CC BY
72
HayKOBMM BiCHMK ^tBiBCtKoro Ha^OHa^tHoro yHiBepcMTeTy
BeTepMHapHoi Megw^HM Ta öioTexHO^oriw iMem C.3. I^M^Koro
Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies
ISSN 2518-7554 print doi: 10.32718/nvlvet9227
ISSN 2518-1327 online http://nvlvet.com.ua
UDC 619:578:579.62:636.4:577.2
Evaluation of the cleansing and disinfection protocol of pig-breeding premises contaminated by the porcine epidemic diarrhea virus
D M. Masiuk, O.I. Sosnztskyi, A.V. Kokariev, T.O. Vasilenko
Dnipro State Agrarian and Economic University, Dnipro, Ukraine
Masiuk, D.M., Sosnztskyi, O.I., Kokariev, A.V., & Vasilenko, T.O. (2018). Evaluation of the cleansing and disinfection protocol of pig-breeding premises contaminated by the porcine epidemic diarrhea virus. Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies, 20(92), 130-136. doi: 10.32718/nvlvet9227
The results of the determination of the efficiency of the cleaning and disinfection protocol of pig farms contaminated by the porcine epidemic diarrhea virus are presented in this study. The research was conducted in the Scientific Research Center of Biosafety and Environmental Control AIC of the Dnipro State Agrarian and Economic University. The experimental part was carried out on the basis of a permanently infected pig breeding farm of the southern region of Ukraine. In order to determine the critical points, a selection of samples of washings/scraps from the surfaces of the pig farm's premises and the objects of the environment was carried out before cleaning and disinfection and after 1 and 2 premises' sanitation. A total of 204 tests were analyzed. Disinfection of the territory of pig farms and livestock premises was carried out in accordance with generally accepted methods. Before disinfection, a thorough mechanical cleaning of livestock premises was carried out, with subsequent irrigation of all surfaces with cold tap water. Disinfection of premises and the territory of the pig complex was carried out by the wet cleaning of surfaces with a solution of disinfectant based on glutaraldehyde after preparatory operations in the absence of animals. After disinfection the premises were additionally processed with Ca(OH)2 solution. Washes were obtained with a sterile swab from a surface of 10.0 cm2 by inserting a swab into a test tube with a sterile physiological solution. Scraps from the surfaces were obtained with a disposable sterile blades from the scalpel. The obtained material was placed in disposable sterile plastic 1.5-2.0 cm3 test tubes. The study of the presence of the PEDV was performed using a real-time polymerase chain reaction with the previous reverse transcription of RNA. It was established that the causative agent of PED in a permanently infectedfarm contaminates most of the production and auxiliary premises and objects of the environment. The one-time cleaning and disinfection protocol does not allow free the farm from the PEDV completely. Only two-time sanitation of premises and objects of the environment with the laboratory control of the efficiency of cleaning and disinfection contributes to the effective eradication of the PEDV.
Key words: sanation, PED, PEDv, RT-PCR, washings, contamination.
Ощнка протоколу очищення та дезшфекцп у свинарських примнценнях контамшованих Bipy^M ешдемiчноl дiаpеl свиней
Д.М. Масюк, О.1. Сосницький, А.В. Кокарев, Т.О. Василенко
Днтровський державний аграрно-економiчний yuieepcumem, м. Дтпро, Украша
У po6omi представлено результаты визначення eфeктивностi протоколу очищення та дезтфекци у свинарських примщеннях контамтованих вipyсoм eпiдeмiчнoi дiаpei свиней. До^дження проведет в Науково-до^дному цeнmpi бюбезпеки та eкoлoгiчнoгo контролю peсypсiв агропромислового комплексу Днтровського державного агpаpнo-eкoнoмiчнoгo утверситету. Експерименталь-на частина проведена на базi стащонарно неблагополучного свинарського тдприемства твденного регюну Украти. Для визначення критичних точок було проведено вiдбip зразтв змивiв /зiшкpiбiв з поверхонь примщень свиноферми та об 'eкmiв навколишнього середовища до проведення очищення та дезтфекци та тсля 1 i 2 санацп примщень. Всього було протестована 204 проб. Дезтфе-кцш територп свинарських комплекав i тваринницьких примщень проводили згiднo загальноприйнятих спoсoбiв. Перед дезтфек-щею проводили ретельне мехашчне очищення тваринницьких примщень з подальшим зрошенням вЫх поверхонь хoлoднoi водопро-
