CC BY
0
DOI: 10.14258/jcprm.20230312150
УДК 581.6; 577.13; 547.918
ФИТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ И АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ЭКСТРАКТОВ РАСТЕНИЙ РОДА VITEX L. (LAMIACEAE)
© С.О. Володина1'2', Е.В. Некрасова2, Ву Тхи Лоан3, А.Ю. Очагова2, О.В. Топкова2, В.В. Володин1'4
1 Институт биологии ФИЦ Коми научный центр УрО РАН, ул. Коммунистическая, 28, Сыктывкар, 167000 (Россия), e-mail: svetlana20664@yandex.ru
2 Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет, ул. Профессора Попова, 14а, Санкт-Петербург, 197022 (Россия)
3 Институт тропической медицины Российско-Вьетнамского Тропического научно-исследовательского и технологического центра, ул. Нгуен Ван Хуен, Нгиа До, Кау Зай, Ханой (Вьетнам)
4 Санкт-Петербургский государственный лесотехнический университет им. С.М. Кирова, Институтский пер., 5, Санкт-Петербург, 194021 (Россия)
Проведено сравнительное фитохимическое исследование выборочных видов рода Vitex L. (Lamiaceae) из флоры России и Вьетнама: V. agnus-castus, V. canescens, V. negundo, V. tripinnata. Наибольшее количество экстрактивных веществ было получено из листьев V. agnus-castus при экстракции 60%-ным этанолом. Цветные реакции с реактивами Трим-Хилла и Шталя, а также данные тонкослойной хроматографии показали высокое содержание иридоидов в экстрактах листьев V. agnus-castus и V. negundo и их низкое содержание (или отсутствие) в экстрактах листьев V. tripinna-ta и V. canescens. Наибольшее количество полифенолов и флавоноидов содержится в экстракте листьев V. agnus-castus. Наименьшее количество полифенолов содержится в листьях V. canescens, а флавоноидов - в листьях V. tripinnata. Все исследованные образцы витексов характеризуются повышенным содержанием эссенциальных микроэлементов - железа, меди и цинка, а листья V. tripinnata - также высоким содержанием кобальта. Установлена высокая антирадикальная активность всех образцов листьев изучаемых видов витексов. Показана связь между содержанием вторичных метаболитов и положением видов на молекулярно-филогенетическом древе рода Vitex, которая позволяет разработать хемотаксономический прогноз привлечения видов данного рода с повышенным содержанием биологически активных соединений определенного класса (иридоиды, полифенолы, фитоэкдистероиды) для дальнейших фармакологических исследований.
Ключевые слова: Vitex, лекарственные растения, места произрастания, Россия, Вьетнам, вторичные метаболиты, иридоиды, полифенолы, флавоноиды, микроэлементы, молекулярно-филогенетический анализ, хемотаксономия.
Исследования выполнены по теме НИР Института биологии ФИЦ «Коми научный центр УрО РАН» - «Научно обоснованные биотехнологии для улучшения экологической обстановки и здоровья человека на Севере» № 1021051101411-4-1.6.23 и в рамках Договоров творческого сотрудничества с Российско-Вьетнамским научно-исследовательским и технологическим тропическим центром (Хайной, Вьетнам) и Санкт-Петербургским государственным химико-фармацевтическим университетом.
Введение
УШх Ь. (витекс, прутняк) - род листопадных или вечнозеленых деревьев и кустарников, включающий в себя приблизительно 270 видов. Входит в семейство Ьашасеае (яснотковые). Родиной растений является Сре-
Володина Светлана Олеговна - кандидат биологических дизшнишрьа Большинство предсгавшшш рода
наук, старший научный сотрудник лаборатории произрастают по всему миру в тропическом и суб-
би°химии и ¡эиагежитогаи доцент кафедры тропическом климате, и лишь ограниченное число биотехнологии, e-mail: svetlana20664@yandex.ru
Окончание на С. 172. видов встречаются в умфетнш клитте. В России
' Автор, с которым следует вести переписку.
на Черноморском побережье Кавказа и в Крыму встречается единственный вид Vitex agnus-castus L. [1].
Интересной особенностью рода Vitex является тот факт, что многие его представители издавна применяются в традиционной медицине многих народов мира. Тривиальное название рода «Целомудренное дерево» или по-английски «Chastetree», хотя и связано с известным в медицине c античных времен видом Vitex agnus-castus, называемого также целомудренной ягодой (chasteberry), часто применяется и к другим видам этого рода. Например, вид V. negundo известен под названием китайское целомудренное дерево или пятилистное целомудренное дерево (chinese chaste tree, five-leaved chaste tree), V. rotundifolia - круглолистное целомудренное дерево (round-leaf chaste tree), V. trifolia - простолистное целомудренное дерево (simpleleaf chastetree). Это общее название отражает сходство применения перечисленных видов рода Vitex для лечения гинекологических заболеваний. В современной европейской медицине препараты на основе V. agnus-castus применяются при нарушениях менструального цикла, аменорее, дисменорее [2]. Экстракт V. negundo используется в традиционной фитотерапии для репродуктивного здоровья женщин в Малайзии [3]. Для лечения женских болезней на островах Кука используется V. trifolia [4]. Использование препаратов на основе V. rotundifolia аналогично использованию V. agnus-castus [5]. Результаты современных фитохимических и фармакологических исследований показали, что экстракты плодов V. agnus-castus содержат бициклические дитерпены, которые, обладая высоким сродством к D2 допаминовым рецепторам, ингибируют высвобождение пролактина, гиперпродукция которого в организме является причиной многих нарушений репродуктивной сферы и у женщин, и у мужчин [6].
Следует отметить, что благодаря противовоспалительному действию V. negundo (местное название «лагунди»), на Филиппинах одобрили клинические испытания средства на его основе для дополнительного лечения пациентов с COVID-19 [7].
Экстракты растений рода Vitex обладают широким спектром и других полезных свойств: обезболивающим, противомалярийным, мочегонным, отхаркивающим, ранозаживляющим и другими, за счет присутствия в растениях изучаемого рода биологически активных веществ различной природы: эфирных масел, иридоидов, ди- и тритерпеноидов, экдистероидов, полифенолов [8, 9].
