Факторы, влияющие на иммуногенность вируса гриппа и гриппозных вакцин Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Факторы, влияющие на иммуногенность вируса гриппа и гриппозных вакцин

Е.А. Федорова1 (fedorova.iem@gmail.com), И.В. Киселева1 (irina.v.kiseleva@gmail.com), Н.В. Ларионова1 (nvlarionova@mail.ru), Е.П. Григорьева1 (epgrigorieva@gmail.com), С.А. Донина1 (sveta.donina@gmail.com), Е.А. Баженова1 (sonya.01.08@mail.ru), И.А. Дубровина1 (ropsha.home@rambler.ru), М.К. Ерофеева2 (erofeeva@influenza.spb.ru),

В.П. Дриневский2 , Л.Г. Руденко1 (vaccine@mail.ru)

1ФГБУ «НИИ экспериментальной медицины» СЗО РАМН, Санкт-Петербург 2ФГБУ «НИИ гриппа» Минздрава России, Санкт-Петербург

Резюме

Настоящий обзор посвящен рассмотрению некоторых факторов, влияющих на иммуногенность вируса гриппа и гриппозных вакцин. Основное внимание уделено фенотипическим свойствам вируса гриппа: его способности к эффективной репликации за границами температурного оптимума, чувствительности к неспецифическим ингибиторам. Представлены данные о рецепторной специфичности гемагглютинина вируса гриппа и ее влиянии на показатели иммуногенности. Приведен анализ возможной связи фенотипических свойств«дикого»«родительского» вируса и иммуногенности живой гриппозной вакцины, приготовленной на его основе (по данным клинических испытаний). Показано, что свойства «дикого»вируса, выбранного в качестве источника поверхностных антигенов при подготовке реассортантных штаммов живой гриппозной вакцины, оказывают определяющее влияние на ее иммуногенность.

Ключевые слова: вирус гриппа, живая гриппозная вакцина, иммуногенность, сывороточные ингибиторы, температурочувстви-тельность, рецепторная специфичность вируса гриппа

Factors Affecting Immunogenicity of Influenza Virus and Influenza Vaccines

E.A. Fedorova1 (fedorova.iem@gmail.com), I.V. Kiseieva1 (irina.v.kiseleva@gmail.com), N.V. Larionova1 (nvlarionova@mail.ru), E.P. Grigorieva1 (epgrigorieva@gmail.com), S.A. Donina1 (sveta.donina@gmail.com), E.A. Bazhenova1 (sonya.01.08@mail.ru)1,

I.A. Dubrovina 1(ropsha.home@rambler.ru), M.K. Erofeeva2 (erofeeva@influenza.spb.ru),\V.P. Drinevsky\, L.G. Rudenko1 (vaccine@mail.ru)

1Federal State Budgetary Institution «Institute of Experimental Medicine» of the North-West Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Saint Petersburg

2Federal State Budgetary Institution «Research Institute of Influenza» of Ministry of Healthcare of the Russian Federation, Saint Petersburg Abstract

In this review some factors affecting immunogenicity of influenza virus and influenza vaccines are presented. The review focuses on phenotypic characteristics of influenza virus: its ability to replicate effectively on limiting temperatures, sensitivity to normal serum inhibitors etc. Data regarding influenza virus receptor specificity and its impact on immunogenicity are provided. Study of possible relation of phenotypic characteristics of parental epidemic virus and immunogenicity of live influenza vaccine strains (based on clinic trials data) is shown. It concluded that characteristics of parental epidemic virus selected as antigenic determinants' donor for live influenza vaccine reassortment strains may affect immunogenicity of vaccine.

Key words: Influenza virus, live influenza vaccine, immunogenicity, serum inhibitors, temperature sensitivity, receptor specificity of influenza viruses

Формирование иммунного ответа на любой антигенный раздражитель - многофакторный процесс, зависящий от целого ряда признаков и свойств как антигена, так и индивидуального организма. Изучение свойств антигенов, влияющих на развитие иммунного ответа, - одно из основных направлений, находящихся в области интересов исследователей, занимающихся вопросами иммунопрофилактики. Правильный подбор антигена для введе-

ния в организм определяет эффективность иммунизации и защитные свойства препарата.

Иммуногенность вакцин - важнейшая характеристика их эффективности, то есть способности формировать у организма защитные антитела в случае инфицирования. За эталон принимается иммунитет, развивающийся после перенесенной человеком естественной инфекции.

Вирус гриппа отличается большой изменчивостью, с чем связана необходимость ежегодной

подготовки новых штаммов гриппозной вакцины. Вакцины на основе разных штаммов гриппа различаются степенью иммуногенности, определяемой по состоянию гуморального иммунного ответа.

В связи с высокой скоростью распространения гриппозной инфекции время на подготовку вакцинных штаммов крайне ограничено и залогом успешных противоэпидемических мероприятий является подготовка максимально эффективной вакцины против циркулирующих вариантов вируса. Для получения высокоиммуногенных штаммов важно правильно подбирать варианты «родительских» вирусов, на основе которых будет создаваться вакцина для текущего эпидемического сезона.

Наиболее доступны для оценки фенотипические свойства вируса гриппа, такие как способность к размножению за пределами температурного оптимума, чувствительность к неспецифическим ингибиторам сыворотки крови. Понимание того, какие фенотипические свойства «дикого» вируса могут быть маркерами иммуногенности вакцинного штамма, подготовленного на его основе, должно облегчить отбор вариантов «родительских» вирусов и получение высокоиммуногенных вакцинных штаммов.

В настоящем обзоре основное внимание уделено двум важным фенотипическим свойствам, присущим вирусу гриппа, - его способности к репродукции за верхними пределами температурного оптимума и чувствительности к неспецифическим ингибиторам.

Температурочувствительность «диких» вирусов, ее возможные механизмы

Различная способность штаммов гриппа к размножению при температурах за границами температурного оптимума давно известна, данный показатель используется в качестве лабораторного маркера свойств вирусов гриппа. И.В. Киселева с соавт. [1] провели подробный анализ большого массива литературных и экспериментальных данных о способности к репродукции при повышенной температуре (37 - 40 оС) вирусов гриппа типов А и В разных лет выделения (с 1933 по 2001 г.) и определили, что температурочувствительность штаммов гриппа разных подтипов волнообразно изменяется в ходе их циркуляции. По данным авторов, температуро-чувствительные штаммы встречались среди всех исследованных сероподтипов вируса гриппа типов А (H1N1, H3N2, H2N2) и В. Появление таких штаммов было датировано годом-двумя после появления в циркуляции антигенно нового варианта. По всей видимости, данные штаммы представляли собой «отражение» адаптации циркулирующего варианта вируса к популяции хозяина. Это подтверждается исследованиями клинической картины вызванного природными температурочувствительными штаммами вируса (далее - ts, от «temperature sensitive») заболевания, которое протекало в смягченной форме.

Известно, что вирусы гриппа, выделенные из популяций разных видов животных, обладают раз-

личной способностью к репликации при повышенной температуре. У птичьих и свиных вирусов, как правило, наблюдается способность к репликации при более высоких температурах, чем у вирусов, выделенных от человека [2]. По данным И.В. Киселевой с соавт., практически все антигенно новые варианты обладали высокой способностью к репродукции при температуре 40 оС. По мере циркуляции фенотип вирусов менялся в сторону увеличения чувствительности к высокой температуре [1]. Видимо, при смене хозяина вирусы некоторое время сохраняли способность к репликации при высоких температурах, но постепенно преимущество получали формы, менее разрушительно воздействующие на организм хозяина при размножении.

Исследования молекулярных основ аттенуации холодоадаптированных штаммов гриппа, а также анализ температурочувствительных вариантов «диких» вирусов в качестве причин сужения границ температурного оптимума однозначно указывают на ведущую роль внутренних генов вируса гриппа, прежде всего генов полимеразного комплекса [3 -6]. Есть данные о возможной роли нейраминидазы в формировании температурочувствительного фенотипа [7]. Известно также, что в разных системах границы температурного диапазона репликации вирусов гриппа различаются, однако точные причины этого явления неизвестны [8, 9].

Влияние ts-фенотипа «дикого»«родительского» вируса на иммуногенность вакцинных штаммов живой гриппозной вакцины

Первые живые гриппозные вакцины (ЖГВ) готовили путем серийного пассирования эпидемических штаммов в куриных эмбрионах при оптимальной температуре [10]. Таким способом удавалось получать аттенуированные варианты с измененным кругом хозяев. Пассажные вакцины обладали непредсказуемым набором свойств и нестабильными характеристиками безопасности. Позднее начал применяться метод холодовой адаптации, позволявший получать аттенуированные штаммы с улучшенными показателями безопасности. Современные штаммы ЖГВ получают путем рекомбинации эпидемических штаммов с холодоадапти-рованными безвредными для человека донорами аттенуации. В геном вакцинного штамма переходят гемагглютинин и нейраминидаза эпидемического штамма, а остальные шесть генов принадлежат донору аттенуации. В этих генах содержатся атте-нуирующие мутации, определяющие стабильность характеристик безопасности штамма [4, 5].

Активное изучение холодовой адаптации как метода аттенуации вируса гриппа показало, что во время пассирования при пониженной температуре для снижения реактогенных свойств штаммов гриппа важно контролировать иммуногенные свойства. Как было показано рядом авторов, аттенуа-ция путем адаптации к пониженной температуре инкубации одновременно приводила к снижению

иммуногенных свойств вакцинных штаммов вируса гриппа [11, 12].

Т.Е. Медведевой с соавт. [13] был проведен ряд исследований зависимости иммуногенности от хо-лодовой адаптации штаммов вируса гриппа. Изучалась зависимость между количеством пассажей при пониженной температуре и иммуногенностью. Авторы анализировали реактогенные и иммуно-генные свойства пассажных вариантов штамма А/Ленинград/538/74 (H3N2), полученных на разных этапах его пассирования при пониженной температуре (28 °С) в развивающихся куриных эмбрионах. Было показано, что параллельно с постепенным снижением степени чувствительности вируса к воздействию повышенной температуры происходило не только снижение его реактогенно-сти для людей, но и снижение иммуногенности по показателям гуморального иммунного ответа. При этом на определенном этапе пассирования произошло резкое изменение свойств вируса - потеря способности к эффективной репликации при температуре 40 °С, резкое снижение реактогенных свойств и иммуногенности. Эти же исследователи несколькими годами ранее проводили изучение способности вирусов с различными показателями температурочувствительности к индукции синтеза интерферона в развивающихся куриных эмбрионах [14]. При различных температурах титры интерферона коррелировали с титром вируса. То есть холодолюбивые штаммы индуцировали выработку большего количества инферферона при субоптимальной температуре инкубации, чем холодочув-ствительные, у теплолюбивых наиболее высокие показатели количества интерферона достигались при повышенной температуре инкубации.

