CC BY
100
УДК: 615.074
ФЛАВОНОИДЫ FAGOPVRUM SAGITTATUM GILIB
Национальный фармацевтический университет, г. Харьков
А. Ю. ВЛАДИМИРОВ С. В. ГАРНАЯ
Изучено количественное содержание флавоноидов в семи сериях травы гречихи обыкновенной, произрастающей на территории Украины. Установлено, что содержание флавоноидов в пересчете на рутин составило в пределах 4,9-5,6 Данная экспериментальная работа является фрагментом исследования по разработке отечественной нормативной документации на траву гречихи обыкновенной.
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: высокоэффективная жидкостная хроматография, гречиха обыкновенная, флавоноиды.
Введение. Гречиха обыкновенная (Fagopyrum sagittatum Gilib.) - важнейшая крупяная культура, относящаяся к однолетним растениям, семейства гречишных. Для медицинских целей у гречихи заготовляют верхушки цветущих растений, а семена используют для пищевых целей. В цветущих верхушках содержатся рутин, галловая, хлорогеновая, протокатеховая, кофейная и аскорбиновая кислоты, каротин. Из цветков выделен фагопирин. Семена богаты крахмалом (до 67 %), содержат жирное масло, лимонную и яблочную кислоты, соли железа, кальция, фосфора, витамины В1 и В2, легко усвояемый организмом белок, в составе которого много незаменимых аминокислот, в том числе 7,9 % лизина, 12,7 % аргинина и др. [1, 2].
Гречиха посевная и препараты на ее основе применяются в медицинской практике в качестве препаратов, обладающих капилляропротекторным действием. Основными действующими веществами гречихи, обусловливающие данные вид фармакологической активности, являются вещества флавоноидной природы, в частности, рутин, относящийся к группе витамина Р. Эта группа витаминов способствует уменьшению хрупкости и проницаемости капилляров [3, 4].
Трава гречихи применяется при тех же показаниях, что и витамин Р: для лечения гипо-и авитаминозов, для лечения и профилактики кровоизлияния в мозг, сердце, сетчатку глаз, при cклонности к кровоизлияниям в кожу и слизистые оболочки (геморрагические диатезы) гипертонической болезни (совместно с препаратами, снижающими кровяное давление), для лечения ревматизма, скарлатины, кори, сыпного тифа, а также для профилактики и лечения поражений сосудов, вызванных применением антикоагулянтов (дикумарина), салицилатов, мышьяковистых соединений, рентгено- и радиотерапии, лучевой болезни [5, 6].
Следует отметить, что одним из важнейших аспектов в сфере применения лекарственного растительного сырья является использование стандартизованного растительного сырья. В Украине отсутствует национальная нормативная документация на траву гречихи. Качество травы гречихи обыкновенной, используемой в фармацевтической промышленности, должно соответствовать требованиям Европейской фармакопеи (ЕФ) монографии «Buckwheat herb» [7].
Цель. Исходя из вышеизложенного, с целью определения соответствия исследуемого сырья требованиям действующей нормативной документации монографии ЕФ «Buckwheat herb» [7] и последующей разработкой монографии в Государственную фармакопею Украины (ГФУ) было проведено количественное определение флавоноидов травы гречихи обыкновенной.
Материалы и методы. Для исследования была использована сухая трава, заготовленная в августе - начале сентября 2009-2010 гг. в период цветения в разных регионах Украины (Харьковской, Донецкой и Полтавской областях). Сушка травы осуществлялась воздушным способом в тени до остаточной влажности не более 10 %. Идентификацию вида проводили по гербарным образцам, хранящимся на кафедре ботаники Национального фармацевтического университета.
Изучение количественного содержания флавоноидов проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) по методике, приведенной ниже.
Испытуемый раствор. К 0,500 г измельченного в порошок сырья (355) (2.9.12) добавляли 30 мл метанола (80% об/об) Р. Смесь нагревали на водяной бане с обратным холодильником при температуре 60°С в течение 30 мин, затем экстрагировали на ультразвуковой бане в течение 15 мин. Охлаждали, доводили объем раствора до 50,0 мл метанолом (80% об/об) Р и фильтровали. Раствор сравнения (а). 25.0 мг ФСО ГФУ рутина тригидрата растворяли в метаноле (80% об/об) Р и доводили объем раствора до 50.0 мл тем же растворителем. Раствор сравнения (б). 20.0 мг троксерутина Р и 5.0 мг кверцетрина Р растворяли в метаноле (80% об/об) Р и доводили объем раствора до 50.0 мл тем же растворителем.
Колонка: размер: 0.125 м х 4.0 мм; неподвижная фаза: силикагель октадецилсилильный для хроматографии Р (5 мкм); температура: 30 С. Подвижная фаза:
- подвижная фаза А: смешивали 50 частей ацетонитрила Р и 950 частей воды, доведенной до рН 2 фосфорной кислотой Р;
- подвижная фаза Б: смешивали 95 частей воды, доведенной до рН 2 фосфорной кислотой Г, и 905 частей ацетонитрила Р.
