CC BY
12
Original articles
Оригинальные статьи
Russian Journal of Infection and Immunity = Infektsiya i immunitet Инфекция и иммунитет
2019, vol. 9, no. 3-4, pp. 539-548 2019, Т. 9, № 3-4, с. 539-548
фенотип nk-клеток в динамике послеоперационного периода у больных перитонитом в зависимости от исхода заболевания
А.А. Савченко1, А.Г. Борисов1, И.В. Кудрявцев2,3, В.Д. Беленюк1
1ФГБНУ Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук», обособленное подразделение «НИИмедицинских проблем Севера», г. Красноярск, Россия 2 ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, СанктПетербург, Россия
3ГБОУВПО Первый СанктПетербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова МЗ РФ, СанктПетербург, Россия
Резюме. Целью исследования явилось изучение фенотипа NK-клеток в крови у больных распространенным гнойным перитонитом (РГП) в динамике послеоперационного периода в зависимости от исхода заболевания. Обследовано 48 пациентов с острыми хирургическими заболеваниями и травмами органов брюшной полости, осложнившимися РГП, в возрасте 30—63 лет. Забор крови производили перед операцией (дооперационный период), а также на 7, 14 и 21 сутки послеоперационного периода. В качестве контроля обследовано 67 относительно здоровых людей аналогичного возрастного диапазона. Исследование фенотипа NK-клеток крови проводили методом проточной цитометрии с использованием прямой иммунофлуоресценции цельной периферической крови. По средней интенсивности флуоресценции оценивались уровни экспрессии рецепторов на мембране NK-клеток. Обнаружено, что у больных с благоприятным исходом РГП в дооперационном периоде снижено содержание зрелых NK-клеток. Восстановление количества NK-клеток у данной категории больных к концу послеоперационного периода (21 сутки после операции) осуществляется за счет повышения уровней зрелых, цитотоксических и цитокин-продуцирующих клеток. При благоприятном исходе заболевания к концу послеоперационного периода среди всех исследуемых субпопуляциях NK-клеток крови повышается доля с экспрессией CDllb-рецептора и увеличивается количество CD57+ NK-клеток относительно дооперационного уровня. У больных с неблагоприятным исходом РГП в дооперационном и в течение всего послеоперационного периода выявляется снижение содержания зрелых NK-клеток как относительно показателей здоровых людей, так и пациентов с благоприятным исходом заболевания. При неблагоприятном исходе РГП к концу наблюдаемого периода повышается уровень цитотоксических NK-клеток в крови. У данной категории больных в дооперационном периоде и после операции доля зрелых NK-клеток с экспрессией CDllb снижается. В течение всего послеоперационного периода при неблагоприятном исходе заболевания понижено содержание CD57+ NK-клеток как относительно контрольного диапазона, так и количества в крови у больных с благоприятным исходом РГП. В то же время у больных с неблагоприятным исходом данного инфекционно-воспалительного заболевания на NK-клетках крови повышается уровень экспрессии CD28 и CD57. Выявленные особенности фенотипа NK-клеток крови при неблагоприятном исходе заболевания отражают нарушения в механизмах созревания и миграции NK-клеток, что, в свою очередь, определяет расстройство процессов регулирования острой воспалительной реакции при РГП.
Ключевые слова: перитонит, исход заболевания, NK-клетки, активационные маркеры, адгезионные рецепторы, дооперационный период, послеоперационное лечение.
Адрес для переписки:
Кудрявцев Игорь Владимирович
197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, 12,
ФГБНУ Институт экспериментальной медицины.
Тел.: 8 (812) 234-29-29.
E-mail: igorek1981@yandex.ru
Библиографическое описание:
Савченко А.А., Борисов А.Г., Кудрявцев И.В., Беленюк В.Д. Фенотип NK-клеток в динамике послеоперационного периода у больных перитонитом в зависимости от исхода заболевания // Инфекция и иммунитет. 2019. Т. 9, № 3-4. С. 539-548. doi: 10.15789/2220-76192019-3-4-539-548
© Савченко А.А. и соавт., 2019
Contacts:
Igor V. Kudryavtsev
197376, Russian Federation, St. Petersburg, Akademika Pavlova str., 12, Scientific Research Institute of Experimental Medicine. Phone: +7 (812) 234-29-29. E-mail: igorek1981@yandex.ru
Citation:
Savchenko A.A., Borisov A.G., Kudryavcev I.V., Belenjuk V.D. The phenotype of NK-cells in the dynamics of the post-operative period in patients with peritonitis in depending on the outcome of the disease // Russian Journal of Infection and Immunity = Infektsiya i immunitet, 2019, vol. 9, no. 3-4, pp. 539-548. doi: 10.15789/2220-7619-2019-3-4-539-548
DOI: http://dx.doi.org/10.15789/2220-7619-2019-3-4-539-548
THE PHENOTYPE OF NK-CELLS IN THE DYNAMICS OF THE POST-OPERATIVE PERIOD IN PATIENTS WITH PERITONITIS IN DEPENDING ON THE OUTCOME OF THE DISEASE
Savchenko A.A.a, Borisov A.G.a, Kudryavcev I.V.b,c, Belenjuk V.D.a
a Krasnoyarsk Science Center of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Scientific Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation
bResearch Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, Russian Federation cPavlov First Saint Petersburg State Medical University, St. Petersburg, Russian Federation
Abstract. Our study was aimed at investigating dynamic phenotype pattern of peripheral blood NK cells in patients with widespread purulent peritonitis (WPP) during postoperative period depending on disease outcome. A total of 48 patients aged 30—63 with acute surgical diseases and abdominal injuries complicated by WPP were examined. Blood sampling was performed before surgery (preoperative period) as well as on day 7, 14 and 21 during postoperative period. 40 apparently healthy age-matched subjects were included in control group. Peripheral blood NK cell phenotyping was performed by using flow cytometry with directly immunofluorescently tagged antibodies. Mean fluorescence intensity was measured to estimate expression levels of NK cell surface receptors was measured. It was found that in patients with a favorable WPP outcome during preoperative period the percentage of mature NK cells was decreased that was restored by the end of the postoperative period (21 days post-surgery) due to elevated mature, cytotoxic and cytokine-producing NK cell subsets. In addition, percentage of CD11b-positive NK cell subsets was increased upon favorable outcome by the end of postoperative period as well as frequency of CD57-positive NK cells relative to the preoperative period. However, frequency of mature NK cells with unfavorable WPP outcome vs. control vs. favorable outcome was decreased during preoperative and entire postoperative period. Moreover, amount of cytotoxic NK cells was elevated during examination period upon unfavorable WPP outcome. Further, percentage of mature CD11b-positive NK cells in this patient cohort was decreased during preoperative period and post-surgery. Percentage of CD57-positive NK cells was decreased during entire postoperative period in patients with unfavorable vs. favorable outcome vs. control group. At the same time, patients with unfavorable outcome of this infectious-inflammatory disease were shown to display upregulated expression of CD28 and CD57 markers on NK cells. such features identified in phenotype of peripheral blood NK cells in patients with unfavorable WPP outcome reflect abnormal mechanisms in NK cell maturation and migration, which, in turn, determines disturbance in events regulating acute inflammatory reaction in WPP.
