CC BY
17
Выводы. Насыщение крови лейкоцитами у телят обеих групп выравнивается только в 3-месячном возрасте, их количество в течение двух месяцев было выше у телят I гр. Лейкограмма новорождённых телят характеризуется высоким содержанием нейтрофилов, причём у животных I гр. диктатура нейтрофилии продолжалась до 3, а во II - до 5 суток. Миелоциты исчезли из крови телят I гр. уже на 6-е, а у их сверстников - на 30-е сутки, юные нейтрофилы у телят I гр. не регистрировались на 30-е сутки, а у животных II гр. их находили и на 3-м месяце жизни. Базофилы в лейкограмме телят I гр. впервые обнаружили на 5-е сутки, у телят-трансплантантов их выявили в крови сразу после рождения. Эозинофилов у телят II гр. по значительному количеству дней наблюдения было больше, чем у животных сравниваемой группы.
Исходя из этого, следует признать, что более полноценное и динамичное созревание клеток белой крови в крови телят I гр. проходило в первые две недели жизни, а у их сверстников из II гр. ещё не завершилось к концу 2-го месяца жизни.
Литература
1. Технология трансплантации эмбрионов в молочном и мясном скотоводстве: методич. рекомендации // Белорусский научно-исследовательский институт животноводства; сост. И.И. Будевич, В.С. Антонюк, Н.Ф. Жук [и др.]. Жодино, 2004. 33 с.
2. Мадисон В.В. Биотехнология приплода // Животноводство России. 2010. № 6. С. 5 - 6.
3. Романов А. А., Руднев А.С., Безин А.Н. Особенности становления иммунной системы телят-трансплантантов мясных пород // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2012. № 5 (91). С. 93 - 95.
4. Жуков А.П., Сеитов М.С., Шарафутдинова Е.Б. Схема клинического исследования животных: методическое пособие. Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2014. 64 с.
5. Петров А.М., Воронин Е.С., Серых М.М. Изучение резистентности телят-трансплантантов и её коррекция: методич. рекомендации. М.: РАСХН, 1995. 78 с.
Формирование колострального иммунитета и становление неспецифической резистентности у новорождённых телят-трансплантантов под действием иммунотропных препаратов микробного происхождения*
В.И. Сорокин, к.б.н., А.П. Жуков, д.в.н., профессор, Е.Б. Шарафутдинова, к.б.н., М.А. Пойманов, аспирант, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ
Если при искусственном осеменении используется потенциал производителей - их сперма, то при трансплантации эмбрионов используется потенциал самок - их яйцеклетка, которая оплодотворяется, превращаясь в процессе дробления в эмбрион [1].При трансплантации эмбрион, полученный от донора, является для реципиента аллотрансплантантом и действует так же как антиген, но при этом вызывает более сильный иммунный ответ, чем оплодотворённая клетка собственного организма, в результате чего эмбрион должен бы отторгаться. Тем не менее он не отторгается, так как в организме реципиента образуются иммуносупрессорные факторы, которые и оберегают эмбрион [2, 3].
Техника трансплантации эмбрионов в настоящее время достаточно широко разработана и предстоит лишь её совершенствовать, но до сих пор управлению и коррекции иммунного статуса новорождённых телят-транстплантантов уделяется мало внимания [4].
Целью настоящего исследования явилось изучение влияния иммунотропных препаратов
природного происхождения - споронормина жидкого и споропротектина на иммунобиологическое состояние коров-реципиентов в третьем триместре стельности и телят, полученных от них.
Материал и методы исследования. Исследование проведено в условиях НПО «Южный Урал» Саракташского района, где были подобраны две группы стельных коров-реципиентов симментальской породы, которым были трансплантированы эмбрионы от коров герефордской породы.
Коровам-реципиентам за 30 дней до отёла вводили интраперитонеально по 5 мл споро-протектина и в течение недели с концентратами задавали споронормин из расчёта 0,5 мл на 1 кг живой массы. Коровы контрольной группы препараты не получали.