Учитывая тот факт, что причиной многих патофизиологических нарушений и социально значимых стресс-индуцированных заболеваний является оксидативный стресс, цель настоящей работы заключалась в изучении состава и содержания вторичных метаболитов, предотвращающих его развитие: иридоидов, полифенолов, флавоноидов, а также оценить содержание эссенциальных микроэлементов и определить антирадикальную активность экстрактов выборочных видов рода Vitex, произрастающих на территории России и Вьетнама.
Материалы и методы
Объектами наших исследований являлись дикорастущие и культивируемые деревья рода Vitex L. Образцы листьев, одревесневших побегов и плодов витекса священного (V. agnus-castus) собирали с деревьев, культивируемых в горной местности Адлеровского района г. Сочи (Россия). Образцы листьев, одревесневших побегов и коры дикорастущих деревьев V. tripinnata, V. canescens и V. negundo собирали в национальных парках Кон Ка Кинь и Кат Тьен во Вьетнаме. Растительный материал фиксировали путем высушивания в бумажных пакетах при температуре 60 °С.
Содержание суммы экстрактивных веществ в этанольных экстрактах листьев растений рода Vitex определяли по методике ОФС.1.5.3.0006.15 «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарствен-
Некрасова Елена Владимировна - старший
преподаватель кафедры биотехнологии,
e-mail: elena.nekrasova@pharminnotech.com
Ву Тхи Лоан - кандидат биологических наук, научный
сотрудник, e-mail: svetlana20664@yandex.ru
Очагова Александра Юрьевна - магистрант,
e-mail: svetlana20664@yandex.ru
Топкова Оксана Владимировна - кандидат
биологических наук, доцент кафедры биотехнологии,
e-mail: oxana.topkova@pharminnotech.com
Володин Владимир Витальевич - доктор биологических
наук, профессор кафедры лесохимических продуктов,
химии древесины и биотехнологии,
e-mail: vladimir131035@yandex.ru
ном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах (метод 1)» [10].
Обнаружение иридоидов в водно-спиртовых экстрактах растений рода У1(вх проводили с помощью реактивов Трим-Хилла и реактива Шталя [11] и методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). Перед проведением ТСХ сырье экстрагировали хлороформом для удаления пигментов. Использовали пластинки 8огЪй1 ПТСХ-11-А-УФ. Анализ проводили в различных системах элюирования: н-бутанол - этанол - вода (4 : 1 : 5) (система I), эта-
нол - хлороформ (1 : 1) (система II), этанол - этилацетит (1 : 1) (система III). В качестве проявляющих реагентов использовали реактив Трим-Хилла (1), 2 н раствор серной кислоты (2), 1 н раствор соляной кислоты (3). Перед проявлением пластинки высушивали на воздухе, а после обработки проявляющими реагентами пластинки нагревали в сушильном шкафу при температуре 110 °С в течение 15 мин [12, 13].
Определение суммы полифенолов в пересчете на галловую кислоту проводили по методике с реактивом Фолина-Чокальтеу в щелочной среде [14]. Оптическую плотность растворов определяли на спектрофотометре СФ-2000 при длине волны 765 нм по отношению к контрольному раствору. В качестве стандарта использовали галловую кислоту.
Сумму флавоноидов в пересчете на кверцетин определяли с помощью метода, основанного на определении оптической плотности растворов комплексов, образующихся при взаимодействии флавоноидов с хлоридом алюминия, в интервале длин вол 408-420 нм [15].
Определение микроэлементов проводили с помощью метода атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой в специализированной аккредитованной эко-аналитической лаборатории Института биологии ФИЦ Коми НЦ УрО РАН (Сыктывкар).
Антирадикальную активность водно-спиртовых экстрактов витексов оценивали с помощью метода, основанного на реакции 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила (DPPH), растворенного в этаноле, с исследуемым образцом, содержащим антиокислитель. Регистрация изменения оптической плотности gводилась на спектрофотометре СФ-2000 (Россия) при длине волны 517 нм [16].
Все эксперименты проводились в трехкратном повторении. Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью программы Statistica 10.
Результаты и их обсуждение
Основным признаком доброкачественности экстрактов лекарственных растений является требуемое для галеновых препаратов содержание суммы экстрактивных веществ. В последние годы в фармакогнозии стали широко применяться такие современные физико-химические методы анализа, как газовая и жидкостная хроматография, сопряженные с масс-спектроскопией, ядерный магнитный резонанс и другие методы, которые позволяют точно определять тонкую структуру вторичных метаболитов растений. Однако качество жидких экстрактов до сих пор традиционно оценивают по сумме экстрактивных веществ, которую определяют в соответствии с методикой [10].
Нами определен выход экстрактивных веществ из сырья листьев четырех видов растений рода Vitex (V. agnus-castus, V. negundo, V. canescens, V. tripinnata) при использовании в качестве экстрагента смеси этанол-вода при различном содержании этанола: 40, 60, 70 и 96%. Выход экстрактивных веществ оказался наибольшим при использовании экстрагента этанол-вода при содержании этанола 60% для образцов листьев всех четырех исследованных видов. При этом наибольшее количество экстрактивных веществ было извлечено из листьев V. agnus-castus (640.8 мг/г сухой массы). Далее в порядке убывания располагаются V. negundo, V. canescens и V. tripinnata (соответственно, 464.1, 384.6 и 198.0 мг/г).
Иридоиды относятся к монотерпеноидам циклопентанопиранового типа, которые встречаются и в растительном, и в животном мире. В растениях иридоиды, как правило, встречаются в виде гликозидов. Будучи не столь широко распространенными вторичными метаболитами растений, они обнаружены в таких семействах как Valerianaceae, Menyanthaceae, Gentianaceae, Lamiaceae, Plantaginaceae. Иридоиды обладают резко выраженным горьким вкусом, поэтому растения, их содержащие, применяют для повышения аппетита и улучшения пищеварения. Кроме этого, выявлен широкий спектр и других фармакологических свойств: нейропротекторное, противоопухолевое, противовоспалительное и иммуномодулирующее, гепа-топротекторное, гиполипидемдическое и гипогликемическое, ранозаживляющее и антимикробное [17].