Key words: peritonitis, outcome of the disease, NK-cells, activation markers, adhesion receptors, preoperative period, postoperative treatment.
Введение
NK-клетки (Natural Killer) определяются как отдельная популяция лимфоцитов, осуществляющая функции врожденного иммунитета. Основной функцией NK-клеток, которая была первоначально определена, является ци-толитическая активность без предшествующей стимуляции вирусинфицированных и некоторых опухолевых клеток [6, 7, 15]. Однако в настоящее время у NK-клеток также выделяют и функцию регуляции врожденного и адаптивного иммунитета за счет секреции широкого спектра цитокинов и хемокинов [12, 13, 16]. В частности, в исследовании Anuforo O.U.U. и соавт. (2018) показано, что при антигенинду-цированном воспалении NK-клетки осуществляют поддержание апоптоза и регулируют функциональную активность нейтрофилов [9]. Кроме того, выявление различных субпопуляций NK-клеток позволяет расширить их роль в реализации иммунного ответа [2, 16, 24]. В связи с этим появляются исследования фе-нотипического состава и особенностей функциональной активности NK-клеток при различных воспалительных заболеваниях. Так, в работе Rasid O. и соавт. (2016) показано, что при системной воспалительной реакции из-
меняется уровень экспрессии маркеров активации (CD25 и CD69) и повышается синтез ряда эффекторных молекул (IFNy, гранзим B и IL-10) [26]. Доказана регуляторная роль NK-клеток при инфекции Salmonella Typhimurium [22]. При снижении их количества активность воспалительного процесса в слизистой оболочке кишечника снижается.
Распространенный гнойный перитонит (РГП) является одним из проблемных вопросов современного здравоохранения. Несмотря на новые разработанные хирургические и медикаментозные методы лечения РГП, летальность при данном заболевании остается высокой, достигая 75,8—100% при развитии различных осложнений, например, сепсиса [1, 3, 20]. На сегодняшний день доказано, что характер течения РГП, а также механизм развития осложнений определяется не только применяемыми хирургическими методами и качеством послеоперационного лечения, но и зависит от состояния иммунной системы пациента [3, 5, 27]. Однако роль NK-клеток при РГП до сих пор изучена слабо.
Целью исследования явилось изучение фенотипа NK-клеток в крови у больных РГП в динамике послеоперационного периода в зависимости от исхода заболевания.
Материалы и методы
На базе Красноярского краевого гнойно -септического центра КГБУЗ «Краевая клиническая больница» обследовано 48 пациентов с острыми хирургическими заболеваниями и травмами органов брюшной полости, осложнившимися РГП, в возрасте 30—63 лет. Из исследования были исключены пациенты, у которых причиной РГП являлись: острый деструктивный панкреатит (панкреонекроз), тотальный мезентериальный тромбоз, онкологические заболевания, туберкулез. Объем оперативного вмешательства и количество санаций определялись лечащим врачом в зависимости от состояния больного. Забор крови производили перед операцией (дооперационный период), а также на 7, 14 и 21 сутки послеоперационного периода. В качестве контроля обследовано 67 относительно здоровых людей аналогичного возрастного диапазона.
Исследование фенотипа NK-клеток крови проводили методом проточной цитометрии с использованием прямой иммунофлуоресцен-ции цельной периферической крови с монокло-нальными антителами (Beckman Coulter, США), меченных FITC (fluorescein isothiocyanate), PE или RD1 (phycoerythrin), ECD (phycoerythrin-Texas Red-X), PC5 (phycoerythrin-cyanin 5) и PC7 (phycoerythrin-cyanin 7) в следующих панелях: CD16-FITC/CD56-PE/CD45-ECD/CD11b-PC7 и CD57-FITC/CD28-PE/CD16+56-PC5/CD45-PC7. Дополнительно по средней интенсивности флуоресценции (MFI — Mean Fluorescence Intensity) оценивались уровни экспрессии поверхностных рецепторов. Распределение антител по каналам флуоресценции проводили в соответствие с принципами формирования панелей для многоцветных цитофлуоримет-рических исследований [4]. Пробоподготовку осуществляли по стандартной методике [33]. Анализ окрашенных клеток проводили на проточном цитофлуориметре Navios (Beckman Coulter, США) центра коллективного пользования КНЦ СО РАН. В каждой пробе анализировали не менее 50 000 лимфоцитов.
Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых и в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2013 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.
Описание выборки производили с помощью подсчета медианы (Ме) и интерквартального размаха в виде 25 и 75 процентилей (Q1 и Q3). Достоверность различий между показателя-
ми независимых выборок оценивали по непараметрическому критерию Манна—Уитни (Mann—Whitney U-test). Достоверность различий в динамике лечения определяли по критерию Вилкоксона (Wilcoxon matched pairs test). Статистический анализ осуществляли в пакете прикладных программ Statistica 8.0 (StatSoft Inc., 2007).
Результаты
При исследовании фенотипа NK-клеток крови у больных с благоприятным исходом РГП обнаружено, что в дооперационном периоде у обследованных пациентов на фоне снижения абсолютного количества лимфоцитов понижается процентный уровень CD16+/56+-и CD16+CD56+-клеток (табл. 1). Количество лимфоцитов у пациентов данной группы относительно исходных значений повышается уже на 7 сутки послеоперационного периода, контрольных значений достигает на 21 сутки после операции. Процентное содержание CD16+/56+-клеток при благоприятном исходе остается сниженным относительно контрольных значений в течение двух недель послеоперационного периода и повышается до контрольных значений на 21 сутки после операции. В то же время количество CD16+CD56+-клеток у больных РГП с благоприятным исходом на 7 и 14 сутки послеоперационного лечения соответствуют контрольному уровню и более чем в 2 раза превышают его к концу наблюдаемого периода. Процентное содержание CD16+CD56 - и CD16-CD56+-клеток при благоприятном исходе заболевания повышены относительно контрольных значений на 7 и 21 сутки послеоперационного периода.