Article info
Received 23.10.2018 Received in revised form
23.11.2018 Accepted 26.11.2018
Dnipro State Agrarian and Economic University, 25 Serhiya Yefremova Street, Dnipro, 49000, Ukraine. Tel.: +38-050-636-62-37 E-mail: [email protected]
вiдноi водою. Шсля тдготовчих операцш проводили дезтфекцт свинарських примщень i територп свинокомплексу, за вiдсутно-стi тварин, вологою обробкою поверхт розчином дезтфщючого засобу на основi глутарового альдегiду. Шсля дезтфекци прит-щення додатково проводили обробку свiжо гашеним вапном. Змиви проводили стерильним тампоном з поверхт розмiром 10,0 см2, встромлюючи тампон в пробiрку iз стерильним фiзiологiчним розчином. Зшк^би з поверхонь проводили одноразовими стерильни-ми лезами вiд скальпеля. Отриманий матерiал помщали в одноразовi стерильт пластиковi пробiрки об'емом 1,5-2,0 см3. Досл> дження наявностi вiрусу ЕДС проводили за допомогою полiмеразноi ланцюговоiреакцп iз детекцieю результатiв у реальному ча& за попередньог' зворотноi транскрипцп РНК (КГ-РСК). Встановлено, що збудник ЕДС у стащонарно неблагополучному господарс-твi контамшуе бтьшкть виробничих i допомiжних примщень та об'eктiв навколишнього середовища. Використаний одноразо-вий протокол очищення та дезшфекци не дае змогу повтстю звшьнити господарство вiд вiрусу ЕДС. Лише дворазова санащя примщень та об'ектiв навколишнього середовища, яка вiдбуваеться з урахуванням результатiв лабораторного контролю ефек-тивностi очищення та дезтфекци сприяе ефективнш ерадикаци збуднику ЕДС.
Ключовi слова: санащя, ЕДС, РЕОу, КГ-РСК, змиви, зiшкрiби, контамтащя.
Вступ
Дезшфекцш тваринницьких примщень, забрудне-них BipycoM en№Mi4HOi дiаpеl свиней (PEDv), е обов'язковим елементом протиетзоотичних захoдiв, спрямованих на санування та ерадикацш збудника епiдемiчнol дiаpеl свиней (ЕДС) з довкшля сприйнят-ливих тварин. Т№ки повне знезараження тваринни-цько! ферми в поеднанш з елiмiнацiею збудника з оргашзму свиней дае можливють звшьниться вщ цир-куляци збудника ЕДС серед сприйнятливих тварин (Dee et al., 2018; Gosling, 2018). Необхщно враховува-ти, що новонароджеш неiмyннi поросята е надчутте-вими i облтатно сприйнятливими макрооргашзмами до PEDv, саме тому вони е бюшдикатором збудника ЕДС, який збертаеться у навколишньому cеpедoвищi на piзнoманiтнoмy технолопчному обладнанш в piз-них тваринницьких примщеннях (Trudeau et al., 2017).
PEDv ввдноситься до РНК-кopoнавipycy, який мае лшопротешову оболонку, що обумовлюе !х ефipo - i хлороформчутливють. Пеплос i пеплoмipи вipycy руйнуються дезоксихолатом натpiю, детергентами i загальноприйнятими кoнцентpацiями поширених дезiнфiкyючих заcoбiв. Вipyc iнактивyетьcя 0,03% розчином фopмалiнy, 0,01% розчином р-пpoпioлактoнy, 1% розчином Lysovet (cyмiш фенолу та альдепду), слабкими розчинами 1дкого натрш, гшохлориду натpiю, йоду, тощо (Bowman et al., 2015; Gosling, 2018). PEDv стшкий до трипсину, жовч^ рН 3,0-9,0, низьких температур, триразове заморожуван-ня-вiдтавання не знижуе iнфекцiйнicть збудника. У рщких фекалiях на сонщ вipyc втрачае iнфекцiйнicть протягом 6 год, в тш - за 3 доби. Висош температури i пpямi coнячнi пpoменi дшть згубно (Jung and Chae, 2004; Thomas et al., 2014; Cochrane et al., 2017).
В УкраЫ зареестроваш i застосовуються piзнoма-нiтнi офщшш дезiнфiкyючi препарати проти шфек-цшних агентiв piзнol природи. Проти вipycних i бак-теpiальних iнфекцiй ефективш Аеродез, Бioдез, Бю-дез-Екстра ДВУ, Бio-Лoнг, Вipocан, Вipкoн С, Гексах-лорфен, ДЗПТ-2, Дезконтен, Дезолайн-Д, Дшовю, Жавель-Клейд, Мiкcамiн, Новодез, Пoлiдез, Септадор, Септокс, Тpiocепт-Екcтpа, Теoтpoпiн-П, Трюсепт-Ендо, Хлopамiн Б, Ектерецвд, Епiдез, Ешдез М, Еко-цид C, група Desu, Incimaxxc T, Environ та ш.
