения клеточной токсичности [31].
Азотсодержащие соединения фуллерена могут обладать сильно различающимися свойствами в зависимости от строения вплоть до значительной токсичности. Присоединение к фуллеренам С60 пиридинов и пиримидинов усиливает их избирательную ней-ротропную активность и в 3-5 раз повышает общую токсичность.
Активно исследуют производные фуллерена, модифицированные различными аминокислотами, а также карбоксифуллерены. Например, цистин-С60 — производное фуллерена [32] — показал высокую эффективность антиоксидантного действия против супероксид-анион- и гидроксильных радикалов, предотвращая Н202-индуцированный апоптоз клеток феохромоцитомы крыс (линия РС12) при концентрации 5 цг/мл. Из-за гидрофобных взаимодействий многие производные (например, аминокислота-С60) самостоятельно собираются в сферические агрегаты, при этом морфология агрегатов существенно влияет как на цитотоксический, так и на цитопротективный эффект этих соединений против Н2О2-индуцированного апоптоза [33].
При рассмотрении разных вариантов модификации С60 остатками гексакарбоновой кислоты (С3 или Б3 конформации) наблюдаются [34] важные различия между липофильными и гидрофильными частицами (С3/Б3—С60). В качестве модельной системы использовали антиоксидантное действие фуллеренов против перекисного окисления липидов и разрушения целостности мембран клеток, вызываемых радикалами,
полученными в реакциях ксантин/ксантин-оксидаза и Фентона. У липофильных производных С60 обнаружен защитный эффект даже больший, чем у природного антиоксиданта — витамина Е. Антиапоптотиче-ские функции таких производных фуллерена могут быть независимыми от их АФК-акцепторной роли. Так, трис-карбокси-С60 является мощным ингибитором апоптоза в человеческих кожных эпителиальных клетках (НЕК), блокируя клеточный цикл в G0/G1-фазе и вызывая клеточное старение. При этом наблюдается снижение уровня экспрессии убиквитин лига-зы HERC5, участвующей во врожденном иммунном ответе на вирусные и бактериальные инфекции. В клетках, обработанных гекса-карбокси-С60 и y-CD-C60 в этих же условиях, никаких изменений в пролиферации не наблюдалось.
Показано, что 10 цмоль/л карбоксифуллеренов уменьшают апоптоз мононуклеаров крови [35], а про-токатеховая кислота-С60 [36] снижает апоптоз клеток феохромоцитомы крыс (линия PC12). Уровень концентрации зависит от химического строения производного, которое определяет его дальнейшую способность к агрегированию и связыванию с различными сайтами биологических компонентов, и от характеристик используемой клеточной линии. Конформа-ционная компонента играет существенную (если не определяющую) роль в этих процессах.
Сравнение антиоксидантных свойств различных производных С60 (PEG (полиэтиленгликоль)-С60, PVP-C60, CD-C60, C60, содержащего ОН-группы и С60-изостеариновая кислота) по отношению к кера-тиноцитам кожи человека выявило мощный антира-дикальный акцепторный потенциал всех этих соединений [37].
Из-за декларируемого многими авторами отсутствия видимой токсичности и уникальных физикохимических свойств особый интерес вызывают фуллеролы. Гидроксилированный водорастворимый C60(C60HyFn) благодаря антиоксидантному действию ингибирует катаболическую стресс-индуцированную продукцию матричных металлопротеиназ ММР-1, ММР-3 и ММР-13, а также апоптоз и преждевременное старение в культурах человеческих хондроцитов. Это позволяет предполагать возможность его использования в качестве защитного агента против остеоартрита [38]. При определенных условиях такие высоко-гидроксилированные фуллерены могут существенно снижать накопление жира и генерацию АФК [39].
Акцепторную активность по отношению к су-пероксидрадикалу в системе ксантин/ксантин-оксидаза проявлял фуллерол С60(ОН)24, не оказывая генотоксических эффектов и демонстрируя цитопро-текторные свойства в широком диапазоне концентраций (11—221 цмоль/л). Однако по другим данным, при исследовании доксорубицин-индуцированной кардиотоксичности этот же фуллерол размером 7 нм при концентрации 1—100 цмоль/мл вызывает морфологи-
4 ’201 2
4 ’201 2
T3SS
С1е®
I-UN
SK-N-MC cells
„ A,
Щ СкС)
Рис. 2. Аденозиновые рецепторы в SK-N-MC линии клеток нейроэпителиомы человека во взаимодействии с аддуктом фуллерена Ст [49]
ческие изменения в клетках сосудов эндотелия, ингибирует их пролиферацию и активирует аутофагию. Это сопровождается накоплением в клетках полиубикви-тированных белков, что активирует аутофагию [40, 41].