На 21 сутки послеоперационного периода в крови у больных РГП с благоприятным исходом повышается содержание CD16+CD56+CD11b+-клеток как относительно контрольного диапазона, так и исходных значений (табл. 2). Относительное содержание CD16+/56+CD57+-клеток также повышается к концу наблюдаемого периода, однако только в сравнении с исходным уровнем. Относительно контрольных значений у пациентов данной группы в период на 7 и 21 сутки после операции в крови увеличивается количество CD16+CD56 CD11b+- и CD16-CD56+CD11b+-клеток.
У больных РГП с неблагоприятным исходом РГП абсолютное содержание общих лимфоцитов в крови снижено относительно контрольных значений еще в дооперационном периоде и восстанавливается только к 21 суткам после операции (табл. 3). В течение всего периода обследования у пациентов данной группы понижено относительное количество CD16/56+-
и СВ16+СВ56+-клеток. К концу периода наблюдения повышается относительно контрольного диапазона содержание СВ16+СВ56-клеток.
Содержание СБ16+СВ56+СБ11Ъ+-клеток у больных с неблагоприятным исходом РГП понижено относительно контрольного диапазона в дооперационном периоде и до конца наблюдаемого периода (табл. 4). Кроме того, у лиц данной группы на 7 сутки послеоперационного периода снижается количество СВ16/56+СВ57+-клеток и остается на пониженном уровне до конца наблюдаемого периода.
При сравнении фенотипического состава НК-клеток у больных в зависимости от исхода РГП обнаружено, что уже в дооперационном периоде при неблагоприятном исходе заболевания в крови снижено относительное количество СБ16+/56+- (р = 0,031), СБ16+СБ56+- (р = 0,045), СБ16-СБ56+- (р = 0,028), СБ16+СБ56+СБ11Ъ+-(р = 0,036) и СБ16-СВ56+СБ11Ъ+-клетки (р = 0,048) (см. табл. 1, 2, 3 и 4). На 7 сутки послеоперационного периода у больных с неблагоприятным исходом РГП по сравнению с благоприятным исходом заболевания сохраняется пониженное содержание СБ16+СБ56+- (р = 0,028), СБ16-
СБ56+- (р = 0,047), СБ16+СБ56+СБ11Ъ+- (р = 0,007) и СБ16-СВ56+СБ11Ъ+-клеток (р = 0,024). Также в этот период наблюдения при неблагоприятном исходе снижены уровни СВ16+СВ56-СБ11Ъ+- (р = 0,027) и СБ16/56+СБ57+- (р = 0,042). На 14 сутки послеоперационного периода при неблагоприятном исходе РГП в крови понижено количество СБ16/56+- (р = 0,037), СБ16+СБ56+-(р = 0,040), СБ16+СБ56+СБ11Ъ+- (р = 0,041) и СБ16+/56+СБ57+-клеток (р = 0,038). На 21 сутки послеоперационного периода у больных с неблагоприятным исходом РГП по сравнению с благоприятным исходом заболевания СБ16+/56+- (р = 0,025), СБ16+СБ56+- (р = 0,046), СБ16+СБ56+СБ11Ъ+- (р = 0,041), СБ16+СБ56-СБ11Ъ+- (р = 0,044) и СБ16+/56+СБ57+-клеток (р = 0,027).
По сравнению с контрольными значениями НК-клетки больных с неблагоприятным исходом РГП интенсивнее экспрессируют СВ28-рецептор на 7 и 14 сутки и СВ57-маркер на 7 и 21 сутки послеоперационного периода (табл. 5). При этом выявляются различия по уровням экспрессии активационных маркеров в зависимости от исхода заболевания.
Таблица 1. Содержание NK-клеток в крови у больных с благоприятным исходом РГП в динамике послеоперационного периода (Ме, Q1 — Q3)
Table 1. The content of blood NK-cells in patients with a favorable outcome of WPP in the dynamics of the postoperative period (Ме, Q1 — Q3)
Показатели Parameters Контроль Control n = 67 Дооперационный период Preoperative period n = 27 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 27 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 27 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 27
Лимфоциты, 109/л Lymphocytes, 109/L 2,05 1,56-2,60 1,06 0,78-1,33 1,32 0,83-2,53 1,34 0,90-2,08 2,15 1,35-3,89
p! < 0,001 ft = 0,007 p2 = 0,017 ft = 0,007 p2 = 0,042 p2 = 0,005
CD16/56+, % 16,2 11,0-21,0 6,3 3,6-11,6 9,4 5,6-13,7 10,5 6,2-12,5 17,3 7,3-22,5
p! < 0,001 ft < 0,001 ft = 0,048 p2 = 0,038 p3 = 0,045
CD16+CD56+, % 7,9 5,6-14,9 5,6 2,9-10,0 8,8 5,1-13,0 9,8 3,3-22,9 16,6 7,6-22,4
p, = 0,041 ft = 0,045 p2 = 0,018 p3 = 0,046
CD16+CD56-, % 0,33 0,21-0,57 0,53 0,17-0,83 0,67 0,51-1,16 0,48 0,25-1,29 0,89 0,59-1,20
ft < 0,001 ft = 0,019
CD16CD56+, % 0,28 0,17-0,53 0,33 0,22-0,45 0,52 0,27-1,10 0,43 0,23-0,92 0,49 0,26-0,72
ft = 0,007 p2 = 0,016 ft = 0,044
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; р2 — статистически значимые различия с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде; р3 — статистически значимые различия с показателями больных на 7 сутки после операции.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery; р3 — statistically significant differences versus 7 days after surgery patients.