И.В. Киселевой с соавт. [3, 4, 15] был проведен подробный анализ генетических основ аттенуации вируса гриппа и фенотипических свойств, коррелирующих с аттенуированным фенотипом вирусов. В работе было продемонстрировано, что ts-маркер является показателем аттенуированного фенотипа штамма, в то время как холодоадаптированные (далее - ca, от «cold-adapted») варианты встречались как среди аттенуированных, так и среди неаттенуи-рованных вирусов. Полное секвенирование генома «диких» родительских вирусов и подготовленных на их основе аттенуированных холодоадаптированных пассажных вариантов дало информацию о роли отдельных генов и мутаций в аттенуации вируса и проявлении са- и ts-фенотипов. Было показано, что основную роль играют мутации в белках полиме-разного комплекса (PB1, PB2), это подтверждается данными других авторов, полученными на вирусах гриппа А подтипов H1N1, H7N7 и H3N2 [16, 17]. Была также продемонстрирована важность наличия мутаций в остальных генах вируса гриппа для стабильности аттенуированного фенотипа.

Аналогичный анализ был проведен для донора аттенуации американской ЖГВ FluMist [5, 18]. Как и в холодоадаптированных штаммах отечествен-

ной ЖГВ, необходимые для проявления аттенуированного фенотипа американской вакцины мутации располагались в генах полимеразного комплекса, но также содержались замены и в других генах.

Влияние адаптации к пониженной температуре на клеточный компонент иммунного ответа описано в исследовании [19]. Было выявлено, что холо-довая адаптация приводила к снижению способности индуцировать образование антителосекре-тирующих клеток (АСК) при первичном антигенном раздражении, вплоть до полной утраты. Авторы связывают снижение способности вирусов к первичной стимуляции АСК со сниженной способностью к репликации в нижних отделах дыхательных путей. При этом наличие мутантных генов от холо-доадаптированного штамма не оказывало значительного влияния на функциональную активность цитотоксических лимфоцитов памяти. Показано, что количество АСК обусловливалось гемагглюти-нином и нейраминидазой штамма, а цитотоксиче-ский лимфоцитарный ответ определялся составом внутренних генов вируса. При введении мышам вакцинного штамма, содержащего шесть внутренних генов от донора аттенуации, а гемагглютинин и нейраминидазу - от «дикого» вируса, цитотоксиче-ский лимфоцитарный ответ был значительно ниже, чем при введении «дикого» вируса.

Было отмечено, что существует зависимость между способностью «дикого» «родительского« вируса размножаться при температуре до 38 - 40 °С и иммуногенностью полученного на его основе вакцинного штамма [20]. И.В. Киселева с соавт. провели анализ данных клинических испытаний вакцинных штаммов ЖГВ, полученных на основе «диких» вирусов гриппа и различавшихся по способности к репликации при повышенной температуре, и отметили, что вакцинные реассортанты с более высокой иммуногенностью были получены на основе штаммов, способных к эффективной репликации при температуре 40 °С. Штаммы, «дикий» «родитель» которых был температурочувствителен уже при 38 °С, преимущественно обладали низкой иммуногенностью. Данный анализ был проведен на 19-ти вакцинных штаммах вируса гриппа А.

В соответствии с нормативными документами [21] иммуногенными считаются штаммы, вызывающие более 50% сероконверсий у серонегатив-ных пациентов после однократной иммунизации и более 70% - после двукратной. В упомянутом выше исследовании [20] для выявления зависимости иммуногенности от степени температурочувствитель-ности штамма было выделено три группы (градации) иммуногенности вакцинных штаммов (табл. 1).

В нашем исследовании мы воспользовались теми же градациями уровня иммуногенности вакцинных штаммов. Температурочувствительность «диких» вирусов-«родителей» оценивали в зависимости от способности вируса к репродукции в куриных эмбрионах при температуре 40 °С. Как и в исследовании [20], высокоиммуногенные вакцинные

Таблица 1.

Оценка уровня иммуногенности вакцинных штаммов для взрослых и для детей (по частоте сероконверсий) [20]

Уровень иммуногенности Частота сероконверсий к вакцинному штамму после иммунизации (%)

однократной двукратной

Высокий > 60 > 80

Средний 50 - 60 70 - 80

Низкий < 50 < 70

Примечание: Исходный титр сывороточных антител < 1:10.

штаммы чаще получались на основе устойчивых к температуре «диких» «родительских» вирусов (рис. 1). В исследование вошло 33 вакцинных штамма, подготовленных на основе 28 «диких» вирусов гриппа типов А и В с 1972 по 2008 год.

Для выявления более тонких связей между температурочувствительностью и иммуногенно-стью мы оценивали также способность «диких» вирусов к эффективной репликации при 38 °С. Вирусы были разделены на три группы, каждой из которых был присвоен ранг, отражающий степень температурочувствительности:

1. Температуроустойчивые: разница между титрами при указанных температурах - не более 3,0 £ ЭИД50/0,2 мл.

2. Чувствительные к температуре: разница в репродукции при температурах 33 °С и 40 °С -не менее 5,0 ^ ЭИД50/0,2 мл.

3. Высокочувствительные к температуре: разница в репродукции при температурах 33 °С и 38 °С - не менее 5,0 ^ ЭИД50/0,2 мл. Известно, что вирусы гриппа типа В более чув-

ствительны к температуре, чем вирусы гриппа типа А, и в ряде работ вирусы гриппа типа В, способные размножаться при температуре 38 °С, охарактеризованы как температуроустойчивые, а не реплицирующиеся при этой температуре - как темпера-турочувствительные [22]. В нашем исследовании чувствительность к температуре рассматривалась в качестве абсолютного показателя, поэтому среди вирусов гриппа типа А встречались все три представленных выше фенотипа, а вирусы гриппа типа В были только температурочувствительными и высокотемпературочувствительными.

Нами была обнаружена обратная зависимость между степенью температурочувствительности «дикого» «родительского» вируса и иммуногенно-стью вакцинного штамма, подготовленного на его основе. Значение коэффициента корреляции Спирмена (г) для показателей иммуногенности вакцинного штамма и температурочувствитель-ности вируса-«родителя», оцененных в баллах, составляло для вирусов гриппа типов А и В -0,508 (Р = 0,003; п = 33). Вакцинные штаммы, получен-

Рисунок 1.

Распределение значений иммуногенности вакцинных штаммов ЖГв типов А и в на основе «диких» вирусов-«родителей» с различной способностью к росту при повышенной температуре инкубации

Примечание: цветные столбцы - вакцинные штаммы, подготовленные на основе «диких» температурочувствительных родительских, вирусов. Пунктирная линия - тенденция к убыванию количества штаммов в группах с более высокой иммуногенностью («дикие» «родительские» вирусы обладают температурочувствительностью репродукции). Серые столбцы - штаммы, подготовленные на основе «диких» температу-роустойчивых«родительских»вирусов. Сплошная линия - тенденция к увеличению количества штаммов в группах с более высокой иммуногенностью («дикие» «родительские» вирусы обладают температуроустойчивостью репродукции)

ные на основе более устойчивых к температуре вариантов вируса гриппа, были более иммуногенны.

Несмотря на то что за чувствительность вируса гриппа к температуре инкубации в основном отвечают внутренние гены [4, 5], а в геном вакцинного штамма попадают только поверхностные антигены вируса гриппа - гемагглютинин и нейрами-нидаза, зависимость между температурочувстви-тельностью «дикого» вируса и иммуногенностью вакцинного штамма на его основе выявляется с высокой степенью статистической значимости. Хотя температурочувствительность вируса, как было упомянуто, зависит прежде всего от свойств внутренних белков вируса, по всей видимости, свойства гемагглютинина и нейраминидазы природных вирусов, обладающих разной температу-рочувствительностью, различаются по способности индуцировать эффективное развитие иммунного ответа. Возможно, ts-варианты вирусов являются дрейфовыми вариантами, обладающими общими эпитопами в антигенных детерминантах с циркулировавшими на протяжении последнего времени вирусами, в связи с чем в результате реассортации с донором аттенуации и получаются штаммы с более низкой иммуногенностью.

Ингибиторочувствительность «диких» вирусов, ее природа и возможные механизмы

Ингибиторочувствительность - еще одно свойство вирусов гриппа, поддающееся быстрой оценке и при этом определяющее поведение вируса в процессе инфекции и при подготовке вакцинного штамма. Наиболее информативны данные, полученные в последние 20 лет - после открытия природы ингибиторов.

При оценке чувствительности вируса к ингибиторам необходимо четко понимать, что ингибиторы сывороток разных животных различаются по своему составу и на результаты оказывают влияние протокол обработки сыворотки и способ учета результатов реакции [23 - 27]. Тем не менее чувствительность вируса к ингибиторам безусловно стоит принимать во внимание, поскольку чувствительность к ингибиторам как лабораторный маркер штаммов изучается достаточно давно и накоплен большой массив данных клинических испытаний вакцин на основе вирусов с разными показателями чувствительности к ингибиторам.

В 1969 году была предложена классификация ингибиторов нормальной сыворотки и секретов животных с разделением на три класса: а, в и у - в зависимости от термостабильности и чувствительности к нейраминидазе [28].

1-й класс: а-ингибиторы - термостабильные гликопротеины, содержащие остатки сиаловых кислот и сцепленные с рецепторсвязывающими областями головки гемагглютинина вируса гриппа. а-ингибиторы чувствительны к обработке нейра-минидазой, трипсином, периодатом и содержатся в сыворотках и секретах большинства животных.

2-й класс: p-ингибиторы - лектины, взаимодействующие с компонентами вирусных оболочек. Нейтрализация вируса происходит путем связывания гемагглютинина и активации каскада комплемента по лектин-зависимому пути. По классификации O. Krizanova и V. Rathova (1969), в-ингибиторы отнесены к термолабильным, но в статье М. Matrosovich с соавт. (1998) показано, что по крайней мере часть из них устойчива к температуре. Ингибиторы этого класса нечувствительны к обработке нейраминидазой и периодатом, могут быть удалены обработкой цитратом или трипсином. Они были обнаружены в сыворотках крови коров, мышей, кроликов, хорьков и морских свинок.

3-й класс: g-ингибиторы - температуроустойчи-вые гликопротеины, содержащие остатки сиаловых кислот и устойчивые к нейраминидазной активности. По данным O. Krizanova и V. Rathova (1969), при воздействии высокой температуры количество этих ингибиторов может увеличиваться. В качестве способа удаления таких ингибиторов описана только обработка периодатом калия. Эти ингибиторы присутствуют у разных видов млекопитающих.