Вдало застосовують розчини формал^ з вмicтoм 1,5% фopмальдегiдy, розчин нейтрального гшохлориду кальцш з вмютом 5,0% активного хлору, 5,0% розчин хлорамшу, хлорне вапно, з вмютом не менш
як 25,0% активного хлору, перекис водню, однохло-ристого йоду, йодозоль, йодис, 3,0% гарячий розчин 1дкого натру та ш. (Gerber et al., 2014; Bowman et al., 2015; Quist-rybachuk et al., 2015; Tun et al., 2016; Baker et al., 2017; Holtkamp et al., 2017; Martelli et al., 2017; Trudeau et al., 2017).
При дотриманш нормативних вимог до умов проведения процесу дезшфекци та концентрацп активно дшчо! речовини в лабораторних умовах отримують ефективш результати стосовно шактивацп шфекцш-ного агента (Ojeh et al., 1995), але в реальних умовах тваринницького комплексу завжди знаходяться важ-кoдocтyпнi мicця, до яких не проникае дезiнфектант у необхвдних кoнцентpацiях, у pезyльтатi чого не ви-тримуеться технoлoгiчна експозишя, що знижуе вipy-лiциднy дш препарату i збеpiгае бioлoгiчнo активний вipyc - пoтенцiйне джерело решфекци ЕДС (Waddil-ove and Blackwell, 1997; Thomson et al., 2007; Luyckx et al., 2016).
Мета роботи: визначити ефектившсть протоколу очищення та дезшфекци у свинарських примщеннях контамшованих вipycoм епiдемiчнol дiаpеl свиней.
MaTepia™ i методи дослiджень
Дослвдження пpoведенi в Наyкoвo-дocлiднoмy центpi бюбезпеки та екoлoгiчнoгo контролю pеcypciв агропромислового комплексу Днiпpoвcькoгo державного агpаpнo-екoнoмiчнoгo yнiвеpcитетy вiдпoвiднo до Науково! теми "Визначення теоретичних аcпектiв епiзooтичнoгo процесу з урахуванням генетичних ваpiантiв шташв вipycy епiдемiчнol дiаpеl свиней" (№ державно1 реестраци 0117U004293). Експеримен-тальна частина проведена на базi стацюнарно неблагополучного свинарського пiдпpиемcтва швденного pегioнy Укра1ни.
Для визначення критичних точок було проведено вiдбip зразшв змивiв / зiшкpiбiв з поверхонь примь щень свиноферми та oб'ектiв навколишнього середовища до проведення очищення та дезшфекци та шсля 1 i 2 санаци пpимiщень. Всього було протестована 204 проб.
Дезiнфекцiю територи свинарських кoмплекciв i тваринницьких примщень проводили зпдно загаль-ноприйнятих cпocoбiв проведення даного заходу за вipycних iнфекцiй, викликаних оболонковими вipycа-ми, яш мають невисоку cтiйкicть до шпбуючих фiзи-кo-хiмiчних впливiв зовшшнього середовища, особливо хiмiкатiв, яш вoлoдiють детергентними власти-
востями i руйнують лшвдну оболонку Bipycy або е активными окислювачами.
Перед заключною дезiнфекцiею проводили рете-льне механiчне очищення тваринницьких примщень з подальшим зрошенням вciх поверхонь холодною водопроввдною водою. Пicля пвдготовчих операцiй проводили заключну дезiнфекцiю свинарських примщень, за ввдсутносп тварин, i територп свинокомплексу вологою обробкою поверхш розчином дезшфь куючого засобу '^росан". Це дезiнфектант на оcновi глутарового альдегiдy. Препарат використовували зпдно з iнcтрyкцiею до використання з екcпозицiею протягом години.
Пicля дезiнфекцiï примщення додатково проводили обробку свгжогашеним вапном, а перед введениям тварин до свинарнику, ва поверхнi й технолопчне обладнання посипали препаратом "Айлжсш" (аналог "хлорамшу").
Змиви проводили стерильним тампоном з поверхш розмiром 10,0 см2, встромлюючи тампон в пробiркy iз стерильним фiзiологiчним розчином. Зш^би з пове-рхонь проводили одноразовими стерильними лезами ввд скальпеля. Отриманий матерiал помiщали в одно-разовi cтерильнi плаcтиковi пробiрки об'емом 1,52,0 см3.
Доcлiдження наявноcтi вiрycy ЕДС проводили за допомогою полiмеразноï ланцюговоï реакцiï iз детек-щею резyльтатiв у реальному чаci за попередньоï зворотноï транскрипцй' РНК (RT-PCR).
Екстракцш тотального генетичного матерiалy iз зразк1в здiйcнювали за допомогою комерцшного набору для видiлення ДНК / РНК "BioExtract®Column Kit" ("Biosellal", Фраицiя).