Таблица 2. Содержание NK-клеток, экспрессирующих активационные и адгезионные маркеры, у больных с благоприятным исходом РГП в динамике послеоперационного периода (Ме, Q1 — Q3)
Table 2. The content of NK-cells expressing activation and adhesion markers in patients with a favorable outcome of WPP in the dynamics of the postoperative period (Ме, Q1 — Q3)
Показатели Parameters Контроль Control n = 67 Дооперационный период Preoperative period n = 27 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 27 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 27 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 27
CD16CD56CDW, % 7,4 5,5-14,0 5,4 3,6-10,0 8,5 5,0-12,7 9,7 3,2-22,4 16,2 7,6-21,5
ft = 0,040 p2 = 0,022 p3 = 0,047
CD16+CD56-CD11b+, % 0,25 0,16-0,43 0,39 0,07-0,77 0,48 0,38-0,78 0,25 0,17-0,64 0,79 0,47-1,12
p, = 0,002 ft = 0,012
CD16CD56CD11b+, % 0,26 0,16-0,47 0,30 0,19-0,43 0,48 0,24-1,09 0,29 0,22-0,51 0,42 0, 26-0,64
p! = 0,008 ft = 0,041
CD16/56+CD28+, % 0,58 0,21-1,82 0,66 0,09-1,07 0,57 0,17-1,30 0,49 0,13-0,91 0,46 0,19-0,59
CD16/56+CD57+, % 2,79 1,52-4,18 2,09 1,44-3,49 2,74 1,37-5,27 2,25 1,13-5,37 3,65 2,01-7,52
p2 = 0,039 p3 = 0,047 p4 = 0,042
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; р2 — статистически значимые различия
с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде; р3 — статистически значимые различия с показателями больных на 7 сутки
после операции; р4 — статистически значимые различия с показателями больных на 14 сутки после операции.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery;
р3 — statistically significant differences versus 7 days after surgery patients; р4 — statistically significant differences versus 14 days after surgery patients.
Таблица 3. Количество NK-клеток в крови у больных с неблагоприятным исходом РГП в динамике послеоперационного периода (Ме, Q1 — Q3)
Table 1. The number of blood NK-cells in patients with an unfavorable outcome of WPP in the dynamics of the postoperative period (Ме, Q1 — Q3)
Контроль Control n = 67 Дооперационный 7 сутки после 14 сутки после 21 сутки после
Показатели период операции операции операции
Parameters Preoperative period n = 21 7 days after surgery n = 17 14 days after surgery n = 15 21 days after surgery n = 12
2,05 0,92 0,87 1,06 2,06
Лимфоциты, 109/л Lymphocytes, 109/L 1,56-2,60 0,51-1,25 0,70-1,81 0,65-1,11 1,27-2,85
ft < 0,001 ft < 0,001 ft < 0,001 p2 = 0,008 p3 = 0,014 p4 = 0,041
16,2 3,9 6,8 4,3 6,1
CD16/56+, % 11,0-21,0 3,1-4,9 2,01-16,8 2,7-5,1 2,2-12,9
ft < 0,001 ft = 0,006 ft < 0,001 ft = 0,017
7,9 2,8 3,4 4,7 4,9
CD16+CD56+, % 5,6-14,9 1,6-6,8 0,8-7,0 1,4-7,4 2,6-7,4
ft = 0,004 ft = 0,010 ft = 0,047 ft = 0,048
0,33 0,49 0,54 0,53 0,90
CD16+CD56-, % 0,20-0,56 0,36-0,84 0,20-0,97 0,44-1,17 0,49-2,38
ft = 0,046
CD16CD56+, % 0,28 0,17 0,18 0,26 0,63
0,165-0,53 0,08-0,23 0,08-0,90 0,25-0,99 0,44-1,53
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; р2 — статистически значимые различия
с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде; р3 — статистически значимые различия с показателями больных на 7 сутки
после операции; р4 — статистически значимые различия с показателями больных на 14 сутки после операции.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery;
р3 — statistically significant differences versus 7 days after surgery patients; р4 — statistically significant differences versus 14 days after surgery patients.
Уровень MFI CD28 более выражен на NK-клетках больных с неблагоприятным исходом в до- и в первые 2 недели послеоперационного периода. Более высокий уровень MFI CD57 также выявляется при неблагоприятном исходе на 7 и 21 сутки после операции.
Обсуждение
NK-клетки представляют собой гетерогенную популяцию, обладают естественной цитолической активностью и способны продуцировать цитокины и хемокины [6, 25, 34]. Иммунофенотипирование общей фракции NK-клеток и их основных субпопуляций осуществляли по маркерам CD16 и CD56. CD16 является низкоаффинным рецептором иммуноглобулинов G III типа (FcyRIII), с помощью которого осуществляется механизм клеточной цито-токсичности [2, 10, 23]. Маркер CD56 (NCAM, Leu-19, NKH-1) является гликопротеином, принадлежащим к суперсемейству иммуноглобулинов, и принимает участие в реализации межклеточных контактов [2, 21, 37]. При этом NK-клетки, активно экспрессирующие CD16 и CD56, определяются как зрелые. NK-клетки с фенотипом CD16CD56+ проявляют цитоток-сическую активность. NK-клетки с фенотипом CD16+CD56- в ответ на стимуляцию IL-2 начинают секретировать широкий спектр цито-кинов, но проявляют слабую цитолитическую активность (цитокинпродуцирующие) [2, 8, 17].
У больных РГП независимо от исхода заболевания относительное количество общих NK-клеток (CD16/56+) в крови снижено уже в до-операционном периоде, что проявляется на фоне понижения абсолютного уровня лимфоцитов в крови. К концу наблюдаемого периода содержание лимфоцитов нормализуется. В то же время количество NK-клеток до уровня контрольного диапазона восстанавливается только у больных с благоприятным исходом РГП к 21 суткам послеоперационного лечения. Более того, в течение всего периода обследования у пациентов с не-благоприятныи исходом заболевания наблюдается низкий уровень NK-клеток по сравнению с выявленным у лиц с благоприятным исходом перитонита. Низкое содержание NK-клеток при перитоните может определяться двумя основными причинами. Во-первых, это миграция клеток в зону воспаления. В частности, на примере экспериментального перитонита показано, что уже через 48 ч развития заболевания количество мигрирующих в брюшную полость NK-клеток достигает максимума [35]. И, во-вторых, в работе Shindo Y. и соавт. (2017) показано, что на фоне развития экспериментальных острых воспалительных процессов NK-клетки интенсивнее экспрес-сируют рецептор PD-1 (programmed cell death-1) [29]. Высокий уровень экспрессии PD-1 авторы связывают со снижением количества NK-клеток и других лимфоцитов в крови. Причем блокирование экспрессии данного рецептора приводило к повышению выживаемости животных.