В качестве средств коррекции были использованы препараты А.В. Воробьева [5]: перо-рально - споронормин жидкий, состоящий из Bacillus subtilis, штамма ВКПМ - 2335, Bacillus Licheniformis штамма ВКПМ - 2336 и Lactoba-cillus acidophilus. В 1 мл препарата содержится 1...2*109/л представителей рода Bacillus и не менее 2...5*109 представителей родов Lactobacillus. Интраперитонеально вводили споропротектин, состоящий из полного бактериального комплекса непатогенных бактерий Bacillus subtilis, штамм
* Статья подготовлена при грантовой поддержке правительства Оренбургской области.
ВКПМ - 2335, Bacillus Licheniformis штамм ВКПМ - 2336.
В течение опыта постоянно велись наблюдения за состоянием здоровья и выраженностью аппетита у животных. Полученных от коров-реципиентов телят разделили на две группы по 10 гол. в каждой. Опытная группа состояла из телят, полученных от коров, которых обрабатывали препаратами.
Кровь от телят-трансплантантов получали в утренние часы до кормления по схеме: 1-е сутки - до кормления молозивом, а также на 5-, 30- и 60-е сутки.
При проведении работы использовались клинико-физиологические методы, гематологические с исследованием на автоматическом геманализаторе ВС-2800уе^ биохимические - с использованием диагностических наборов ЗАО «ЭКОлаб» и автоматического биохимического анализатора BS-380, иммунологических - по содержащимся в ГОСТах методикам в условиях комплексной межкафедральной аналитической лаборатории университета.
Цифровой материал экспериментальных данных обработан методом вариационной статистики с применением программного комплекса Microsoft Excel 7.0.
Результаты исследования. Клинический статус новорождённых телят-трансплантантов характеризовался параметрами и тестами, свойственными для животных этой породы (табл. 1). Так, при рождении температура тела молодняка была близкой к 39,4°С, пульс - 141,6±6,83 - 146,2±6,19 ударов в минуту и 50,1±6,96 - 50,7±6,44 дыхательных движений в минуту. Телята опытной группы попытку подъёма на конечности и стояния в течение 45 - 78 сек. осуществляли на 67,8±4,3 8-й мин., а их сверстники из контрольной группы -на 68,9±3,69-й мин. Масса тела телят при рождении была сравнима и равнялась 32,3±1,83 кг. Сосательный рефлекс появлялся на 72,4±4,78-й и 74,3±4,84-й мин. соответственно у телят опытной и контрольной группы, сила и частота сосательных движений различались незначительно.
Среднесуточный прирост массы тела после 1-го месяца жизни у телят опытной группы был равен 353,4±27,86 г, в контрольной - 318,2±18,43 г. На 5-е сутки жизни у телят регистрировали уменьшение массы тела на 1,5 - 2,0 кг, что было связанно с реализацией процесса адаптации и преобладания процессов энергетического обеспечения над пластическими. Начиная с месячного возраста, у телят обеих групп прослеживалась тенденция к более интенсивному набору массы тела. Более энергично этот процесс проходил в опытной группе, и уже к 2-месячному возрасту молодняк опытной группы превосходил контрольных сверстников на 7,5±1,85 кг (Р<0,05).
Гуморальные факторы неспецифической резистентности представлены разнообразными белками и пептидами, содержащимися в крови и других жидкостях организма. Обладая антимикробными свойствами, они способны активировать друг друга, а также стимулировать фагоцитарные клетки. Основным из них является бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК), считающаяся финальным отображением противомикробных процессов, вызванных комплексом гуморальных факторов естественной защиты [6].
Определено, что после выпойки молозива процент бактерицидности повышался в сыворотки крови телят-трансплантантов обеих групп на 9 - 12 % вне зависимости от стартовых возможностей. Наиболее существенно инициирует ЛАСК выпойка молозива. Так, у телят контрольной группы она увеличилась от 2,74±0,32 % до 23,96±2,78 %, а у сверстников опытной группы -более чем в 9 раз (табл. 2). Комплементарная активность также возрастала у всех наблюдаемых животных в первые 5 сут. жизни на 40 - 50 ед/л. Характеризуя динамику гуморальных факторов в первые два месяца жизни, следует признать, что наиболее значимые изменения произошли в крови телят-трансплантантов после выпойки молозива.
