CC BY
16
2017, том 19 [2]
УДК [616-005/1-08:331/1]:615.22
ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ОЦЕНКИ ВНУТРИСОСУДИСТОЙ АКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ У БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ
Киперман1 Я.В., Зайцев2 В.В., Макурина3 О.Н.
1 Курский институт социального образования (филиал) РГСУ, г. Курск, Российская Федерация 2Самарская государственная сельскохозяйственная академия, г. Самара, Российская Федерация 3Самарский национальный исследовательский университет имени академика С.П. Королева, г. Самара, Российская Федерация
Аннотация. Внутрисосудистая активность тромбоцитов в значительной степени определяет микрореологические свойства крови. В этой связи ее скрининговая оценка остается весьма востребованной в практической биологии. Регистрация внутрисосудистой активности ведется с применением световой фазовоконтрастной микроскопии, позволяя выяснять процентное содержание в крови активных форм тромбоцитов и их агрегатов. Оценка состояния внутрисосудистой активности тромбоцитов доступна и способна дать необходимую информацию при многократном исследовании. В ходе применения данного метода установлено, что в норме в крови лишь у небольшой части тромбоцитов отмечается изменение формы. В патологических условиях активация тромбоцитов может быть весьма выражена, что существенно ухудшает микроциркуляцию.
Ключевые слова: тромбоциты, агрегация, внутрисосудистая активность, диагностика, микроциркуляция.
Являясь важной частью популяции клеток крови млекопитающих, тромбоциты в значительной степени определяют ее реологические свойства. Весьма велика в этом плане роль их агрегации и поверхностной геометрии, в связи с чем остаются востребованы методические подходы к скрининговой
оценке микрореологических свойств тромбоцитов у людей и животных [4,7]. Их применение позволяет своевременно и адекватно проводить оценку этих показателей в любом возрасте [2,6], при необходимости корректируя и предотвращая дисциркуля-торные нарушения в жизненно важных органах [7].
—--—
... 9 .
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Вестник представлен в научной электронной библиотеке (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
Since 1999
e-ISSN 2226-7417
On line scientific & educational Bulletin "Health and Education Millennium", 2017. Vol. 19. No 2
Не вызывает сомнений, что развитие микрореологических дисфункций тромбоцитов имеет порой генетическую природу [1]. Кроме того, активация тромбоцитов происходит под действием патогенных средовых факторов и имеет место при многих заболеваниях [10,13]. Замечено, что в условиях патологии усиление внутрисосудистой активности тромбоцитов может стать первоосновой нарушения функций различных внутренних органов, что способно увеличить тяжесть состояния человека или животного и ухудшить дальнейший прогноз [15]. Все это подчеркивает диагностическую ценность быстрой и доступной лабораторной оценки внутрисосудистой активности тромбоцитов [9,18].
Регистрация внутрисосудистой активности тромбоцитов ведется следующим образом. Производится взятие из вены 2 мл крови в силиконированную центрифужную пробирку с 8 мл раствора 0,125% глутараль-дегида, которую сразу центрифугируют 6 мин при 1000 об/мин Супернатант разводят раствором глутаральдегида в четыре раза (0,1 мл+0,3 мл раствора), перемешивают пипеткой 5 раз и заполняют камеру Горяева, которую помещают на 20 мин. в увлажненную чашку Петри [16].
При помощи фазовоконтрастного микроскопа определяют процентное распределение форм тромбоцитов на 200 клеток. Первым видимым проявлением активации кровяных пластинок является изменение их формы, которое может служить для адекватной оценки этого процесса как индуцируемого in vitro, так и развивающегося в организме. В сосудистом русле при отсутствии
патологических активирующих влиянии подавляющее большинство интактных тромбоцитов, называемых дискоцитами, имеет характерную дискоидную форму или форму чечевицы и практически гладкую поверхность. При активации тромбоцитов развивается типичная последовательность изменений: от дискоцита к активированным клеткам - дискоэхиноциту, т.е. дискоциту, у которого на поверхности появляются отростки, и далее к сфероциту или сфероэхиноциту.