Зворотну траиcкрипцiю РНК вiрycy ЕДС i репль кацiю кДНК проводили за допомогою набору реакти-вiв "Bio-T kit®PEDV all - TGEV" ("Biosellal", Фран-цiя) на амплiфiкаторi CFX 96 Real-Time System ("Bio Rad", США) зпдно температурного режиму (табл. 1).
Таблиця 1
Температурний режим ампл1фшацп
№ этапу Температура, °С Час, секунд Юльюсть циктв, шт
1 50 1200 1
2 95 300 1
3 95 10
4 60 45 45
Вимiрювания рiвня флуоресценцп зразк1в здшс-нювали в режимi реального часу на 4-му еташ температурного режиму.
Облш резyльтатiв амплiфiкацiï, а також визначен-ня значення порогового циклу реакцп (threshold cycle, Ct) проводили за допомогою програмного забезпе-чення "Bio-Rad CFX Manager".
Результати та ïx обговорення
В одному з свинарських господарств з штенсив-ною технолопею ведення тваринництва в твденному регiонi Украши, неблагополучному по ЕДС, проведено молекулярно-генетичне дослвдження, спрямоване на визначення якоcтi та ефективноcтi стандартних дезшфекцшних заходiв, як1 використовують при са-нацiï господарства ввд PEDv.
Опрацьовуючи екcпериментальнi данi, викладенi в таблицях 2-6, встановили, що пicля першоï i дрyгоï дезiнфекцiï на свинокомплекс методом молекулярно-генетичного анал1зу виявлена цiльова поcлiдовнicть кДНК PEDv на рiзних предметах технологiчного об-ладнання та дiлянках примiщень, як1 розташоваш мозаïчно та не упорядковано - контамшоваш i знеза-ражеш дмнки зycтрiчаютьcя повсюди i стикаються мiж собою.
Таблиця 2
Результати скриншгу кДНК PEDv на знезаражуваних поверхнях галереï та сектора кнyрiв, Ct
Дослщжуваний об'ект До дезшфекци Шсля 1 дезшфекци Шсля 2 дезшфекци
Галерея
Вхiд NA NA NA
Шдлога 37,62 NA NA
Транспортер 35,94 39,57 NA
Коридор 39,21 NA NA
Мийка 39,27 NA NA
Коридор 34,38 NA NA
Сектор кнур1в
Саиiтариий пропускник NA NA NA
Шдлога в клетках 39,40 NA NA
Шдлога в проходi 38,31 NA NA
Шдлога тд год1вницею NA NA NA
Зливна яма 39,19 NA NA
Пiраиiï NA NA NA
Примтка. NA - не виявлено
При доcлiдженi змивiв та зiшкрiбiв з поверхонь об'ектiв галереï та сектору кнyрiв встановлено, що до проведення дезiнфекцiï галереï у 5 з 6 проб виявлено генетичний матерiал PEDv, а в rera^i кнyрiв - у 3 з
6 проб. Шсля першоï дезшфекци виявлено cлiдовi кiлькоcтi РНК вiрycy лише в змивах з транспортеру у галере^ що вказуе на низьку ефективнicть проведених дезiнфекцiйних заходiв. Жодна проба змивiв, вщбра-
них 1з сектору кнур1в, не м1стила генетичного матерь алу РЕБу. Шсля останньо! дезшфекцп ва дослвджу-ваш проби були негативними.
Дослщження змив1в та зшкр1б1в з поверхонь об'екпв свинарников сектору дорощування (табл. 3) вказують на широку розповсюджетсть в1руав у при-мщеннях сектору дорощування. Це пвдтверджуеться наявтстю генетичного матер1алу в1русу ЕДС у 4 з 6 дослщжуваних проб.
Шсля першо! санацп примщення бшьшсть поверхонь зовтштх об'екпв були позбавлет в1русу ЕДС,
але все р1вно генетичний матер1ал збуднику виявлено в змивах з шдлоги гад год1вницею, зливнш ям1 та тдлоз1 в кликах, що вказуе на нестопроцентну дезш-фекцш тд час першо! санацп примщень.
Слад зазначити, що збудник ЕДС е висококонтагь озним в1русом, а тому навиъ незначна його шльшсть, яку виявлено тсля друго! санацп примщень, за умов надходження до сприйнятливого оргатзму, який не мае специф1чного 1мунного захисту, може 1ндукувати розвиток д1арейного синдрому, що особливо актуально для неонатальних поросят (Masiuk et а1., 2017).