Таблица 4. Содержание NK-клеток, экспрессирующих активационные и адгезионные маркеры, у больных с неблагоприятным исходом РГП в динамике послеоперационного периода (Ме, Q1 — Q3)
Table 4. The content of NK-cells expressing activation and adhesion markers in patients with an unfavorable outcome of WPP in the dynamics of the postoperative period (Ме, Q1 — Q3)
Показатели Parameters Контроль Control n = 67 Дооперационный период Preoperative period n = 21 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 17 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 15 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 12
CD16+CD56+CD11 b+, % 7,4 5,5-14,0 2,7 1,6-6,4 3,4 0,7-6,8 4,4 1,2-6,6 4,3 0,6-6,5
p = 0,005 p < 0,001 ft = 0,048 ft = 0,011
CD16+CD56-CD11b+, % 0,25 0,16-0,43 0,39 0,16-0,80 0,36 0,05-0,61 0,38 0,27-0,58 0,38 0,19-0,84
CD16CD56CDW, % 0,26 0,16-0,47 0,17 0,10-0,36 0,14 0,08-0,76 0,25 0,21-1,55 0,34 0,03-1,93
CD16/56+CD28+, % 0,58 0,21-1,82 0,44 0,27-1,17 0,50 0,20-2,31 0,62 0,24-0,85 0,61 0,03-6,19
CD16/56+CD57+, % 2,79 1,52-4,18 1,93 1,55-2,91 0,99 0,41-2,61 1,12 1,04-1,95 0,52 0,47-1,83
ft = 0,048 ft = 0,048 ft = 0,037 p2 = 0,040
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; р2 — статистически значимые различия
споказателями больных, находящихся в дооперационном периоде; р3 — статистически значимые различия с показателями больных на 7 сутки
после операции; р4 — статистически значимые различия с показателями больных на 14 сутки после операции.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery;
р3 — statistically significant differences versus 7 days after surgery patients; р4 — statistically significant differences versus 14 days after surgery patients.
При анализе субпопуляционного состава NK-клеток обнаружено, что в дооперационном периоде у больных РГП независимо от исхода заболевания снижение NK-клеток в крови осуществляется за счет фракции зрелых клеток. Однако у больных с благоприятным исходом РГП содержание зрелых клеток восстанавливается уже к 7 суткам после операции, а на 21 сутки наблюдения значительно превышают контрольный диапазон. У пациентов с неблагоприятным исходом заболевания уровень зрелых NK-клеток в послеоперационном периоде практически не меняется. При этом их количество при неблагоприятном исходе постоянно меньше, чем при благоприятном исходе. У больных с благоприятным исходом РГП на 7 и 21 сутки послеоперационного периода в крови повышается содержание цитотоксических и цитокин-продуцирующих NK-клеток, тогда как у больных с неблагоприятным исходом заболевания повышение содержания цитотоксических NK-клеток наблюдается только на 21 сутки после операции. Более того, в дооперационном периоде и в первую неделю после операции у данной категории больных выявляется более низкий уровень цитокинпродуцирующих NK-клеток по сравнению с их количеством у пациентов с благоприятным исходом.
Способность к реализации функции NK-клетками охарактеризована через определение количества лимфоцитов, экспрессирую-щих активационные и адгезионные маркеры.
CD11b представляет собой aM цепь интегрина Mac-1, экспрессия данного рецептора на поверхности NK-клеток увеличивает их миграционные и эффекторные возможности [28, 31]. Так, в работе Lin W. и соавт. (2017) показано, что снижение уровня экспрессии CD11b приводило к понижению функциональной активности NK-клеток и, соответственно, к снижению интенсивности воспалительной реакции [19]. У больных с благоприятным исходом РГП количество зрелых NK-клеток с экспрессией CD11b в дооперационном периоде и в первые 2 недели послеоперационного лечения соответствует контрольному уровню и значительно повышается на 21 сутки наблюдения. Содержание цитотоксических и цитокинпродуцирующих NK-клеток, экспрессирующих CD11b, имеет 2 пика повышения: на 7 и 21 сутки послеоперационного периода. При неблагоприятном исходе РГП наблюдается снижение количества зрелых NK-клеток, экспрессирующих CD11b, в дооперационном периоде и в течение всего периода послеоперационного наблюдения. Содержание цитотоксических и цитокинпро-дуцирующих NK-клеток с экспрессией CD11b у лиц данной категории соответствует контрольному уровню. Однако по сравнению с количеством, выявленным при благоприятном исходе РГП, у пациентов с неблагоприятным исходом определяется пониженный уровень основных субпопуляций NK-клеток, экспрес-сирующих данный рецептор.
Таблица 5. Уровень экспрессии (по MFI) CD28 и CD57 на поверхности NK-клеток у больных с различными исходами РГП в динамике послеоперационного периода (Ме, Q1 — Q3)
Table 5. The expression level (by MFI) of CD28 and CD57 on the surface of NK-cells in patients with different outcomes of WPP in the dynamics of the postoperative period (Ме, Q1 — Q3)
Показатели Parameters Контроль Control Дооперационный период Preoperative period 7 сутки после операции 7 days after surgery 14 сутки после операции 14 days after surgery 21 сутки после операции 21 days after surgery
Благоприятный исход РГП/Favorable outcome of WPP
MFI CD28+, o.e. 3,14 2,85-3,56 3,13 2,88-3,72 3,70 2,62-5,62 3,46 3,09-4,47 3,22 2,95-3,40
MFI CD57+, o.e. 29,35 13,01-44,30 30,31 19,70-50,30 25,70 14,00-67,10 30,80 23,85-44,50 20,75 12,28-36,15
Неблагоприятный исход РГП/Unfavorable outcome of WPP
MFI CD28+, о.е. 3,14 2,85-3,56 4,11* 3,26-5,84 6,38* 5,85-8,62 4,80* 4,59-5,39 4,35 2,99-5,70
ft = 0,002 ft = 0,005
MFI CD57+, о.е. 29,35 13,01-44,30 32,20 30,30-48,10 75,10** 25,31-123,01 39,60 26,50-72,10 69,35** 44,90-93,80
ft = 0,015 p2 = 0,041 ft = 0,045
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; р2 — статистически значимые различия с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде. *р < 0,05, **p < 0,01 — статистически значимые различия с соответствующими показателями больных с благоприятным исходом РГП.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery. *р < 0,05, **p < 0,01 — statistically significant differences with the corresponding indexes in patients with a favorable outcome of WPP.
Молекула СВ28 (Тр44) является гликопро-теином, относящимся к суперсемейству иммуноглобулинов, и участвует в формировании второго активационного сигнала, что приводит к стимуляции пролиферации клеток и синтезу цитокинов [32, 36]. Обнаружено, что у больных РГП независимо от исхода заболевания количество НК-клеток, экспрессирующих СВ28-рецептор, в течение всего периода наблюдения соответствует контрольным значениям. Однако при неблагоприятном исходе в дооперационном периоде и в течение 2 недель послеоперационного лечения наблюдается повышение экспрессии СВ28 НК-клетками как относительно контрольных значений, так и уровней, выявляемых у пациентов с благоприятным исходом РГП.
