CC BY
12
Original articles
Оригинальные статьи
Russian Journal of Infection and Immunity = Infektsiya i immunitet Инфекция и иммунитет
2019, vol. 9, no. 1, pp. 115-127 2019, Т. 9, № 1, с. 115-127
ОСОБЕННОСТИ ФЕНОТИПА Т-ЛИМФОЦИТОВ В ДИНАМИКЕ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОГО ПЕРИОДА У БОЛЬНЫХ ПЕРИТОНИТОМ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИСХОДА ЗАБОЛЕВАНИЯ
A.А. Савченко1,2, А.Г. Борисов1,3, Д.В. Черданцев3, О.В. Первова3, И.В. Кудрявцев4,
B.Д. Беленюк1
1ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук, обособленное подразделение НИИ медицинских проблем Севера, г. Красноярск, Россия
2 ФГАОУВО Сибирский федеральный университет, г. Красноярск, Россия
3 ФГБОУ ВО Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России, г. Красноярск, Россия
4 ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия
Резюме. Целью исследования явилось изучение фенотипического состава Т-лимфоцитов крови в динамике послеоперационного периода у больных распространенным гнойным перитонитом (РГП) в зависимости от исхода заболевания. Обследовано 36 пациентов с острыми хирургическими заболеваниями и травмами органов брюшной полости, осложнившимися РГП, в возрасте 30—65 лет. Забор крови производили перед операцией (дооперационный период), а также на 7, 14 и 21 сутки послеоперационного периода. В качестве контроля обследовано 40 относительно здоровых людей аналогичного возрастного диапазона. Исследование фенотипа Т-лимфоцитов крови проводили методом 5-цветной проточной цитометрии с использованием прямой имму-нофлуоресценции цельной периферической крови. По средней интенсивности флуоресценции оценивались уровни экспрессии поверхностных рецепторов. Установлено, что в дооперационном периоде у больных РГП независимо от исхода заболевания на фоне снижение абсолютного количества общих лимфоцитов в крови повышается содержание Т-клеток. Т-лимфоциты больных РГП значительно интенсивнее по сравнению с клетками здоровых людей экспрессируют рецепторы СБ28 и СБ62Ь. В дооперационном периоде и в течение двух недель послеоперационного лечения при благоприятном исходе РГП выявляется повышенное количество СБ62Ь+ Т-лимфоцитов по сравнению с показателями больных с неблагоприятным исходом заболевания. Другими особенностями фенотипического состава Т-лимфоцитов у больных с благоприятным исходом РГП является повышение Т-регуляторной активности, которое проявляется как в дооперационном периоде, так и в течение двух недель послеоперационного лечения. При благоприятном исходе РГП уже на 14 сутки лечения наблюдается повышение количества активированных цитотоксических Т-лимфоцитов, которое при неблагоприятном исходе наблюдается только на 21 сутки лечения. Предполагается, что Т-клеточная супрессия и активация цитотоксических Т-клеток являются факторами, определяющими снижение интенсивности воспалительных процессов при РГП и, тем самым, повышающими уровень благоприятного исхода заболевания. При неблагоприятном исходе заболевания послеоперационная терапия слабее или с запаздыванием
Адрес для переписки:
Кудрявцев Игорь Владимирович
197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, 12,
ФГБНУ Институт экспериментальной медицины.
Тел.: 8 (812) 234-29-29.
E-mail: igorek1981@yandex.ru
Библиографическое описание:
Савченко А.А., Борисов А.Г., Черданцев Д.В., Первова О.В., Кудрявцев И.В., Беленюк В.Д. Особенности фенотипа Т-лимфоцитов в динамике послеоперационного периода у больных перитонитом в зависимости от исхода заболевания // Инфекция и иммунитет. 2019. Т. 9, № 1. С. 115-127. doi: 10.15789/2220-7619-2019-1-115-127
© Савченко А.А. и соавт., 2019
Contacts:
Igor V. Kudryavtsev
197376, Russian Federation, St. Petersburg, Akademika Pavlova str., 12, Scientific Research Institute of Experimental Medicine. Phone: +7 (812) 234-29-29. E-mail: igorek1981@yandex.ru
Citation:
Savchenko A.A., Borisov A.G., Cherdantsev D.V., Pervova O.V., Kudryavtsev I.V., Belenyuk V.D. Peculiarities of the phenotype of T-lymphocytes in the dynamics of the postoperating period in patients with peritonite depending on the outcome of disease // Russian Journal of Infection and Immunity = Infektsiya i immunitet, 2019, vol. 9, no. 1, pp. 115-127. doi: 10.15789/22207619-2019-1-115-127
DOI: http://dx.doi.org/10.15789/2220-7619-2019-1-115-127
влияет на динамику исследуемых показателей, чем при благоприятном исходе. При благоприятном исходе РГП повышение содержания СБ3+СБ57+-клеток наблюдается уже со второй недели лечения и более выражено, тогда как при неблагоприятном исходе РГП увеличение уровня данных клеток наблюдается только на третьей недели лечения. Однако уровень экспрессии CD57 на Т-лимфоцитах на всем протяжении обследования более выражен при неблагоприятном исходе РГП.
Ключевые слова: перитонит, исход заболевания, Т-лимфоциты, Т-регуляторные клетки, цитотоксические Т-лимфоциты, дооперационный период, послеоперационное лечение.
PECULIARITIES OF THE PHENOTYPE OF T-LYMPHOCYTES IN THE DYNAMICS OF THE POSTOPERATING PERIOD IN PATIENTS WITH PERITONITE DEPENDING ON THE OUTCOME OF DISEASE
Savchenko A.A.a,b, Borisov A.G.a,c, Cherdancev D.V.c, Pervova O.V.c, Kudryavcev I.V.d
a Federal Research Center "Krasnoyarsk Science Center " of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Scientific Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation b Siberian Federal University, Krasnoyarsk, Russian Federation
cKrasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.F. Voino-Yasenetsky, Krasnoyarsk, Russian Federation dResearch Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, Russian Federation
Abstract. The aim of the study was to investigate the phenotype of blood T-lymphocytes in the dynamics of the postoperative period in patients with widespread purulent peritonitis (WPP) depending on the outcome of the disease. A total of 36 patients aged 30—65 with acute surgical diseases and abdominal injuries complicated by WPP years were examined. Blood sampling was performed before the operation (preoperative period), and also on the 7th, 14th and 21st day of the postoperative period. 40 relatively healthy people of the same age range were examined as a control. Study of the phenotype of blood T-lymphocytes was carried out by the method of 5-color flow cytometry using direct immunofluorescence of whole peripheral blood. Mean levels of fluorescence were used to evaluate the expression levels of surface receptors. It was established that in the preoperative period in patients with WPP regardless of the outcome of the disease against the background of a decrease in the absolute amount of total lymphocytes in the blood the content of T cells increases. The T-lymphocytes of patients with WPP are significantly more intense expressing the CD28 and CD62L receptors than the cells of healthy people. In the preoperative period and within two weeks of postoperative treatment with a favorable outcome of the WPP an increased amount of CD62L+T-lymphocytes is detected in comparison with the indices of patients with an unfavorable outcome of the disease. Other features of the phenotypic composition of T-lymphocytes in patients with a favorable outcome of WPP is an increase in T-regulatory activity which manifests itself both in the preoperative period and within two weeks of postoperative treatment. With a favorable outcome of WPP an increase in the number of activated cytotoxic T-lymphocytes is observed on the 14th day of treatment which with an unfavorable outcome is observed only on the 21st day of treatment. It is assumed that T-cell suppression and activation of cytotoxic T cells are the factors determining a decrease in the intensity of inflammatory processes in WPP and thereby increasing the level of the favorable outcome of the disease. In case of an unfavorable outcome of the disease, postoperative therapy has a weaker or delayed effect on the dynamics of the studied parameters than with a favorable outcome. With a favorable outcome of WPP an increase in the CD3+CD57+cell count is observed already from the second week of treatment and is more pronounced whereas in the case of an adverse outcome of WPP an increase in the level of these cells is observed only at the third week of treatment. However, the level of expression of CD57 on T-lymphocytes is more pronounced throughout the course of the examination with an unfavorable outcome of WPP.