Позднее классификацию дополняли другие исследователи в соответствии с новыми данными.

По современным представлениям, ингибиторы вируса гриппа можно разделить на две основные группы, содержание которых в сыворотках крови разных животных сильно различается.

I. Ингибиторы, мимикрирующие под рецептор вируса гриппа на клеточной поверхности и блокирующие рецепторсвязывающий карман гемагглютинина

Гемагглютинин вируса гриппа при проникновении в клетку хозяина взаимодействует с находящимися на ее поверхности олигосахаридами. Вирусы гриппа человека прикрепляются к олигосахари-дам, содержащим 5-^ацетилнейраминовую (сиа-ловую) кислоту, связанную с галактозой или глю-козамином а-2 ^ 6-связью. Вирусы гриппа птиц и лошадей «предпочитают» рецепторы с а-2 ^ 3-свя-зью [23].

Чувствительность к ингибиторам, мимикрирующим под рецептор, определяется рецепторной специфичностью гемагглютинина вируса и субстратной специфичностью его нейраминидазы. В эту группу попадают ингибиторы, по классификации [28] относящиеся ка- и g-классам.

В статье М. Matrosovich с соавт. (1998) подробно рассмотрен молекулярный механизм взаимодействия ингибиторов с гемагглютинином [24]. В ряде экспериментов авторы выясняли, чем обусловлена ингибитороустойчивость штамма вируса A/Los Angeles/2/87 (H3N2) к сывороткам кролика, свиньи и лошади. Было показано, что в каждом случае устойчивость приобреталась с появлением уникальных замен в рецепторсвязывающей области гемагглютинина.

В частности, отмечена устойчивость вируса А(H3N2) к у-ингибиторам лошадиной сыворотки, связанная с рецепторной специфичностью вируса, например с аминокислотой, стоящей в позиции 226 гемагглютинина. При смене рецепторной специфичности с а-2 ^ 6 на а-2 ^ 3 вирус приобретал устойчивость к у-ингибиторам лошадиной сыворотки (аналогичные результаты были получены М. Matrosovich с соавт. [24]). При формировании устойчивости к свиной сыворотке, также содержащей NA-чувствительные сиалогликоконъ-югаты с а-2 ^ 6-связью (а2-макроглобулин), был задействован похожий механизм, подробно описанный М. Matrosovich с соавт. [24].

Замены в рецепторсвязывающем кармане гемагглютинина в позициях, отвечающих за переключение рецепторной специфичности, в гемаг-глютинине вируса подтипа Н2 также определяют чувствительность к ингибиторам, содержащимся в лошадиной сыворотке [29, 30].

В литературе не встречается упоминаний о вирусах А(Н^1), чувствительных к ингибиторам, тот же факт подтверждается нашими собственными исследованиями. Вероятно, это связано с тем, что вирусы гриппа человека данного подтипа взаимодействуют как с а-2 ^ 6-, так и с а-2 ^3-рецепто-рами [31].

Те же закономерности выявлены при анализе показателя ингибиторочувствительности к лошадиной сыворотке вирусов гриппа типа В [22]. Обнаружено, что вирусы линии Ямагата, чувствительные к ингибиторам, имеют рецепторную специфичность а-2 ^ 6, а штаммы викторианской линии проявляют сродство как к а-2 ^ 3-, так и к а-2 ^ 6-глика-нам [32].

Как было отмечено выше, к а-ингибиторам относили молекулы, чувствительные к вирусной ней-раминидазе, а к у-ингибиторам - устойчивые [28]. В работе и. Gimsa и соавт. [25] было показано, что большую роль играет субстратная специфичность нейраминидазы. Нейраминидазы вирусов, чувствительных к ингибиторам лошадиной сыворотки, не расщепляли а-2 ^ 6-связь между сиаловой кислотой и галактозой, предпочитая а-2 ^ 3.

В исследовании М. Matrosovich с соавт. [24] описан еще один вариант устойчивости ингибиторов к нейраминидазной активности -4-О-ацетилирование остатка сиаловой кислоты.

I/. Ингибиторы, не содержащие сиаловых остатков: коллектины, пентраксины

Во вторую группу относят молекулы сывороток и секретов слизистых, не содержащие остатков сиаловой кислоты и ингибирующие вирус гриппа вне зависимости от его рецепторной специфичности. По классификации О. Krizanova и V. Rathova [28], это в-ингибиторы, и в эту группу были отнесены только термолабильные молекулы. М. Matrosovich с соавт. [24] расширили группу, включив термостабильные компоненты, и описали механизм ин-

гибирования вируса гриппа компонентами бычьей сыворотки: связывание лектина с маннозой и активация каскада комплемента по лектин-зависи-мому пути.

По современным представлениям, к ß-ингибиторам относятся молекулы семейства коллектинов, а также другие не содержащие сиаловых остатков компоненты врожденной неспецифической защиты против вирусов гриппа, механизм действия которых изучается [26]. Коллектины - Са2+-зависимые лектины, содержащие коллагеноподобный домен и консервативный домен, связывающий с олигосахариды. Коллектины взаимодействуют с остатками сахаров на поверхности гемагглютинина и блокируют его, а также вызывают активацию системы комплемента [24, 26]. Чувствительность к молекулам данного класса четко определяется характером гликозилирования гемагглютинина [24, 26, 33]. К этой группе относятся белок сурфактанта D, маннозасвязывающий лектин и CL-43, конглютинин [24, 26].

P.C. Reading с соавт. [26] описана возможная роль пентраксинов (SAP, CRP, PTX3) в качестве ß-ингибиторов вируса гриппа.

Связь ингибиторочувствительности с иммуногенностью

В рамках прогнозирования влияния ингибиторочувствительности вируса на его иммуногенность интересно рассмотреть несколько аспектов.

Во-первых, чувствительность к ингибиторам является важным свойством вакцинного штамма живой гриппозной вакцины, поскольку способность вируса попадать в клетки верхних дыхательных путей и размножаться в них напрямую влияет на иммуногенность.

Во-вторых, чувствительность вируса к ингибиторам, содержащимся в прогретой лошадиной сыворотке, определенная по стандартному протоколу, является стабильным маркером свойств вируса, позволяющим прогнозировать его специфичность к типу рецептора и оценивать корреляцию данного свойства вирусов-«родителей» с иммуногенностью вакцин на основе этих вирусов.

Ряд исследований посвящен оценке действия на разные штаммы in vivo ингибиторов вируса гриппа, содержащихся в сыворотке и секретах млекопитающих. Пассированием под сывороткой получали штаммы, устойчивые к сыворотке определенного вида животных, после чего проводилось заражение животных полученными вариантами вирусов. C.A. Hartley с соавт. [33] показали на мышах, что ингибитороустойчивый вариант «дикого» вируса обладает повышенной вирулентностью по сравнению с чувствительным вариантом.

Изучение in vivo роли некоторых ß-ингибиторов на модели мышей с нокаутированными генами соответствующих белков (белки сурфактанта легких, коллектины) показало, что потеря белков сурфактанта A и D приводит к увеличению восприимчиво-

сти к гриппозной инфекции и тяжести ее проявлений [34, 35], а заражение вирусом гриппа повышает выработку этих белков [36].

В исследовании, проведенном на пассажных вакцинных штаммах [37], содержится указание на более высокую иммуногенность ингибиторочув-ствительных вариантов. Работа проводилась на штаммах А2/Гонконг/1/68/21 и А2/Истра/69/10 (по современной классификации это вирусы, принадлежащие к сероподтипу H3N2). Из исходной гетерогенной популяции выделяли линии, отличавшиеся по ингибиторочувствительности, после чего проводили ряд последовательных пассажей при пониженной температуре. Изучали иммуногенность холодоадаптированных пассажных вариантов, а также потенциальную антигенную активность данных штаммов в условиях циркуляции гомологичных штаммов вируса в течение трех лет. Ингибиторочувствительные варианты были более иммуногенны по показателям гуморального иммунитета, причем ингибиторочувствительный штамм А2/Гонконг/1/68/21 обладал стабильно высокой иммуногенной активностью на протяжении трех лет. Вакцинный вирус А2/Истра/69/10, созданный на основе специально полученного ингиби-тороустойчивого варианта, вызывал значительные приросты сывороточных антител только в первый год циркуляции гомологичных штаммов, в дальнейшем его иммуногенность сильно снижалась. У добровольцев с исходным титром антител 1:16 и более прироста антител обнаружено не было. Сходные результаты получили иностранные авторы, работавшие с гомологичными вирусами тех же лет выделения [38].

В исследовании Г.П. Жиловой [37] более им-муногенные ингибиторочувствительные варианты показали более высокую реактогенность при испытании на ограниченных группах добровольцев. Данные об их более высокой реактогенности публиковались и ранее [39], а также подтверждались иностранными исследователями [38]. Стоит отметить, что в данном случае речь идет о пассажных вакцинах с непредсказуемым набором мутаций во внутренних генах вакцинных штаммов, поэтому говорить о прямом влиянии ингибиторочувствительности на реактогенность некорректно. В литературе также существуют данные о более высокой вирулентности ингибитороустойчивых вирусов. В частности, было показано, что ингибитороустойчи-вые варианты проникают в нижние отделы дыхательных путей мышей [33].

По всей видимости, в случае с вакцинными штаммами, не способными реплицироваться при температуре, характерной для нижних дыхательных путей, основную роль играет способность эффективно размножаться в верхних отделах дыхательных путей. Ингибиторочувствительные вирусы гриппа, обладающие сродством к а-2 ^ 6-рецепто-рам, преобладающим в верхних отделах дыхательных путей [40, 41], способны более эффективно

реплицироваться в верхних дыхательных путях и вызывать большее количество реакций, регистрируемых при испытаниях вакцинного штамма.

Еще в одном отечественном исследовании [42] на основе косвенных данных было подтверждено, что ингибиторочувствительные вирусы обладают более высокой иммуногенностью. В работе анализировался комплекс свойств различных вирусов и полученных на их основе вакцинных штаммов и была обнаружена зависимость между степенью гидрофобности и иммуногенностью вирусов, при этом сочетание рассмотренных свойств привело к заключению, что ингибиторочувствительные вирусы обладают большей иммуногенностью.

Связь рецепторной специфичности с иммуногенностью

Поскольку устойчивость вирусов гриппа к ингибиторам, содержащимся в прогретой лошадиной сыворотке, определенная по стандартному протоколу, является отражением а-2 ^ 6- и а-2 ^ 3-рецепторной специфичности вируса гриппа, ряд работ последних лет, посвященных зависимости иммуногенности от рецепторной специфичности вируса, может быть рассмотрен в рамках возможной связи ингибиторочувствительности с иммуно-генностью.

