CC BY
14
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 32, 2016 | БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ_5
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
ФЛУКТУАЦИИ БЕЛКОВ СВЕРТЫВАЮЩЕЙ СИСТЕМЫ ПЛАЗМЫ КРОВИ _ПРИ РАЗБАВЛЕНИИ ВОДОЙ И ФИЗРАСТВОРОМ_
Ложкина Анна Николаевна
Канд.биол.наук, ст.науч.сотр., Читинская государственная медицинская академия, г. Чита
АННОТАЦИЯ
Исследовали флуктуации коагуляционной активности плазмы крови. Замеряли время свертывания (рекальцификации) цитратной плазмы доноров без разведения физраствором или дистиллированной водой (i), после разведения в 2 (ii) и 4 (iii) раза. Измерения повторялись 20-100 раз. Флуктуации времени свертывания плазмы крови после разбавления дистиллированной водой резко снижались; после разведения физраствором данные неоднозначны. Требуются дополнительные эксперименты.
ABSTRACT
We investigated the fluctuations of the coagulation activity of blood plasma. Measured clotting time (recalcification) citrated plasma donors without dilution with saline or distilled water (i), after dilution in 2 (ii) and 4 (iii) times. The measurements were repeated 20-100 times. Fluctuations in the clotting time of blood plasma after dilution with distilled water acutely decreased; after dilution with saline mixed data. Furtherexperimentsare-required.
Ключевые слова: флуктуации, белки, вариативность, свертывающая система крови, система комплемента
Keywords: fluctuations in proteins, variability, the blood coagulation syst em, complement system
Флуктуации активности ферментов, конфор-маций белковых молекул связаны с разными факторами, в том числе состоянием растворителя - воды [2], физраствора и др. В данной работе исследовали флуктуации времени свертывания плазмы крови.
Методика. Кровь забирали из вены в пробирки с цитратом натрия (на станции переливания крови) от лиц 18-35 лет. Получали центрифугированием обедненную тромбоцитами плазму. К 0,1 мл плазмы добавляли 0,2 мл хлористого кальция и измеряли время появления сгустка («время рекальцификации»).
Результаты. При разбавлении плазмы крови в 2 раза физраствором показатели времени свертывания (количество повторных замеров /п/ от 40 до 143) приобретают тенденцию к стабилизации (среднеквадратическое отклонение /5/снижается с 13,9±4,7 до 9,0±1,1%; Р<0,1). (Таблица1) В одной из
серий (п=143) до разбавления показатели свертывания варьировали со среднеквадратическим отклонением 21%; в той же плазме, разбавленной в 2 и 4 раза дистиллированной водой коэффициент вариативности снизился с 21% до 5% и 3%, соответственно. (Рис. 1) Тот же образец плазмы (не разбавленный водой), сохраненный трое суток, утратил флуктуационную активность. (Рис. 1)
[В данном аспекте интересно решение параллельной проблемы. При оценке титра антител к лекарственным препаратам методом реакции связывания комплемента использовали свежую сыворотку человека. Получаемые результаты постоянно варьировали в одной и той же пробе крови больного; не удавалось определить истинный титр антител. Исходя из опыта работы выход был найден быстро - пробы (после внесения сыворотки крови в буфер) начали оставлять на ночь и лишь затем продолжали методику замера. Флуктуации прекратились. [1,3] ]
Таблица 1
Изменение коэффициента вариации времени свертывания (рекальцификации; в секундах) после __разбавления плазмы__
Серии опытов (количество экспериментов) Неразбавле! плазма (конт] ная роль) Разбавленная в 2 раза Разбавленная в 4 раза
n 5% M±m, сек. n 5% M±m, сек. n 5% M±m, сек.
1 20 5 180±2 20 3* 170±1
2 30 6 183±2 37 3* 171±1
3 21 15 372±12 21 9* 424±8 20 8* 560±10
4 (см. рис. 1) 71 21 209±10 37 5* 183±2 37 3* 171±1
5 21 7 131±2 21 7 123±2 20 10 152±3
6 22 6 147±2 21 8 142±3 21 8 159±3
7 20 8 175±3 19 10 172±4 17 18* 192±8
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) #32, 2016
8 20 9 198±4 21 14 257±8 20 14 357±11
9 20 11 164±4 20 10 153±3 15 22* 185±10
Итого для 7 сер] М ср. Р й 13,9±4,7 160 9,0±1,1 <0,1 11,8±2,5 >0,5
Итого для 9 сери М ср. Р й 12,0±3,7 - 9,9±2,3 >0,5
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НА УКИ
6
Примечание: * - Р<0,025 по критерию Фишера. п - Количество замеров всемени выпадения сгустка. [Плазму 20150 раз забрали в отдельную пробирку по 0,1 млиз общей емкости, добавляли 0,2 млраствора хлорида кальция (для восстановления содержания ионов кальция, без которых свертывание не происходит), что запускало каскад свертывающей системы.]
Рис.1. Флуктуации времени свертывания плазмы крови в секундах. Точками снизу вверх обозначены последовательно получаемые инварианты замеров. Нижние графики - суммарное распределение инвариант. При разбавлении плазмы в 2 и 4 раза остался ведущий (наиболее вероятностный) пик значений (в диапазоне 170-190 секунд).
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 32, 2016 | БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
Методической ошибкой (мерой неаккуратности) проводимых исследований (по определению времени рекальцификации) можно считать минимальный разброс, соответствующий среднеквадра-тическому отклонению в 3%. То есть флуктуации не случайны.
Таким образом, разбавление плазмы может привести как к снижению (серии 1-4), так и увеличению (в сериях 7 и 9 таблицы) разброса флуктуа-ций. Торможение во времени свертывания плазмы после ее разбавления (в сериях 3 и 8), возможно, связано со снижением концентрации факторов коа-гуляционного гемостаза (низким содержанием белков у данных доноров). На таких пробах крови, предположительно, можно изучать гетерогенные структуры (трубчатые, сферические, плоскостные) в аспекте структуризации жидкости [данный методический подход сложен, но реален]. Сокращение времени свертывания (в сериях 1, 2, 4) после разбавления указывает, вероятнее, на постепенную активацию факторов контактными поверхностями в процессе эксперимента.
[20-летняя работа с кровью показала, что с годами найти донора с хорошим разбросом данных все труднее. Для этого нам приходилось просить
7
сдать кровь студента местной национальности, здорового, молодого по возрасту. (Грубо выражаясь, природа постепенно умирает; разбросов все меньше. Если раньше на реках весной лед трескался и шел ледокол, то сейчас постепенно тает без синхронизации процесса.) То есть исчезает коопе-ративность (quorum sensing /чувство локтя/) - согласованность в работе флуктуирующих молекул. Если каждая молекула флуктуирует сама по себе, то в итоге должны получаться среднестатистические -одни и те же значения.]
Список литературы:
1. Говорин Н.В., Ложкина А.Н. Антитела к нейролептическим препаратам и их место в механизмах терапевтической резистентности при параноидной шизофрении / / Ж. невропатол. и психиатрии им. Корсакова. - 1991. - N 7. - С. 117-121.
2. Захаров С. Д., Зюзин М. В., Мосягина И. В. Вода: микроструктура и флуктуации // http://www.biophYS.ru/archive/h2o-00027.pdf
3. Ложкина А.Н., Говорин Н.В. Определение антител к нейролептическим
препаратам реакцией поглощения комплемента в сыворотке крови больных шизофренией // Лабораторное дело. - 1991. - № 10. - C. 78.