Key words: peritonitis, outcome of the disease, T-lymphocytes, T-regulatory cells, cytotoxic T-lymphocytes, preoperative period, postoperative treatment.
Введение
Распространенный гнойный перитонит (РГП) остается одной из нерешенных проблем современной абдоминальной хирургии. В подавляющем большинстве случаев РГП является осложнением ряда острых хирургических заболеваний или травм живота (острый аппендицит, перфоративная язва желудка и двенадцатиперстной кишки, острый гангренозный холецистит, панкреонекроз, перфорация полых органов, их повреждение при травме и др.) [4,
19, 27]. До настоящего времени летальность при этом грозном осложнении воспалительных заболеваний и травм органов брюшной полости удерживается на уровне 20—30%, достигая наиболее высоких цифр (50% и более) при развитии полиорганной недостаточности (ПОН) и септического шока (СШ), профилактика и купирование которых являются ключевыми в лечении перитонита [13, 14].
Доказано, что само течение инфекционного процесса в брюшной полости, характер и особенности развития гнойных послеоперацион-
ных осложнений определяются не только тяжестью основного заболевания, адекватностью выполненного оперативного вмешательства и полнотой проводимой интенсивной терапии, но и функциональным состоянием иммунной системы [1, 10, 30]. Установлено, что повышение функциональной активности В-лимфоцитов приводит к затруднению развития антигенза-висимого перитонита у мышей в эксперименте [25]. В работе Confer B.D. et al. (2013) показано, что частота спонтанного развития бактериальных перитонитов у больных циррозом печени была выше при сниженном количестве и функциональной активности CD4+-лимфоцитов [7]. С помощью кластерного анализа иммунологических показателей обнаружено, что у больных РГП наиболее часто выделяются иммуноде-фицитный (большинство показателей имму-нограммы ниже нормы) и ареактивный (большинство показателей иммунограммы соответствуют норме) иммунотипы [1].
Системная иммунодепрессия нарастает параллельно с манифестацией клинических признаков РГП. У больных РГП уже в доопераци-онном периоде в периферической крови повышено содержание CD62L+-, HLA-DR- и CD64+-нейтрофилов [5]. Высокий уровень содержания CD62L+-клеток сохраняется в течение 24 суток послеоперационного периода, тогда как количество HLA-DR- и CD64+-нейтрофилов на 24 сутки послеоперационного периода снижается до уровня нормы. Обсуждается, что тяжелая дисфункция иммунной системы является не просто ранним и надежным признаком развивающейся ПОН, а во многом определяет ее возникновение и последующее прогресси-рование [1, 2]. Однако состояние иммунной системы у больных РГП в динамике заболевания исследовано недостаточно, в том числе и в зависимости от исхода заболевания. Особенно актуально исследовать состояние Т-клеточного иммунитета, так как Т-лимфоциты вовлечены не только в эффекторные процессы при перитонитах, но и участвуют в регуляции воспаления, интенсивность которого во многом определяет эффективность лечения и исхода заболевания [6, 24].
Таким образом, целью исследования явилось изучение фенотипического состава Т-лимфо-цитов крови в динамике послеоперационного периода у больных РГП в зависимости от исхода заболевания.
Материалы и методы
На базе Красноярского краевого гнойно-септического центра КГБУЗ Краевая клиническая больница обследовано 36 пациентов с острыми хирургическими заболеваниями и травмами
органов брюшной полости, осложнившимися РГП, в возрасте 30—65 лет. Из исследования были исключены пациенты, у которых причиной РГП являлись: острый деструктивный панкреатит (панкреонекроз), тотальный мезен-териальный тромбоз, онкологические заболевания, туберкулез. Объем оперативного вмешательства и количество санаций определялись лечащим врачом в зависимости от состояния больного. Забор крови производили перед операцией (дооперационный период), а также на 7, 14 и 21 сутки послеоперационного периода. В качестве контроля обследовано 40 относительно здоровых людей аналогичного возрастного диапазона.
Исследование фенотипа Т-лимфоцитов крови проводили методом проточной цитометрии с использованием прямой иммунофлуоресцен-ции цельной периферической крови с монокло-нальными антителами (Beckman Coulter, США), меченных FITC (fluorescein isothiocyanate), PE или RD1 (phycoerythrin), ECD (phycoerythrin-Texas Red-X), PC5 (phycoerythrin-cyanin 5) и PC7 (phycoerythrin-cyanin 7) в следующих панелях: CD62L-FITC/CD127-PE/CD3-ECD/CD25-PC5/CD4-PC7 и CD57-FITC/CD28-PE/CD3-ECD/CD62L-PC5/CD45-PC7. Дополнительно по средней интенсивности флуоресценции (MFI — Mean Fluorescence Intensity) оценивались уровни экспрессии поверхностных рецепторов. Распределение антител по каналам флуоресценции проводили в соответствие с принципами формирования панелей для многоцветных цитофлуориметрических исследований [3]. Пробоподготовку осуществляли по стандартной методике [16]. Анализ окрашенных клеток проводили на проточном цито-флуориметре Navios (Beckman Coulter, США) центра коллективного пользования КНЦ СО РАН. В каждой пробе анализировали не менее 50 000 лимфоцитов.
Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых и в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2013 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.
Описание выборки производили с помощью подсчета медианы (Ме) и интерквартального размаха в виде 25 и 75 процентилей (Q1 и Q3). Достоверность различий между показателями независимых выборок оценивали по непараметрическому критерию Манна—Уитни (Mann—Whitney U-test). Достоверность различий в динамике лечения определяли по критерию Вилкоксона (Wilcoxon matched pairs test).
Статистический анализ осуществляли в пакете прикладных программ Statistica 8.0 (StatSoft Inc., 2007).
Результаты
У больных с благоприятным исходом РГП в дооперационном периоде обнаружено снижение абсолютного количества лимфоцитов в крови (табл. 1). На 7 и 14 сутки наблюдается повышение содержания лимфоцитов, которое к 21 суткам послеоперационного периода достигает контрольного диапазона. До операции и на всем протяжении послеоперационного периода у пациентов с благоприятным
исходом заболевания сохраняется повышенное относительное количество СВ3+-клеток. При этом процентный уровень СВ3+СВ4+-и СВ3+СВ62Ь+-лимфоцитов у пациентов данной группы повышен уже в дооперационном периоде, а к 21 суткам послеоперационного периода снижается как относительно контрольного диапазона, так и исходных значений. Относительное содержание СВ3+СВ8+-клеток в крови у больных с благоприятным исходом РГП относительно контрольного уровня и исходных значений повышается только на 21 сутки послеоперационного периода. К концу периода обследования при благоприятном исходе заболевания, как относительно контрольного
Таблица 1. Содержание CD3+-лимфоцитов в крови у больных с благоприятным исходом РГП в динамике лечения [Ме (Q1 — Q3)]
Table 1. The number of CD3+-lymphocytes in blood in patients with favorable outcome of WPP in treatment dynamics [Ме (Q1 - Q3)]
Показатели Parameters Контроль Control n = 40 Больные РГП/WPP patients
Дооперационный период Preoperative period n = 21 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 21 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 21 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 21
Лимфоциты, 109/л Lymphocyte, 109/l 2,05 (1,56-2,60) 1,06 (0,78-1,33) p < 0,001 1,32 (0,83-2,53) p, = 0,007 p2 = 0,017 1,34 (0,90-2,08) p, = 0,007 2,15 (1,35-3,89)
CD3+, % 68,0 (62,5-74,0) 76,1 (71,7-82,0) p < 0,001 72,6 (67,2-81,5) p = 0,009 80,0 (70,0-82,6) p = 0,003 76,9 (69,9-89,9) p, = 0,042
CD3+CD4+, % 43,1 (35,0-48,0) 54,0 (45,7-60,5) p1 < 0,001 45,1 (37,7-51,6) 46,7 (39,8-50,6) 31,5 (28,5-37,5) p, = 0,029 p2 = 0,008
CD3+CD8+, % 27,0 (21,2-32,0) 21,2 (14,8-28,4) 22,2 (19,7-31,5) 37,2 (23,0-40,3) 41,0 (32,6-42,0) ft = 0,045 p2 = 0,007
CD3+CD25+, % 4,9 (2,5-11,1) 7,4 (4,5-10,2) 5,5 (4,1-10,6) 6,3 (4,1-13,8) 4,9 (4,6-9,8)
CD3CD28+, % 65,0 (56,1-71,4) 68,7 (62,4-75,9) 56,2 (48,4-72,0) 54,3 (49,3-69,1) 36,1 (32,1-38,2) ft = 0,045 p2,3,4 < 0,008
CD3+CD57+, % 8,5 (4,8-12,3) 8,5 (4,5-16,1) 11,3 (8,2-18,8) 20,1 (11,3-22,6) p = 0,009 p2 = 0,048 p3 = 0,049 27,5 (20,8-29,2) ft = 0,002 p2 = 0,027 p3 = 0,026
CD3+CD62L+, % 42,2 (36,7-51,0) 51,2 (47,2-55,0) p, = 0,034 48,9 (34,2-54,6) 46,7 (41,0-52,5) 32,5 (27,2-36,0) ft = 0,008 p2 = 0,014
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; p2 — статистически значимые различия с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде; p3 — статистически значимые различия с показателями больных на 7 сутки после операции.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery; р3 — statistically significant differences versus 7 days after surgery patients.