Для определения иридоидов в растительном сырье используют цветные реакции с использованием реактивов Трим-Хилла (раствор сульфата меди в концентрированной соляной кислотs и ледяной уксусной кислоты в определенном соотношении) и Шталя (раствор п-диметиламинобензальдегид и концентрированной соляной кислоты в этаноле), а также методы бумажной и тонкослойной хроматографии (ТСХ). Методы количественного определения иридоидов в лекарственном сырье пока еще изучены недостаточно. Наиболее перспективными методами определения иридоидов в растительном сырье следуют считать современные физико-химические методы ВЭЖХ и ВЭЖХ-МС [17]. В литературе имеются данные о наличии иридоидов в роде Vitex [18]. Показано, что глюкозиды иридоидов, выделенные из этилацетатных экстрактов листьев V. altissima, показали высокую антиоксидантную активность как с помощью фоторедукции
рибофлавина супероксидным нитросиним тетразолием (NBT), так и с помощью метода гашения свободных радикалов дифенилпикрилгидразилом (DPPH) [9].
Нами было показано, что экстракты листьев изученных видов рода Vitex с реактивом Трим-Хилла при комнатной температуре имеют желто-зеленую окраску. Известно, что при нагревании на водяной бане в течение минуты при наличии иридоидов в экстрактах должно происходить изменение окраски. Экстракт листьев V. agnus-castus с реактивом Трим-Хилла при нагревании приобрел изумрудную (сине-зеленую) окраску, что на качественном уровне свидетельствует о высоком содержании в нем иридоидов. Наличие иридоидов в экстракте листьев V. negundo также подтверждается изменением окраски раствора с зелено-коричневой на темно-синюю. При нагревании экстракта листьев V. tripinnata, изначально имеющего ярко-зеленую окраску, с реактивом Трим-Хилла происходило потемнение раствора, цвет стал коричневым, однако изменения окраски на характерную для иридоидов (синяя, зеленая) не произошло. Экстракт листьев V. canescens, как и экстракт листьев V. tripinnata, не содержит или содержит незначительное количество иридоидов, так как окраска раствора после нагревания с реактивом Трим-Хилла не изменилась.
Полученные результаты согласуются с результатами другой цветной реакции на наличие иридоидов в исследуемых экстрактах с использованием реактива Шталя. Положительной реакцией с реактивом Шталя считается изменение окраски раствора на синюю или голубую. Экстракты листьев V. agnus-castus и V. negundo после нагревания с реактивом Шталя, так же как и с реактивом Трим-Хилла, изменили окраску соответственно на темно-синий и синий. При нагревании с реактивом Шталя происходит изменение окраски экстрактов листьев V. tripinnata и V. canescens с ярко-зеленой на коричневую, что свидетельствует об отсутствии либо о незначительном содержании иридоидов в листьях данных видов.
Методом ТСХ проведен качественный анализ иридоидов в спиртовых экстрактах различных частей растений четырех видов рода Vitex: V. agnus-castus (листья), V. tripinnata (листья, кора), V. negundo (листья и одревесневшие побеги), V. canescens (листья и кора), в различных системах элюирования.
При проведении анализа ТСХ в трех системах элюирования обработка пластинок реагентами 1 и 3 позволяет обнаружить по одному мажорному соединению (1) - яркому пятну с характерным для иридоидов зеленоватым (реагент 1) или голубым (реагент 3) цветом в экстрактах листьев V. agnus-castus (образец 1) и листьев V. negundo (образец 8). В экстракте одревесневших побегов V. negundo (образец 9) с помощью реагента 3 обнаруживается дополнительное пятно (соединение 2) с характерным для иридоидов голубым цветом в системах I и II. Проявление пластинок с помощью реагента 2 позволяет увидеть, кроме соединения 1, большее число метаболитов с меньшей интенсивностью окраски во всех трех системах. Наиболее оптимальное разделение метаболитов происходит в системе II (таблица 1). Следует отметить отсутствие иридоидов или их незначительное количество (соединение 3) в листьях V. tripinnata (образцы 2 и 6). Кора этого же вида содержит незначительное количество соединения 4 с близким для соединения 3 значением Rf (таблица 2). Соединение 4 обнаруживается и в коре другого вида - V. canescence. Однако, в отличие от образца коры V. tripinnata в коре V. canescence содержится еще один метаболит иридоидной природы (соединение 5). Соединение 1, являющееся мажорным компонентом в образцах 1, 8 и 9, обнаруживается как минорный компонент на хроматограммах экстрактов коры и листев V. canescence (образцы 3 и 4) и коры V. tripinnata (образец 7).
Таким образом, соединение 1, обнаруженное во всех исследованных видах, можно считать хемотак-сономическим маркером рода Vitex. Отсутствие в образце двух иридоидов можно объяснить их низкой концентрацией за пределами чувствительности используемого метода. Структуры характеристического иридоида и минорных соединений иридоидной природы планируется установить в будущих исследованиях. Таким образом, использование цветных реакций и ТСХ показало, что наиболее богатыми иридоидами оказались виды V. agnus-castus и V. negundo, причем в больших концентрациях они содержатся в листьях и одревесневших побегах деревьев.
Полифенолы принадлежат к одной из важнейших групп вторичных метаболитов, широко распространенных в различных фруктах, овощах и получаемых из них соках и пище. К настоящему времени из растений было выделено более 8 тысяч соединений полифенольной природы [19]. Термин «фенолы» относится к соединениям с одним ароматическим кольцом, соединенным с одной гидроксильной группой, в то время как полифенолы имеют в составе молекулы одно и более ароматических колец с более, чем одной гидроксильной группой. Полифенолы делятся на несколько подгрупп: фенолкислоты, флавоноиды и соединения нефлавоноидной структуры. Флавоноиды, на долю которых приходится около 60% всех полифенолов, имеют в молекуле два бензольных кольца, соединенных между собой трехуглеродной цепоч-
кой [20, 21]. В свою очередь флавоноиды разделяются на 6 подклассов: флавоны, флаванолы, флавонолы, флавононы, изофлавовны и процианидины.
Считается, что полифенолы вносят основной вклад в общую антиокислительную активность экстрактов растений. Как и другие фенольные соединения, в ходе окислительных процессов полифенолы образуют преимущественно феноксильные радикалы, обладающие меньшей реакционной активностью. Таким образом, полифенолы способны прерывать цепной механизм окисления, выступая в качестве ловушек свободных радикалов.