Другой гидроксилированный фуллерол C60(OH)22 в диапазоне наномолярных концентраций вызывал ингибирование роста клеток. Эффект зависел от характеристик конкретной клеточной линии, дозы и времени его действия. В то же время C60(OH)22, как и С60(ОН)24, значительно подавлял индуцированную доксорубицином цитотоксичность при любых концентрациях независимо от времени добавления фуллерола. Считается, что эти свойства С60(ОН)22 опосредованы его высокой акцепторной активностью по отношению именно к ОН-радикалам [41]. При концентрациях более 10 цмоль/л фуллеролы в ряде экспериментов проявляли выраженную цитотоксичность [42].
Некоторые водорастворимые фуллерены [43] способны проникать через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) и, противодействуя оксидативному стрессу, влиять на пролиферацию клеток мозга [44]. In vitro было смоделировано взаимодействие наночастиц водорастворимого карбоксифуллерена С60(С(СООН)2)2 с клетками ГЭБ в условиях окислительного стресса, вызван-
ного пероксидом водорода, которое показало, что частицы этого соединения селективно проникают преимущественно в окисленные (а не нормальные) клетки эндотелия микрососудов, сохраняя их целостность за счет подавления Н2О2-индуцированной деполимеризации F-актина [45].
Карбоксифуллерены продемонстрировали in vivo свою эффективность в предотвращении нейродегенерации при амиотрофическом латеральном склерозе [46].
Водорастворимые фуллеролы считаются главным достижением нанотехнологий для нейромедицины [47]. При концентрациях от 10 до 100 цмоль/л они на 10—80 % ингибируют активность глутаматных рецепторов. Однократная обработка клеток нейроэпи-телиомы человека (линия SK-N-MC) нетоксичной концентрацией водорастворимого С60-бис-аддукта (рис. 2) вызывала модуляцию экспрессии аденозино-вых рецепторов с увеличением экспрессии A2A-и А2В-рецепторов мРНК и повышением уровня А1 и А2А белков [48].
Однако нельзя забывать, что наряду с нейропро-текторным возможно и нейротоксическое действие фуллеренов, проявления которого пока изучены далеко недостаточно.
ЛИТЕРАТУРА
1. Orlova MA, Orlov A.P. Role ofzinc in an organism and its influence on processes leading to apoptosis. Br J Med Res 2011;1:239-305.
2. Portt L., Norman G., Clapp C., Greenwood M. Anti-apoptosis and cell survival. Biochim Biophys Acta 2011;1813:238-59.
3. Shvedova A.A., Kagan V.E., Fadeel B. Close encounters of the small kind: adverse effects of man-made materials interfacing with the nano-cosmos of biological systems. Annu Rev Pharmacol Toxicol 2010;50:63-88.
4. Markovic Z., Trajkovic V. Biomedical potential of the reactive oxygen species
generation and quenching by fullerenes (C60). Biomaterials 2008;29:3561-73.
5. Yamakoshi Y., Umezawa N., Ryu A. et al. Active oxygen species generated from photoexcited fullerene (C60) as potential medicines: O2-* versus 'O2. J Am Chem Soc 2003;125:12803-9.
6. Sayes C.M., Gobin A.M., Ausman K.D. et al. Nano- C60 cytotoxicity is due to lipid peroxidation. B60iomaterials 2005;26:7587-95.
7. Scrivens W.A., Tour J.M., Creek K.E., Pirisi L. Synthesis of 14C-labeled C60, its suspension in water, and its uptake by human keratinocytes. J Am Chem Soc 1994;116:4517-8.
8. Maeda R., Noiri E., Isobe H. et al.
A water-soluble fullerene vesicle alleviates angiotensin II-induced oxidative stress in human umbilical venous endothelial cells. Hypertension Res 2008;31:141-51.