уровня, так и исходных значений в крови у обследованных пациентов понижается относительное количество СВ3+СВ28+-лимфоцитов. Процентное содержание СВ3+СВ57+-клеток у больных с благоприятным исходом РГП повышается на 14 сутки обследования относительно контрольного уровня и значений, выявленных у данных лиц в дооперационном периоде и на 7 сутки послеоперационного периода.
Абсолютное содержание СВ3+СВ4+-лимфо-цитов у больных с благоприятным исходом РГП в дооперационном периоде в 1,3 раза ниже, чем у лиц контрольной группы (табл. 2), начиная с 7 суток после операции, их количество повышается до контрольных значений. Процентное содержание СВ3+СВ4+СВ62Ь+-клеток у пациентов данной группы в доопера-ционном периоде и на 7 сутки обследования повышено относительно контрольного диапазона. На 14 сутки относительное количество
данной фракции Т-лимфоцитов остается повышенным относительно контрольных значений, но снижается по сравнению с исходным уровнем. На 21 сутки лечения у больных с благоприятным исходом РГП выявляется снижение количества СВ3+СВ4+СВ62Ь+-лимфоцитов относительно контрольного и исходного уровней. Относительный уровень СВ3+СВ4+СВ1271ож СБ25Ш8Ь- и СВ3+СВ4+СВ1271ожСВ25ш8ЬСВ621+-клеток у больных с благоприятным исходом РГП в дооперационном периоде соответственно в 2,2 и 1,9 раз выше, чем у лиц контрольной группы. На 7 и 14 сутки лечения их количество остается повышенным, но на 21 сутки послеоперационного периода снижается до уровня контрольных значений. Абсолютное количество СВ3+СВ8+-лимфоцитов у больных с благоприятным исходом РГП в дооперационном периоде понижено относительно контрольного уровня в 2,6 раза. На 7 сутки лечения их пониженное
Таблица 2. Содержание CD4 - и CDe-лимфоцитов в крови у больных с благоприятным исходом РГП в динамике лечения [Ме (Q1 — Q3)]
Table 2. The number of CD4+- и CD8+-lymphocytes in blood in patients with favorable outcome of WPP in treatment dynamics [Ме (Q1 — Q3)]
Показатели Parameters Контроль Control n = 40 Больные РГП/WPP patients
Дооперационный период Preoperative period n = 21 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 21 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 21 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 21
CD3CD4+, 109/l 0,83 (0,56-1,16) 0,62 (0,40-0,72) p, = 0,002 0,74 (0,35-1,15) 0,61 (0,42-0,98) 0,74 (0,50-1,08)
CD3CD4CD62L+, % 29,4 (24,6-35,9) 53,3 (39,7-83,1) p < 0,001 53,0 (36,2-78,1) ft < 0,001 38,1 (30,8-77,8) ft = 0,036 p2 = 0,010 p3 = 0,008 21,3 (18,7-27,9) ft = 0,039 p2,3 < 0,001
CD3CD4CD127Low CD25High, % 5,1 (4,0-6,6) 11,2 (7,4-15,5^ < 0,001 9,4 (4,8-15,8)p1 = 0,001 6,4 (5,0-17,1)ft = 0,026 3,2 (2,8-4,1) p2,3 < 0,001 p4 = 0,034
CD3CD4CD127Low CD25HighCD62L+, % 3,8 (2,9-4,9) 7,3 (5,8-10,5) p1 < 0,001 6,5 (4,1-8,7) ft = 0,001 5,7 (4,0-11,6) p1 = 0,027 2,6 (2,3-3,4) p2,3 < 0,001 p4 = 0,025
CD3CD8+, 109/l 0,55 (0,37-0,80) 0,21 (0,13-0,33) ft = 0,013 0,30 (0,21-0,35) ft = 0,002 0,43 (0,20-0,86) 0,90 (0,54-1,63) ft = 0,025 p2,3 < 0,001
CD3 CD8 CD11b+, % 24,9 (20,2-29,7) 21,2 (14,8-28,3) 22,0 (19,7-31,4) 37,1 (22,6-40,2) ft = 0,041 p2 = 0,046 40,7 (32,6-41,8) ft = 0,018 p2 = 0,007 p3 = 0,010
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; p2 — статистически значимые различия
с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде; p3 — статистически значимые различия с показателями больных на 7 сутки
после операции; p4 — статистически значимые различия с показателями больных на 14 сутки после операции.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery;
р3 — statistically significant differences versus 7 days after surgery patients; р4 — statistically significant differences versus 14 days after surgery patients.
содержание сохраняется, но на 21 сутки лечения количество СВ3+СВ8+-клеток повышается как относительно контрольного уровня (в 1,6 раза), так и исходного (в 4,3 раза). Процентное содержание СВ3+СВ8+СВ11Ъ+-лимфоцитов при благоприятном исходе РГП в дооперационном периоде и на 7 сутки после операции соответствует контрольным значениям, но на 14 и 21 сутки лечения наблюдается значительно повышение их количества.
При исследовании уровней экспрессии активационных и адгезионных рецепторов на поверхности Т-лимфоцитов обнаружено, что у больных с благоприятным исходом РГП в дооперационном периоде уровень экспрессии СВ28 на СВ3+-клетках выше, чем у лиц контрольной группы, но уже с 7 суток лечения уровень экспрессии данного маркера снижается до контрольных значений (табл. 3). Уровень экспрессии СВ57 на СВ3+-лимфоцитах при благоприятном исходе РГП в дооперационном периоде и первые две недели послеоперационного периода соответствует контрольному диапазону, тогда как на 21 сутки лечения наблюдается значительное понижение уровня экспрессии данного маркера как относительно контрольных, так и исходных значений. Уровень
экспрессии СВ62Ь на СВ3+-клетках у больных данной группы повышен относительно контрольного уровня на все протяжении обследования. В то же время, уровень экспрессии СВ62Ь на СВ3+СВ4+- и Тге§-клетках в доопера-ционном периоде соответствует контрольным диапазонам, тогда как с 7 и по 21 сутки лечения уровень экспрессии данного маркера значительно превышает контрольные значения.