Полифенолы встречаются практически во всех семействах цветковых растений, однако их количественное содержание значительно варьирует у представителей различных семейств, а также зависит от фазы развития растений и условий внешней среды [22, 23]. В сырой биомассе фруктов их содержание достигает до 0.2-0.3%. Полифенолы могут составлять до 50-60% от массы суммы экстрактивных веществ [24]. При биохимическом исследовании лекарственных растений Калининградской области, было установлено, что максимальное содержание полифенолов содержится в листьях синюхи голубой Polemonium coeruleum, герани кровавокрасной Geranium sanquineum, мелиссы лекарственной Melissa officinalis, чернокорня лекарственного Cynoglossum officinale, шалфея клейкого Salvia glutinosa, шлемника байкальского Scutellaria baicalensis, ревеня дланевидного Rheum palmatun, шалфея лекарственного Salvia officinalis. Суммарное содержание полифенолов в этих растениях составило 47.7-166.3 мг/г сухой биомассы. Примечательно, что среди группы растений из 8 видов с наибольшим содержанием полифенолов 4 вида относились к семейству Lamiaceae [25].
Представляло интерес определить содержание суммы полифенолов в листьях четырех изучаемых видов рода Vitex, также относящемуся к семейству Lamiaceae. Содержание полифенолов определяли в экстрактах, в которых в качестве экстрагента использовали смесь этанол-вода с содержанием этанола 40, 50, 60 и 70%. Как следует из полученных данных, наибольший выход полифенолов достигается при использовании 60%-ного этанола для всех четырех видов сырья. По сравнению с другими видами витексов наибольшее количество полифенолов содержится в экстракте листьев V. agnus-castus (350.0 мг/г сухой биомассы). Содержание полифенолов в образце листьев витекса священного намного превышает содержа -ние полифенолов в плодах черноплодной рябины (~240 мг/г сухого вещества) [26] и приблизительно такое же, как и в зеленом чае (200-350 мг/г) [27]. Наименьшее количество полифенолов содержится в листьях V. canescens (115.3 мг/г) (рис. 1).
Таблица 1. Результаты анализа образцов Vitex на наличие иридоидов с помощью ТСХ в системе этанол-
хлороформ (1 : 1)
№ об- Вид Части растения Соединения на ТСХ-пластинках с использованием различных про-
разца являющих реагентов
1* 2* 3*
1 V. agnus-castus листья 1 -яркое зеленое пятно 1 - яркое 2 - яркое 3 - яркое 4 - яркое 1 - яркое голубое пятно
2 V. tripinnata листья - - -
3 V. canescens кора 1 - слабое 4 - слабое 5 - слабое
4 V. canescens листья - 1 - слабое -
5 V. negundo одревесневшие побеги - 1 - слабое 4 - слабое -
6 V. tripinnata листья - 1 - слабое 3 - слабое -
7 V. tripinnata кора 1 - слабое 2 - слабое 4 - слабое
8 V. negundo листья 1 - яркое зеленое пятно 1 - яркое 2 - слабое 3 - яркое 4 - слабое
9 V. negundo одревесневшие побеги 1 - яркое зеленое пятно 1 - яркое 2 - слабое 1 - яркое голубое пятно 2 - слабое голубое пят- но
Примечание: * - 1 - реактив Трим-Хилла; реагент 2 - 2 н раствор серной кислоты; 3 - 1 н раствор соляной кислоты.
Таблица 2. Значения коэффициентов замедления Rf соединений иридоидной природы по данным ТСХ в системе этанол-хлороформ (1:1) с использованием различных проявляющих реагентов
№ соединения 1 2 3 4 5
Значение Rf 0.82 0.75 0.62 0.50 0.16
Известно, что растения рода УЫех содержат большое количество флавоноидов различного строения, большая доля которых представлена флавонолами и флавонами, имеющими в молекуле гидроксильные группы в положении 3 и/или 5. Среди них обнаружены кверцетин, кемпферол, кастицин, апигенин, лапи-генин, лютеолин, витексин и другие. Этот факт был учтен нами при выборе спектрофотометрической методики определения суммы флавоноидов в изучаемых видах путем определения оптической плотности растворов комплексов, образующихся при взаимодействии указанной группы флавоноидов с хлоридом алюминия. Суммарное содержание флавоноидов представлено на рисунке 2.
Содержание флавоноидов определяли в спиртовых экстрактах с содержанием этанола 40, 50, 60 и 70%. Из полученных данных следует, что наиболее максимальное извлечение флавоноидов происходит в экстрагенте с содержанием этанола 60%. Наибольший выход флавоноидов в экстракт указанного состава достигается в образце листьев V. agnus-castus (3.7% от сухой биомассы). Наименьшее количество флавоноидов содержится в листьях V. №ргппа(а (0.72%).
Известно, что микроэлементы наряду с биологически активными веществами органической природы отвечают за физиологическую активность лекарственных растений. Исходя из известных фармакологических свойств галеновых препаратов на основе растений рода УЫех (наиболее изучен вид V. agnus-сазЫз) благотворно влиять на репродуктивную сферу женского и мужского организма, усиливать иммунитет, улучшать состояние сердечно-сосудистой системы, регулировать углеводный и липидный обмен, большой интерес представляет определение содержание в растительном сырье растений рода УПех таких эссенциальных элементов, как М^ (макроэлемент), и микроэлементы Бе, Си, 2п, Мп и Со.
Данные анализа эссенциальных макро- и микроэлементов в листьях четырех исследованных видов рода УПех представлены в таблице 3. Интерес представляет сравнение полученных данных о содержании эссенциальных микроэлементов, которые мы определили в плодах и биомассе V. agnus-castus, произрастающего в России на Черноморском побережье Кавказа, с имеющимися в литературе данными о содержании микроэлементов в образцах плодов этого же вида, произрастающего в Турции. Следует отметить, что содержание железа, меди, цинка и кобальта в образце турецкого происхождения составляет соответственно 93.7, 3.0, 7.0 и 0.26 мкг/г сухой биомассы, что существенно ниже, чем содержание упомянутых микроэлементов в образце плодов витекса священного, собранного в России на Черноморском побережье Кавказа.
Следует отметить, что все образцы исследованных нами витексов различных видов характеризуются повышенным содержанием железа, меди и цинка, а листья V. tripinnata - высоким содержанием кобальта. Необычно высокое содержание марганца в исследованных нами образцах можно объяснить особенностями состава почв, при этом порог токсичности по содержанию марганца в данных образцах не достигается. Высокое содержание магния во всех исследованных образцах свидетельствует о его позитивном вкладе в улучшение состояния сердечно-сосудистой системы при приеме галеновых препаратов на основе фармакопейных видов витексов. Полученные данные свидетельствует о перспективности дальнейшего изучения микроэлементного состава растений рода УЫех при разработке галеновых и новогаленовых препаратов на их основе.