СБ57 (ННК-1, КК-1, Ьеи-7) представляет собой олигосахаридную антигенную детерминанту, экспрессируемую на различных белках, липидах и протеогликанах [18, 30]. Доказано, что НК-клетки, экспрессирующие рецептор СВ57, способны более активно синтезировать ШКу, но обладают сниженным уровнем пролиферации, что позволяет определить СВ57+ НК-лимфоциты как зрелые эффекторные клетки [6, 11, 14]. Установлено, что у больных с благоприятным исходом РГП к 21 суткам послеоперационного лечения повышается количество СВ57+ НК-клеток относительно исходного уровня. У больных с неблагоприятным исходом заболевания в послеоперационном периоде наблюдается последовательное снижение содержания НК-клеток с экспрессией СВ57-рецептора относительно контрольных значений и уровней, выявленных при благоприятном исходе РГП. В то же время уровень экспрессии СВ57 у данной категории в послеоперационном периоде выше, чем у здоровых людей и пациентов с благоприятным исходом заболевания.
В целом можно заключить, что при неблагоприятном исходе РГП в крови снижается количество НК-клеток с высоким уровнем миграционного и активационного потенциала.
Список литературы/ЯеТегепсеБ
Заключение
Таким образом, у больных РГП в зависимости от исхода заболевания обнаружены выраженные различия в фенотипе НК-клеток крови. У пациентов с благоприятным исходом РГП в доопера-ционном периоде снижено содержание зрелых НК-клеток. Восстановление количества НК-кле-ток у данной категории больных к концу послеоперационного периода (21 сутки после операции) осуществляется за счет повышения уровней зрелых, цитотоксических и цитокинпродуци-рующих клеток. При благоприятном исходе заболевания к концу послеоперационного периода во всех исследуемых субпопуляциях НК-клеток крови повышается доля с экспрессией СВ11Ъ-рецептора и увеличивается количество СВ57+ НК-клеток относительно дооперационного уровня. У больных с неблагоприятным исходом РГП в дооперационном и в течение всего послеоперационного периода выявляется снижение содержания зрелых НК-клеток, как относительно показателей здоровых людей, так и пациентов с благоприятным исходом заболевания. При неблагоприятном исходе РГП к концу наблюдаемого периода повышается уровень цитотоксических НК-клеток в крови. У данной категории больных в дооперационном периоде и после операции доля зрелых НК-клеток с экспрессией СВ11Ъ снижается. В течение всего послеоперационного периода при неблагоприятном исходе заболевания понижено содержание СВ57+ НК-клеток, как относительно контрольного диапазона, так и количества в крови у больных с благоприятным исходом РГП. В то же время у больных с неблагоприятным исходом заболевания на НК-клетках повышается уровень экспрессии СВ28 и СВ57. Выявленные особенности фенотипа НК-клеток крови при неблагоприятном исходе заболевания отражают нарушения в механизмах созревания и миграции НК-клеток, что, в свою очередь, определяет расстройство процессов регулирования острой воспалительной реакции при РГП.
1. Гасанов М.Дж. Формирование алгоритмов для определения степени тяжести эндотоксикоза при перитонитах // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2015. № 1. С. 54—57. [Gasanov M.Dzh. Formation of algorithms to determine the severity of endotoxemia in peritonitis. Khirurgiya. Zhurnal im. N.I. Pirogova = Pirogov Russian Journal of Surgery, 2015, no. 1, pp. 54—57. doi: 10.17116/hirurgia2015154-57(In Russ.)]
2. Зурочка А.В., Хайдуков С.В., Кудрявцев И.В., Черешнев В.А. Проточная цитометрия в биомедицинских исследованиях. Екатеринбург: Уральское отделение РАН, 2018. 720 с. [Zurochka A.V., Khaidukov S.V., Kudryavtsev I.V., Chereshnev V.A. Flow cytometry in biomedical research. Ekaterinburg: Ural Branch of the Russian Academy of Sciences, 2018. 720p. (In Russ.)]
3. Косинец В.А. Иммунорегулирующие свойства реамберина в комплексном лечении распространенного гнойного перитонита // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2013. № 7. С. 29—32. [Kosinets V.A. The immunoregulating action of reamberine and its use in the treatment of duffuse peritonitis. Khirurgiya. Zhurnal im. N.I. Pirogova = Pirogov Russian Journal of Surgery, 2013, no. 7, pp. 29—32. (In Russ.)]
4. Кудрявцев И.В., Субботовская А.И. Опыт измерения параметров иммунного статуса с использованием шести-цветного цитофлуоримерического анализа // Медицинская иммунология. 2015. Т. 17, № 1. С. 19—26. [Kudryavtsev I.V., Subbotovskaya A.I. Application of six-color flow cytometric analysis for immune profile monitoring. Meditsinskaya immunolo-giya = Medical Immunology (Russia), 2015, vol. 17, no. 1, pp. 19-26. doi: 10.15789/1563-0625-2015-1-19-26(In Russ.)]
5. Савченко А.А., Гвоздев И.И., Борисов А.Г., Черданцев Д.В., Первова О.В., Кудрявцев И.В., Мошев А.В. Особенности фагоцитарной активности и состояния респираторного взрыва нейтрофилов крови у больных распространенным гнойным перитонитом в динамике послеоперационного периода // Инфекция и иммунитет. 2017. Т. 7, № 1. С. 51—60. [Savchenko A.A., Gvozdev I.I., Borisov A.G., Cherdancev D.V., Pervova O.V., Kudryavcev I.V., Moshev A.V. Phagocytic activity and blood neutrophils respiratory burst state features amongst widespread purulent peritonitis patients in the postoperative period dynamics. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2017, vol. 7, no. 1, pp. 51—60. doi: 10.15789/2220-7619-2017-1-51-60(In Russ.)]
6. Савченко А.А., Модестов А.А., Мошев А.В., Тоначева О.Г., Борисов А.Г. Цитометрический анализ NK- и NKT-клеток у больных почечноклеточным раком // Российский иммунологический журнал. 2014. Т. 8 (17), № 4. С. 1012—1018. [Savchenko A.A., Modestov A.A., Moshev A.V., Tonacheva O.G., Borisov A.G. Cytometric analysis of NK- and NKT-cells in patients with renal cell carcinoma. Rossiyskiy immunologicheskiy zhurnal = Russian Immunological Journal, 2014, vol. 8 (17), no. 4, pp. 1012-1018. (In Russ.)]