9. Kolosnjaj J., Szwarc H., Moussa F. Toxicity studies of fullerenes and derivatives. Adv Exp Med Biol 2007;620:168-80.
10. Jia G., Wang H., Yan L. et al.
Cytotoxicity of carbon nanomaterials: singlewall nanotube, multi-wall nanotube, and fullerene. Environ Sci Technol 2005;39:1378-83.
11. Sayes C.M., Marchione A.A., Reed K.L., Warheit D.B. Comparative pulmonary toxicity assessments of C60 water suspensions in rats: few differences in fullerene toxicity
in vivo in contrast to in vitro profiles.
Nano Lett 2007;7:2399-406.
12. Baker G.L., Gupta A., Clark M.L. et al. Inhalation toxicity and lung toxicokinetics of C60 fullerene nanoparticles and microparticles. Toxicol Sci 2008;101:122-31.
13. Horie M., Nishio K., Kato H. et al. In vitro evaluation of cellular responses induced by stable fullerene C60 medium dispersion.
J Biochem 2010;148:289-98.
14. Zhou S., Burger C., Chu B. et al. Spherical bilayer vesicles of fullerene-based surfactants in water: a laser light scattering study. Science 2001;291:1944-7.
15. Sawamura M., Kawai K., Matsuo Y. et al. Stacking of conical mesogens with a fullerene apex into polar columns in crystals and liquid crystals. Nature 2002;419:702-5.
16. Yin J.J., Lao F., Fu P.P. et al. The scavenging of reactive oxygen species and the potential for cell protection by functionalized fullerene materials. Biomaterials 2009;30:611-21.
17. Husebo L.O., Sitharaman B., Furukawa K. et al. Fullerenols revisited as stable radical anions. J Am Chem Soc 2004;126:12055-64.
18. Yamakoshi Y.N., Yagami T., Sueyoshi S., Miyata N. Acridine adduct of [60]fullerene with enhanced DNA-cleaving activity. J Org Chem 1996;61:7236-7.
19. Makha M., Purich A., Raston C.L., Sobolev A.N. Structural diversity of host-guest and intercalation complexes of fullerene C60. Eur J Inorg Chem 2006;3:507-6017.
20. Deguchi S., Mukai S.A., Tsudome M., Horikoshi K. Facile generation of fullerene nanoparticles by hand-grinding. Adv Mater 2006;18:729-32.
21. Quaranta A., Zhang Y., Filippone S. et al. Photophysical studies of six amphiphilic 2:1 cyclodextrin:[60]fullerene derivatives. Chem Phys 2006;325:397-403.
22. Dhawan A., Taurozzi J.S., Pandey A.K. et al. Stable colloidal dispersions of C60 fullerenes in water: evidence for genotoxicity. Environ Sci Technol 2006;40:7394-401.
23. Deguchi S., Alargova R.G., Tsujii K. Stable dispersions of fullerenes, C60 and C70, in water: preparation and characterization. Langmuir 2001;17:6013-7.
24. Lyon D.Y., Adams L.K., Falkner J.C., Alvarez PJ. Antibacterial activity of fullerene water suspensions: effects of preparation method and particle size. Environ Sci Technol 2006;40:4360-6.
25. Brant J.A., Labille J., Bottero J.Y., Wiesner M.R. Characterizing the impact of preparation method on fullerene cluster structure and chemistry. Langmuir 2006;22:3878-85.
26. Cook S.M., Aker W.G., Rasulev B.F.
et al.Choosing safe dispersing media for С60 fullerenes by using cytotoxicity tests on the bacterium Escherichia coli. J Hazar Mater 2010;176:367-73.
27. Cho M., Fortner J.D., Hughes J.B.,
Kim J.H. Escherichia coli inactivation by
water-soluble, ozonated С derivative:
60
kinetics and mechanisms. Envir Sci Technol 2009;43:7410-5.
28. Каркищенко Н.Н. Нанобезопасность: новые подходы к оценке рисков
и токсичности наноматериалов. Биомедицина 2009;1:5-27.
29. Nishimura T., Kubota R., Tahara M. et al. Biological effects of fullerene С60
in mouse embryonic stem cells. Toxicol Lett 2006;164S:S214.
30. Trpkovic A., Todorovic-Markovic B., Kleut D. et al. Oxidative stress-mediated hemolytic activity of solvent exchange-prepared fullerene (С60) nanoparticles. Nanotechnol 2010;21(37):375102.