Рецепторсвязывающие участки молекулы гемагглютинина перекрываются с его антигенными участками [43], поэтому аминокислотные замены в этой области могут существенно повлиять на им-муногенность полученного в результате изменения рецепторной специфичности варианта вируса.

Исследования, посвященные этому вопросу, подтверждают наличие связи между иммуногенно-стью и рецепторной специфичностью.

В детальном исследовании на животной модели (хорьки) Q. Xu с соавт. [41] показали влияние одиночных мутаций в рецепторсвязывающей области гемагглютинина на специфичность взаимодействия с рецептором и на иммуногенность. Авторы работали с вирусами гриппа A(H1N1), которые, как известно, взаимодействуют как с а-2 ^ 6-, так и с а-2 ^ 3-рецепторами, при этом обладая большей аффинностью к а-2 ^ 6 [31, 44]. В респираторном тракте хорьков, как и у человека, преобладают а-2 ^ 6-рецепторы. Для сравнения авторы использовали четыре варианта штамма вируса A/Solomon Island/3/06 (H1N1), содержащих разные сочетания аминокислотных остатков в позициях 190 и 226 гемагглютинина. Авторы подтвердили, что 226-й аминокислотный остаток, известный как детерминанта рецепторной специфичности у вирусов подтипа H3 [45], играет ту же роль у выбранного штамма подтипа H1. Оценка иммуноген-ности производилась методами определения сывороточных антител в реакциях гемагглютинации и нейтрализации. Авторы показали, что вариант с а-2 ^ 6-специфичностью был более иммуногенен, чем вариант, адаптированный к «птичьему» рецеп-

тору, а холодоадаптированный вакцинным штамм на основе варианта с а-2 ^ 3-специфичностью реплицировался в верхних отделах дыхательных путей значительно хуже.

Изменение только одного аминокислотного остатка повлияло на антигенные свойства вируса и способность взаимодействовать с эритроцитами с разным составом поверхностных сиалоглика-нов. Именно это послужило причиной того, что при подготовке вакцинного штамма в качестве итогового варианта вакцины был выбран вариант с а-2 ^ 3-специфичностью - как было позже установлено, менее иммуногенный. При определении происхождения гемагглютинина клонов, полученных в процессе подготовки вакцинного штамма, в качестве референс-вируса использовался а-2 ^ 3-специфичный вариант, прошедший несколько пассажей в куриных эмбрионах. Варианты с а-2 ^ 6-специфичным гемагглютинином были признаны антигенно отличающимися и исключены из процесса подготовки [41].

В более раннем исследовании, проведенном M.W. Leigh с соавт. с использованием вариантов вируса A/Memphis/102/72 (H3N2) с различной ре-цепторной специфичностью на той же животной модели, также производилось сравнение иммунного ответа [46]. Вирусы пассировались на клеточной линии MDCK с использованием лошадиной сыворотки в качестве селектирующего фактора для получения варианта с измененной рецепторной специфичностью. Была обнаружена связь рецеп-торной специфичности только с изменением патогенных свойств вируса, иммуногенность же по показателю титров сывороточных антител в реакции РТГА была одинаковой. В статье Q. Xu с соавт. [41] показано, что аминокислота, стоящая в позиции 226 гемагглютинина, определяла рецепторную специфичность; аминокислота в позиции 190 также влияла на способность к связыванию с рецептором. При этом одно из исследованных сочетаний аминокислот в позициях 190 и 226 определяло двойную рецепторную специфичность. Разные варианты сочетаний незначительно отличались антигенно и по кросснейтрализующей активности сывороток после иммунизации.

Возможно, подобное явление - причина описанных результатов, полученных M.W. Leigh с соавт. [46]. Поскольку клеточная линия MDCK содержит оба типа рецепторов, а механизм действия сыворотки не определен однозначно, нельзя исключать, что вариант с измененной аффинностью к рецепторам отличался по свойствам от варианта, который был бы получен путем пассирования в системе с рецепторами только с а-2 ^ 3-связью. Вероятно, более детальное изучение антигенных свойств и понимание молекулярного механизма переключения специфичности у штаммов, с которыми работали исследователи, а также определение кросс-нейтрализующей активности сывороток могло бы объяснить полученные результаты.

Исследования влияния отдельных аминокислотных остатков на связывание с рецептором и иммуногенность проводились также на вирусах гриппа сероподтипа H5.

W. Wang с соавт. [47] исследовали влияние замен и характера гликозилирования в молекуле гемагглютинина вируса A/Vietnam/1203/2004 (H5N1) на способность к связыванию с разными типами рецепторов и иммуногенность реассор-тантных холодоадаптированных штаммов при ин-траназальном заражении хорьков. Вакцина на основе штамма A/Vietnam/1203/2004 (H5N1) оказалась низкоиммуногенной, и авторы искали пути повышения иммуногенности путем внесения в последовательность гемагглютинина одиночных замен, основываясь на последовательности близкородственного штамма A/Hong Kong/213/2003 (H5N1), вызывавшего развитие активного иммунного ответа у животных. Гемагглютинин штамма A/Vietnam/1203/2004 (H5N1) специфичен к «птичьему» варианту рецептора, штамм A/Hong Kong/213/2003(H5N1) имеет двойную специфичность и способен связывать оба типа рецепторов. Способность к связыванию с а-2 ^6-рецептором штамм A/Vietnam/1203/2004 (H5N1)приобретал при внесении ряда одиночных замен, но ни одна из этих замен не приводила к усилению иммунного ответа. Повышение способности к репликации в верхних дыхательных путях хорьков и иммуногенности удалось добиться только путем внесения замены в позицию 227 (S227N), а также путем удаления гликозилирования в позиции 158. При отборе вариантов с мутациями в ключевых позициях, определяющих рецепторную специфичность (Q226L, G228S), добиться повышения иммуногенности удавалось также только в случае потери гликозилирования в позиции 158. Вероятно, гликози-лирование в позиции 158 играет важнейшую роль, маскируя антигенные эпитопы в головке гемагглютинина вируса A/Vietnam/1203/2004 (H5N1) и тем самым обеспечивая снижение иммунного ответа.

Влияние гликозилирования на различные свойства вируса и на эффективность вакцин подробно рассмотрено в обзоре I.T. Schulze [48]. На момент написания указанного обзора данные литературы, касающиеся вопроса иммуногенности вирусов, выращенных в разных субстратах, были противоречивы. В одном из случаев, описанных в обзоре, иммунитет у модельных животных был одинаковым к обоим вариантам вирусов из различных субстратов. В оригинальном исследовании [49] указано, что вирусы отличались мутацией в НА в позиции 156 (H3N2). В другой статье, на которую ссылается автор обзора, варианты вирусов H1 и H3 из куриных эмбрионов обладали меньшей иммуногенностью при иммунизации инактивированным вирусом, чем варианты, подготовленные в MDCK. Отмечена также важность выбора варианта вируса, используемого в качестве антигена, при оценке иммуногенности различными методами: аффинность

связывания вируса с рецептором влияет на оценку титра антител. В частности, при оценке нейтрализующей активности сывороток, полученных против человеческих Н1-вирусов, использование вариантов вирусов, накопленных в MDCK по сравнению с вирусами, полученными в куриных эмбрионах. выявляет более высокие титры антител с дополнительными сайтами гликозилирования в головке гемагглютинина.

Коллектив авторов компании MedImmune (США) исследовал влияние одиночных мутаций на иммуногенность холодоадаптированных штаммов для животных. Штаммы Н3, содержавшие аминокислотные замены в отдельных позициях (V186G, L194P), были способны к активному размножению в куриных эмбрионах, но обладали низкой иммуногенностью. Замены в данных позициях позволяли достичь более высоких показателей иммуногенности, но значительно снижали репликацию вируса в куриных эмбрионах. Анализ большого количества штаммов показал, что введение в гемагглютинин дополнительных аминокислотных замен (195, 226) позволяло получить штаммы, обладавшие способностью как к эффективной репликации, так и к индукции иммунного ответа [50].

Позднее были опубликованы данные, полученные на вирусах других подтипов [51]. Авторы искали компромиссный метод, позволяющий получить с использованием куриных эмбрионов наиболее иммуногенный вариант вакцины. Изучалась роль пары мутаций в позициях 226 и 228 у Н2- и Н6-вирусов. Как и в других исследованиях, большей иммуногенностью для хорьков обладали варианты с а-2 ^ 6-рецепторной специфичностью ^226 и G228), наименьшей - с а-2 ^ 3-специфичностью (Р226 и G228). Удалось получить вариант с двойной рецепторной специфичностью ^226 и Б228), который, несмотря на бльшую аффинность к а-2 ^6-рецептору, тем не менее достаточно эффективно взаимодействовал с рецептором «птичьего» типа и эффективно реплицировался в развивающихся куриных эмбрионах. Репликация в верхних дыхательных путях хорьков также была эффективной, и этот вариант вируса обладал высокими показателями иммуногенности, являясь наиболее перспективным в качестве вакцинного компонента.

Интересные данные приводятся в исследовании Б.Е. Hensley и соавт. [52]. Анализ пула одиночных мутантов вируса A/PR/8/34, полученных путем пассирования в популяциях вакцинированных данным штаммом и иммунологически наивных мышей, показал, что при пассировании вируса в вакцинированных мышах вирус приобретает в рецепторсвязывающей области ряд мутаций, которые обеспечивают увеличение эффективности взаимодействия вируса с клеткой и снижают взаимодействие с поликлональными антителами. В процессе ухода от иммунного ответа получали

преимущество те субпопуляции вируса, мутации в антигенных сайтах которых повышали аффинность связывания с клеткой хозяина.

Анализ литературных данных приводит к заключению, что переключение рецепторной специфичности гемагглютинина определяется аминокислотными остатками, стоящими в определенных позициях, но не ограничивается только этими заменами [24, 53, 54]. Часты случаи, когда гемагглютинин способен к связыванию с рецепторами разных типов, при этом тонкая подстройка к какому-либо типу рецепторов происходит за счет дополнительных аминокислотных замен в области рецепторного кармана [51, 52]. Огромную роль играет характер гликозилирования молекулы ге-магглютинина [47, 55].

Важно, что в работах, посвященных влиянию одиночных мутаций в рецепторсвязывающей области на иммуногенность вирусов гриппа, есть подтверждение того, что варианты, различающиеся по составу одиночных замен и по рецепторной специфичности, могут значительно различаться и по антигенным свойствам [46, 50, 52, 56].