Время (мин) Подвижная фаза А (об/об) Подвижная фаза В (об/об)
0 - 6 94 6
6 - 16.5 94 ^ 85 6 ^ 15
I6.5 - 22 85 ^ 76 15 ^ 24
22 - 25 76 ^ 59 24 ^ 41
25 - 27 59 ^ 94 41 ^ 6
Скорость подвижной фазы: 1.0 мл/мин.
Детектирование: спектрофотометрически при длине волны 350 нм. Объем вводимой пробы: 10 мкл.
Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (б):
- порядок выхода пиков: при хроматографировании при указанных условиях порядок выхода пиков должен соответствовать порядку указания веществ в составе раствора сравнения (б);
- коэффициент разделения: не менее 3 для пиков троксерутина и кверцетрина.
Используя время удерживания на хроматограмме раствора сравнения (а), определяли расположение рутина на хроматограмме испытуемого раствора. Содержание рутина в процентах, вычисляли по формуле:
Л, х m х Р 100 —--—— х-
Л2 х m 100 - d
где:
A1 - площадь пика рутина на хроматограмме испытуемого раствора;
A2 - площадь пика рутина тригидрата на хроматограмме раствора сравнения;
m1 - масса навески сырья, в граммах;
m2 - масса навески ФСО ГФУ рутина тригидрата, в граммах; p - содержание рутина в ФСО ГФУ рутина тригидрата, в процентах; d - потеря в массе при высушивании, в процентах.
Содержание рутина, установленное данным методом должно составлять не менее 4 % в пересчете на абсолютно сухое сырье.
Результаты и обсуждение. Результаты экспериментального определения количественного содержания флавоноидов (с учетом показателя сырья «потеря в массе при высушивании») для семи серий травы гречихи обыкновенной представлены в таблице.
Из приведенных данных в табл. 1 видно, что все образцы травы гречихи обыкновенной соответствовали требованиям, регламентированным монографией ЕФ «Buckwheat herb» в разделе «Количественное определение», содержание флавоноидов в пересчете на рутин составляло от 4,9% до 5,6% в разных сериях сырья.
Таблица
Содержание флавоноидов в траве Fagoруrum sagittatum Gilib
Образец Потеря в массе при высушивании, % Содержание рутина, %
№ 1 7,87±0,45 5,1±0,11
№ 2 7,04±0,39 5,3±0,12
№ 3 6,97±0,34 4,9±0,11
№ 4 8,12±0,29 5,5±0,10
№ 5 8,45±0,41 5,2±0,12
№ 6 7,75±0,38 4,9±0,11
№ 7 6,67±0,40 5,6±0,12
Нормирование ЕФ монография «Buckwheat herb» не более 10 % не менее 4 %
Выводы. Данное экспериментальное исследование является фрагментом работы, посвященной разработке национальной монографии на траву гречихи обыкновенной. Полученные результаты эксперимента свидетельствовали о возможности введения показателя «Количественное определение», нормированного требованиями монографии ЕФ «Buckwheat herb», без внесения национальных изменений в проект монографии ГФУ «Гречихи обыкновенной трава».
Литература
1. Анисимова М.М. Качественный и количественный анализ флавоноидов травы гречихи посевной / М.М. Анисимова, В.А. Куркин, В.Н. Ежков // Известия Самарского научного центра РАН. - 2010. -№ 12 (33), № 1 (8). - С. 2011- 2014.
2. Rutin and flavonoid contents in three buckwheat species Fagopyrum esculentum, F. Tataricum, and F. Homotropicum and their protective effects against lipid peroxidation. // P. Jiang, F. Burczynski, C. Campbell at al. // Food Res. Int. 2007.- V. 40. - P. 356-364.
3. Анисимова М.М. Перспективы использования травы гречихи посевной как сырьевого источника ангиопротекторных препаратов / М.М. Анисимова, В.А. Куркин // XVIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство»: тез. Докл. - М., 2011. - С. 499-500.
4. Куркин, В.А. Антиоксидантная активность суммарных извлечений травы гречихи посевной / М.М. Анисимова, В.А. Куркин // Известия самарского научного центра РАН. - 2009. - Т. 11, № 1 (6). -С. 1259-1261.
5. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям (Фитотерапия). 3-е издание, стереотипное. М.: Металлургия, 1990. — 428 с.
6. Kreft, I. Rutin content in buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) food materials and products.
/
I. Kreft, N. Fabjan, K. Yasumoto // Food Chem. - 2006. - V. 98. - P. 508-512.
7. European Pharmacopeia. - 6.0th ed. - Strasbourg, Council of Europe, 2008.
FLAVONOIDS FAGOPYRUM SAGITTATUM GILIB
O.YU. VLADIMIROV S.V. GARNAYA
National university of pharmacy, Kharkov
e-mail: [email protected]
The quantitative content of flavonoids in seven series of Buckwheat grass, growth in Ukraine, were studied. The content of lavornoids in a count on rutin the limits of 4,9-5,6 % was determinated. This experimental work is the fragment of research on development of normative document on the grass of Buckwheat.
Key words: high-efficiency liquid chromatography, Buckwheat, flavonoids.
