CC BY
84
УДК 619.615.371:636.3
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕГО ПРЕПАРАТА МОБЕС
Малина В.В., кандидат ветеринарных наук, доцент, и.о. заведующего кафедрой гигиены животных и основ санитарии Белоцерковский национальный аграрный университет, г. Украина
Аннотация. Разработана биотехнология получения иммуномодулирующего препарата МОБЕС, безбелкового физиологически-сбалансированного набора гуморальных факторов (миелопептидов) выделенных из органов иммуногенеза свиней. В состав препарата входят низкомолекулярные пептиды, углеводы, макро- и микроэлементы. Введение препарата активирует клеточные и гуморальные факторы резистентности, повышает метаболизм что может быть использовано для профилактики вторичных иммунодефицитов и повышения продуктивности животных.
Ключевые слова: телята, технология, стресс, продуктивность, иммунодефициты, заболеваемость, периферическая кровь, эритроциты, лимфоциты, иммуномодуляторы, МОБЕС, профилактика.
Введение. Выращивание здорового молодняка крупного рогатого скота, способного реализовать свой генетический потенциал продуктивности, остается острой и актуальной задачей. По этому, стимулирование и укрепление естественных защитных сил организма, длительное поддержание их на высоком уровне является
приводит к глубоким нарушениям иммунобиологического гомеостаза. Изменение условий среды приводит к нарушению функций иммунной системы, развиваются вторичные иммунодефицитные состояния, повышается восприимчивость животных к инфекциям [2].
К настоящему времени установлено, что любая патология сопровождается изменениями иммунобиологической реактивности организма. Для коррекции иммунодефицитных состояний у животных предложено значительное количество иммунотропных лекарственных средств [3].
Антибактериальные, антивирусные,
противогрибковые средства будут
малоэффективными при лечении животных с низким антиинфекционным иммунитетом. А по этому, использование иммунотропных препаратов, которые выборочно влияют на отдельные звенья иммунитета, имеет целесообразность при комплексном лечении инфекционных заболеваний [4].
Annotation. The biotechnology receiving immunomodulatory drug MOBES, protein-free physiologically balanced set of humoral factors (myelopeptides) isolated from organs immunogenesis pigs. The preparation consists of low molecular weight peptides, carbohydrates, macro- and microelements. Administering the drug activates cellular and humoral factors resistance increases metabolism that can be used for prevention of secondary immunodeficiencies and improve animal performance.
Keywords: calves, technology, stress, productivity, immunodeficiencies, disease, peripheral blood, erythrocytes, lymphocytes, immune modulators, MOBES, prevention.
актуальной проблемой, которая стоит перед работниками животноводства [1].
Новорожденные телята в первые дни жизни отличаются незрелостью иммунной системы, поэтому воздействие на организм негативных технологических факторов (нарушение условий содержания и кормления, различные стрессы)
иммуномодулирующих препаратов для профилактики первичных и вторичных иммунодефицитных состояний у молодняка сельскохозяйственных животных [9].
Сотрудниками Проблемной лаборатории иммунологии сельскохозяйственных животных Белоцерковского национального аграрного университета разработана биотехнология получения экзогенного иммуномодулятора животного происхождения МОБЕС (ТУ У 24.4.20573778-006:2007) [10].
Целью работы было изучение влияния препарата МОБЕС на клеточные и гуморальные факторы неспецифической резистентности и продуктивности молодняка крупного рогатого скота, при выращивании его в условиях промышленной технологии.
Материалы и методы. Доклинические исследования проводились в условия Проблемной лаборатории иммунологии сельскохозяйственных животных
Умелое использование биологически-активных препаратов позволяет
профилактировать болезни и лечить животных, способствует нормализации у них обмена веществ, уменьшает расходы на дорогостоящие химиотерапевтические средства [5].