Таблиця 3
Результати скринтгу кДНК РЕБу на знезаражуваних поверхнях сектору дорощування, Ct
Дослвджуваний об'ект_До дезшфекцп_Шсля 1 дезшфекцп Шсля 2 дезшфекцп
Сектор дорощування: свинарник №1
Саниарний пропускник 39,76 NA
Шдлога в кликах ^ NA NA
Шгдлога в проход! 38,79 NA NA
Шдлога тд год1вницею NA 39,15 NA
Зливна яма 39,41 NA ^
Шграни 32,91 NA
Сектор дорощування: свинарник №2
Саниарний пропускник 38,44 NA NA
Шдлога в кликах 35,30 38,48 NA
Шгдлога в проход! 31,76 NA NA
Шдлога тд годгвницею ^ NA ^
Зливна яма 32,70 39,16 NA
Шграни 37,81 ^ NA
Примтка: NA - не виявлено
Друга дезшфекщя свинарнишв 1з сектору дорощування вказуе на вщсутшсть збуднику у 100% досл1-джуваних зразках 1з поверхонь об'екпв зовтшнього середовища. Це сввдчить про ефективно проведет
дезтфекцшт заходи, як1 направлен! на зв1льнення примщень ввд в1русу ЕДС з урахуванням критичних м1сць зберпання збуднику коронав1русно! тфекцп в зовшшньому середовищ1.
Таблиця 4
Результати скринтгу кДНК РЕБу на знезаражуваних поверхнях сектору ввдгод1вл1, Ct
Дослвджуваний об'ект_До дезшфекцп_Шсля 1 дезшфекцп Шсля 2 дезшфекцп
Сектор вщгодшлг свинарник №1
Саниарний пропускник NA NA
Шдлога в кликах 32,22 NA ^
Шгдлога в проход! NA NA NA
Шдлога тд год1вницею 39,29 NA NA
Зливна яма 38,40 ^ NA
Шграни 34,23 NA NA
Сектор вщгодгвлг свинарник №2
Саниарний пропускник 39,35 NA
Шдлога в кликах ^ NA NA
Шгдлога в проход! 37,57 NA NA
Шдлога тд год1вницею 31,14 ^ NA
Зливна яма 35,19 NA NA
Шграни NA NA
Сектор вщгодгвлг свинарник №3
Саниарний пропускник NA NA NA
Шгдлога в кликах 39,10 NA NA
Шгдлога в проход! NA ^ NA
Ш!длога тд годшницею NA NA NA
Зливна яма 34,68 NA ^
Ш!рат1 37,88 NA NA
Примтка: NA - не виявлено
,ocmgKeHHH 3mhbîb 3 noBepxoHb o6'eKTÎB i3 ceKTo-py BigrogiBji BKa3yroTb Ha 3HanHe po3noBcrogKeHHa Bipycy cepeg nux CBHHapHHKiB. TaK, y nepmoMy npuMi-meHHi Bipyc BHHB^eHo y 4 3 6 npo6. npu nboMy Haö6i-jtma Ki^bKÎcTb MicTHjacb y 3MHBax 3 nigjoru kjîtok Ta nipamö. y gpyroMy npHMimeHHi npucyTHicTb Bipycy 6yja BHHB^eHa y 3MHBax i3 3jhbhoï îmh, 6ij« camTapHo-ro nponycKHHKa Ta Ha nigjo3i cBHHapHHKa. CxoK pe-3y^bTaTH 6yju oTpHMaHi npu gocjigKem TpeTboro cBHHapHHKa.
BKe nid« nepmoï Ta nid« gpyroï caHamö npuMi-meHb, bcî npo6u 3MHBÎB 6yju BijbHHMH Big reHeTHHHoro MaTepiajy Bipycy E,C. Цe BKa3ye Ha BucoKy e^eKTHB-HicTb BHKopucTaHoro npoTOKojy onumeHH« Ta ge3ÎH$e-Kqiï cBHHapcbKHx npuMimeHb.
Haii6ijibma KijibKicTb Bipycy 6yno Biumuem» b 3mh-Bax 3 noBepxoHb o6'ektîb Ta npuMiieHb y cBHHapHHKy b npHMimeHHHx ceKTopy MaTOHHHKa: cBHHapHHKa № 1 i 2 (Ta6j. 5).