7. Селькова М.С., Никитина О.Е., Селютин А.В., Михайлова В.А., Эсауленко Е.В. Особенности содержания NK-клеток у больных хроническим гепатитом С // Медицинская иммунология. 2012. Т. 14, № 4—5. С. 439—444. [Selkova M.S., Nikitina O.V., Mikhailova V.A., Esaulenko E.V., Seliutin A. Features of NK-cell contents in patients with chronic hepatitis C. Meditsinskaya immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2012, vol. 14, no. 4-5, pp. 439- 444. doi: 10.15789/1563-0625-20124-5-439-444 (In Russ.)]
8. Adib Rad H., Basirat Z., Mostafazadeh A., Faramarzi M., Bijani A., Nouri H.R., Soleimani Amiri S. Evaluation of peripheral blood NK cell subsets and cytokines in unexplained recurrent miscarriage. J. Chin. Med. Assoc., 2018, vol. 81, no. 12, pp. 10651070. doi: 10.1016/j.jcma. 2018.05.005
9. Anuforo O.U.U., Bjarnarson S.P., Jonasdottir H.S., Giera M., Hardardottir I., Freysdottir J. Natural killer cells play an essential role in resolution of antigen-induced inflammation in mice. Mol. Immunol., 2018, vol. 93, pp. 1-8. doi: 10.1016/j.molimm. 2017.10.019
10. Ben Mkaddem S., Aloulou M., Benhamou M., Monteiro R.C. Role of FcyRIIIA (CD16) in IVIg-mediated anti-inflammatory function. J. Clin. Immunol., 2014, vol. 34, suppl. 1, S46-50. doi: 10.1007/s10875-014-0031-6
11. Björkström N.K., Riese P., Heuts F., Andersson S., Fauriat C., Ivarsson M.A., Björklund A.T., Flodström-Tullberg M., Michaelsson J., Rottenberg M.E., Guzman C.A., Ljunggren H.G., Malmberg K.J. Expression patterns of NKG2A, KIR, and CD57 define a process of CD56dim NK-cell differentiation uncoupled from NK-cell education. Blood, 2010, vol. 116, no. 19, pp. 3853-3864. doi: 10.1182/blood-2010-04-281675
12. Chen C., Ai Q.D., Chu S.F., Zhang Z., Chen N.H. NK cells in cerebral ischemia. Biomed. Pharmacother., 2019, vol. 109, pp. 547554. doi: 10.1016/j.biopha. 2018.10.103
13. Crinier A., Milpied P., Escaliere B., Piperoglou C., Galluso J., Balsamo A., Spinelli L., Cervera-Marzal I., Ebbo M., Girard-Madoux M., Jaeger S., Bollon E., Hamed S., Hardwigsen J., Ugolini S., Vely F., Narni-Mancinelli E., Vivier E. High-dimensional single-cell analysis identifies organ-specific signatures and conserved NK cell subsets in humans and mice. Immunity, 2018, vol. 49, no. 5,pp. 971-986. doi: 10.1016/j.immuni. 2018.09.009
14. Damele L., Montaldo E., Moretta L., Vitale C., Mingari M.C. Effect of tyrosin kinase inhibitors on NK cell and ILC3 development and function. Front. Immunol., 2018, vol. 9, pp. 2433. doi: 10.3389/fimmu. 2018.02433
15. Gardiner C.M. NK cell function and receptor diversity in the context of HCV infection. Front. Microbiol., 2015, vol. 6, pp. 1061. doi: 10.3389/fmicb. 2015.01061
16. Gianchecchi E., Delfino D.V., Fierabracci A. NK cells in autoimmune diseases: Linking innate and adaptive immune responses. Autoimmun. Rev, 2018, vol. 17, no. 2, pp. 142-154. doi: 10.1016/j.autrev. 2017.11.018
17. Jabir N.R., Firoz C.K., Ahmed F., Kamal M.A., Hindawi S., Damanhouri G.A., Almehdar H.A., Tabrez S. Reduction in CD16/ CD56 and CD16/CD3/CD56 natural killer cells in coronary artery disease. Immunol. Invest., 2017, vol. 46, no. 5, pp. 526-535. doi: 10.1080/ 08820139.2017.1306866
18. Kared H., Martelli S., Ng T.P., Pender S.L., Larbi A. CD57 in human natural killer cells and T-lymphocytes. Cancer Immunol. Immunother, 2016, vol. 65, no. 4,pp. 441-452. doi: 10.1007/s00262-016-1803-z
19. Lin W., Man X., Li P., Song N., Yue Y., Li B., Li Y., Sun Y., Fu Q. NK cells are negatively regulated by sCD83 in experimental autoimmune uveitis. Sci. Rep, 2017, vol. 7, no. 1, pp. 12895. doi: 10.1038/s41598-017-13412-1
20. Mariage M., Sabbagh C., Yzet T., Dupont H., NTouba A., Regimbeau J.M. Distinguishing fecal appendicular peritonitis from purulent appendicular peritonitis. Am. J. Emerg. Med., 2018, vol. 36, no. 12, pp. 2232-2235. doi: 10.1016/j.ajem.2018.04.014
21. Melsen J.E., Lugthart G., Lankester A.C., Schilham M.W. Human circulating and tissue-resident CD56(bright) natural killer cell populations. Front. Immunol., 2016, vol. 7, pp. 262. doi: 10.3389/fimmu.2016.00262
22. Müller A.A., Dolowschiak T., Sellin M.E., Felmy B., Verbree C., Gadient S., Westermann A.J., Vogel J., LeibundGut-Landmann S., Hardt W.D. An NK cell perforin response elicited via IL-18 controls mucosal inflammation kinetics during salmonella gut infection. PLoS Pathog., 2016, vol. 12, no. 6: e1005723. doi: 10.1371/journal.ppat.1005723
23. Oboshi W., Watanabe T., Matsuyama Yu., Kobara A., Yukimasa N., Ueno I., Aki K., Tada T., Hosoi E. The influence of NK cellmediated ADCC: Structure and expression of the CD16 molecule differ among FcyRIIIa-V158F genotypes in healthy Japanese subjects. Human Immunol., 2016, vol. 77, iss. 2, pp. 165-171. doi: 10.1016/.humimm.2015.11.001
24. Parodi M., Raggi F., Cangelosi D., Manzini C., Balsamo M., Blengio F., Eva A., Varesio L., Pietra G., Moretta L., Mingari M.C., Vitale M., Bosco M.C. Hypoxia modifies the transcriptome of human NK cells, modulates their immunoregulatory profile, and influences NK cell subset migration. Front. Immunol., 2018, vol. 9, pp. 2358. doi: 10.3389/fimmu.2018.02358
25. Peng H., Tian Z. NK cells in liver homeostasis and viral hepatitis. Sci. China Life Sci. 2018, vol. 61, no. 12, pp. 1477-1485. doi: 10.1007/s11427-018-9407-2