Достижения современной биотехнологии открыли широкие возможности использования природных фармакологических средств и продуктов, полученных от животных, в практике сельскохозяйственного производства, зооинженерии и ветеринарной медицине [6].
Существующая практика использования иммуномодулирующих препаратов в
животноводстве является несовершенной. Арсенал биологически-активных препаратов, которые используются с целью коррекции клеточных и гуморальных факторов резистентности животных довольно широкий. Вместе с тем, исследования механизмов влияния иммуномодуляторов на гомеостаз животных, способов их использования в условиях промышленных технологий выращивания животных следует расширять и уточнять [7].
Объясняется это тем, что иммунная система представляет собой сложную сеть взаимодействующих и взаимозависимых подсистем с сигналами и механизмами обратной связи, часть из которых еще не распознана или недостаточно изучена. Следует так же учесть, что рассматриваемая проблема состоит, по крайней мере, из двух аспектов. Речь идет о необходимости глубокого познания не только закономерностей функционирования иммунной системы, но и механизмов и факторов, обеспечивающих их формирование [8].
Изыскание путей направленной стимуляции или ингибиции иммуногенеза тесно связано с разработкой технологий получения сыворотки крови (ЛАСК) -
фотоэлектроколориметрическим методом, титр нормальных антител сыворотки крови (ТНАСК) в реакции аглютинации (Чумаченко В.Е. и др., 1990), количество теофиллинрезистентных (ТФР) и теофиллинчувствительных (ТФЧ) Т-лимфоцитов определяли методом Б. Ь1тайЬи1 е1 а1. (1995), Общее количество В-лимфоцитов -методом К.Б. МеМе8 е1 (1973), О-лимфоцитов - разницей между общим количеством лимфоцитов и суммой Т- и В-лимфоцитов. Иммунорегуляторный индекс (ИРИ)
рассчитывали за соотношении ТФР до ТФЧ-лимфоцитов, содержание общих белков сыроватки - методом Слуцкого (1974), белковых фракций - Олла и Маккорда в модификации С.А.Карпюка (1962), свободных
Белоцерковского национального аграрного университета, а производственные
исследования - в условиях ТОВ «Чорнобай Прод- Сервис» Киевской области.
Объектом исследований были физико-химические и биологические характеристики иммуномодулирующего препарата МОБЕС, показатели клеточного и гуморального иммунитета мышей линии СВА и молодняка крупного рогатого скота, показатели продуктивности (сохранность, среднесуточные привесы живой массы).
Для исследований использовали периферическую кровь, которую отбирали от лабораторных и сельскохозяйственных животных, соблюдая правила асептики и антисептики до- и после введения препаратов.
В периферической крови определяли показатели гематокрита - методом центрифугирования, содержание гемоглобина -гемоглобинцианидным методом используя тест-набор фирмы «Симко» ЛТД, количество лейкоцитов, лейкограмму - (Левченко В.И и др., 2004).
Клеточные факторы резистентности определяли за показателями фагоцитарной активности (ФА), интенсивности (индекса), фагоцитоза (ФИ), абсолютного фагоцитоза (АФ), индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ) нейтрофилов крови при помощи общепринятых методов (Чумаченко В.Е. и др., 1990), общее число Т-лимфоцитов ( Е-РОК) -методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана за М..ТоМа1 е1. а1. (Чумаченко В.Е. и др., 1990), количество активных Т-лимфоцитов ( Еакт.-РОК)- за М. Wansbroush-Jones е1. а1. (1979).
Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) исследовали методом О.В. Смирновой, Т.А. Кузьминой (1996),
лизоцимную активность
Действующим началом препарата являются низкомолекулярные пептиды и биологически-активные вещества, которые способны влиять на функциональную активность клеточного и гуморального иммунитета животных. В препарате содержатся 17 аминокислот, из которых 99% состоят в виде низкомолекулярных пептидов (миелопептидов), а 1% пребывает в свободном состоянии. Наибольшее количество составляют низкомолекулярные пептиды, которые в своем составе содержат глутаминовою кислоту -12,85% , лейцин - 12,78% , лизин - 9,58 % и аргинин - 8,34% . В свободном состоянии содержатся аминокислоты: глицин - 31,63 % , аланин - 17,47 % , цистин - 13,17 % и лизин -
аминокислот в крови, плазме крови, препарате -на аминокислотном анализаторе ААА-339М фирмы «Микротехника» (Чехия).
Результаты и их обсуждение. В процессе исследований нами разработана биотехнология получения комплекса низкомолекулярных миелопептидов из трубчатых костей свиней. Конечный продукт получил название МОБЕС (модулятор В-системы иммунитета).
Препарат возможно фасовать в емкости 10 мл -20-50-100 и 200 мл.
Доклиническими исследованиями на мышах линии СВА установлено, что введение препарата МОБЕС не вызывает побочных явлений: повышения температуры тела, отставания в росте и развитии. Среднесуточные привесы живой массы у мышей в опытной группе на 10 день исследований были на 16,7 % высшими по сравнению с контрольным аналогом. Серия препарата считается активной, если разница приростов в контрольной и опытной группах более 10 %.
Содержание гемоглобина в
периферической крови опытных животных увеличивалось на 14,12 г/л или 8,96 % (Р<0,05), количество эритроцитов возрастало на 11,24 % (Р<0,05).
В пределах физиологической нормы на вводили изотонический раствор №С1 из расчета 0,1 мл/гол, а в опытной группе аналогично препарат МОБЕС. Кровь отбирали с ретроорбитального сплетения, суспедировали в 0,9 М №С1. В сыворотке крови определяли титры антистафилококовых антител в реакции аглютинации. Результаты опыта
свидетельствовали о том, что в сыворотке крови мышей, иммунизированных стафилококком с последующим введением препарата МОБЕС, уровень антистафилококковых антител был в 2,2 раза выше в сравнении с аналогичным показателем контрольных животных.
При изучении функциональной активности
7,12 %.
Физико-химические и биологические свойства препарата МОБЕС в соответствии с ТУ У представлены в таблице.
12,68 % увеличивалось общее количество лейкоцитов. При проведении
патологоанатомических исследований
изменений в структуре внутренних органов не установлено. Отмечали увеличение индекса тимуса на 0,24 и снижение индекса селезенки на 0,84 (Р<0,05), что свидетельствует о высокой функциональной активности препарата.
При постановке опыта по изучению влияния препарата на антигенспецифические реакции иммунитета мышей линии СВА иммунизировали инактивированным
стафилококком в дозе 2*109 микробных тел на одно животное. Суспензию микроорганизмов вводили три раза с интервалом 7 дней. Было использовано 10 животных, которых в последствии - разделили на 2 группы, контрольную и опытную по 5 голов в каждой. Мышам в контрольной группе подкожно профилактики вторичных иммунодефицитных состояний и увеличению продуктивных качеств животных.
Литература
1. Москалев А., Сидоренко С. Использование молозива при выращивании телят // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2008. № 11. с. 41-43.
2. Корсакова Е.Н. Оптимизации специфической профилактики инфекционных болезней у телят в зонах «экологического риска» // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2008. № 1. с. 37-43.
3. Маслянко Р.П. Основи iмунолоril. -
Физико-химические и биологические свойства препарата МОБЕС
Показатели Един. измерения Значение
Внешний вид Органолепт. Прозрачная жидкость
Цвет Органолепт. Светло-желтый
Массовая часть сухого остатка % 3.12±0.04
Массовая часть белка мг/см3 Отсутствует
Безвредность у тест-дозах на мышах см 0.3
Стерильность - Стерильный
Биологическая активность - Активный
Аномальная токсичность - Безвредный
Эндотоксины ЕД/ см3 0.25
фагоцитов установлено, что макрофаги перитонеальной полости неинфицированных животных в присутствии МОБЕСА не изменяют функциональной активности.