Ta6.^H 5
Pe3yjbTaTH cKpHHÎHry k,HK PEDv Ha 3He3apaKyBaHHx noBepxH«x ceKTopiB MaTOHHHKa Ta peMoHTHoro MojogH«Ky,
Ct
^ocjig^yBaHHH o6'eKT_,o ge3fflfoeKmï_nicj« 1 ge3mfoeKmï nicj« 2 ge3iHfoeKmï
CeKTop MaTOHHHKa: cBHHapHHK № 1
CamTapHHH nponycKHHK 33,94 NA NA
nigjora b KjiTKax 34,42 39,22 NA
nigjora b npoxogi NA NA NA
nigjora nig rogiBHHnero 39,20 NA NA
3jHBHa «Ma 35,81 40,13 NA
nipaHiï 38,28 NA NA
CeKTop MaToHHHKa: cBHHapHHK № 2
CaHÎTapHHË nponycKHHK 39,78 NA NA
nigjora b KjiTKax 31,35 38,79 NA
nigjora b npoxogi NA 39,41 NA
nigjora nig rogiBHHnero 38,20 NA NA
3jHBHa «Ma 32,64 41,85 NA
nipaHiï 39,50 NA NA
CeKTop peMoHTHoro MojogH«Ky
CamTapHHH nponycKHHK NA NA NA
nigjora b KjiTKax NA NA NA
nigjora b npoxogi NA NA NA
nigjora nig rogiBHHnero NA NA NA
3jHBHa «Ma 34,60 NA NA
nipaHiï NA NA NA
npuMimKa: NA - He BH«BjeHo
nicja nepmoï caHamï npuMiieHb Bipyc 6yjo bh«b-jeHo y 5 3 6 KompojibHHx tohok o6ox npuMiigeHb. y npHMimeHHÎ, ge yTpuMyBaBc« peMoHTHHH MojogH«K, jume ogHa npo6a 3MHBy Î3 3jhbhoï îmh MicTHja PHK Bipycy E,C.
3 ypaxyBaHHHM oTpuMaHux pe3yjbTaTÎB, «Ki BKa3y-MTb Ha Micn« 36epiraHH« Bipycy E,C y 3oBHimHboMy cepegoBHii, 6yjo npoBegeHo onumeHH« Ta ge3iH$eKmro npuMiieHb, y pe3yjbTaTi noro ceKTop peMoHTHoro mo-jogH«Ky noBHic™ 3BijbHeHHH Big 36ygHHKy E,C. Ha ne BKa3yMTb oTpuMam HeraTHBHi pe3yjbTaTH RT-PCR nida nepmoï Ta gpyroï caHamï'. y toh Ke nac Ha noBep-xh«x y npHMiieHHax MaTOHHHKiB BHHBjeHo k,HK Bipycy E,C nid« npoBegeHH« nepmoro onumeHH« Ta ge3-iH^eKqiï. npH nboMy b nepmoMy cBHHapHHKy BHHBueHo
2 3 6 npo6, a y gpyroMy cBHHapHHKy - 3 3 6 npo6 3mhbîb
3 noBepxoHb, io 6yjH KoHTaMÎHoBaHi reHeTHHHHM Ma-TepiajoM Bipycy E,C. Cjig Big3HanHTH, io gocjigKy-BaHi npo6H nid« gpyroï caHamï npuMimeHb MicT«Tb Ha 2-3 jorapH^MH MeHmy KijbKicTb 36ygHHKy E,C, nopi-bh«ho go pe3yjbTaTÎB, oTpHMaHHx nicna nepmoro ohh-ieHHH Ta ge3iH$eKmï. Ha ne BKa3ye 36ijbmeHH« y no3H-thbho pearyMHHx npo6ax noKa3HHKy Ct Ha 6 oguHHnb i 6ijbme (Ojeh et al., 1995).
,pyre onuieHHa Ta ge3iH$eKqia TBapuHHHnbKux npuMiieHb cnpuajH 3BijbHeHHM HaBKojumHboro cepe-goBHia KopnyciB MaTOHHHKy Big Bipycy E,C, io nigT-BepgKyeTbc« HeraTHBHHM pe3yjbTaToM TeciyBaHH« 3MHBÎB noBepxoHb o6'ektîb cBHHapHHKÎB MeTogoM RT-PCR.
CKpuHÎHr reHeTHHHoro MaTepiajy Bipycy E,C 3 noBepxoHb ÎHmux o6'gktîb, io 3HaxogaTbca Ha TepHTopiï cBHHoKoMnjeKcy BKa3yMTb Ha 3HanHe po3noBcMg®eHHH Bipycy y 3oBHimHboMy cepegoBHii (Ta6j. 6).