Абсолютное количество лимфоцитов в периферической крови у больных с неблагоприятным исходом РГП в дооперационном периоде и в первые две недели послеоперационного лечения понижено по сравнению с контрольным уровнем, на 21 сутки лечения их содержание восстанавливается (табл. 4). Относительное количество СВ3+-лимфоцитов у больных данной группы повышено относительно контрольных значений только в дооперационном периоде. В то же время, процентное содержание СБ3+СБ4+- и СБ3+СБ28+-клеток в доопераци-онном периоде и начале послеоперационного лечения соответствует уровням, выявляемым у лиц контрольной группы, но на 21 сутки лечения понижается относительно контрольных значений и исходных уровней. Относительное количество СВ3+СВ57+-лимфоцитов при не-
Таблица 3. Уровни экспрессии некоторых CD-рецепторов на Т-лимфоцитах крови у больных с благоприятным исходом РГП в динамике лечения [Ме (Q1 — Q3)]
Table 3. Levels of some CD-receptors expression on blood T-lymphocytes in patients with favorable outcome of WPP in treatment dynamics [Ме (Q1 — Q3)]
Показатели Parameters Контроль Control n = 40 Больные РГП/WPP patients
Дооперационный период Preoperative period n = 21 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 21 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 21 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 21
MFI CD28 на CD3+-клетках, о.е. MFI CD28 on CD3+-cells, r.u. 12,00 (10,00-13,70) 16,40 (12,80-18,50) p < 0,001 14,00 (11,00-18,30) p2 = 0,028 13,45 (11,95-15,05) 13,65 (11,15-15,85)
MFI CD57 на CD3+-клетках, о.е. MFI CD57 on CD3+-cells, r.u. 35,25 (24,10-47,90) 44,00 (20,70-63,60) 21,40 (12,30-66,70) 34,10 (15,90-41,70) 21,00 (8,27-33,65) ft = 0,029 p2 = 0,038
MFI CD62L на CD3+-клетках, о.е. MFI CD62L on CD3+-cells, r.u. 3,47 (2,91-4,44) 5,15 (3,18-6,52) p = 0,042 4,74 (4,01-6,31) ft = 0,024 5,09 (4,64-6,63) ft = 0,021 5,46 (4,64-6,62) ft = 0,039
MFI CD62L на CD3+CD4+-клетках, о.е. MFI CD62L on CD3+CD4+-cells, r.u. 3,26 (2,61-4,46) 4,83 (3,64-6,08) ft = 0,027 4,50 (3,79-5,92) ft = 0,018 4,75 (3,97-6,20) ft = 0,017 5,38 (4,95-6,51) ft = 0,030
MFI CD62L на Treg, о.е. MFI CD62L on Tger, r.u. 3,21 (2,66-4,39) 4,28 (2,96-5,41) 4,50 (3,77-5,67) ft = 0,008 4,61 (3,44-5,89) ft = 0,029 4,96 (4,50-6,30) ft = 0,032
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; р2 — статистически значимые различия с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery.
благоприятном исходе РГП повышается относительно контрольного диапазона на 21 сутки послеоперационного периода, тогда как процентное содержание СВ3+СВ62Ь+-клеток в этот же период снижается.
При сравнении содержания СВ3+-лимфо-цитов, экспрессирующих активационные и адгезионные маркеры, у больных в зависимости от исхода РГП обнаружено, что при неблагоприятном исходе заболевания в крови на 14 и 21 сутки лечения понижено относительное количество СВ3+СВ57+-клеток (р = 0,025 и р = 0,034, соответственно). Также при неблагоприятном исходе РГП в периферической крови больных в дооперационном периоде и на всем протяжении послеоперационного периода снижено процентное содержание СВ3+СВ62Ь+-клеток: перед операцией — р = 0,039, на 7 сутки лечения — р = 0,045, на 14 сутки — р = 0,044 и на 21 сутки — р = 0,040.
При неблагоприятном исходе РГП в периферической крови обследованных пациентов в дооперационном периоде и по 14 сутки послеоперационного лечения снижается абсолютное количество СВ3+СВ4+- и СВ3+СВ8+-лимфоцитов, уровень которых на 21 сутки лечения повышается до контрольных значений (табл. 5). В конце периода обследования у данной категории больных относительно контрольных значений снижается процентное содержание СВ3+СВ4+СВ1271™СВ25Ш811-и СВ3+СВ4+СВ1271о"СВ25ш8ьСВ62Ь+-клеток. Процентное содержание СВ3+СВ8+СВ11Ъ+-лим-фоцитов в дооперационном периоде и на начальном периоде послеоперационного лечения у больных с неблагоприятным исходом РГП соответствует контрольному диапазону, но значительно повышается на 21 сутки обследования как относительного контрольных значений, так и исходного уровня.
Таблица 4. Содержание CD3+-лимфоцитов в крови у больных с неблагоприятным исходом РГП в динамике лечения [Ме (Q1 — Q3)]
Table 4. The number of CD3+-lymphocytes in blood in patients with adverse outcome of WPP in treatment dynamics [Ме (Q1 - Q3)]
Показатели Parameters Контроль Control n = 40 Больные РГП/WPP patients
Дооперационный период Preoperative period n = 15 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 11 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 10 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 7
Лимфоциты, 109/л Lymphocyte, 109/l 2,05 (1,56-2,60) 0,70 (0,37-1,25) p < 0,001 0,87 (0,70-1,81) ft < 0,001 1,06 (0,65-1,11) p1 < 0,001 2,06 (1,27-2,85) p2 = 0,009 p3 = 0,032
CD3+, % 68,0 (62,5-74,0) 73,1 (67,0-88,3) p = 0,048 70,7 (63,8-78,9) 75,4 (64,3-82,2) 75,9 (61,0-81,6)
CD3+CD4+, % 43,1 (35,0-48,0) 46,5 (42,5-52,4) 42,6 (33,0-50,2) 38,0 (19,2-51,2) 26,3 (25,7-37,5) ft = 0,020 p2 = 0,017
CD3+CD8+, % 27,0 (21,2-32,0) 23,5 (15,3-27,1) 19,2 (14,7-27,7) 19,6 (16,9-31,4) 33,9 (31,5-36,2)
CD3+CD25+, % 4,9 (2,5-11,1) 7,2 (2,4-9,8) 4,0 (2,0-10,4) 7,3 (2,5-11,6) 6,2 (3,4-9,9)
CD3CD28+, % 65,0 (56,1-71,4) 66,9 (59,9-72,7) 64,6 (50,2-71,4) 60,1 (56,1-69,6) 50,1 (31,0-59,3) ft = 0,031 p2 = 0,040
CD3+CD57+, % 8,5 (4,8-12,3) 10,6 (9,5-13,0) 7,8 (4,6-17,2) 7,4 (4,6-10,2) 13,5 (13,0-15,5) ft = 0,014
CD3+CD62L+, % 42,2 (36,7-51,0) 38,0 (34,1-48,1) 35,5 (31,6-48,4) 40,0 (19,1-40,2) 27,0 (23,3-33,4) ft = 0,008
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; p2 — статистически значимые различия с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде; p3 — статистически значимые различия с показателями больных на 7 сутки после операции.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery; р3 — statistically significant differences versus 7 days after surgery patients.
При проведении сравнительного анализа содержания СВ4+- и СВ8+-лимфоцитов в крови у больных РГП в зависимости от исхода заболевания обнаружено, что при неблагоприятном исходе в периферической крови обследованных пациентов в дооперационном периоде и первые две недели послеоперационного лечения снижено абсолютное количество СВ3+СВ4+-клеток (до операции — р = 0,047, на 7 сутки лечения — р = 0,029 и на 14 сутки — р = 0,045). Также в до-операционном периоде и на 7 сутки после операции у пациентов при неблагоприятном исходе РГП понижено относительное содержание СВ3+СВ4+СВ62Ь+-лимфоцитов (до операции — р = 0,025 и на 7 сутки лечения — р = 0,046). Только в дооперационном периоде у больных с неблагоприятным исходом РГП понижено процентное содержание СВ3+СВ4+СВ1271™СВ25ш811-и СВ3+СВ4+СВ1271о"СВ25ш8ьСВ62Ь+-клеток (р = 0,039 и р = 0,025 соответственно). Также, у данной категории пациентов на 14 и 21 сутки лечения повышен абсолютный уровень СВ3+СВ8+-лимфоцитов (р = 0,025 и р = 0,048 соответственно).
