CC BY
20
УДК 616.127-005.8:616.89-214.22
ЭМБРИО-ФЕТОТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ У НОВОГО ПУРИНОВОГО НУКЛЕОЗИДА АДЕНОЗИНА С АНТИДЕПРЕССИВНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
Т. Д. Денисова, Ю. А. Мазанова, Л. И. Бугаева, А. А. Озеров
Волгоградский государственный медицинский университет, НИИ фармакологии
В экспериментах на беременных крысах-самках установлено отсутствие повреждающего влияния вещества ВМА 99-82 при внутрижелудочном введении в дозах 10 мг/кг и 150 мг/кг на процессы эмбрио-, органо- и фетогенеза. Отмечено также положительное влияние вещества ВМА 99-82 на общее состояние беременных крыс-самок и на качество антенатального развития плодов.
Ключевые слова: беременные крысы-самки, органогенез, фетогенез, производное нуклеозида, психотропные средства.
EMBRYO-FETOTOXIC ACTION OF NEW PURINE NUCLEOSIDE ADENOSINE
WITH ANTIDEPRESSANT ACTIVITY
T. D. Denisova, J. A. Mazanova, L. I. Bugaeva, A. A. Ozerov
Volgograd State Medical University, Research Institute of Pharmacology
In experiments on pregnant female rats, we found that the agent VMA 99-82 had no damaging effect on embryo-, organo-and fetogenesis when it was administered intragastrically in doses of 10 mg/kg and 150 mg/kg. We also observed the positive influence of the agent VMA 99-82 on the general condition of pregnant female rats and on the quality of antenatal development of their fetuses.
Key words: pregnant female rats, organogenesis, fetogenesis, nucleoside derivative, psychotropic drugs.
Новое соединение с антидепрессивной активностью является ароматическим аналогом пуринового нуклеозида аденозина, под лабораторным шифром ВМА 99-82 [6]. В экспериментальных исследованиях у данного соединения, наряду с антидепрессивной активностью [5], выявлено анксиолитическое и противовирусное действие [4—6]. По результатам токсикологических исследований было показано, что вещество ВМА 99-82 относится к 3-му классу умеренно токсичных соединений (ГОСТ 12.1.007.76), ЛД_0 которого при внутрижелудочном введении крысам составляет 4811,7 мг/кг [1, 2, 3, 8]. В настоящее время решается вопрос о дальнейшем более углубленном изучении вещества ВМА 99-82. По данным литературы известно, что использование препаратов с антидепрессивной (трициклические антидепрессанты, селективные ингибиторы обратного захвата серотонина и ИМАО) и анксиолити-ческой активностью (бензодиазепины) в течение беременности не повышает риск пороков развития и уродств [10].
Учитывая важность изучения на доклиническом уровне процессов репродукции и эмбриогенеза, сочли целесообразным исследовать данные аспекты действия у нового аналога пуринового нуклеозида аденозина под лабораторным шифром ВМА-99-82.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучение влияния вещества ВМА 99-82 на процессы эмбрио- и фетогенеза, регистрируемые в антенатальный период развития плодов.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты выполнены на 140 беспородных вир-гинных белых крысах самках 4-мес. возраста, доставленных из специлизированного питомника Государственного унитарного предприятия научно-исследовательского института гигиены труда и профпатологии МЗ РФ г. Волгограда (НИИ ГТиП, г Волгоград) и прошедших 2-недельный карантин в виварии НИИ фармакологии. Содержание животных и проведение на них манипуляций соответствовало нормативным требованиям, изложенным в «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» (Часть первая). — М.: Гриф и К, 2012 [7].
При проведении экспериментов забеременевших крыс-самок, накануне ссаженных с интактными крысами-самцами, делили на 4 опытные и 3 контрольные группы. Опытным группам крыс-самок вещество ВМА 99-82 вводили внутрижелудочно в различные периоды беременности. В период органогенеза (с 6-го по 16-е дни беременности) вводили вещество ВМА 99-82 в дозах 10 мг/кг (составляет 1 /480 от ЛД_0 и соответствует терапевтически эффективной дозе — 1-я опытная группа) и 150 мг/кг (составляет 1 /32 от ЛД_0 и превышает терапевтически эффективную дозу в 15 раз—2-я опытная группа). В период имплантации и плацентации (с 1-го по 6-й день беременности) и фетогенеза (с 16-го по 19-е дни беременности) вводили вещество ВМА 99-82 в дозе 150 мг/кг (соответственно 3-я и 4-я опытные группы). Контрольным группам крыс самок в эти же периоды беременности вводили внутрижелудочно дистиллированную
воду в объеме 20 мл /кг. Данный объем дистиллированной воды использовался при растворении исследуемого вещества.