При внесении препарата к макрофагам, полученных от инфицированных животных установлено, что МОБЕС увеличивает количество распростертых макрофагов с 34,8±3,8 % до 52,6±3,8 %, а интенсивность фагоцитоза с 4,3±1,2% до 7,8%.
Влияние МОБЕСА на функциональную активность фагоцитов периферической крови телят определяли в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте (НСТ-
нитросиним тетразолием). Для определения уровня стимулированного НСТ-теста использовали суспензию инактивированной культуры. Животным в опытной группе подкожно вводили МОБЕС в оптимальной дозе (0,01 мл/кг живой массы), в контрольной -изотонический раствор №С1 аналогично. Через 24 часа отбирали кровь и определяли уровень бактерицидной активности. Установлено, что препарат увеличивает уровни как спонтанного, так и стимулированного НСТ-теста. При этом увеличивается функциональный резерв моноцитов и нейтрофилов, что свидетельствует об активации реакций антигенспецифической защиты организма.
Активация клеточных и гуморальных факторов резистентности животных
положительно сказывается на показателях продуктивности телят.
При внедрении разработки в производство установлено, что двухкратное введение препарата МОБЕС с интервалом 14 дней в дозе 0,01 мл/кг живой массы способствует увеличению сохранности телят на 8,6% и среднесуточных приростов живой массы на 66,1 г что на 14,2 % больше по сравнению с контрольными аналогами.
Выводы
1. Разработана биотехнология получения иммуномодулирующего препарата МОБЕС.
2. Препарат МОБЕС в физиологических пределах активирует клеточные и гуморальные факторы резистентности, способствует активации метаболизма, что может быть использовано с целью
Львiв : Вертикаль. 1999. - 472с.
4. Косенко М., Коцюмбас I., Косенко Ю. та ш Контроль впливу ветеринарних лшарських 3aw6iB на стан iмунiтету тварин // Ветеринарна медицина Украши. 2004. №1.с.43-44.
5. Чумаченко В. Лшвщування та профшактика захворювань тварин з урахуванням !х iмунного статусу // Ветеринарна медицина Украши. 2003. №3. с. 27-28.
6. КАФ1: Техшчш умови Украши (ТУ У) 24.4.-20573778-003:2007 ДКПП 24.42.21.609, УКНД 11.220/ А.М. НЫтенко, В.В.Малина, Н.В.Козак.
7. Нштенко А.М., Малина В.В. Гомотин як фактор оптишзацп природно! резистентност та продуктивносп кроленят // Науковий вюник нащонального аграрного ушверситету. 2002. № 55. с. 231-233.
8. Малина В.В. Вивчення впливу iмуномодулюючого препарату КАФ1 на показники iмунобiологiчноl реактивносп телят при !х вирощуванш в 30-км зош ЧАЕС // Вiсник Бшоцерювського державного аграрного унiверситету. 1996 Вип.1. с. 64-66.
9. Шарандак В.1., Малина В.В., Шарандак П.В. Визначення оптимальних доз i кратносп введення КАФ1 та дослiдження його впливу на продуктивш якостi молодняку велико! рогато! худоби : зб. статей . Луганськ. 2002. №4. с. 110113.
10. МОБЕС : Техшчш умови Украши (ТУ У) 24.4-20573778-006:2007 ДКПП 24.42.21.690, УКНД 11,220 / А.М. НЫтенко, В.В.Малина, Н.В.Козак.
11. Гамко, Л.Н. Обмен веществ и биохимические показатели крови у молодняка свиней, содержащегося в разных экологических условиях при скармливании пробиотика / Л.Н. Гамко, И.И. Сидоров, В.В. Черненок // В1СНИК ЖНАЕУ, Выпуск №1 (34), Т. 3, 2013 р., С. 1014.