Клеточные и гуморальные факторы естественной резистентности имеются уже при
1. Клинико-статистические и гравиметрические показатели у новорождённых
телят-трансплантантов (X±Sx)
Показатель Опытная Контрольная
Количество животных, гол. 10 10
Масса тела при рождении, кг 32,3±1,83 32,2±1,96
Уверенное состояние на ногах, мин. 67,8±4,38 68,9±3,69
Появление сосательного рефлекса, мин. 72,4±4,78 74,3±4,84
Частота сосательных движений в мин. 53,4±4,81 50,2±4,34
Вакуум сосания, кг/см2 0,46±0,09 0,39±0,09
Температура тела, °С 39,43±0,67 39,37±0,61
Число сердечных сокращений, уд/мин 141,6±6,83 146,2±6,19
Частота дыхания, дыхательных движ/мин 50,1±6,96 50,7±6,44
Среднесуточный прирост массы тела в 1-й месяц жизни, г 353,4±27,86 318,2±18,43
рождении телят, однако эта система остаётся толерантной и будет функционировать, если не произойдет её активация биологически активными веществами молозива. Особенно мощной является самая древняя в филогенетическом плане форма защиты - система фагоцитоза. Замечено, что количество фагоцитов у новорождённых на единицу массы тела значительно больше, чем у взрослых животных [7]. Но при этом следует учитывать, что среднее число фагоцитированных микробов на один активный фагоцит с возрастом животных увеличивается, особенно это выражено у 2-месячных телят, достигая двукратного перевеса по сравнению с новорождёнными (табл. 2).
Фагоцитарная ёмкость, фагоцитарное число и показатель фагоцитарной активности нейтрофи-лов в проведённом опыте были заметно выше у телят опытной группы. Клеточные факторы естественной резистентности существенные изменения претерпели в 2-месячном возрасте, когда экспоненты первого месяца жизни телят практически удвоились (табл. 2).
Лимфоциты являются продуцентами лейки-нов, некоторых фракций комплемента лизоцима
и интерферона. Кроме того, они участвуют в выработке антител, способствуют реализации иммунного ответа, играют видную роль в гуморальных опосредованных антителами иммунных реакциях, занимают одну из более активных позиций в системе гуморально-клеточной кооперации крови и соединительной ткани [8].
Установлено, что содержание лимфоцитов в крови телят обеих групп при рождении находилось в интервале от 3,48±0,29 до 3,65±0,39* 109/л (Р<0,05), и в течение первого месяца жизни эти показатели существенно не отличались. К 2-месячному возрасту насыщение лимфоцитами крови телят опытной группы превышало аналогичный показатель у контрольных сверстников на 20 % (табл. 3). Содержание Т- и В-лимфоцитов в крови телят опытной группы на всех этапах наблюдения превышало результаты в контрольной группе на 3 - 8 %. За первый месяц жизни насыщение крови Т-лимфоцитами увеличилось у особей контрольной группы всего лишь на 4 %, а опытной - на 2 %, тогда как содержание В-лимфоцитов за этот же период у молодняка обеих групп повысилось на 12 % (табл. 3).
2. Динамика показателей неспецифической резистентности телят-трансплантантов (Х±Бх)
Показатель Группа Возраст, сут.
1 5 30 60
БАСК, % контроль опытная 20,49±1,12 23,44±3,18 28,24±1,16 33,86±2,87 33,49±2,08 39,98±2,38 39,76±3,43 43,56±3,74
ЛАСК, % контроль опытная 2,74±0,32 3,18±0,26 23,96±2,78 28,49±2,68 21,53±2,94 25,83±3,16 29,75±3,17 34,95±3,68
Комплемент, ед/л контроль опытная 147,8±9,11 153,2±10,26 177,5±12,17 192,9±11,69 219,6±13,68 238,6±12,06 208,1±12,83 214,9±12,63
ФАНК, % контроль опытная 29,29±1,78 33,07±2,79 27,33±2,09 30,4±1,96 34,58±2,24 35,02±2,29 50,27±0,72 58,83±3,14
Фагоцитарное цисло контроль опытная 1,88±0,09 2,36±0,09 1,63±0,06 1,98±0,08 2,29±0,12 2,85±0,11 4,89±0,72 5,63±0,79
Фагоцитарная ёмкость, микроб. тел х109/л контроль опытная 5,24±0,74 6,18±0,89 4,81±0,63 5,38±0,72 5,26±0,74 6,95±0,83 10,79±0,98 12,53±1,13
Показатель Группа Возраст, сут.