Учитывается также относительное число всех тромбоцитов, вовлеченных в агрегацию. Это выявляется по процентному отношению числа агрегировавших тромбоцитов к общему их числу в препарате по формуле:
2 а + 3 6 + 4 С + .... х 100 0%, 500 + 2 а + 3 в + 4 с + ...
где а, в, с и т.д. - число агрегатов соответствующего размера на 500 свободных тромбоцитов.
Данный способ оценки внутрисосудистой активности тромбоцитов не требует дорогостоящего оборудования и способен дать точную информацию [5]. Его практическое применение позволило регистрировать в крови у здоровых людей и животных изменение формы у небольшой части тромбоцитов [15]. В условиях патологии этим методом было показано, что изменения внутрисосу-дистой активности тромбоцитов могут быть намного более выражены [14]. Это указывает на большую практическую ценность приведенного метода, способного давать точные сведения при патологических состояниях, когда микроциркуляция может значительно ухудшаться по причине появления в крови
~ 10 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Вестник представлен в научной электронной библиотеке (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
Since 1999 e-ISSN 2226-7417
On line scientific @ educational Bulletin "Health and Education Millennium", 2017. Vol. 19. No 1
—-g^OC^B-—
значительного количества тромбоцитов с измененной формой и большого числа их агрегатов [8].
Ввиду того, что адекватность перфузии внутренних органов человека и животных во многом определяет их общее функциональное состояние организма [17], имеется большая практическая потребность в доступной экспресс оценке внутрисосудистой активности тромбоцитов [16]. Особое значение, как показали предшествующие исследования, эти данные имеют в оценке функционального состояния человека и животных на разных этапах индивидуального развития [3,11]. Становится ясно, что от динамики внутрисосудистой активности тромбоцитов, в т.ч. в условиях патологии во многом зависит динамика состояния животного или человека, сроки и полнота его излечения. Все это доказывает, что внутрисосудистая активность тромбоцитов является серьезным маркером функционального состояния организма и важной мишенью коррекционного воздействия [12].
Заключение. Внутрисосудистая активность тромбоцитов в значительной степени определяют микрореологические свойства крови. Оценка ее состояния не требует дорогостоящего оборудования и способна дать полную информацию об их динамике в различных ситуациях. При применении данного метода установлено, что в норме лишь у небольшой части тромбоцитов изменена форма. В патологических условиях изменения этих показателей могут быть намного более выражены, что существенно ухудшает микроциркуляцию.
ЛИТЕРАТУРА
1. Амелина И.В., Медведев И.Н. Проявление транскрипционной активности ядрышкообразующих районов хромосом в Курском регионе. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2009; 147(6) : 671-673.
2. Завалишина С.Ю., Медведев И.Н. Антиагре-гационные свойства стенки кровеносных сосудов у телят в период перехода к молочно-растительному типу питания. Проблемы биологии продуктивных животных. 2012; 1 : 31-36.
3. Завалишина С.Ю. Гемостатическая активность сосудистой стенки у новорожденных телят. Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. 2012; 1 : 37-39.
4. Краснова Е.Г. Физиологические особенности тромбоцитарного гемостаза у поросят растительного питания. Ветеринария. 2013; 2 : 46-49.
5. Кутафина Н.В., Медведев И.Н. Тромбоцитар-ная агрегация у клинически здоровых лиц второго зрелого возраста, проживающих в Курском регионе. Успехи геронтологии. 2015; 28(2) : 321-325.
6. Медведев И.Н., Громнацкий Н.И. Воздействие небиволола на агрегацию тромбоцитов больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом. Клиническая медицина. 2005; 83(3) : 31-33.
7. Медведев И.Н., Громнацкий Н.И. Коррекция тромбоцитарного гемостаза и снижение биологического возраста при метаболическом синдроме. Клиническая медицина. 2005; 83(8) : 54-57.