При исследовании уровней экспрессии активационных и адгезионных маркеров на Т-лимфоцитах у больных с неблагоприятным исходом РГП выявлено, что у данной группы пациентов на всем протяжении обследования относительно контрольных значений повышена экспрессия СВ28 и СВ62Ь на СВ3+-лимфоцитах, а также СВ62Ь на СВ3+СВ4+-и Тге8-клетках (табл. 6). Кроме того, при неблагоприятном исходе РГП с 7 по 21 сутки послеоперационного лечения повышена экспрессия СВ57-рецептора на СВ3+-лимфоцитах, как относительно контрольных значений (указано в табл. 6), так и уровней, выявленных у пациентов с благоприятным исходом РГП (на 7 сутки — р = 0,039, на 14 сутки — р = 0,047, на 21 сутки - р = 0,032).
Обсуждение
Само развитие РГП определяет наличие нарушений в регуляторных и эффекторных механизмах местного и системного иммунитета [7, 30]. Кроме того, хирургическое вмешательство
Таблица 5. Содержание CD4 - и CDe-лимфоцитов в крови у больных с неблагоприятным исходом РГП в динамике лечения [Ме (Q1 — Q3)]
Table 5. The number of CD4+- и CD8+-lymphocytes in blood in patients with adverse outcome of WPP in treatment dynamics [Ме (Q1 — Q3)]
Показатели Parameters Контроль Control n = 40 Больные РГП/WPP patients
Дооперационный период Preoperative period n = 15 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 11 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 10 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 7
CD3CD4+, 109/l 0,83 (0,56-1,16) 0,37 (0,19-0,59) p < 0,001 0,34 (0,28-0,46) ft < 0,001 0,41 (0,13-0,55) ft = 0,001 0,61 (0,48-0,75) p3 = 0,040
CD3CD4CD62L+, % 29,4 (24,6-35,9) 32,2 (29,8-46,6) 39,6 (20,6-52,9) 31,1 (28,6-59,9) 26,5 (19,8-68,0)
CD3CD4CD127Low CD25High, % 5,1 (4,0-6,6) 4,4 (3,0-10,5) 6,3 (2,5-14,8) 6,4 (5,4-17,0) 2,6 (0,3-4,4) ft = 0,034 p4 = 0,006
CD3CD4CD127Low CD25HighCD62L+, % 3,8 (2,9-4,9) 3,4 (2,1-5,5) 3,5 (1,2-6,6) 4,8 (4,2-8,2) 2,3 (0,8-2,9) ft = 0,045 p4 < 0,001
CD3CD8+, 109/l 0,55 (0,37-0,80) 0,13 (0,08-0,19) p < 0,001 0,23 (0,16-0,25) ft < 0,001 0,21 (0,19-0,34) ft = 0,005 0,68 (0,46-0,90) p2,34 < 0,001
CD3 CD8 CD11b+, % 24,9 (20,2-29,7) 23,5 (15,3-27,0) 19,1 (14,7-27,1) 19,3 (16,7-30,9) 33,5 (31,2-35,8) ft = 0,032 ft,2 < 0,001 p4 = 0,012
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы; p2 — статистически значимые различия
с показателями больных, находящихся в дооперационном периоде; p3 — статистически значимые различия с показателями больных на 7 сутки
после операции; p4 — статистически значимые различия с показателями больных на 14 сутки после операции.
Note. р1 — statistically significant differences versus controls; р2 — statistically significant differences versus patients with WPP before surgery;
р3 — statistically significant differences versus 7 days after surgery patients; р4 — statistically significant differences versus 14 days after surgery patients.
и последующая антибактериальная терапия также вносят значительный вклад в нарушении иммунных механизмов [10]. Так, у обследованных пациентов с РГП независимо от исхода заболевания в дооперационном периоде выявляется снижение абсолютного количества лимфоцитов в крови, уровень которых восстанавливается до контрольных значений только на третьей недели лечения. В дооперационном периоде также независимо от исхода РГП наблюдается повышение содержания Т-лимфоцитов. Однако если при благоприятном исходе заболевания высокий уровень Т-лимфоцитов сохраняется весь период наблюдения (в течение 3 недель лечения), то при неблагоприятном исходе уже на 7 сутки послеоперационного лечения выявляется снижение количества Т-клеток до контрольного уровня.
При РГП меняется фенотипический состав Т-лимфоцитов и уровень экспрессии ими ряда маркеров. Так, только при благоприятном исходе РГП в дооперационном периоде наблюдается повышение количества Т-клеток, экспрес-сирующих СВ62Ь-маркер. Однако независимо от исхода заболевания на 21 сутки лечения обнаружено снижение количества Т-лимфоцитов с экспрессией рецепторов СВ62Ь и СВ28. СВ62Ь — мембранный гликопротеид семейства
L-селектинов, экспрессирующийся на различных клетках иммунной системы, обеспечивает межклеточные взаимодействия и хоминг Т-лимфоцитов в периферические лимфоидные органы [18, 22]. CD28 — гомодимер, относящийся к суперсемейству иммуноглобулинов, принимает участие в костимуляции Т-лимфоцитов [28, 31]. При этом необходимо отметить, что уровень экспрессии CD62L на Т-лимфоцитах больных РГП более выражен, чем у лиц контрольной группы, и не зависит от исхода заболевания. Исходно повышенный уровень экспрессии CD28 на Т-клетках больных с благоприятным исходом уже к 7 суткам лечения снижается до контрольного уровня, тогда как при неблагоприятном исходе заболевания остается повышенным в течение всего периода наблюдения.
К концу периода наблюдения у больных РГП в крови повышается содержание Т-лимфоцитов, экспрессирующих рецептор CD57. CD57 (также известный как HNK1 (human natural killer-1), L2, LEU7) представляет собой углеводный эпитоп, характеризующий накопление перфо-ринов и гранзимов, и экспрессируется на терминальной стадии дифференцировки клеток [11, 29]. У больных с благоприятным исходом заболевания повышение количества CD57+ Т-лимфоцитов проявляется на 2 неделе после-
Таблица 6. Уровни экспрессии некоторых CD-рецепторов на Т-лимфоцитах крови у больных с неблагоприятным исходом РГП в динамике лечения [Ме (Q1 — Q3)]
Table 6. Levels of some CD-receptors expression on blood T-lymphocytes in patients with adverse outcome of WPP in treatment dynamics [Ме (Q1 — Q3)]
Показатели Parameters Контроль Control n = 40 Больные РГП/WPP patients
Дооперационный период Preoperative period n = 15 7 сутки после операции 7 days after surgery n = 11 14 сутки после операции 14 days after surgery n = 10 21 сутки после операции 21 days after surgery n = 7
MFI CD28 на CD3+-клетках, о.е. MFI CD28 on CD3+-cells, r.u. 12,00 (10,00-13,70) 15,70 (12,80-17,90) p = 0,003 14,45 (12,00-16,80) ft = 0,045 19,85 (15,10-21,15) ft = 0,031 14,15 (12,70-15,60) ft = 0,043
MFI CD57 на CD3+-клетках, о.е. MFI CD57 on CD3+-cells, r.u. 35,25 (24,10-47,90) 44,20 (28,30-51,50) 56,20 (30,10-98,80) ft = 0,025 50,30 (38,90-59,10) ft = 0,046 43,55 (42,70-44,40) ft = 0,048
MFI CD62L на CD3+-клетках, о.е. MFI CD62L on CD3+-cells, r.u. 3,47 (2,91-4,44) 6,75 (3,89-8,06) ft = 0,042 5,17 (4,80-5,96) ft = 0,010 6,96 (5,62-8,88) ft = 0,015 5,66 (5,17-6,14) ft = 0,038
MFI CD62L на ОД3ЭД4-клетках, о.е. MFI CD62L on CD3+CD4+-cells, r.u. 3,26 (2,61-4,46) 6,08 (3,67-7,93) ft = 0,014 5,17 (4,66-5,66) ft = 0,012 6,60 (5,35-8,38) ft = 0,019 5,30 (4,65-5,94) ft = 0,018
MFI CD62L на Treg, о.е. MFI CD62L on Tger, r.u. 3,21 (2,66-4,39) 5,07 (3,56-5,44) ft = 0,024 5,19 (4,31-5,65) ft = 0,039 6,60 (5,25-7,33) ft = 0,008 5,28 (4,62-5,94) ft = 0,020
Примечание. p1 — статистически значимые различия с показателями контрольной группы. Note. р1 — statistically significant differences versus controls.