TeHeTHHHHH MaTepiaj Bipycy E,C 6yjo BHHBjeHo b npo6ax 3MHBÎB Bigi6paHHx 3 noBepxoHb 6ija neHTpajb-Horo caHÎTapHoro nponycKHHKy cBHHoKoMnjeKcy Ta nouoBÎioro caHÎTapHoro nponycKHHKy, a TaKo5K y Ka6i-HeTi BeTepuHapHoro jiKapa, BeTepHHapmn anTeni Ta ckotobo3Î. OcTaHHÎH gocHTb nacTo e gKepejoM po3noB-crogKeHHa KopoHaBipycHoï ÎH^eKniï (Thomas et al., 2014).
nicja npoBegeHHH nepmoro onuieHHH Ta ge3ÎH$eK-niï cjigu reHeTHHHoro MaTepiajy Bipycy E,C BHHBjeHo y Ka6ÎHeTi BeTepHHapHoro jiKapa Ta ckotobo3Î. nicja gpyroï caHaniï BHie 3a3HaneHux o6'eKTÎB pe3yjbTaTH gocjigKeHHa 3mhbîb 3 ïx noBepxoHb Maju HeraTHBHHH pe3yjbTaT, io BKa3ye Ha BigcyTHicTb Bipycy b gocji-gKyBaHHx 3pa3Kax.
Таблиця 6
Результати скриншгу кДНК PEDv на знезаражуваних поверхнях шших об'ектiв, що знаходяться на територп свинокомплексу, Ct
Дослвджуваний об'ект
До дезiнфекцiï
Шсля 1 дезшфекци Пicля 2 дезшфекци
Саиiтариий пропускник (центральний)
Жiиочий санпропускник
Чоловiчий санпропускник
Кабшет ветеринарного лжаря
Ветеринарна аптека
Вшзд з ферми
Скотовоз
Холодильник_
32,39 NA 31,60 32,46 33,34 NA 33,13 NA
NA NA NA 40,90 NA NA 39,52 NA
NA NA NA NA NA NA NA NA
Примтка. NA - не виявлено
Отже, у стацюнарно неблагополучному господарс-твi за ЕДС вiрyc е широко розповсюдженим у навко-лишньому cередовищi.
Доcлiдження якоcтi протоколу очищення та дезшфекци вказують на низьку ефектившсть одноразовоï санацп примiщень та прилеглоï територи, тодi як дворазова обробка поверхонь об'екпв зовнiшнього середовища сприяе бiльш ефективному видаленню вiрycy ЕДС з територи господарства.
Висновки
Збудник ЕДС у стацюнарно неблагополучному го-cподарcтвi контамшуе бiльшicть виробничих i допо-м1жних примiщень та об'ектiв навколишнього сере-довища. Використаний одноразовий протокол очи-щення та дезiнфекцiï не дае змогу повнicтю звiльнити господарство вщ вiрycy ЕДС. Лише дворазова санашя примiщень та об'ектiв навколишнього середовища, яка ввдбуваеться з урахуванням результапв лабораторного контролю ефективноcтi очищення та дезшфекци сприяе ефективнш ерадикаци збуднику ЕДС.
References
Baker, K.L., Thomas, P.R., Karriker, L.A., Ramirez, A., Zhang, J., Wang, C., & Holtkamp, D.J. (2017). Evaluation of an accelerated hydrogen peroxide disinfectant to inactivate porcine epidemic diarrhea virus in swine feces on aluminum surfaces under freezing conditions. BMC veterinary research, 13(1), 372. doi: 10.1186/s12917-017-1300-4. Bowman, A.S., Nolting, J.M., Nelson, S.W., Bliss, N., Stull, J.W., Wang, Q., & Premanandan, C. (2015). Effects of disinfection on the molecular detection of porcine epidemic diarrhea virus. Veterinary Microbiology, 179(3-4), 213-218. doi: 10.1016/j.vetmic.2015.05.027. Cochrane, R.A., Schumacher, L.L., Dritz, S.S., Woodworth, J.C., Huss, A.R., Stark, C.R., DeRouchey, J.M., Tokach, M.D., Goodband, R.D., Bia, J., Chen, Q., Zhang, J., Gauger, P.C., Derscheid, R.J., Magstadt, D.R., Main, R.G., & Jones, C.K. (2017). Effect of pelleting on survival of porcine epidemic diarrhea virus-contaminated feed. Journal of Animal Science, 95(3), 1170-1178. doi: 10.2527/jas.2016.0961. Corona-Barrera, E., Smith, D.G.E., Murray, B., & Thomson, J.R. (2004). Efficacy of seven disinfectant sanitisers on
field isolates of Brachyspira pilosicoli. Veterinary Record, 154, 473-474. doi: 10.1136/vr.154.15.473.
Dee, S.A., Bauermann, F.V., Niederwerder, M.C., Singrey, A., Clement, T., Lima de M., Long, C., Patterson, G., Sheahan, M.A., & Stoin, A.M. (2018). Survival of viral pathogens in animal feed ingredients under transboundary shipping models. PLoS One, 13:0194509. doi: 10.1371/jornal.pone.0194509.
Gerber, P.F., Xiao, C.-T., Chen, Q., Zhang, J., Halbur, P. G., & Opriessnig, T. (2014). The spraydrying process is sufficient to inactivate infectious porcine epidemic diarrhea virus in plasma. Veterinary Microbiology, 174, 86-92. doi: 10,1016/j.vetmic.2014.09.008.