8. Медведев И.Н., Кумова Т.А. Влияние эпро-сартана на состояние интраваскулярной активности тромбоцитов у лиц с артериальной гипертонией при метаболическом синдроме. Российский кардиологический журнал. 2008; 1 : 40-42.)
9. Медведев И.Н., Лапшина Е.В., Завалишина С.Ю. Активность тромбоцитарного гемостаза у детей с искривлениями позвоночника. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010; 149(5) : 579580.
10. Медведев И. Н., Скорятина И. А. Динамика микрореологических свойств эритроцитов у больных артериальной гипертонией с дислипидемией, получавших аторвастатин. Клиническая медицина. 2012; 90(6) : 42-45.
~ 11 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Журнал представлен в НАУЧНОЙ ЭЛЕКТРОННОЙ БИБЛИОТЕКЕ (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
Since 1999 e-ISSN 2226-7417
On line scientific & educational Bulletin "Health and Education Millennium", 2017. Vol. 19. No 2
11. Медведев И.Н., Кутафина Н.В. Агрегацион-ная активность тромбоцитов у здоровых лиц второго зрелого возраста. Фундаментальные исследования. 2012; 8 : 362-366.
12. Симоненко В. Б., Медведев И. Н., Мезенцева Н. И., Толмачев В. В. Антиагрегационная активность сосудистой стенки у больных артериальной гипертонией при метаболическом синдроме. Клиническая медицина. 2007; 85(7) : 28-30.
13. Симоненко В.Б., Медведев И.Н., Кумова Т.В. Патогенетические аспекты артериальной гипертонии при метаболическом синдроме. Военно-медицинский журнал. 2010; 331(9) : 41-44.
14. Симоненко В.Б., Медведев И.Н., Толмачев В.В. Патогенетические аспекты артериальной гипертонии
при метаболическом синдроме. Клиническая медицина. 2011; 89(1) : 49-51.
15. Сушкевич Г.Н. Патологические системы гемостаза и принципы их корреции при тромбофилиях различного генеза. Краснодар: Советская Кубань, 2010 : 240.
16. Шитикова А.С. Тромбоцитопатии врожденные и приобретенные / под ред. Л.П. Папаян, О.Г. Головиной. - СПб.: ИИЦ ВМА, 2008.
17. Medvedev I.N., Zavalishina S.Yu., Krasnova E.G., Belova T.A., Kutafina N.V. Meccanismi di base vascolare-piastrine emostasi. Italian Science Review. 2014; 3(12) : 167-169.
18. Zavalishina S.Yu. Activity of Vascular Hemo-stasis in Milk-Fed Calves. Russian Agricultural Sciences. 2012; 38(4) : 321-323.
THE PHYSIOLOGICAL IMPORTANCE OF EVALUATING INTRAVASCULAR PLATELET ACTIVITY IN BIOLOGICAL OBJECTS
Kiperman1 Ya.V., Zaitsev2 V.V., Makurina3 O.N.
1Kursk Institute of Social Education (branch) of the Russian State Social University, Kursk, Russian Federation 2Samara State Agricultural Academy, Samara, Russian Federation 3Samara National Research University, Samara, Russian Federation
Annotation. Intravascular platelet activity largely determines the properties of blood microrheology. In this regard, it screening assessment remains very popular in practical biology. Register intravascular activity is conducted with the use of a light phase contrast microscopy, allowing to find out the percentage of the active forms of platelets and their aggregates in the blood. Assessment of the intravascular platelet activity is available and capable of providing necessary information at multiple study. In the application of this method, it found that blood normally only a small part of the observed platelet shape change. In pathological conditions, platelet activation can be quite pronounced, which significantly impairs the microcirculation. Key words: platelets, aggregation, intravascular activity, diagnostics, microcirculation.
REFERENCES
1. Amelina I.V., Medvedev I.N. Transcriptional ac-
tivity of chromosome nucleolar organizing regions in
population of Kursk region// Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2009. no.147(6), pp.730-732 (English).