Рис. 1. Содержание полифенолов в спиртовых экстрактах растений рода УЫех
Рис. 2. Суммарное содержание флавоноидов в водно-спиртовых экстрактах растений рода УЫех
Таблица 3. Содержание микроэлементов в образцах растений рода Vitex
Наименование пробы Си, мг/кг Со, мг/кг 7п, мг/кг Мп, мг/кг Ее, мг/кг Mg, мг/кг
V. canescens биомасса листьев 11.1±2.2 0.29±0.11 71±14 4900±1500 140±40 4900±1500
V. agnus-castus биомасса листьев 5.3±1.1 1.2±0.5 150±30 1700±500 140±40 1700±500
V. tripinnata биомасса коры 5.6±1.1 <0.1 48±10 1700±500 79±22 1700±500
V. canescens биомасса коры 4.0±0.8 0.27±0.11 36±7 2700±800 570±160 2700±800
V. tripinnata биомасса листьев 6.0±1.2 7.2±2.9 31±6 3100±900 110±30 3100±900
V. negundo биомасса листьев 16.0±3.0 1.2±0.5 49±10 2600±800 170±50 2600±800
V. agnus-castus биомасса семян 10.0±2.0 1.2±0.5 88±18 2400±700 180±50 2400±700
Свободно-радикальное окисление наряду с тканевым дыханием, анаэробным и микросомальным окислением является одним из составляющих всех процессов окисления в организме, объединяемых термином биологическое окисление. Известно, что в процессе тканевого дыхания, основного способа получения энергии в митохондриях в форме молекул АТФ, небольшая часть кислорода превращается в активные формы, или свободные радикалы (СР) (гидроксил радикал НО', супероксид радикал О' , перекись водорода Н2О2 и другие), которые, обладая высокой химической активностью, вызывают в организме реакции свободно-радикального окисления. Установлено, что СР принимают участие в биосинтезе простагланди-нов и нуклеиновых кислот. Окисляя чужеродные мембранные белки и липиды патогенных микроорганизмов, СР выполняют защитную функцию. Однако в условиях внешних повреждающих факторов, например, ионизирующего излучения и УФ-облучения, а также таких внутренних факторов, как высокие физические и психические нагрузки, хронический стресс, происходит избыточное образование СР, которые, разрушая мембраны клеток и ДНК в организме человека, приводят к развитию окислительного стресса и возникновению заболеваний, таких как атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, катаракта, нейродегенератив-ные заболевания, сахарный диабет и другие. Образованию избыточного количества СР в организме препятствует антиоксидантная защитная система: ферменты супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионперок-сидаза, а также витамины А, С и Е. В условиях окислительного стресса рекомендован также дополнительный прием экзогенных антиоксидантов, которые подразделяются на два типа - индукторы активности ферментов антиоксидантной защиты (например, многие вещества-адаптогены - тритерпеновые и стероидные гликозиды, экдистероиды) и вещества - ловушки свободных радикалов (витамин Е, полифенолы и биофлаваноиды растений). К настоящему времени выявлена антиоксидантная активность экстрактов многих видов растений и установлена природа веществ, ответственных за антиоксидантное действие. Вместе с тем поиск новых источников антиоксидантов остается актуальной областью исследований [28, 29].
Для оценки антирадикальной активности использовался метод, основанный на реакции БРРИ с образцом антиоксиданта. Из полученных данных, представленных на рисунке 3, следует, что все исследованные образцы листьев витексов четырех видов в 60, 70 и 96%-ном этаноле проявляют высокую антирадикальную активность, сравнимую с рутином, использованным в качестве стандартного соединения (94.2%). Наиболее выраженной антирадикальной активностью обладал образцы листьев V. agnus-castus в 96%-ном этаноле (92.2%) и V. tripinnata в 60%-ном этаноле (88.2%), что согласуется с полученными ранее данными об очень высокой антирадикальной активности экстрактов V. cannabifolia, V. agnus-castus и V. negundo, произрастающих на территории Украины (доля радикалов БРРИ, ингибированных за 30 мин, составила практически 100%) [30].
Рис. 3. Антирадикальная активность водно-спиртовых экстрактов растений рода Vitex
Поскольку все изученные экстракты листьев витексов проявили высокую антирадикальную активность независимо от содержания полифенолов и флавоноидов, это позволяет утверждать, что вклад в антирадикальное действие экстрактов вносят и другие сопутствующие биологически активные вещества, входящие в состав экстрактивных веществ, например, фитоэкдистероиды, обнаруженные ранее в видах V. canescens и V. tripinnata [31].
Заключение
Проведено сравнительное фитохимическое исследование выборочных видов рода Vitex L. (Lamiace-ae) из флоры России и Вьетнама: V. agnus-castus, V. canescens, V. negundo, V. tripinnata в качестве растительного сырья для использования в медицине. Выход экстрактивных веществ оказался наибольшим при использовании экстрагента при содержании этанола 60%-ного для образцов листьев всех четырех исследованных видов. При этом наибольшее количество экстрактивных веществ было получено из листьев V. agnus-castus. (640.8 мг/г сухой массы). Далее в порядке убывания располагаются V. negundo, V. canescens и V. tripinnata (соответственно, 464.1, 384.6, 198.0 мг/г). Качественные цветные реакции с реактивами Трим-Хилла и Шталя показали высокое содержание иридоидов в экстрактах листьев V. agnus-castus и V. negundo и не дали положительной пробы в экстрактах листьев V. tripinnata и V. canescens. Методом тонкослойной хроматографии определен качественный состав иридоидов. Наибольшее количество метаболитов иридоидной природы обнаружено в экстрактах V. agnus-castus и V. negundo. Во всех исследованных образцах, за исключением образца листьев V. tripinnata, обнаружен иридоид, который, по-видимому, можно считать хемотаксономическим маркером рода. Определено содержание полифенолов в водно-спиртовых экстрактах листьев изучаемых видов. По сравнению с другими видами наибольшее количество полифенолов содержится в экстракте листьев V. agnus-castus (300-400 мг/г), что сравнимо с содержанием полифенолов в зеленом чае (200-350 мг/г). Наименьшее количество полифенолов содержится в листьях V. canescens (100-120 мг/г). При изучении содержания флавоноидов в листьях изучаемых видов установлено, что наибольшее их количество содержится в образце листьев V. agnus-castus (от 3 до 4% от сухой биомассы) при использовании в качестве экстрагента водного этанола. Наименьшее количество флавоноидов содержится в листьях V. tripinnata (0.72%). При изучении содержания макро- и микроэлементов установлено, что все исследованные образцы витексов характеризуются повышенным содержанием эссенциальных микроэлементов - железа, меди и цинка, а листья V. tripinnata - также высоким содержанием кобальта. Необычно высокое содержание марганца во всех исследованных образцах можно объяснить особенностями состава почв. Установлена высокая антирадикальная активность всех образцов листьев изучаемых видов витексов, сравнимая с величиной антирадикальной активности для стандартного соединения - рутина. Полученный результат можно объяснить большим содержанием суммы экстрактивных веществ в листьях изучаемых видов и значительным вкладом в их состав соединений полифенольно-флавоноидного комплекса.