26. Rasid O., Ciulean I.S., Fitting C., Doyen N., Cavaillon J.M. Local Microenvironment controls the compartmentalization of NK cell responses during systemic inflammation in mice. J. Immunol., 2016, vol. 197, no. 6, pp. 2444-2454. doi: 10.4049/jimmu-nol.1601040
27. Ren Y., Hua L., Meng X., Xiao Y., Hao X., Guo S., Zhao P., Wang L., Dong B., Yu Y., Wang L. Correlation of surface toll-like receptor 9 expression with IL-17 production in neutrophils during septic peritonitis in mice induced by E. coli. Mediators Inflamm., 2016:3296307. doi: 10.1155/2016/3296307
28. Schmid M.C., Khan S.Q., Kaneda M.M., Pathria P., Shepard R., Louis T.L., Anand S., Woo G., Leem C., Faridi M.H., Geraghty T., Rajagopalan A., Gupta S., Ahmed M., Vazquez-Padron R.I., Cheresh D.A., Gupta V., Varner J.A. Integrin CD11b activation drives anti-tumor innate immunity. Nat. Commun., 2018, vol. 9, no. 1, pp. 5379. doi: 10.1038/s41467-018-07387-4
29. Shindo Y., McDonough J.S., Chang K.C., Ramachandra M., Sasikumar P.G., Hotchkiss R.S. Anti-PD-Ll peptide improves survival in sepsis. J. Surg. Res., 2017, vol. 208,pp. 33-39. doi: 10.1016/j.jss.2016.08.099
30. Solana R., Campos C., Pera A., Tarazona R. Shaping of NK cell subsets by aging. Curr. Opin. Immunol., 2014, vol. 29, pp. 56-61. doi: 10.1016/j.coi.2014.04.002
31. Song P., Zhang J., Zhang Y., Shu Z., Xu P., He L., Yang C., Zhang J., Wang H., Li Y., Li Q. Hepatic recruitment of CD11b+Ly6C+ inflammatory monocytes promotes hepatic ischemia/reperfusion injury. Int. J. Mol. Med., 2018, vol. 41, no. 2, pp. 935-945. doi: 10.3892/ijmm.2017.3315
32. Stojanovic A., Fiegler N., Brunner-Weinzierl M., Cerwenka A. CTLA-4 is expressed by activated mouse NK cells and inhibits NK Cell IFN-y production in response to mature dendritic cells. J. Immunol., 2014, vol. 192, no. 9, pp. 4184-4191. doi: 10.4049/ jimmunol. 1302091
33. Sutherland D.R., Ortiz F., Quest G., Illingworth A., Benko M., Nayyar R., Marinov I. High-sensitivity 5-, 6-, and 7-color PNH WBC assays for both Canto II and Navios platforms. Cytometry B. Clin. Cytom., 2018, vol. 94, no. 1, pp. 1-15. doi: 10.1002/ cyto.b.21626
34. Tahrali I., Kucuksezer U.C., Altintas A., Uygunoglu U., Akdeniz N., Aktas-Cetin E., Deniz G. Dysfunction of CD3-CD16+CD56dim and CD3-CD16-CD56bright NK cell subsets in RR-MS patients. Clin. Immunol., 2018, vol. 193, pp. 88-97. doi: 10.1016/j. clim. 2018.02.005
35. Tomasdottir V., Vikingsson A., Hardardottir I., Freysdottir J. Murine antigen-induced inflammation — a model for studying induction, resolution and the adaptive phase of inflammation. J. Immunol. Methods, 2014, vol. 415, pp. 36-45. doi: 10.1016/ j.jim.2014.09.004
36. Trojan K., Zhu L., Aly M., Weimer R., Bulut N., Morath C., Opelz G., Daniel V. Association of peripheral NK cell counts with Helios(+) IFN-y(-) T(regs) in patients with good long-term renal allograft function. Clin. Exp. Immunol., 2017, vol. 188, no. 3, pp. 467-479. doi: 10.1111/cei.12945
37. Van Acker H.H., Capsomidis A., Smits E.L., Van Tendeloo V.F. CD56 in the immune system: more than a marker for cytotoxicity? Front. Immunol., 2017, vol. 8, pp. 892. doi: 10.3389/fimmu.2017.00892
Авторы:
Савченко А.А., д.м.н., профессор, руководитель лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии ФГБНУ Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный центр Сибирского отделения РАН», обособленное подразделение «НИИ медицинских проблем Севера», г. Красноярск, Россия;
Борисов А.Г., к.м.н., ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии ФГБНУ Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный центр Сибирского отделения РАН», обособленное подразделение «НИИ медицинских проблем Севера», г. Красноярск, Россия;
Кудрявцев И.В., к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории общей иммунологии ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия; доцент кафедры иммунологии ФГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; Беленюк В.Д., младший научный сотрудник лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии ФГБНУ Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный центр Сибирского отделения РАН», обособленное подразделение «НИИ медицинских проблем Севера», г. Красноярск, Россия.
Поступила в редакцию 05.03.2019 Принята к печати 20.05.2019
Authors:
Savchenko A.A., PhD, MD (Medicine), Head of the Cellular-Molecular Physiology and Pathology Laboratory, Federal Research Center «Krasnoyarsk Science Center» of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Scientific Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation; Borisov A.G., PhD (Medicine), Leading Researcher, Cellular-Molecular Physiology and Pathology Laboratory, Federal Research Center «Krasnoyarsk Science Center» of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Scientific Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation; Kudryavtsev I.V., PhD (Biology), Senior Researcher, Laboratory of Immunology, Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, Russian Federation; Associate Professor, Department of Immunology, Pavlov First St. Petersburg State Medical University, St. Petersburg, Russian Federation;
Belenyuk V.D., Junior Researcher, Cellular-Molecular Physiology and Pathology Laboratory, Federal Research Center «Krasnoyarsk Science Center» of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Scientific Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation.
Received 05.03.2019 Accepted 20.05.2019