~ 12 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Вестник представлен в научной электронной библиотеке (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
Since 1999 e-ISSN 2226-7417
On line scientific @ educational Bulletin "Health and Education Millennium", 2017. Vol. 19. No 1
—-g^OC^B--
2. Zavalishina S.Yu., Medvedev I.N. Antiaggrega-tion properties of the walls of blood vessels in the calves during the transition to milk-vegetable type of nutrition // Problems of Biology productive zhivotnyh, 2012, no.1, pp.31-36 (in Russian).
3. Zavalishina S.Yu. Hemostatic Activity of Vascular Wall of Newborn Calves // Russian Agricultural Sciences,
2012, no.38(1), pp.51-54 (English).
4. Krasnova E.G. Physiological characteristics of platelet hemostasis piglets power plant // Veterinary,
2013, no.2, pp.46-49 (in Russian).
5. Kutafina N.V., Medvedev I.N. Platelet Aggregation in Clinically Healthy Persons of the Second Coming-of-Age Living in the Kursk Oblast // Advances in Gerontology, 2015, no. 5(4), pp.267-270 (English).
6. Medvedev I.N., Gromnatskii N.I. The influence of nebivolol on thrombocyte aggregation in patients with arterial hypertension with metabolic syndrome // Kliniches-kaia meditsina, 2005, no.83(3), pp.31-33 (in Russian).
7. Medvedev I.N., Gromnatskii N.I. Correction of thrombocyte hemostasis and biological age reduction in metabolic syndrome // Klinicheskaia meditsina, 2005, no.83(8), pp.54-57 (in Russian).
8. Medvedev I.N., Kumova T.A. Reduced platelet aggregation in losartan-treated patients with arterial hypertension and metabolic syndrome // Russian Journal of Cardiology, 2008, no.1, pp.40-42 (in Russian).
9. Medvedev I.N., Lapshina E.V., Zavalishina S.Yu.Activity of platelet hemostasis in children with spinal deformities // Bulletin of experimental biology and medicine, 2010, no.149(5), pp.645-646 (English).
10. Medvedev I.N., Skoriatina I.A. Dynamics of mi-crorheologic properties of erythrocytes in patients with ar-
terial hypertension and dyslipidemia treated with atorvas-tatin // Klinicheskaia meditsina, 2012, no.90(6), pp.42-45 (in Russian).
11. Medvedev I.N., Kutafina N.V. Platelet aggregation in healthy individuals of the second adulthood // Fundamental issledovaniya, 2012, no.8, pp.362-366 (in Russian).
12. Simonenko V.B., Medvedev I.N., Mezentseva N.I., Tolmachev V.V. The antiaggregation activity of the vascular wall in patients suffering from arterial hypertension with metabolic syndrome // Klinicheskaia meditsina, 2007, no.85(7), pp.28-30 (in Russian).
13. Simonenko V.B., Medvedev I.N., Kumova T.A. Pathogenetic aspects of hypertension in case of metabolic syndrome // Voenno-meditsinskii zhurnal, 2010, no.331(9), pp.41-44 (in Russian).
14. Simonenko V.B., Medvedev I.N., Tolmachev V.V. Pathogenetic aspects of arterial hypertension in metabolic syndrome // Klinicheskaia meditsina, 2011, no.89(1), pp.49-51 (in Russian).
15. Sushkevich G.N. Abnormal hemostasis system and the principles of their correction. Krasnodar: So-vetskaya Kuban, 2010, 240 p (in Russian).
16. Shitikova A.S. Thrombocytopathy congenital and acquired.- St. Petersburg, 2008, 320 p (in Russian).
17. Medvedev I.N., Zavalishina S.Yu., Krasnova E.G., Belova T.A., Kutafina N.V. Meccanismi di base vasco-lare-piastrine emostasi // Italian Science Review, 2014, no. 3(12), pp. 167-169.
18. Zavalishina S.Yu. Activity of Vascular Hemostasis in Milk-Fed Calves // Russian Agricultural Sciences, 2012, no.38(4), pp.321-323.
~ 13 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Журнал представлен в НАУЧНОЙ ЭЛЕКТРОННОЙ БИБЛИОТЕКЕ (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