Влияние ингибиторочувствительности «дикого» «родительского» вируса на иммуногенность вакцинных штаммов ЖГВ

Использование лабораторного маркера ин-гибитороустойчивости штаммов для поиска корреляции с иммуногенностью представляет особый интерес, поскольку, как ясно из описанного выше, определение ингибитороустойчивости по стандартному протоколу в реакции с лошадиной сывороткой является показателем рецепторной специфичности вируса гриппа, связь которой с иммуногенностью на настоящий момент активно изучается.

Мы провели анализ связи ингибиторочувствительности вируса-«родителя» и иммуногенности штаммов на его основе по данным архивов клинических испытаний штаммов. Было проанализировано 28 эпидемических вирусов и 33 вакцинных штамма на их основе 1972 - 2008 годов выделения.

Ингибиторочувствительность вируса оценивалась в реакции торможения гемагглютинации с нативной сывороткой лошади, прогретой при 56 оС в течение 30 минут. Вирус считают устойчивым к ингибиторам, если титр в РТГА с прогретой лошадиной сывороткой не превышает 1:40. При более высоком титре вирус считают ингибиторочувстви-тельным [22].

Степень иммуногенности рассчитывалась в соответствии с нормативными документами [21]: иммуногенными считались штаммы, вызвавшие более 50% сероконверсий у серонегативных пациентов после однократной иммунизации и более 70% - после двукратной. Остальные штаммы считались низкоиммуногенными.

С использованием критерия хи-квадрат Фишера (х2) нами было показано, что иммуногенные

Таблица 2.

Связь иммуногенности вакцинного штамма ЖГБ с ингибитороустойчивостью «дикого» родительского вируса

Фенотип «дикого» вируса Иммуногенность вакцинного штамма

низкоиммуногенный штамм иммуногенный штамм

Ингибитороустойчивый 2 17

Ингибиторочувствительный 8 6

х2 8,29

P 0,004

варианты вакцинных штаммов, подготовленные на основе ингибитороустойчивых штаммов, получались статистически достоверно чаще (табл. 2).

Полученные результаты можно объяснить тем, что в исследованиях, представленных в литературе, использовались модельные системы «диких» вирусов с охарактеризованными одиночными заменами в антигенных детерминантах. Преимущество в размножении в дыхательных путях получали вирусы с а-2 ^ 6-специфичностью гемагглютинина к рецептору, содержащие все остальные гены от того же «дикого» вируса. В случае вакцинных штаммов ЖГВ, полученных путем классической реассортации в системе in ovo, специфичность к «птичьему» типу рецепторов является преимуществом на стадии подготовки штамма и позволяет получать вакцинные штаммы за значительно меньшее количество пассажей, чем при работе с вирусами, «предпочитающими» рецептор с а-2 ^ 6-связью и чувствительными к ингибиторам, содержащимся в лошадиной сыворотке.

Кроме того, как было описано выше, очень важным моментом при детекции титра антител является выбор антигена, используемого для детекции результатов реакции. Традиционно для приготовления гриппозных диагностикумов применяют ингибитороустойчивые антигены, природные или получаемые серийным пассированием ингибиторочувствительного вируса в присутствии богатой ингибиторами нормальной сыворотки животных [57] (при использовании ингибиторочувствительных антигенов результаты сложно трактовать [30]). Однако неоднократно было показано, что результаты реакции торможения гемагглютинации могут достоверно различаться при наличии в гемагглютинине одиночных мутаций, располагающихся вблизи от активного центра молекулы, а для получения более высокого титра необходимо использовать тот антиген, которым проводилась иммунизация [30, 46, 52, 56]. Также нельзя исключать, что использование чувствительного к ингибиторам антигена при детекции результатов РТГА дает более высокие титры за счет неспецифического ингибирования, что влияет на результат оценки иммуногенности [30, 56].

Возможное влияние комбинации признаков чувствительности к ингибиторам и к температуре инкубации «дикого»«родительского» вируса на иммуногенность вакцинных штаммов ЖГВ

Анализ, проведенный нами на основе данных о свойствах 38-ми эпидемических штаммов вируса гриппа типов А и В, показал, что существует корреляция между признаками чувствительности вируса к повышенной температуре и его чувствительности к ингибиторам лошадиной сыворотки. Вирусы, способные к эффективной репликации при повышенной температуре, чаще оказывались устойчивы к ингибиторам, содержащимся в лошадиной сыворотке (коэффициент корреляции Спирмена ггапк = 0,410; Р = 0,003; п = 38), что является косвенным показателем специфичности к рецепторам с а-2 ^ 3-связью между остатком сиаловой кислоты и сахаром.

Известно, что температура в кишечнике птиц достигает 42 оС и «птичьи» вирусы гриппа в среднем имеют более высокий температурный оптимум репликации, чем человеческие штаммы, размножающиеся в основном в верхних дыхательных путях человека при температуре, близкой к 33 - 37 оС [58].

Как упоминалось выше, в процессе циркуляции вирусов гриппа в человеческой популяции, судя по всему, идет постепенная адаптация к размножению при более низких температурах и накопление природных ts-вариантов [1]. Также есть исследование, подтверждающее, что в процессе антигенного дрейфа вирус постепенно подстраивается к рецептору хозяина [52]. Вероятно, свойства температуроустойчивости и ингибитороу-стойчивости являются взаимосвязанными из-за особенностей эпидемиологии штаммов гриппа. Новые варианты вирусов, являющиеся результатом реассортации сегментами генома между вирусами гриппа птиц и млекопитающих, часто наследуют от «птичьих» вирусов температуро- и ингибитороустойчивый фенотип. А поскольку именно такие вирусы являются антигенно шиф-товыми вариантами, штаммы на их основе могут быть более иммуногенны, чем штаммы на основе дрейфовых вариантов, чувствительных к температуре и адаптированных к «человеческому» типу рецептора.

Возможное влияние комбинации признаков чувствительности к ингибиторам и к температуре инкубации «дикого» «родительского» вируса на выраженность клинических реакций при введении ЖГВ

Как отмечалось выше, в литературе встречается ряд упоминаний о более высокой реактогенно-сти ингибитороустойчивых штаммов вирусов [37, 39, 59]. Для «диких» вирусов это явление имеет под собой очевидное основание: ингибитороу-стойчивые вирусы более вирулентны [33] - они могут заражать клетки нижних дыхательных путей человека, на которых преимущественно расположены рецепторы с а-2 ^ 3-связью [40], вызывающие более тяжелые состояния.

Нами был проведен анализ данных архивов клинических испытаний реактогенности вакцинных штаммов, подготовленных в отделе вирусологии НИИЭМ. В анализ были включены вакцинные штаммы с 1972 по 2008 год, по которым удалось сопоставить протоколы исследований реактогенности и иммуногенности с данными о фенотипи-ческих свойствах вирусов-«родителей». Все штаммы ЖГВ были ареактогенны для людей и полностью удовлетворяли требованиям безопасности, предъявляемым к вакцинным штаммам [60]. Мы сравнили показатели реактогенности, рассчитывающиеся по данным о количестве температурных реакций, по разным группам вирусов (темпе-ратуроустойчивых и температурочувствительных вирусов, ингибитороустойчивых и ингибиторочув-ствительных вирусов), и не обнаружили различий по данному параметру.

Однако поскольку «дикие» «родительские» вирусы фенотипически значительно отличались друг от друга, был проведен более детальный анализ для поиска возможных минорных различий в реакции на введение штамма. Были проанализированы частота слабых температурных реакций и частота катаральных явлений после вакцинации штаммами на основе разных вирусов. Статистически значимой связи со свойствами температурочув-

ствительности и ингибиторочувствительности «родительского» штамма обнаружено не было - как для каждого признака в отдельности, так и для их сочетаний.

Таким образом, свойства «дикого» «родительского» вируса не влияли на частоту слабых реакций и выраженность катаральных явлений у добровольцев после вакцинации. Это свидетельствует о высоком уровне безопасности реассор-тантных вакцинных штаммов на основе холодоа-даптированных доноров аттенуации: независимо от свойств вируса-«родителя» холодоадаптирован-ные реассортантные вакцинные штаммы всегда остаются ареактогенными для людей. Это дает возможность выбирать исходный штамм для подготовки живой гриппозной вакцины, руководствуясь данными о свойствах, влияющих на им-муногенность, и не опасаясь возможного влияния свойств «дикого» вируса на реактогенность будущей вакцины, что особенно важно при подготовке пандемических и предпандемических вакцин на основе высокопатогенных вирусов.

Заключение

Свойства «дикого» вируса, выбранного в качестве источника поверхностных антигенов при подготовке реассортантных штаммов живой гриппозной вакцины, оказывают определяющее влияние на ее иммуногенность. Такие фенотипиче-ские свойства «дикого» «родительского» вируса, как чувствительность к повышенной температуре инкубации и неспецифическим ингибиторам нормальной сыворотки крови, являются отражением эволюционной истории этого вируса. Обнаружена корреляция данных свойств вирусов-«родителей» с иммуногенностью живых гриппозных вакцин, подготовленных на их основе. Грамотный выбор штамма - донора антигенных детерминант - при подготовке гриппозной вакцины, основанный на оценке его фенотипических свойств, позволит получать вакцинные штаммы с более высокой иммуногенностью. ш

Литература

1. Киселева И.В., Ларионова Н.В., Литвинова О.М., Иванова В.В., Исакова И.Н., Медведева Т.Е. и др. Изменение признака температурочувствительности как отражение эволюционной изменчивости эпидемических штаммов вирусов гриппа. Мед. акад. журн. 2002; 2 (3): 49 - 57.

2. Murakami Y., Nerome K., Yoshioka Y., Mizuno S., Oya A. Difference in growth behavior of human, swine, equine, and avian influenza viruses at a high temperature. Arch. Virol. 1988; 100 (3 4): 231 - 244.

3. Kiseleva I.V., Voeten J.T., Teley L.C., Larionova N.V., Drieszenvan der Cruijsen S.K., Basten S.M. et al. PB2 and PA genes control the expression of the temperature-sensitive phenotype of cold-adapted B/USSR/60/69 influenza master donor virus. J. Gen. Virol. 2010; 91 (Pt 4): 931 - 937.

4. Kiseleva I., Klimov A., Su Q., Szymkowiak C., Toner T.J., Kwan W.S. et al. Role of individual genes of the A/Leningrad/134/17/57 (H2N2) cold-adapted donor strain in manifestation of the temperature-sensitive phenotype of reassortant influenza A viruses. Proceedings of Options for the Control of Influenza V. Okinawa, Japan; 2003: 547 - 550.