операционного лечения, тогда как при неблагоприятном исходе РГП — на 3 неделе. В зависимости от исхода заболевания значительно различается уровень экспрессии данного маркера на Т-лимфоцитах. При благоприятном исходе в дооперационном периоде и в течение 2 недель лечения наблюдается соответствие контрольному уровню и только на 21 сутки послеоперационного периода уровень экспрессии СВ57 на Т-лимфоцитах больных снижается. При неблагоприятном исходе РГП с 7 суток лечения и до конца наблюдаемого периода установлено повышение уровня экспрессии СВ57 на Т-клетках. Причем СВ57 является единственным из исследуемых рецепторов, уровень экспрессии которого зависит от исхода РГП. По-видимому, в крови больных с неблагоприятным исходом РГП с 7 суток послеоперационного лечения нарушается миграция в зону воспаления эффекторных фракций Т-лимфоцитов в терминальной стадии дифференцировки.
В целом, исходя из данного анализа, можно предпол ожить, что наколичество Т-лимфоцитов с экспрессией адгезионных и активационных рецепторов влияет как сам абдоминальный им-муновоспалительный процесс, так антибиоти-котерапия, проводимая в послеоперационном периоде. Соответственно, снижение количества Т-клеток, экспрессирующих СВ28 и СВ62Ь, в крови больных РГП на 3 неделе лечения можно охарактеризовать как ингибированием реактивности клеток иммунной системы на фоне антибиотикотерапии, так и миграцией активированных клеток. Увеличение количества СВ57+ Т-лимфоцитов в конце периода лечения РГП также можно определить влиянием анти-биотикотерапии. В частности, ранее установлено, что при лечении антибиотиками больных неврологическими расстройствами в крови повышается количество СВ57+-лимфоцитов [23].
При анализе фенотипического состава СВ4+ Т-лимфоцитов в зависимости от исхода РГП установлено, что при благоприятном исходе заболевания у обследованных пациентов в дооперационном периоде наблюдается повышение относительного количества СВ4+ Т-лимфоцитов, но при снижении их абсолютного содержания. На 7 и 14 сутки обследования содержание данной субпопуляции Т-лимфоцитов выравнивается относительно контрольного диапазона, на 21 сутки послеоперационного лечения выявляется понижение их процентного уровня. Изменение содержания в крови СВ4+ Т-лимфоцитов при благоприятном исходе РГП с одной стороны определяется количеством лимфоцитов в динамике послеоперационного периода, с другой стороны — миграцией клеток из крови. Последнее подтверждается тем, что у данной группы пациентов в течение 2 недель
послеоперационного лечения наблюдается повышение количества СВ4+ Т-клеток с экспрессией СВ62Ь. Причем на всем протяжении обследования СВ4+ Т-лимфоциты с большей активностью экспрессируют данный маркер, чем клетки данной фракции у здоровых людей.
При неблагоприятном исходе РГП в до-операционном периоде и первые две недели послеоперационного лечения наблюдается соответствие процентного количества СВ4+ Т-клеток контрольному диапазону с понижением на 21 сутки. Абсолютное количество данной фракции клеток соответствует послеоперационной динамике абсолютного уровня общих лимфоцитов. Несмотря на повышенный уровень экспрессии рецептора СВ62Ь, количество СВ4+ Т-клеток с экспрессией СВ62Ь у больных с неблагоприятным исходом не отличается от контрольного уровня на всем протяжении обследования. Отсутствие динамики в содержании СВ4+СВ621 Т-лимфоцитов при неблагоприятном исходе не позволяют предположить влияние механизмов миграции клеток на содержание Т-лимфоцитов-хелперов в крови.
В состав СВ4+ Т-лимфоцитов входят Т-регу-ляторные клетки (Тге8, СВ3+СВ4+СВ1271ож СВ25Ш8Ь), которые осуществляют супрессию иммунного и воспалительного ответа [8, 15]. На модели перитонита доказано, что Тге8 способны мигрировать из крови в зону воспаления и осуществлять ингибирование воспалительных процессов [17]. Более того, в работе БеИшоееке! К. и соавт. (2015) показано, что при снижении функциональной активности Тге8 у мышей в модели перитонита, осложненного сепсисом, понижается уровень выживаемости животных [20]. Действительно, у больных с благоприятным исходом РГП наблюдается повышенное количество Тге8 в крови (в том числе, экспрессирующих СВ621-рецептор) в доопера-ционном периоде и первые две недели послеоперационного лечения, Только на 21 сутки наблюдения количество клеток снижалось до контрольных значений. При неблагоприятном исходе заболевания содержание Тге8 и СВ62Ь+-Тге8 дооперационном периоде и до 14 суток включительно соответствовала контрольному уровню, тогда как на 21 сутки понижалось ниже контрольного диапазона. Можно предположить, что понижение содержания в крови Тге8, не-экспрессирующих и экспрессирующих СВ621-рецептор, у больных РГП в конце наблюдаемого периода связано с проводимой антибиотико-терапией.
Известно, что функциональная активность цитотоксических Т-лимфоцитов во многом влияет на характер течения воспалительных процессов [12, 26]. У больных с благоприят-
ным исходом РГП относительное содержание цитотоксических Т-клеток в крови в до-операционном периоде и течение двух недель послеоперационного лечения соответствует контрольному диапазону и повышается только на 21 сутки лечения. При неблагоприятном исходе на всем протяжении обследования у пациентов выявляется соответствие процентного уровня СВ8+-Т-клеток контрольному диапазону. Абсолютное содержание цитотоксических Т-лимфоцитов в крови у обследованных больных повторяет динамику количества общих лимфоцитов крови. Кроме того, установлено, что при благоприятном исходе заболевания у больных в крови, начиная с 14 суток лечения, повышается количество СВ11Ъ+ цитотоксиче-ских Т-клеток, тогда как при неблагоприятном исходе подобное повышение уровня клеток наблюдается только на 21 сутки послеоперационного лечения. Экспрессия СВ11Ъ (аМ цепь интегрина Мас-1) увеличивает миграционный и эффекторный потенциал цитотоксических Т-клеток [9, 21]. Накопление СВ11Ъ+ цито-токсических Т-лимфоцитов в крови больных РГП в конце наблюдаемого периода характеризует нарушение миграционной активности цитотоксических клеток, что, по-видимому, определяется проводимым послеоперационным лечением.
Заключение
Таким образом, в дооперационном периоде у больных РГП независимо от исхода заболевания на фоне снижение абсолютного количества общих лимфоцитов в крови повышается содержание Т-клеток. Т-лимфоциты больных РГП значительно интенсивнее по сравнению с клетками здоровых людей экспрессируют рецепторы СВ28 и СВ62Ь. При этом, в доопе-рационном периоде и в течение двух недель послеоперационного лечения при благоприятном исходе РГП выявляется повышенное количество СВ62Ь+ Т-лимфоцитов по сравнению
с показателями больных с неблагоприятным исходом заболевания. Другими особенностями фенотипического состава Т-лимфоцитов у больных с благоприятным исходом РГП является повышение Т-регуляторной активности (за счет увеличения количества неактивированных и активированных (по СВ62Ь) Тге§, которое проявляется как в дооперационном периоде, так и в течение двух недель послеоперационного лечения. При благоприятном исходе РГП уже на 14 сутки лечения наблюдается повышение количества активированных цитотоксических Т-лимфоцитов, которое при неблагоприятном исходе наблюдается только на 21 сутки лечения. По-видимому, Т-клеточная супрессия и активация цито-токсических Т-клеток являются факторами, определяющими снижение интенсивности воспалительных процессов при РГП и, тем самым, повышающими уровень благоприятного исхода заболевания. Установлено влияние послеоперационной антибиотикотера-пии на состояние фенотипического состава Т-лимфоцитов при РГП. Причем, при неблагоприятном исходе заболевания послеоперационная терапия слабее или с запаздыванием влияет на динамику исследуемых показателей, чем при благоприятном исходе. При благоприятном исходе РГП повышение содержания СВ3+СВ57+-клеток наблюдается уже со второй недели лечения и более выражено, тогда как при неблагоприятном исходе РГП увеличение уровня данных клеток наблюдается только на третьей неделе лечения. Однако уровень экспрессии СВ57 на Т-лимфоцитах на всем протяжении обследования более выражен при неблагоприятном исходе РГП. Установленные особенности динамики фенотипического состава Т-лимфоцитов у больных РГП в течение послеоперационного периода могут быть использованы для создания методов прогноза исхода заболевания и определяют необходимость разработки иммуноактивной терапии в послеоперационном периоде.