Gosling, R.J. (2018). A review of cleaning and disinfection studies in farming environments. Livestock Science, 23(5), 232. doi: 10.12968/live.2018.23.5.232.
Holtkamp, D.J., Myers, J., Thomas, P.R., Karriker, L.A., Ramirez, A., Zhang, J., & Wang, C. (2017). Efficacy of an accelerated hydrogen peroxide disinfectant to inactivate porcine epidemic diarrhea virus in swine feces on metal surfaces. Canadian journal of veterinary research, 81(2), 100-107. https://www.ncbi.nlm.nih. gov/pubmed/28408777.
Jung, K., & Chae, C. (2004). Effect of temperature on the detection of porcine epidemic diarrhea virus and transmissible gastroenteritis virus in fecal samples by reverse transcriptionpolymerase chain reaction. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 16(3), 237-239. doi: 10.1177/104063870401600312.
Luyckx, K., Millet, S., Weyenberg, V., Herman, L., Heyndrickx, M., Dewulf, J., & De Reu, K. (2016). Comparison of competitive exclusion with classical cleaning and disinfection on bacterial load in pig nursery units. Veterinary Research BMC, 12, 189. doi: 10.1186/s12917-016-0810-9.
Masiuk, D.M., Sosnitsky, O.I., Nedzvetsky, V.S., Kokarev, A.V., & Koliada, S.G. (2017). Endemic course of epidemic diarrhea of pigs in the stabilized focus of infection. Regulatory Mechanisms in Biosystems, 8(3), 410-416. doi: 10.15421/021763.
Martelli, F., Lambert, M., Butt, P., Cheney, T., Tatone, F. A., Callaby, R., Rabie, A., Gosling, R. J., Fordon, S., Crocker, G., Davies, R.H., & Smith, R.P. (2017). Evaluation of an enhanced cleaning and disinfection protocol in Salmonella contaminated pig holdings in the United Kingdom. PloS one, 12(6), e0178897. doi: 10.1371/journal.pone.0178897.
Ojeh, C.K., Cusack, T.M., & Yolken, R.H. (1995). Evaluation of the effects of disinfectants on rotavirus RNA and infectivity by the polymerase chain reaction and cell-culture methods. Molecular and Cellular Probes, 9(5), 341-346. doi: 10.1016/S0890-8508(95)91652-0.
Thomas, P., Karriker, A.L., Ramirez, A., Zhang, J., El-lingson, J.S., & Holtkamp, D.J. (2014). Methods for inactivating PEDV in Hog Trailers. Twenty-second Annual Swine Disease Conference for Swine Practitioners, 13-14, 43-50. doi: 10.31274/ans_air-180814-1366.
Thomson, J.R., Bell, N.A., & Rafferty, M. (2007). Efficacy of some disinfectant compounds against porcine bacterial pathogens. Pig Journal, 60.
Trudeau, M.P., Verma, H., Sampedro, F., Urriola, P.E., Shurson, G.C., & Goyal, S.M. (2017). Environmental persistence of porcine coronaviruses in feed and feed ingredients. PloS one, 12(5), e0178094. doi: 10.1371/journal.pone.0178094.
Trudeau, M.P., Verma, H., Urriola, P.E., Sampedro, F., Shurson, G.C., Goyal, S.M. (2017). Survival of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) in thermally
treated feed ingredients and on surfaces. Porcine Health Management, 19(3), 17. doi: 10.1186/s40813-017-0064-3.
Tun, H.M., Cai, Z., & Khafipour, E. (2016). Monitoring Survivability and Infectivity of Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDv) in the Infected On-Farm Earthen Manure Storages (EMS). Frontiers in Microbiology, 7, 265. doi: 10.3389/fmicb.2016.00265.
Quist-rybachuk, G.V., Nauwynck, H.J., & Kalmar, I.D. (2015). Sensitivity of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) to pH and heat treatment in the presence or absence of porcine plasma. Veterinary Microbiology, 181(3-4), 283-288. doi: 10.1016/j.vetmic.2015.10.010.
Waddilove, J., & Blackwell, M. (1997). Disinfection of pig units. Pig Journal, 40, 28-37.
Mandigra, M.S., Lisicja, A.V., Zhigaljuk, S.V., Dmitriyev, I.M., Velichko, Ju.M., Andrushhuk I.L., Mandigra, Ju.M., & Romanishina, O.O. (2012). Analiz zasobiv dlja veterinarnoi dezynfekcii. Veterynarna medycyna, 96, 163-165. http://jvm.kharkov.ua/sbornik/96/65.pdf (in Ukrainian).