1 5 30 60
Лимфоциты, х109/л контрольная опытная 3,48±0,29 3,65±0,39 3,98±0,6 4,09±0,41 4,13±0,39 4,49±0,62 4,04±0,38 4,91±0,54
Т-лимфоциты, х109/л контрольная опытная 0,76±0,08 0,89±0,06 0,86±0,09 0,98±0,07 0,85±0,11 0,91±0,06 0,91±0,19 1,04±0,09
В-лимфоциты, х109/л контрольная опытная 0,17±0,01 0,24±0,02 0,29±0,02 0,38±0,04 0,38±0,03 0,48±0,04 0,43±0,04 0,52±0,05
Общий белок, г/л контрольная опытная 39,53±2,31 44,62±2,59 47,93±2,49 52,63±3,09 50,86±2,73 56,89±3,53 57,81±2,97 62,83±4,08
^О, г/л контрольная опытная 0,23±0,06 0,29±0,07 9,61±0,98 10,96±1,19 9,36±1,29 10,99±1,19 10,77±1,26 12,84±1,26
^М, г/л контрольная опытная 0,41±0,08 0,49±0,07 1,23±0,24 1,34±0,23 1,37±0,31 1,59±0,21 1,48±0,39 1,68±0,24
3. Динамика показателей специфического иммунитета у телят-трансплантантов (Х±Бх)
Белки сыворотки крови играют ведущую роль в обменных процессах в организме животных и функционально связаны с развитием у них основных хозяйственно ценных признаков. По насыщенности крови общим белком суточные телята-трансплантанты контрольной группы уступали своим сверстникам из опытной группы на 4 -9 г/л, и на последующих этапах наблюдения данное неравенство сохранялось. Выпойка молозива существенно стимулировала белко-восинтезирующую функцию печени, повышая концентрацию белка на 9 -12 г/л (табл. 3).
Наблюдения показали, что первые 5 - 6 сут. приёма молозива существенно изменили насыщение крови иммуноглобулинами. Так, ^О в сыворотке крови телят контрольной группы увеличился на 5-е сут. в 42 раза, опытной - в 38 раз. В последующие возрастные периоды их концентрация нарастала. Иммунодефицит у новорождённых телят можно было бы отнести к врождённому, но он не является следствием генетических дефектов эмбрионального развития, характерных для различных врождённых иммунодефицитов. У них относительно развита Т-система лимфоцитов, следовательно, и синтез антител практически не происходит вследствие отсутствия в эмбриональный период антигенной стимуляции. Исходя из этого, концентрация ^М в сыворотке крови после выпойки молозива увеличилась у телят обеих групп в 3 раза, все последующие этапы наблюдения свидетельствовали о статистически недостоверных изменениях данного признака (табл. 3).
Особое внимание заслуживает возможность выработки антител к вариабельным участкам иммуноглобулинов. Выработка антител может подавить иммунный ответ на соответствующий антиген. Вот почему важно своевременно выявлять уровень аутоиммунизации, особенно у животных с генетической дискриминацией.
Уровень циркулирующих антител к лизату собственных эритроцитов в крови телят свидетельствует о том, что к аутоагрессии и развитию патологии на этой основе были более предрасположены животные контрольной группы, поскольку во все возрастные периоды у них выше балл реакции Уанье. Следует отметить, что присутствие противоорганных антител является нормальным
физиологическим состоянием, поскольку жизнедеятельность организма всегда сопровождается накоплением в нём продуктов метаболизма, которые, обладая антигенными свойствами, обеспечивают свою элиминацию. Поэтому несколько выраженную реакцию Уанье нужно отнести к физиологической системе аутоиммунитета, а не к искажению гомеостаза (табл. 4).