5. Hoffmann E., Mahmood K., Chen Z., Yang C.F., Spaete J., Greenberg H.B. et al. Multiple gene segments control the temperature sensitivity and attenuation phenotypes of ca B/Ann Arbor/1/66. J. Virol. 2005; 79 (17): 11014 - 11021.

6. Subbarao E.K., Park E.J., Lawson C.M., Chen A.Y., Murphy B.R. Sequential addition of temperature-sensitive missense mutations into the PB2 gene of influenza A transfectant viruses can effect an increase in temperature sensitivity and attenuation and permits the rational design of a genetically engineered live influenza A virus vaccine. J. Virol. 1995; 69 (10): 5969 - 5977.

7. Palese P., Tobita K., Ueda M., Compans R.W. Characterization of temperature sensitive influenza virus mutants defective in neuraminidase. Virology. 1974; 61 (2): 397 - 410.

8. Chu C.M., Wei B.Y., Tian S.F., Ren G.F. Host dependence of naturally occurring temperature-sensitive influenza A viruses and location of their genetic lesions. Virus Res. 1992; 22 (3): 207 - 214.

9. Исакова И.Н., Киселева И.В., Ларионова Н.В., Олейник Е.С., Руденко Л.Г. Лабораторные маркеры аттенуации штаммов живой гриппозной вакцины. Вопросы вирусологии. 2007; 52 (4): 22 - 26.

10. Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. Санкт-Петербург: Наука; 1994. 151.

11. Beare A.S., Maassab H.F., Tyrrell D.A., Slepuskin A.N., Hall T.S. A comparative study of attenuated influenza viruses. Bull. World Health Organ. 1971; 44 (5): 593 - 598.

12. Tyrrell D.A., Beare A.S. Some studies on the selection and efficiency of live influenza vaccine viruses. Bull. World Health Organ. 1969; 41 (3): 581 - 584.

13. Медведева Т.Е., Шапошникова Р.П., Коляк Л.И., Гордон М.А., Гольдфарб В.Э., Автушенко С.С. и др. Реактогенные и иммуногенные свойства вируса гриппа А/Ленинград/538/74 на разных этапах пассирования при пониженной температуре. Проблемы гриппа и ОРЗ. Сборник трудов. Ленинград; 1977; 19: 128 - 137.

14. Медведева Т.Е., Александрова Г.И., Смородинцев А.А. Образование интерферона в развивающихся куриных эмбрионах, зараженных холодо- и теплолюбивыми штаммами вируса гриппа типа А2: Проблемы гриппа и ОРЗ: Сборник трудов. Ленинград; 1972. 1: 143 - 149.

15. Киселева И.В., Ларионова Н.В., Voeten J.T.M., Teley L.C.P., Drieszenvan der Cruijsen S.K.M., Heldens J.G.M. et al. Ведущая роль генов полимеразного комплекса в аттенуации отечественной живой гриппозной вакцины А и В. ЖМЭИ. 2010; (6): 41 - 47.

16. Романова Ю.Р., Егоров А.Ю., Лисовская К.В., Медведева Т.Е., Неведомская Г.Н., Александрова Г.И и др. Эффект усиления репродукции вируса гриппа в легких мышей при одновременном инфицировании двумя холодоадаптированными штаммами. Вопросы вирусологии. 1989; 34 (5): 547 - 553.

17. Kaverin N.V., Finskaya N.N., Rudneva I.A., Gitelman A. K., Kharitonenkov I. G., Smirnov Y. A. Studies on the genetic basis of human influenza A virus adaptation to mice: degrees of virulence of reassortants with defined genetic content. Arch. Virol. 1989; 105 (1 2): 29 37.

18. Jin H., Lu B., Zhou H., Ma C., Zhao J., Yang C.F. et al. Multiple amino acid residues confer temperature sensitivity to human influenza virus vaccine strains (FluMist) derived from cold-adapted A/Ann Arbor/6/60. Virology. 2003; 306 (1): 18 - 24.

19. Рекстин А.Р, Найхин А.Н., Баранцева И.Б., Руденко Л.Г. В-клеточный и цитотоксический лимфоцитарный иммунный ответ на патогенные, аттенуированные и реассортантные вирусы гриппа. Вопросы вирусологии. 2002; 47 (4): 27 - 32.

20. Киселева И.В., Григорьева Е.П., Найхин А.Н., Иванова В.В., Ларионова Н.В., Донина С.А. и др. Температурочувствительность эпидемических вирусов гриппа А как возможный маркер иммуногенности реассортантных вакцинных штаммов. Вопросы вирусологии. 2003; 48 (4): 26 - 29.

21. ФСП Р N003224/01-270313. Фармакопейная статья предприятия. Вакцина гриппозная аллантоисная интраназальная живая сухая. 2013.

22. Ларионова Н.В., Киселева И.В., Исакова И.Н., Литвинова О.М., Руденко Л.Г. Фенотипические особенности эпидемических штаммов вируса гриппа типа В, выделенных в разные годы. Вопросы вирусологии. 2006; 51 (5): 38 - 41.

23. Rogers G.N., Pritchett T.J., Lane J.L., Paulson J.C. Differential sensitivity of human, avian, and equine influenza A viruses to a glycoprotein inhibitor of infection: selection of receptor specific variants. Virology. 1983; 131 (2): 394 - 408.

24. Matrosovich M., Gao P., Kawaoka Y. Molecular mechanisms of serum resistance of human influenza H3N2 virus and their involvement in virus adaptation in a new host. J. Virol. 1998; 72 (8): 6373 6380.

25. Gimsa U., Grotzinger I., Gimsa J. Two evolutionary strategies of influenza viruses to escape host non-specific inhibitors: alteration of hemagglutinin or neuraminidase specificity. Virus Res. 1996; 42 (1 - 2): 127 - 135.

26. Reading P.C., Job E.R., Tate M.D., Brooks A.J., Bottazzi B., Mantovani A. Inhibition of influenza viruses by proteins of the innate immune system. Options for the control of influenza VI. Toronto, Ontario, Canada; 2007: 489 - 491.

27. Ito T., Suzuki Y., Mitnaul L., Vines A., Kida H., Kawaoka Y. Receptor specificity of influenza A viruses correlates with the agglutination of erythrocytes from different animal species. Virology. 1997; 227 (2): 493 - 499.

28. Krizanova O., Rathova V. Serum inhibitors of myxoviruses. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1969; 47: 125 - 151.

29. Kuznetcova V., Isakova-Sivak I., Kuznetcova S., Rudenko L. Evaluation of immunogenicity and cross-reactivity of influenza A viruses with different receptor-binding specificity in a mouse model. Options for the control of influenza VIII. Cape Town, South Africa; 2013: 302.

30. Федорова Е.А., Дубровина И.А., Кузнецова В.А., Исакова-Сивак И.Н., Иванова Е.В., Баженова Е.А. Иммуногенность и трансмиссивность ингибитороустойчивого и ингибиторочувствительного вариантов вируса гриппа A/Singapore/57 (H2N2) на модели морской свинки при интраназальном заражении: Материалы XVI Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина человек и его здоровье». Санкт-Петербург; 2013: 421 - 422.

31. Gambaryan A.S., Tuzikov A.B., Piskarev V.E., Yamnikova S.S., Lvov D.K., Robertson J.S. et al. Specification of receptor-binding phenotypes of influenza virus isolates from different hosts using synthetic sialylglycopolymers: non-egg-adapted human H1 and H3 influenza A and influenza B viruses share a common high binding affinity for 6>-sialyl(N-acetyllactosamine). Virology. 1997; 232 (2): 345 - 350.

32. Wang Y.F., Chang C.F., Chi C.Y., Wang H.C., Wang J.R., Su I.J. Characterization of glycan binding specificities of influenza B viruses with correlation with hemagglutinin genotypes and clinical features. J. Med. Virol. 2012; 84 (4): 679 - 685.

33. Hartley C.A., Reading PC., Ward A.C., Anders E.M. Changes in the hemagglutinin molecule of influenza type A(H3N2) virus associated with increased virulence for mice. Arch. Virol. 1997; 142 (1): 75 - 88.

34. LeVine A.M., Hartshorn K., Elliott J., Whitsett J., Korfhagen T. Absence of SP-A modulates innate and adaptive defense responses to pulmonary influenza infection. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2002; 282 (3): L563 - 572.

35. LeVine A.M., Whitsett J.A., Hartshorn K.L., Crouch E.C., Korfhagen T.R. Surfactant protein D enhances clearance of influenza A virus from the lung in vivo. J. Immunol. 2001; 167 (10): 5868 - 5873.

36. Reading PC., Morey L.S., Crouch E.C., Anders E.M. Collectin-mediated antiviral host defense of the lung: evidence from influenza virus infection of mice. J. Virol. 1997; 71 (11): 8204 - 8212.

37. Жилова Г.П. Принципы подготовки вакцинных штаммов вируса гриппа. Проблемы гриппа и вирусных ОРЗ: Сборник трудов. Ленинград, 1973. 5: 54 - 64.

38. Beare A.S. Laboratory characteristics of attenuated influenza viruses. Bull. World Health Organ. 1969; 41 (3): 595 - 598.

39. Smorodintsev A.A., Alexandrova G.A., Chalkina O.M., Selivanov A.A. Experience in the development of live vaccines against influenza and influenza-like respiratory infections. In: Applied Virology (Eds.: M. Saunders, E.H. Lennette; 1st Annual Symposium, Boca Raton, Florida, 1964). Sheboygan, Wisconsin; 1965: 142.

40. Shinya K., Ebina M., Yamada S., Ono M., Kasai N., Kawaoka Y. Avian flu: influenza virus receptors in the human airway. Nature. 2006; 440 (7083): 435, 436.

41. Xu Q., Wang W., Cheng X., Zengel J., Jin H. Influenza H1N1 A/Solomon Island/3/06 virus receptor binding specificity correlates with virus pathogenicity, antigenicity, and immunogenicity in ferrets. J. Virol. 2010; 84 (10): 4936 - 4945.

42. Крашенюк А.И. Разработка и производство нового поколения вирионных гриппозных вакцин. Автореферат дис. ... докт. мед. наук. Санкт-Петербург; 1995.

43. Whittle J.R., Zhang R., Khurana S., King L.R., Manischewitz J., Golding H. et al. Broadly neutralizing human antibody that recognizes the receptor-binding pocket of influenza virus hemagglutinin. Proc. Natl Acad. Sci USA. 2011; 108 (34): 14216 - 14221.

44. Aytay S., Schulze I.T. Single amino acid substitutions in the hemagglutinin can alter the host range and receptor binding properties of H1 strains of influenza A virus. J. Virol. 1991; 65 (6): 3022 - 3028.