Список литературы/References
1. Борисов А.Г., Савченко А.А., Черданцев Д.В., Здзитовецкий Д.Э., Первова О.В., Кудрявцев И.В., Беленюк В.Д., Шапкина В.А. Типы иммунного реагирования при распространенном гнойном перитоните // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2016. № 9. С. 28-34. [Borisov A.G., Savchenko A.A., Cherdantsev D.V., Zdzitovetsky D.E., Pervova O.V., Kudryavtsev I.V., Belenyuk V.D., Shapkina V.A. Types of immune response in advanced suppurative peritonitis. Hirurgiya. Zhurnal im. N.I. Pirogova = Pirogov Russian Journal of Surgery, 2016, no. 9, pp. 28—34. doi: 10.17116/hirurgia2016928-34 (In Russ.)]
2. Гаджиев Н.Д.О. Прогностическое значение интерлейкина-6 в различных биологических средах при распространенном перитоните // Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2013. Т. 172, № 1. С. 25-29. [Gadzhiev N.J. Prognostic value of interleu-kin-6 in various biological environments in generalized peritonitis. Vestnikkhirurgii im. I.I. Grekova = Grekov'sBulletin of Surgery, 2013, vol. 172, no. 1, pp. 25-29. (In Russ.)]
3. Кудрявцев И.В., Субботовская А.И. Опыт измерения параметров иммунного статуса с использованием шести-цветного цитофлуоримерического анализа // Медицинская иммунология. 2015. Т. 17, № 1. С. 19-26. [Kudryavtsev I.V., Subbotovskaya A.I. Application of six-color flow cytometric analysis for immune profile monitoring. Meditsinskaya immunolo-giya = Medical Immunology (Russia), 2015, vol. 17, no. 1, pp. 19-26. doi: 10.15789/1563- 0625-2015-1-19-26 (In Russ.)]
4. Малков И.С., Филиппов В.А., Коробков В.Н., Тагиров М.Р. Распространенный перитонит: эволюция методов хирургического лечения // Практическая медицина. 2017. № 6 (107). С. 46—49. [Malkov I.S., Filippov V.A., Korobkov V.N., Tagirov M.R. Generalized peritonitis: evolution of surgical treatment methods. Prakticheskaya meditsina = Practical Medicine, 2017, no. 6(107), pp. 46-49. (In Russ.)]
5. Савченко А.А., Борисов А.Г., Кудрявцев И.В., Гвоздев И.И., Мошев А.В., Черданцев Д.В., Первова О.В. Взаимосвязь фенотипа и метаболизма нейтрофилов крови у больных распространенным гнойным перитонитом в динамике послеоперационного периода // Инфекция и иммунитет. 2017. Т. 7, № 3. С. 259—270. [Savchenko A.A., Borisov A.G., Kudryavcev I.V., Gvozdev I.I., Moshev A.V., Cherdancev D.V., Pervova O.V. The phenotype and metabolism relationship ofblood neutrophils in patients with widespread purulent peritonitis in the postoperative period dynamics. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2017, vol. 7, no. 3, pp. 259-270. doi: 10.15789/2220-7619-2017-3-259-270. (In Russ.)]
6. Bektas A., Schurman S.H., Sen R., Ferrucci L. Human T cell immunosenescence and inflammation in aging. J. Leukoc. Biol., 2017, vol. 102, no. 4, pp. 977-988. doi: 10.1189/jlb.3RI0716-335R
7. Confer B.D., Lopez R., Zein N.N. CD4+ T-cell function and the risk for developing spontaneous bacterial peritonitis in patients with cirrhosis. J. Clin. Gastroenterol, 2013, vol. 47, no. 9,pp. 807-813. doi: 10.1097/MCG.0b013e3182854969
8. Dey I., Bishayi B. Role of Th17 and Treg cells in septic arthritis and the impact of the Th17/Treg -derived cytokines in the pathogenesis of S. aureus induced septic arthritis in mice. Microb. Pathog., 2017, vol. 113,pp. 248-264. doi: 10.1016/j.micpath.2017.10.033
9. Do J., Visperas A., Freeman M.L., Jang E., Kim S., Malissen B., Min B. y5 T cells support gut Ag-reactive colitogenic effector T-cell generation by enhancing Ag presentation by CD11b(+) DCs in the mesenteric LN. Eur. J. Immunol., 2016, vol. 46, no. 2, pp. 340-246. doi: 10.1002/eji.201545919
10. Fiore M., Maraolo A.E., Gentile I., Borgia G., Leone S., Sansone P., Passavanti M.B., Aurilio C., Pace M.C. Current concepts and future strategies in the antimicrobial therapy of emerging Gram-positive spontaneous bacterial peritonitis. World J. Hepatol.,
2017, vol. 9, no. 30, pp. 1166-1175. doi: 10.4254/wjh.v9.i30.1166
11. Gonzalez-Serna A., Ferrando-Martinez S., Tarancon-Diez L., De Pablo-Bernal R.S., Dominguez-Molina B., Jiménez J.L., Muñoz-Fernández M.Á., Leal M., Ruiz-Mateos E. Increased CD127+ and decreased CD57+ T cell expression levels in HIV-infected patients on NRTI-sparing regimens. J. Transl. Med., 2017, vol. 15, no. 1, pp. 259. doi: 10.1186/s12967-017-1367-5
12. Gregersen S., Holm A.M., Fevang B., Ueland T., Sikkeland L.I., Aalekken T.M., Mynarek G., Kongerud J., Aukrust P., Johansen B., Fraland S.S. Lung disease, T-cells and inflammation in common variable immunodeficiency disorders. Scand. J. Clin. Lab. Invest., 2013, vol. 73, no. 6, pp. 514-522. doi: 10.3109/00365513.2013.819523
13. Kim J.W., Park J.H., Kim D.J., Choi W.H., Cheong J.C., Kim J.Y. The delta neutrophil index is a prognostic factor for postoperative mortality in patients with sepsis caused by peritonitis. PLoS One, 2017, vol. 12, no. 8: e0182325. doi: 10.1371/journal. pone.0182325
14. Launey Y., Duteurtre B., Larmet R., Nesseler N., Tawa A., Mallédant Y., Seguin P. Risk factors for mortality in postoperative peritonitis in critically ill patients. World J. Crit. Care Med., 2017, vol. 6, no. 1, pp. 48-55. doi: 10.5492/wjccm.v6.i1.48
15. Long A.E., Tatum M., Mikacenic C., Buckner J.H. A novel and rapid method to quantify Treg mediated suppression of CD4 T cells. J. Immunol. Methods, 2017, vol. 449,pp. 15-22. doi: 10.1016/j.jim.2017.06.009
16. Maecker H., McCoy P., Nussenblatt R. Standardizing immunophenotyping for the human immunology project. Nat. Rev. Immunol., 2012, vol. 12, pp. 191-200. doi: 10.1038/nri3158
17. Maganto-García E., Bu D.X., Tarrio M.L., Alcaide P., Newton G., Griffin G.K., Croce K.J., Luscinskas F.W., Lichtman A.H., Grabie N. Foxp3+-inducible regulatory T cells suppress endothelial activation and leukocyte recruitment. J. Immunol., 2011, vol. 187, no. 7, pp. 3521-3529. doi: 10.4049/jimmunol.1003947
18. Mahnke K., Useliene J., Ring S., Kage P., Jendrossek V., Robson S.C., Bylaite-Bucinskiene M., Steinbrink K., Enk A.H. Down-regulation of CD62L shedding in T cells by CD39(+) regulatory T cells leads to defective sensitization in contact hypersensitivity reactions. J. Invest. Dermatol, 2017, vol. 137, no. 1, pp. 106-114. doi: 10.1016/j.jid.2016.08.023
19. Ruiz-Tovar J., Alonso N., Ochagavía A., Arroyo A., Llavero C. Effect of the abdominal fascial closure with triclosan-coated sutures in fecal peritonitis, on surgical site infection, and evisceration: a retrospective multi-center study. Surg. Infect. (Larchmt),
2018, vol. 19, no. 1, pp. 61-64. doi: 10.1089/sur.2017.171
20. Schmoeckel K., Traffehn S., Eger C., Potschke C., Broker B.M. Full activation of CD4+ T cells early during sepsis requires specific antigen. Shock, 2015, vol. 43, no. 2, pp. 192-200. doi: 10.1097/SHK.0000000000000267
21. Shiokawa A., Kotaki R., Takano T., Nakajima-Adachi H., Hachimura S. Mesenteric lymph node CD11b(-) CD103(+) PD-L1(High) dendritic cells highly induce regulatory T cells. Immunology, 2017, vol. 152, no. 1, pp. 52-64. doi: 10.1111/imm.12747
22. Sopper S., Mustjoki S., White D., Hughes T., Valent P., Burchert A., Gjertsen B.T., Gastl G., Baldauf M., Trajanoski Z., Giles F., Hochhaus A., Ernst T., Schenk T., Janssen J.J., Ossenkoppele G.J., Porkka K., Wolf D. Reduced CD62L expression on T cells and increased soluble CD62L levels predict molecular response to tyrosine kinase inhibitor therapy in early chronic-phase chronic myelogenous leukemia. J. Clin. Oncol, 2017, vol. 35, no. 2,pp. 175-184. doi: 10.1200/JC0.2016.67.0893
23. Stricker R.B., Winger E.E. Musical hallucinations in patients with Lyme disease. South Med. J., 2003, vol. 96, no. 7, pp. 711-715.