В будущих исследованиях следует продолжить изучение состава и количественного содержания иридоидов и других групп вторичных метаболитов (экдистероидов) в роде Vitex, что позволит установить не только хемотаксономическое значение этих соединений в изучаемом роде, но и использовать полученные закономерности в целях ботанического ресурсоведения и создания новых галеновых и новогаленовых лекарственных препаратов с ожидаемым фитохимическим составом и фармакологической активностью.
Авторы благодарят Генерального содиректора Российско-вьетнамского тропического центра доктора биологических наук А.Н. Кузнецова за помощь в организации исследований, а также руководство и сотрудников Национальных парков Кук Фыонг и Кат Тьен за помощь во время экспедиционных работ на территории Вьетнама.
Список литературы
1. Harley R. In search of Labiatae in Eastern Brazil // Vitex: A Newsletter for Lamiaceae & Verbenaceae Research. 2000. Vol. 1. Pp. 5-7.
2. Монаший перец (Vitex agnus castus, прутняк, авраамово дерево). [Электронный ресурс]. URL: https://argovera.ru/article/monashij-perec.
3. Vitex negundo [Электронный ресурс]. URL: https://evi.wikipe.dia.org/wiki/Vitex_negundo.
4. Vitex trifolia [Электронный ресурс]. URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Vitex_trfofta.
5. Vitex rotundifolia [Электронный ресурс]. URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Vitex_rotundifolia.
6. Вуттке В., Зайдлова-Вуттке Д., Ярри Г., Артымук Н. Роль Витекса священного (Vitex agnus castus) в гинекологической эндокринологии // Гинекология. 2012. Т. 14. №1. C. 8-11.
7. VCO, Lagundi as natural remedies against COVID-19 bannered in Science & Tech Week [Электронный ресурс]. URL: https://www.msn.com/en-ph/news/national/vco-lagundi-as-natural-remedies-against-covid-19-bannered-in-science-and-tech-week/ar-AAQzUVo?ocid=enph-prime-hp-me.
8. Das N., Salgueiro A.C.F., Choudhury D.R., Mandal S.K., Logesh R., Hassan Md.M., Devkota H.P. Traditional uses, phytochemistry, and pharmacology of genus Vitex (Lamiaceae) // Phytotherapy Research. 2022. Vol. 36. Pp. 571-671.
9. Rani A., Sharma A. The genus Vitex: A review // Pharmacognosy Reviews. 2013. Vol. 7. Pp. 188-198. DOI: 10.4103/0973-7847.120522.
10. Государственная фармакопея РФ, XIV изд. М., 2018. Т. 2. С. 2356
11. Siju E.N. et al. Adaptogenic active component from Myxopyrum smilacifolium // Int. J. Curr. Pharm. Res. 2017. Vol. 9. Pp. 110-113. DOI: 10.22159/ijcpr.2017v9i1.16630.
12. Деготь А.В., Литвиненко В.И., Ковалев И.П. Иридоиды из Odontites serotina (Lam) Dut. // Растительные ресурсы. 1971. Т. 7. №3. С. 390-396.
13. Литвиненко В.И., Аронова Г.Н. ИридоидыBetonicafoliosa // Химия природных соединений. 1968. №5. С. 319.
14. Cai M., Hou W., Lv Yu., Sun P. Behavior and rejection mechanisms of fruit juice phenolic compounds in model solution during nanofil-tration // Journal of Food Engineering. 2017. Vol. 195. Pp. 97-104. DOI: 10.1016/j.jfoodeng.2016.09.024.
15. Денисенко Т.А., Вишникин А.Б., Цыганок Л.П. Спектрофотометрическое определение суммы фенольных соединений в растительных объектах с использованием хлорида алюминия, 18-молибдодифосфата и реактива Фолина-Чокальтеу // Аналитика и контроль. 2015. №4. С. 373-380. DOI: 10.15826/analitika.2015.19.4.012.
16. Володин В.В., Во Тхи Хоай Т., Володина С.О., Ву Тхи Л. Антиоксидантная активность выборочных видов флоры Вьетнама // Journal of Tropical Science and Technology. 2017. №13. С. 138-146.
17. Кузина В.Н., Малашенко Е.А., Эллер К.И. Стандартизация лекарственного растительного сырья, содержащего иридоиды. Обзор // Сеченовский вестник. 2011. №3(5)-4(6). С. 31-38.
18. Das N., Salgueiro A.C.F., Choudhury D.R., Mandal S.K., Logesh R., Hassan Md.M., Devkota H.P. Traditional uses, phytochemistry, and pharmacology of genus Vitex (Lamiaceae) // Phytotherapy Research. 2022. Vol. 36. Pp. 571671. DOI: 10.1002/ptr.7330.
19. Singha M., Thrimawithana T., Shuklaa R., Adhikari B. Managing obesity through natural polyphenols: A review // Future foods. 2020. Vol. 2. Article 100002. DOI: 10.1016/j.fufo.2020.100002.
20. Truong V.-L., Jeanh W.-S. Antioxidant and anti-inflammatory roles of tea polyphenols in inflammatory bowel diseases // Food and human wellness. 2022. Vol. 11. Pp. 501-511. DOI: 10.1016/j.fshw.2021.12.008
21. Williamson G. The role of polyphenols in modern nutrition // Nutr. Bull. 2017. Vol. 42(3). Pp. 226-235. DOI: 10.1111/nbu.12278.