45. Rogers G.N., Paulson J.C., Daniels R.S., Skehel J.J., Wilson I.A., Wiley D.C. Single amino acid substitutions in influenza haemagglutinin change receptor binding specificity. Nature. 1983; 304 (5921): 76 - 78.

46. Leigh M.W., Connor R.J., Kelm S., Baum L.G., Paulson J.C. Receptor specificity of influenza virus influences severity of illness in ferrets. Vaccine. 1995; 13 (15): 1468 - 1473.

47. Wang W., Lu B., Zhou H., Suguitan A.L., Cheng X., Subbarao K. et al. Glycosylation at 158N of the hemagglutinin protein and receptor binding specificity synergisti-cally affect the antigenicity and immunogenicity of a live attenuated H5N1 A/Vietnam/1203/2004 vaccine virus in ferrets. J. Virol. 2010; 84 (13): 6570 - 6577.

48. Schulze I.T. Effects of glycosylation on the properties and functions of influenza virus hemagglutinin. J. Infect. Dis. 1997. 176 (Suppl. 1): S24 - S28.

49. Katz J.M., Naeve C.W., Webster R.G. Host cell-mediated variation in H3N2 influenza viruses. Virology. 1987; 156 (2): 386 - 395.

50. Chen Z., Zhou H., Jin H. The impact of key amino acid substitutions in the hemagglutinin of influenza A (H3N2) viruses on vaccine production and antibody response. Vaccine. 2010; 28 (24): 4079 - 4085.

51. Chen Z., Zhou H., Kim L., Jin H. The receptor binding specificity of the live attenuated influenza H2 and H6 vaccine viruses contributes to vaccine immunogenicity and protection in ferrets. J. Virol. 2012; 86 (5): 2780 - 2786.

52. Hensley S.E., Das S.R., Bailey A.L., Schmidt L.M., Hickman H.D., Jayaraman A. et al. Hemagglutinin receptor binding avidity drives influenza A virus antigenic drift. Science. 2009; 326 (5953): 734 - 736.

53. Shtyrya Y., Mochalova L., Voznova G., Rudneva I., Shilov A., Kaverin N. et al. Adjustment of receptor-binding and neuraminidase substrate specificities in avian-human reassortant influenza viruses. Glycoconjugate J. 2009; 26 (1): 99 - 109.

54. Matrosovich M., Tuzikov A., Bovin N., Gambaryan A., Klimov A., Castrucci M.R. et al. Early alterations of the receptor-binding properties of H1, H2, and H3 avian influenza virus hemagglutinins after their introduction into mammals. J. Virol. 2000; 74 (18): 8502 - 8512.

55. Gambaryan A.S., Marinina V.P., Tuzikov A.B., Bovin N.V., Rudneva I.A., Sinitsyn B.V. et al. Effects of host-dependent glycosylation of hemagglutinin on receptor-binding properties on H1N1 human influenza A virus grown in MDCK cells and in embryonated eggs. Virology. 1998; 247 (2): 170 - 177.

56. Hoffmann E., Lipatov A.S., Webby R.J., Govorkova E.A., Webster R.G. Role of specific hemagglutinin amino acids in the immunogenicity and protection of H5N1 influenza virus vaccines. Proc. Natl Acad. Sci USA. 2005; 102 (36): 12915 - 12920.

57. Соминина А.А., Корчакова Н.Л., Поляков Ю.М., Таранова Г.П., Смирнова Л.Б., Константинов В.К. Штамм А (Ленинград)/299/80 вируса гриппа, используемый для приготовления гриппозного диагностикума. Авторское свидетельство № SU 1040788 A. Бюл. № 40. 1986.

58. Lang V., Marjuki H., Krauss S.L., Webby R.J., Webster R.G. Different incubation temperatures affect viral polymerase activity and yields of low-pathogenic avian influenza viruses in embryonated chicken eggs. Arch. Virol. 2011; 156 (6): 987 - 994.

59. Peetermans J. Live influenza virus vaccines and preparation thereof. United States Patent № 39535924; 1976.

60. Методические указания МУ 3.3.2.1758-03 «Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 28.09.2003 г.).

References

1. Kiseleva I.V., Larionova N.V., Litvinova O.M., Ivanova V.V., Isakova I.N., Medvedeva T.E. et al. Changing of temperature sensitivity as a reflection of the evolutionary variability of influenza epidemic strains. Med. Akad. Zh. 2002; 2 (3): 49 - 57 (in Russian).

2. Murakami Y., Nerome K., Yoshioka Y., Mizuno S., Oya A. Difference in growth behavior of human, swine, equine, and avian influenza viruses at a high temperature. Arch. Virol. 1988; 100 (3 - 4): 231 - 244.

3. Kiseleva I.V., Voeten J.T., Teley L.C., Larionova N.V., Drieszenvan der Cruijsen S.K., Basten S.M. et al. PB2 and PA genes control the expression of the temperature-sensitive phenotype of cold-adapted B/USSR/60/69 influenza master donor virus. J. Gen. Virol. 2010; 91 (Pt 4): 931 - 937.

4. Kiseleva I., Klimov A., Su Q., Szymkowiak C., Toner T.J., Kwan W.S. et al. Role of individual genes of the A/Leningrad/134/17/57 (H2N2) cold-adapted donor strain in manifestation of the temperature-sensitive phenotype of reassortant influenza A viruses. Proceedings of Options for the Control of Influenza V. Okinawa, Japan; 2003: 547 - 550.

5. Hoffmann E., Mahmood K., Chen Z., Yang C.F., Spaete J., Greenberg H.B. et al. Multiple gene segments control the temperature sensitivity and attenuation phenotypes of ca B/Ann Arbor/1/66. J. Virol. 2005; 79 (17): 11014 - 11021.

6. Subbarao E.K., Park E.J., Lawson C.M., Chen A.Y., Murphy B.R. Sequential addition of temperature-sensitive missense mutations into the PB2 gene of influenza A transfectant viruses can effect an increase in temperature sensitivity and attenuation and permits the rational design of a genetically engineered live influenza A virus vaccine. J. Virol. 1995; 69 (10): 5969 - 5977.

7. Palese P., Tobita K., Ueda M., Compans R.W. Characterization of temperature sensitive influenza virus mutants defective in neuraminidase. Virology. 1974; 61 (2): 397 - 410.

8. Chu C.M., Wei B.Y., Tian S.F., Ren G.F. Host dependence of naturally occurring temperature-sensitive influenza A viruses and location of their genetic lesions. Virus Res. 1992; 22 (3): 207 - 214.

9. Isakova I.N., Kiseleva I.V., Larionova N.V., Ole nik E.S., Rudenko L.G. Live influenza vaccine: laboratory markers of attenuation. Vopr. Virusol. 2007; 52 (4): 22-26 (in Russian).

10. Alexandrova G.I., Klimov A.I. Live influenza vaccine. Saint-Petersburg: Nauka; 1994. 151 (In Russian).

11. Beare A.S., Maassab H.F., Tyrrell D.A., Slepuskin A.N., Hall T.S. A comparative study of attenuated influenza viruses. Bull. World Health Organ. 1971; 44 (5): 593 - 598.

12. Tyrrell D.A., Beare A.S. Some studies on the selection and efficiency of live influenza vaccine viruses. Bull. World Health Organ. 1969; 41 (3): 581 - 584.

13. Medvedeva T.E., Shaposhnikova R.P., Kolyak L.I., Gordon M.A., Goldfarb V.E., Avtushenko S.S. et al. Reactogenic and immunogenic properties of influenza strain A/Leningrad/538/74 during low-temperature passaging. Problemy Grippa i ORZ. Proceedings. Leningrad: 1977; 19: 128 137 (in Russian).

14. Medvedeva T.E., Alexandrova G.I., Smorodintsev A.A. Interferon production in developing chicken embryos infected with cold- and high temperature-adopted influenza strains A2: Problemy Grippa i ORZ: Proceedings. Leningrad; 1972; 1: 143 - 149 (in Russian).

15. Kiseleva I.V., Larionova N.V., Voeten J.T.M., Teley L.C.P., Drieszen-van der Cruijsen S.K.M., Heldens J.G.M. et al. Principal role of polymerase complex genes in attenuation of Russian live influenza vaccine A and B strains. Zh. Microbiologii Epidemiologii i immunobiologii. 2010; (6): 41 - 47 (in Russian).

16. Romanova Iu.R., Egorov A.Iu., Lisovskaia K.V., Medvedeva T.E., Nevedomskaia G.N., Aleksandrova G.I. et al. The effect of amplifying reproduction of influenza virus in mouse lungs during simultaneous infection with two cold-adapted strains. Vopr. Virusol. 1989; 34 (5): 547 - 553 (in Russian).

17. Kaverin N.V., Finskaya N.N., Rudneva I.A., Gitelman A. K., Kharitonenkov I. G., Smirnov Y. A. Studies on the genetic basis of human influenza A virus adaptation to mice: degrees of virulence of reassortants with defined genetic content. Arch. Virol. 1989; 105 (1 2): 29 - 37.

18. Jin H., Lu B., Zhou H., Ma C., Zhao J., Yang C.F. et al. Multiple amino acid residues confer temperature sensitivity to human influenza virus vaccine strains (FluMist) derived from cold-adapted A/Ann Arbor/6/60. Virology. 2003; 306 (1): 18 - 24.

19. Rekstin A.R., Na khin A.N., Barantseva I.B., Rudenko L.G. B-cell and cytotoxic lymphocyte immune response to virulent, attenuated and reassortant influenza viruses. Vopr. Virusol. 2002; 47 (4): 27 - 32 (in Russian).

20. Kiseleva I.V., Grigor'eva E.P., Na khin A.N., Ivanova V.V., Larionova N.V., Donina S.A. et al. The temperature sensitivity of epidemic influenza A viruses as a marker of immunogenicity of reassortant vaccinal strains. Vopr. Virusol. 2003; 48 (4): 26 - 29 (in Russian).

21. Pharmacopeial article of manufacturer № Р N003224/01-270313. Intranasal allantoic live influenza vaccine. (in Russian). 2013.

22. Larionova N.V., Kiseleva I.V., Isakova I.N., Litvinova O.M., Rudenko L.G. Phenotype of epidemic influenza B virus strains isolated in different years. Vopr Virusol. 2006; 51 (5): 38 - 41 (in Russian).

23. Rogers G.N., Pritchett T.J., Lane J.L., Paulson J.C. Differential sensitivity of human, avian, and equine influenza A viruses to a glycoprotein inhibitor of infection: selection of receptor specific variants. Virology. 1983; 131 (2): 394 - 408.

24. Matrosovich M., Gao P, Kawaoka Y. Molecular mechanisms of serum resistance of human influenza H3N2 virus and their involvement in virus adaptation in a new host. J. Virol. 1998; 72 (8): 6373 - 6380.