Аутоантителообразующие клетки (АОК) обнаруживаются у здоровых животных в пределах 0,5 - 3,0 % в органах, которые являются наиболее иммунокомпетентными, т.е. с непрерывным обменом веществ. По данным таблицы 4 следует, что содержание клеток-антителопродуцентов находится в зависимости от возраста. Выпойка молозива стимулировала активность антите-лообразования в организме телят обеих групп в 2 - 3 раза, чем и объясняется особое внимание практикующих ветеринарных специалистов на животных в этот период онтогенеза. Динамика содержания АОК соответствовала динамике анти-телообразования на всех этапах наблюдения за телятами (табл. 4).
В здоровом организме уровень циркулирующих в крови иммунных комплексов (ЦИК) незначителен. Их определение важно для характеристики тех или иных систем при комплексной оценке резистентности. Формирование ЦИК - обязательный компонент нормального иммунного ответа, так как они представляют собой физиологический продукт реакции «антиген - антитело». Но при определённых условиях наблюдают переход нормальной функции этих комплексов в патологическую. Анализ данных таблицы 4 свидетельствует о комфортном прохождении взаимодействия антигена и антитела, с указанием признаков явного угнетения анти-телообразования, поэтому концентрация ЦИК изменялась однонаправленно и литически.
По результатам исследования можно сделать вывод, что иммунный дефицит у новорождённых телят-трансплантантов возникает вследствие незрелости иммунокомпетентных органов, которые необходимо активизировать на заключительных этапах внутриутробного развития. Применение иммунотропных препаратов микробного происхождения позволяет оживить иммуногенез уже к первому месяцу жизни телёнка. В 2-месячном
4. Динамика аутоиммунных процессов в организме телят-трансплантантов (Х±Бх)
Показатель Группа Возраст, сут.
1 5 30 60
Реакция Уанье, балл контрольная опытная 0,12±0,01 0,09±0,01 0,16±0,03 0,12±0,01 0,28±0,07 0,21±0,04 0,56±0,19 0,45±0,11
Уровень АОК, % контрольная опытная 1,96±0,26 1,05±0,26 4,61±0,38 3,67±0,41 5,56±0,62 4,11±0,33 6,98±0,54 5,63±0,62
Концентрация ЦИК, г/л контрольная опытная 0,22±0,06 0,13±0,03 0,77±0,11 0,48±0,09 1,12±0,13 0,81±0,11 0,49±0,18 0,98±0,13
возрасте иммунный статус телят-трансплантантов опытной группы имеет заметное преимущество как в гуморальной линии защиты, так и в клеточной.
Литература
1. Петров А.М. Интенсивность иммунных реакций у телят-трансплантантов // Ветеринария. 1995. № 10. С. 22 - 24.
2. Петров А.М. Иммунологическая реактивность телят-трансплантантов и её коррекция // Сельскохозяйственная биология. 1995. № 4. С. 37 - 41.
3. Мадисон В.В. Чем полезна трансплантация эмбрионов для специалистов-практиков // Биотехнология и воспроизводство: матер. 2-й межгосударств. науч.-практич. конф. Брест, 1995. С. 68 - 69.
4. Романов А. А., Руднев А.С., Безин А.Н. Особенности становления иммунной системы телят-трансплантантов мясных пород // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2012. № 5 (91). С. 93 - 95.
5. Воробьев А.В., Седова О.Н. Иммунотропная профилактика послеродовых эндометритов коров // Вестник ветеринарии. 2011. № 53 (4). С. 126 - 127.
6. Гугушвили Н.Н., Доми И.А. Применение препаратов для повышения резистентности телят // Труды Кубанского государственного аграрного университета. 2007. № 2. С. 121 - 129.
7. Воробьев А.В., Садов К.М. Иммунотропная терапия в профилактике мастита коров: влияние на продуктивность и качество молока // Ветеринарный врач. 2012. № 6. С. 44- 46.
8. Никитин А.О., Никитина З., Васильев И. О применении иммунобиотехнологической технологии в воспроизводстве // Молочное и мясное скотоводство. 2000. № 3. С. 28 - 30.