22. Безматерных К.В., Ширшова Т.И., Бешлей И.В., Матистов Н.В., Смирнова Г.В., Октябрьский О.Н., Володин В.В. Оценка антиоксидантной активности экстрактов Allium schoenoprasum L. и Rubus chamaemorus L., произрастающих в Республике Коми // Химико-фармацевтический журнал. 2014. Т. 48. №2. С. 36-40. DOI: 10.30906/0023-1134-2014-48-2-36-40.
23. Володин В.В., Безматерных К.В., Смирнова Г.В., Октябрьский О.Н., Алексеева Л.И., Канев В.А. Антиокси-дантные свойства экстрактов растений семейства Lamiaceae, произрастающих в Республике Коми // Известия Коми научного центра УрО РАН. 2014. №1 (17). С. 27-31.
24. Патент №2174011 (РФ). Способ получения полифенолов / Л.П. Рубчевская, О.И. Лебедева, В.М. Ушанова, Е.В. Лис, С.М. Репях. - 27.09.2001.
25. Масленников П.В., Чупахина Г.Н., Скрыпник Л.Н. Содержание фенольных соединений в лекарственных растениях ботанического сада // Известия РАН. Серия Биологическая. 2013. №5. С. 551-557. DOI: 10.7868/S000233291305010X.
26. Еремеева Н.Б., Макарова Н.В., Платонов И.А. Антиоксидантная активность экстрактов черноплодной рябины, полученных в надкритических условиях // Техника и технология пищевых производств. 2016. Т. 42. №3. С. 12-18.
27. Биохимия чая. Основные группы веществ, входящие в состав чая [Электронный ресурс]. URL: https://www.tea-terra.ru/2014/06/16/16894.
28. Sousa S., Pinto J., Rodrigues C., Giao M., Pereira C., Tavaria F., Malcata F.X., Gomes A., Pacheco M.T.B., Pintado M. Antioxidant properties of sterilized yacon (Smallanthus sonchifolius) tuber flour // Food Chemistry. 2015. Vol. 188. Pp. 504-509. DOI: 10.1016/j.foodchem.2015.04.047.
29. Еремеева Н.Б., Макарова Н.В. Изучение содержания антиоксидантов и их активности в концентрированных экстрактах из ягод клюквы (Vaccinium Oxycoccus), облепихи (Hippophae rhamnoides L.), ежевики (Rubus fruti-cosus), калины (Viburnum opulus L.) и рябины (Sorbus aucuparia L.) // Химия растительного сырья. 2021. №4. С. 157-164. DOI: 10.14258/jcprm.2021049365.
30. Лагута И.В., Ставинская О.Н., Дзюба О.И., Иванников Р.В. Антиоксидантные/восстановительные свойства экстрактов из листьев растений рода Vttex // Допов. Нац. акад. наук Укр. 2017. №5. С. 73-79.
31. Володин В.В., Ву Тхи Л., Володина С.О., Кузнецов А.Н. Экдистероидсодержащие растения национального парка Кук Фыонг (Северный Вьетнам) // Известия Коми НЦ УрО РАН. 2018. Т. 3. №35. С. 46-53.
Поступила в редакцию 18 ноября 2022 г.
После переработки 6 марта 2023 г.
Принята к публикации 15 марта 2023 г.
Для цитирования: Володина С.О., Некрасова Е.В., Ву Тхи Лоан, Очагова А.Ю., Топкова О.В., Володин В.В. Фитохимический анализ и антиоксидантная активность экстрактов растений рода Vitex L. (Lamiaceae) // Химия растительного сырья. 2023. №3. С. 171-181. DOI: 10.14258/jcprm.20230312150.
Volodina S.O.1,2*, Nekrasova Ye.V.2, Vu Thi Loan3, Ochagova A.Yu.2, Topkova O.V.2, Volodin V.V.1,4 PHYTOCHEMICAL ANALYSIS AND ANTIOXIDANT ACTIVITY OF EXTRACTS OF PLANTS OF THE GENUS VITEX L. (LAMIACEAE)
1 Institute of Biology, Federal Research Center Komi Scientific Center, Ural Branch of the Russian Academy of
Sciences, ul. Kommunisticheskaya, 28, Syktyvkar, 167000 (Russia), e-mail: svetlana20664@yandex.ru
2 St. Petersburg State Chemical and Pharmaceutical University, ul. Professora Popova, 14a, St. Petersburg, 197022
(Russia)
3 Institute of Tropical Medicine of the Russian-Vietnamese Tropical Research and Technology Center, ul. Nguyen Van
Huyen, Nghia Do, Cau Zay, Hanoi (Vietnam)
4 St. Petersburg State Forestry University named after. CM. Kirova, Institutsky per, 5, St. Petersburg, 194021 (Russia)
A comparative phytochemical study of selected species of the genus Vitex L. (Lamiaceae) (V. agnus-castus, V. canescens, V. negundo, V. tripinnata) from the flora of Russia and Vietnam out was carried. The largest amount of extractive compounds was obtained from the leaves of V. agnus-castus when extracted with 60 % ethanol. Color reactions with Trim Hill and Stahl reagents, as well as thin-layer chromatography data, showed a high content of iridoids in extracts of leaves of V. ag-nus-castus and V. negundo and their low content (or absence) in V. tripinnata and V. canescens leaf extracts. The greatest amount of polyphenols and flavonoids is contained in the extract of the leaves of V. agnus-castus. The smaller amount of polyphenols is found in the leaves of V. canescens, and least amount of flavonoids is found in the leaves of V. tripinnata. All Vitex samples studied are characterized by an increased content of essential trace elements - iron, copper and zinc, and the leaves of V. tripinnata are also high in cobalt. High antiradical activity of all leaf samples of Vitex species was established. The relationship between the content of secondary metabolites and the position of species on the molecular phylogenetic tree of the genus Vitex is shown, which makes it possible to develop a chemotaxonomic forecast for search species of this genus with an increased content of biologically active compounds of a certain class (iridoids, polyphenols, phytoecdysteroids) for further pharmacological studies
Keywords: Vitex species, medicinal plants, places of habitation, Russia, Vietnam, secondary metabolites, iridoids, polyphenols, flavonoids, trace elements, molecular-phylogenetic analysis, chemotaxonomy.
Referenses
1. Harley R. Vitex: A Newsletter for Lamiaceae & Verbenaceae Research, 2000, vol. 1, pp. 5-7.
2. Monashiy perets (Vitex agnus castus, prutnyak, avraamovo derevo). [Monk's pepper (Vitex agnus castus, twig, Abraham tree)]. URL: https://argovera.ru/article/monashij-perec. (in Russ.).