25. Gimsa U., Grotzinger I., Gimsa J. Two evolutionary strategies of influenza viruses to escape host non-specific inhibitors: alteration of hemagglutinin or neuraminidase specificity. Virus. Res. 1996;. 42 (1 - 2): 127 - 135.

26. Reading P.C., Job E.R., Tate M.D., Brooks A.J., Bottazzi B., Mantovani A. Inhibition of influenza viruses by proteins of the innate immune system. Options for the control of influenza VI. Toronto, Ontario, Canada; 2007: 489 - 491.

27. Ito T., Suzuki Y., Mitnaul L., Vines A., Kida H., Kawaoka Y. Receptor specificity of influenza A viruses correlates with the agglutination of erythrocytes from different animal species. Virology. 1997; 227 (2): 493 - 499.

28. Krizanova O., Rathova V. Serum inhibitors of myxoviruses. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1969. 47: 125 - 151.

29. Kuznetcova V., Isakova-Sivak I., Kuznetcova S., Rudenko L. Evaluation of immunogenicity and cross-reactivity of influenza A viruses with different receptor-binding specificity in a mouse model. Options for the control of influenza VIII. Cape Town, South Africa; 2013: 302.

30. Fedorova E.A., Dubrovina I.A., Kuznetsova V.A., Isakova-Sivak I.N., Ivanova E.V., Bazhenova E.A. Immunogenicity and transmission of inhibitor-resistant and inhibitor-sensitive variants of influenza A/Singapore/57 (H2N2) in intranasal-infected guinea pig model. Proceedings of XVI Russian medical and biological conference of young scientists «Fundamental Science and Clinical Medicine - Human and Health». Saint-Petersburg; 2013: 421 - 422 (in Russian).

31. Gambaryan A.S., Tuzikov A.B., Piskarev V.E., Yamnikova S.S., Lvov D.K., Robertson J.S. et al. Specification of receptor-binding phenotypes of influenza virus isolates from different hosts using synthetic sialylglycopolymers: non-egg-adapted human H1 and H3 influenza A and influenza B viruses share a common high binding affinity for 6'-sialyl(N-acetyllactosamine). Virology. 1997; 232 (2): 345 - 50.

32. Wang Y.F., Chang C.F., Chi C.Y., Wang H.C., Wang J.R., Su I.J. Characterization of glycan binding specificities of influenza B viruses with correlation with hemagglutinin genotypes and clinical features. J. Med. Virol. 2012; 84 (4): 679 - 685.

33. Hartley C.A., Reading PC., Ward A.C., Anders E.M. Changes in the hemagglutinin molecule of influenza type A(H3N2) virus associated with increased virulence for mice. Arch. Virol. 1997; 142 (1): 75 - 88.

34. LeVine A.M., Hartshorn K., Elliott J., Whitsett J., Korfhagen T. Absence of SP-A modulates innate and adaptive defense responses to pulmonary influenza infection. Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. Physiol. 2002; 282 (3): L563 - 572.

35. LeVine A.M., Whitsett J.A., Hartshorn K.L., Crouch E.C., Korfhagen T.R. Surfactant protein D enhances clearance of influenza A virus from the lung in vivo. J. Immunol. 2001; 167 (10): 5868 - 5873.

36. Reading P.C., Morey L.S., Crouch E.C., Anders E.M. Collectin-mediated antiviral host defense of the lung: evidence from influenza virus infection of mice. J. Virol. 1997; 71 (11): 8204 - 8212.

37. Zhilova G.P Principles of influenza vaccine strains preparation. Problemy Grippa I virusnyh ORZ: Proceedings. Leningrad; 1973. 5: 54 - 64 (in Russian).

38. Beare A.S. Laboratory characteristics of attenuated influenza viruses. Bull. World Health Organ. 1969; 41 (3): 595 - 598.

39. Smorodintsev A.A., Alexandrova G.A., Chalkina O.M., Selivanov A.A. Experience in the development of live vaccines against influenza and influenza-like respiratory infections. In: Applied Virology (Eds.: M. Saunders, E.H. Lennette; 1st Annual Symposium, Boca Raton, Florida, 1964). Sheboygan, Wisconsin; 1965: 142.

40. Shinya K., Ebina M., Yamada S., Ono M., Kasai N., Kawaoka Y. Avian flu: influenza virus receptors in the human airway. Nature. 2006; 440 (7083): 435, 436.

41. Xu Q., Wang W., Cheng X., Zengel J., Jin H. Influenza H1N1 A/Solomon Island/3/06 virus receptor binding specificity correlates with virus pathogenicity, antigenicity, and immunogenicity in ferrets. J. Virol. 2010; 84 (10): 4936 - 4945.

42. Krashenuk A.I. Development and manufacturing of new generation of whole-virion influenza vaccines: MD Thesis. Saint-Petersburg; 1995 (in Russian).

43. Whittle J.R., Zhang R., Khurana S., King L.R., Manischewitz J., Golding H. et al. Broadly neutralizing human antibody that recognizes the receptor-binding pocket of influenza virus hemagglutinin. Proc. Natl Acad. Sci USA. 2011; 108 (34): 14216 - 14221.

44. Aytay S., Schulze I.T. Single amino acid substitutions in the hemagglutinin can alter the host range and receptor binding properties of H1 strains of influenza A virus. J. Virol. 1991; 65 (6): 3022 - 3028.

45. Rogers G.N., Paulson J.C., Daniels R.S., Skehel J.J., Wilson I.A., Wiley D.C. Single amino acid substitutions in influenza haemagglutinin change receptor binding specificity. Nature. 1983; 304 (5921): 76 - 78.

46. Leigh M.W., Connor R.J., Kelm S., Baum L.G., Paulson J.C. Receptor specificity of influenza virus influences severity of illness in ferrets. Vaccine. 1995; 13 (15): 1468 - 1473.

47. Wang W., Lu B., Zhou H., Suguitan A.L., Cheng X., Subbarao K. et al. Glycosylation at 158N of the hemagglutinin protein and receptor binding specificity synergistically affect the antigenicity and immunogenicity of a live attenuated H5N1 A/Vietnam/1203/2004 vaccine virus in ferrets. J. Virol. 2010; 84 (13): 6570 - 6577.

48. Schulze I.T. Effects of glycosylation on the properties and functions of influenza virus hemagglutinin. J Infect Dis. 1997. 176 (Suppl. 1): S24 - S28.

49. Katz J.M., Naeve C.W., Webster R.G. Host cell-mediated variation in H3N2 influenza viruses. Virology. 1987; 156 (2): 386 - 395.

50. Chen Z., Zhou H., Jin H. The impact of key amino acid substitutions in the hemagglutinin of influenza A (H3N2) viruses on vaccine production and antibody response. Vaccine. 2010; 28 (24): 4079 - 4085.

51. Chen Z., Zhou H., Kim L., Jin H. The receptor binding specificity of the live attenuated influenza H2 and H6 vaccine viruses contributes to vaccine immunogenicity and protection in ferrets. J. Virol. 2012; 86 (5): 2780 - 2786.

52. Hensley S.E., Das S.R., Bailey A.L., Schmidt L.M., Hickman H.D., Jayaraman A. et al. Hemagglutinin receptor binding avidity drives influenza A virus antigenic drift. Science. 2009;. 326 (5953): 734 - 736.

53. Shtyrya Y., Mochalova L., Voznova G., Rudneva I., Shilov A., Kaverin N. et al. Adjustment of receptor-binding and neuraminidase substrate specificities in avian-human reassortant influenza viruses. Glycoconjugate J. 2009; 26 (1): 99 - 109.

54. Matrosovich M., Tuzikov A., Bovin N., Gambaryan A., Klimov A., Castrucci M.R. et al. Early alterations of the receptor-binding properties of H1, H2, and H3 avian influenza virus hemagglutinins after their introduction into mammals. J. Virol. 2000; 74 (18): 8502 - 8512.

55. Gambaryan A.S., Marinina V.P, Tuzikov A.B., Bovin N.V., Rudneva I.A., Sinitsyn B.V. et al. Effects of host-dependent glycosylation of hemagglutinin on receptor-binding properties on H1N1 human influenza A virus grown in MDCK cells and in embryonated eggs. Virology. 1998; 247 (2): 170 - 177.

56. Hoffmann E., Lipatov A.S., Webby R.J., Govorkova E.A., Webster R.G. Role of specific hemagglutinin amino acids in the immunogenicity and protection of H5N1 influenza virus vaccines. Proc. Natl Acad. Sci USA. 2005; 102 (36): 12915 - 12920.

57. Sominina A.A., Korchakova N.L., Polyakov Ju.M., Taranova G.P., Smirnova L.B., Konstantinov V.K. Influenza strain A(Leningrad)299/80 for influenza diagnosticum preparation. Certificate of Authorship № SU 1040788 A. 1986 (in Russian).

58. Lang V., Marjuki H., Krauss S.L., Webby R.J., Webster R.G. Different incubation temperatures affect viral polymerase activity and yields of low-pathogenic avian influenza viruses in embryonated chicken eggs. Arch. Virol. 2011;. 156 (6): 987 - 994.

59. Peetermans J. Live influenza virus vaccines and preparation thereof. United States Patent № 39535924; 1976.

60. Guidelines: MU 3.3.2.1758-03 «Methods of quality control of immunobiologic preparations for influenza prevention and diagnostics» (approved by Chief Medical Officer of Russian Federation 28.09.2003) (in Russian).

4lí

H А С К И

НАЦИОНАЛЬНАЯ АССОЦИАЦИЯ СПЕЦИАЛИСТОВ

ПО КОНТРОЛЮ ИНФЕКЦИЙ

всероссийская научно-практическая

КОНФЕРЕНЦИЯ СПЕЦИАЛИСТОВ ПО КОНТРОЛЮ

ИНФЕКЦИЙ, СВЯЗАННЫХ С ОКАЗАНИЕМ МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ,

с международным участием

19 - 21 ноября 2014

Москва, проспект Вернадского, 84 Российская академия народного хозяйства и государственной службы при Президенте РФ

КОНТАКТЫ ОРГАНИЗАЦИОННОГО КОМИТЕТА: Научная программа и публикации: +7 903-608-39-08 - Ковалишена Ольга Васильевна +7 926-349-52-43 - Полибин Роман Владимирович

Организационные вопросы (проживание, питание и др.), участие в выставке

обеспечивает официальный партнер мероприятия -

медицинское издательство «РЕМЕДИУМ ПРИВОЛЖЬЕ»:

тел.(831)411-19-83(85)

E-mail: nn remedium@medalmanac.ru