24. Sugita S., Shimizu J., Makabe K., Keino H., Watanabe T., Takahashi M. Inhibition of T cell-mediated inflammation in uveitis by a novel anti-CD3 antibody. Arthritis Res. Ther, 2017, vol. 19, no. 1, pp. 176. doi: 10.1186/s13075- 017-1379-9
25. Tomasdottir V., Thorleifsdottir S., Vikingsson A., Hardardottir I., Freysdottir J. Dietary omega-3 fatty acids enhance the B1 but not the B2 cell immune response in mice with antigen-induced peritonitis. J. Nutr. Biochem., 2014, vol. 25, no. 2, pp. 111-117. doi: 10.1016/j.jn utbio.2013.09.010
26. Tosi M.F., van Heeckeren A., Ferkol T.W., Askew D., Harding C.V., Kaplan J.M. Effect of Pseudomonas-induced chronic lung inflammation on specific cytotoxic T-cell responses to adenoviral vectors in mice. Gene Ther., 2004, vol. 11, no. 19, pp. 1427-1433. doi: 10.1038/sj.gt. 3302290
27. Umemura A., Ishida K., Nitta H., Takahara T., Hasegawa Y., Makabe K., Sasaki A. A Rare Case of intraductal tubulopapillary neoplasm of the pancreas rupturing and causing acute peritonitis. Case Rep. Gastroenterol., 2017, vol. 11, no. 3, pp. 661-666. doi: 10.1159/000481935
28. Velasquez M.P., Szoor A., Vaidya A., Thakkar A., Nguyen P., Wu M.F., Liu H., Gottschalk S. CD28 and 41BB costimula-tion enhances the effector function of CD19-specific engager T cells. Cancer Immunol. Res., 2017, vol. 5, no. 10, pp. 860—870. doi: 10.1158/2326-6066. CIR-17-0171
29. Verma K., Ogonek J., Varanasi P.R., Luther S., Bunting I., Thomay K., Behrens Y.L., Mischak-Weissinger E., Hambach L. Human CD8+CD57- TEMRA cells: too young to be called «old». PLoS One, 2017, vol. 12, no. 5: e0177405. doi: 10.1371/journal. pone.0177405
30. Wang W., Shi Q., Dou S., Li G., Shi X., Jiang X., Wang Z., Yu D., Chen G., Wang R., Xiao H., Hou C., Feng J., Shen B., Ma Y., Han G. Negative regulation of Nod-like receptor protein 3 inflammasome activation by T cell Ig mucin-3 protects against peritonitis. Immunology, 2018, vol. 153, no. 1, pp. 71—83. doi: 10.1111/imm.12812
31. Zumerle S., Molon B., Viola A. Membrane rafts in T cell activation: a spotlight on CD28 costimulation. Front. Immunol., 2017, vol. 8, pp. 1467. doi: 10.3389/fimmu.2017.01467
Авторы:
Савченко А.А., д.м.н., профессор, руководитель лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии ФГБНУ НИИ медицинских проблем Севера, г. Красноярск, Россия; зав. кафедрой физиологии ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ, г. Красноярск, Россия; Борисов А.Г., к.м.н., ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии ФГБНУ НИИ медицинских проблем Севера, г. Красноярск, Россия; доцент кафедры инфекционных болезней ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ, г. Красноярск, Россия; Черданцев Д.В., д.м.н., профессор, зав. кафедрой и клиникой хирургических болезней им. проф. А.М. Дыхно с курсом эндоскопии и эндохирургии ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ, г. Красноярск, Россия; Первова О.В., д.м.н., профессор кафедры и клиники хирургических болезней им. проф. А.М. Дыхно с курсом эндоскопии и эндохирургии ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ, г. Красноярск, Россия; Кудрявцев И.В., к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории общей иммунологии ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия; доцент кафедры иммунологии ФГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; Беленюк В.Д., младший научный сотрудник лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии ФГБНУ НИИ медицинских проблем Севера, г. Красноярск, Россия.
Поступила в редакцию 16.03.2018 Принята к печати 11.03.2019
Authors:
Savchenko A.A., PhD, MD (Medicine), Professor, Head of Laboratory of Molecular Cell Physiology and Pathology, Scientific Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation; Head of the Department of Physiology, Krasnoyarsk State Medical University named after prof. V.F. Voino-Yasenetsky, Krasnoyarsk, Russian Federation; Borisov A.G., PhD (Medicine), Leading Researcher, Laboratory of Molecular Cell Physiology and Pathology, Scientific Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation; Associate Professor, Department of Infectious Diseases, Krasnoyarsk State Medical University named after prof. V.F. Voino-Yasenetsky, Krasnoyarsk, Russian Federation; Cherdantsev D.V., PhD, MD (Medicine), Professor, Head of the Department and Clinic Surgical Diseases named after prof. A.M. Dychno with the course of endoscopy and endosurgery, Krasnoyarsk State Medical University named after prof. V.F. Voino-Yasenetsky, Krasnoyarsk, Russian Federation; Pervova O.V., PhD, MD (Medicine), Professor of the Department and Clinic Surgical Diseases named after prof. A.M. Dychno with the course of endoscopy and endosurgery, Krasnoyarsk State Medical University named after prof. V.F. Voino-Yasenetsky, Krasnoyarsk, Russian Federation;
Kudryavtsev I.V., PhD (Biology), Senior Researcher, Laboratory of Immunology, Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, Russian Federation; Associate Professor, Department of Immunology, Pavlov First St. Petersburg State Medical University, St. Petersburg, Russian Federation;
Belenyuk V.D., Junior Researcher, Laboratory of Molecular Cell Physiology and Pathology, Scientific Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation.
Received 16.03.2018 Accepted 11.03.2019