3. Vitex negundo. URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Vitex_negundo.
4. Vitex trifolia. URL: https://en.wMpedia.org/wiki/Vitex_frifolia.
5. Vitex rotundifolia. URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Vitex_rotundifolia.
6. Vuttke V., Zaydlova-Vuttke D., Yarri G., Artymuk N. Ginekologiya, 2012, vol. 14, no. 1, pp. 8-11. (in Russ.).
7. VCO, Lagundi as natural remedies against COVID-19 bannered in Science & Tech Week. URL: https://www.msn.com/en-ph/news/national/vco-lagundi-as-natural-remedies-against-covid-19-bannered-in-science-and-tech-week/ar-AAQzUVo?ocid=enph-prime-hp-me.
8. Das N., Salgueiro A.C.F., Choudhury D.R., Mandal S.K., Logesh R., Hassan Md.M., Devkota H.P. Phytotherapy Research, 2022, vol. 36, pp. 571-671.
9. Rani A., Sharma A. Pharmacognosy Reviews, 2013, vol. 7, pp. 188-198. DOI: 10.4103/0973-7847.120522.
10. Gosudarstvennaya farmakopeya RF, XIV izd. [State Pharmacopoeia of the Russian Federation, XIV ed.]. Moscow, 2018, vol. 2, pp. 2356. (in Russ.).
11. Siju E.N. et al. Int. J. Curr. Pharm. Res, 2017, vol. 9, pp. 110-113. DOI: 10.22159/ijcpr.2017v9i1.16630.
12. Degot' A.V., Litvinenko V.I., Kovalev I.P. Rastitel'nyye resursy, 1971, vol. 7, no. 3, pp. 390-396. (in Russ.).
13. Litvinenko V.I., Aronova G.N. Khimiyaprirodnykh soyedineniy, 1968, no. 5, p. 319. (in Russ.).
14. Cai M., Hou W., Lv Yu., Sun P. Journal of Food Engineering, 2017, vol. 195, pp. 97-104. DOI: 10.1016/j.jfoodeng.2016.09.024.
15. Denisenko T.A., Vishnikin A.B., Tsyganok L.P. Analitika i kontrol', 2015, no. 4, pp. 373-380. DOI: 10.15826/analitika.2015.19.4.012. (in Russ.).
16. Volodin V.V., Vo Tkhi Khoay T., Volodina S.O., Vu Tkhi L. Journal of Tropical Science and Technology, 2017, no. 13, pp. 138-146. (in Russ.).
17. Kuzina V.N., Malashenko Ye.A., Eller K.I. Sechenovskiy vestnik, 2011, no. 3(5)-4(6), pp. 31-38. (in Russ.).
18. Das N., Salgueiro A.C.F., Choudhury D.R., Mandal S.K., Logesh R., Hassan Md.M., Devkota H.P. Phytotherapy Research, 2022, vol. 36, pp. 571-671. DOI: 10.1002/ptr.7330.
19. Singha M., Thrimawithana T., Shuklaa R., Adhikari B. Future foods, 2020, vol. 2, article 100002. DOI: 10.1016/j.fufo.2020.100002.
20. Truong V.-L., Jeanh W.-S. Food and human wellness, 2022, vol. 11, pp. 501-511. DOI: 10.1016/j.fshw.2021.12.008
21. Williamson G. Nutr. Bull, 2017, vol. 42(3), pp. 226-235. DOI: 10.1111/nbu.12278.
22. Bezmaternykh K.V., Shirshova T.I., Beshley I.V., Matistov N.V., Smirnova G.V., Oktyabr'skiy O.N., Volodin V.V. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal, 2014, vol. 48, no. 2, pp. 36-40. DOI: 10.30906/0023-1134-2014-48-2-36-40. (in Russ.).
* Corresponding author.
23. Volodin V.V., Bezmaternykh K.V., Smirnova G.V., Oktyabr'skiy O.N., Alekseyeva L.I., Kanev V.A. Izvestiya Komi nauchnogo tsentra UrO RAN, 2014, no. 1 (17), pp. 27-31. (in Russ.).
24. Patent 2174011 (RU). 27.09.2001. (in Russ.).
25. Maslennikov P.V., Chupakhina G.N., Skrypnik L.N. Izvestiya RAN. Seriya Biologicheskaya, 2013, no. 5, pp. 551557. DOI: 10.7868/S000233291305010X. (in Russ.).
26. Yeremeyeva N.B., Makarova N.V., Platonov I.A. Tekhnika i tekhnologiya pishchevykh proizvodstv, 2016, vol. 42, no. 3, pp. 12-18. (in Russ.).
27. Biokhimiya chaya. Osnovnyye gruppy veshchestv, vkhodyashchiye v sostav chaya [Biochemistry of tea. The main groups of substances that make up tea]. URL: https://www.tea-terra.ru/2014/06/16/16894. (in Russ.).
28. Sousa S., Pinto J., Rodrigues C., Giao M., Pereira C., Tavaria F., Malcata F.X., Gomes A., Pacheco M.T.B., Pintado M. Food Chemistry, 2015, vol. 188, pp. 504-509. DOI: 10.1016/j.foodchem.2015.04.047.
29. Yeremeyeva N.B., Makarova N.V. Khimiya rastitel'nogo syr'ya, 2021, no. 4, pp. 157-164. DOI: 10.14258/jcprm.2021049365. (in Russ.).
30. Laguta I.V., Stavinskaya O.N., Dzyuba O.I., Ivannikov R.V. Dopov. Nats. akad. nauk Ukr., 2017, no. 5, pp. 73-79. (in Russ.).
31. Volodin V.V., Vu Tkhi L., Volodina S.O., Kuznetsov A.N. Izvestiya Komi NTS UrO RAN, 2018, vol. 3, no. 35, pp. 46-53. (in Russ.).
Received November 18, 2022 Revised March 6, 2023 Accepted March 15, 2023
For citing: Volodina S.O., Nekrasova Ye.V., Vu Thi Loan, Ochagova A.Yu., Topkova O.V., Volodin V.V. Khimiya Rastitel'nogo Syr'ya, 2023, no. 3, pp. 171-181. (in Russ.). DOI: 10.14258/jcprm.20230312150.