31. Costa C.L.A., Chaves I.S., Ventura-Lima J. et al. In vitro evaluation of co-exposure of arsenium and an organic nanomaterial (fullerene, С60) in zebrafish hepatocytes. Comp Biochem Physiol C 2012;155:206-12.
32. Hu Z., Guan W., Wang W. et al.
Protective effects of a novel cystine С60 derivative on hydrogen peroxide-induced apoptosis in rat pheochromocytoma PC12 cells. Chem Biol Interact 2007;167:135-44.
33. Hu Z., Guan W., Wang W. et al. Synthesis of amphiphilic amino acid С60 derivatives and their protective effect on hydrogen peroxide-induced apoptosis in rat pheochromocytoma cells. Carbon 2008;46:99-109.
34. Wang I.C., Tai L.A., Lee D.D. et al.
С„ and water-soluble fullerene derivatives as
60
antioxidants against radical-initiated lipid peroxidation. J Med Chem 1999;42: 4614-20.
35. Monti D., Moretti L., Salvioli S. et al.
С60 carboxyfullerene exerts a protective activity against oxidative stress-induced apoptosis in human peripheral blood mononuclear cells. Biochem Biophys Res Commun 2000;277:711-7.
36. Guan S., Bao Y., Jiang B., An L. Protective effect of protocatechuic acid from Alpinia oxyphyllaon hydrogen peroxide-induced oxidative PC12 cell death.
Eur J Pharmacol 2006;538:73-9.
37. Xiao L., Takada H., Maeda K. et al. Antioxidant effects of water-soluble fullerene derivatives against ultraviolet ray or peroxylipid through their action of scavenging the reactive oxygen species in human skin keratinocytes. Biomed Pharmacotherapy 2005;59:351-8.
38. Alcaraz M.J., Megias J.,
Garcia-Arnandis I. et al. New molecular targets for the treatment of osteoarthritis. Biochem Pharmacol 2010;80:13-21.
39. Bal R., Turk G., Tuzcu M. et al. Protective effects of nanostructures of hydrated C60 fullerene on reproductive function in streptozotocin-diabetic male rats. Toxicology 2011;282:69-81.
40. Mirkov S.M., Djordjevic A.N., Andric N.L. et al. Nitric oxide-scavenging activity of polyhydroxylated fullerenol, C60(OH)24. Nitric Oxide 2004;11:201-7.
41. Bogdanovic G., Koji V., Dordevic A. et al. Modulating activity of fullerol C60(OH)22 on doxorubicin-induced cytotoxicity. Toxicol In Vitro 2004;18: 629-37.
42. Wielgus A.R., Zhao B., Chignell C.F. et al. Phototoxicity and cytotoxicity of fullerol in human retinal pigment epithelial cells. Toxicol Appl Pharmacol 2010; 242:79-90.
43. Cagle D.W., Kennel S.J., Mirzadeh S. et al. In vivo studies of fullerene-based materials using endohedral metallofullerene radiotracers. Proc Natl Acad Sci USA 1999;96:5182-7.
44. Oberdorster E. Manufactured nanomaterials (fullerenes, C60) induce oxidative stress in the brain of juvenile largemouth bass. Environ Health Perspect 2004;112:1058-62.
45. Lao F., Chen L., Li W. et al. Fullerene nanoparticles selectively enter oxidation-damaged cerebral microvessel endothelial cells and inhibit JNK related apoptosis. Acs Nano 2009;3:3358-68.
46. Lin J., Wu C. Surface characterization and platelet adhesion studies on polyurethane surface immobilized with C60. Biomaterials 1999;20:1613-20.
47. Linazasoro G. Potential applications of nanotechnologies to Parkinson’s disease therapy. Parkinson Relat Disor 2008; 14:383-92.
48. Morimoto Y., Hirohashi M., Ogami A. et al. Inflammogenic effect of well-characterized fullerenes in inhalation and intratracheal instillation studies. Part Fibre Toxicol 2010;7:4-22.
49. Lee Y.T., Chiang L.Y., Chen WJ., Hsu H.C. Water-soluble hexasulfobutyl-[60]-fullerene inhibits low-density lipoprotein oxidation in aqueous and lipophilic phases. Proc Soc Exp Biol Med 2000;224:69-75.
4 ’201 2