В период наблюдений у беременных крыс-самок отмечали общее состояние, поведение, массу тела (г). На 20-й день беременности крыс самок подвергали эвтаназии (метод дислокации шейных позвонков), [7]. На вскрытии у них выделяли яичники и рога матки. В яичниках подсчитывали число желтых тел беременности, а в рогах матки — количество живых, мертвых и резорбированных плодов. На основании полученных данных вычисляли пред- и постимплантационную гибель плодов [7]. Выделенные из рогов матки плоды тщательно осматривали на предмет обнаружения внешне видимых аномалий и уродств развития, измеряли их краниокаудальные размеры (см) и массу тела (г).
Результаты экспериментов подвергали статистической обработке с использованием пакета программ Microsoft Ехсе1 и Statistika 6.0. О достоверности изменений судили с помощью f-критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
По результатам наблюдений общего состояния беременных крыс в опытных и контрольных группах существенных различий не выявлено. При этом шерстный покров у них был гладкий и лоснящийся, слизистые оболочки — прозрачными и видимые кожные покровы — чистыми. Вместе с тем, в период введения вещества ВМА 99-82 в поведении у беременных крыс-самок отмечались тенденции седации, которые более ярко прослежи-
вались у 2-й опытной группы беременных крыс-самок. При этом реакции на внешние раздражители (болевые, слуховые, тактильные) у 1-й и 2-й опытных групп беременных крыс-самок не отличались от данных контроля.
По результатам наблюдений за динамикой прироста массы тела у беременных крыс-самок опытных групп достоверных различий относительно контрольных групп не обнаружено. Вместе с тем, обращает на себя внимание тенденция дозозависимого снижения прироста массы тела у крыс-самок, получавших вещество ВМА 99-82 в период органогенеза (табл. 1).
Снижение прироста массы тела у этих животных прослеживалось после отмены введения вещества (с 16-го по 20-й дни беременности). За этот период прирост массы тела у крыс-самок в контроле составил 35 г, а в 1-й и 2-й опытных группах — 27 г и 18,4 г (соответственно). Можно предположить, что снижение прироста массы тела у беременных крыс после отмены введения вещества ВМА 99-82 обусловлено наличием эффектов привыкания к препарату. Данное предположение в какой-то степени согласуется с более ранними исследованиями [4—6], которые установили в основе механизма активирующее влияние на серотонин-, норадре-налин- и дофаминергическую системы мозга.
При этом, по результатам изучения прироста массы тела крыс-самок, получавших вещество ВМА 99-82 в периоды эмбрио- и фетогенеза, подобного эффекта не было обнаружено.
Результаты вскрытия крыс-самок на 20-й день беременности, получавших вещество ВМА 99-82 в период органогенеза, представлены в табл. 2.
Таблица 1
Влияние вещества ВМА 99-82 (внутрижелудочно, 6—16 дни беременности) на прирост массы тела (г) беременных крыс (М ± т)
Периоды измерений, дни Варианты опытов, дозы веществ
контрольная группа вода дистиллированная (20 мл/кг) опытная группа 1 вещество ВМА 99-82 (10 мг/кг) опытная группа 2 вещество ВМА 99-82 (150 мг/кг)
Исход 210,20 ± 2,03 209,70 ± 1,19 208,8 ± 1,2
6 227,20 ± 2,69 224,90 ± 2,16 225,00 ± 1,86
16 260,40 ± 3,01 260,90 ± 2,75 261,00 ± 2,77
20 295,00 ± 4,03 287,4 ± 4,8 279,40 ± 3,32*
*р < 0,01 результаты достоверны относительно контрольной группы 1.
Таблица 2
Влияние вещества ВМА 99-82 (внутрижелудочно, 6—16 дни беременности) на процессы эмбрионального развития плодов (М ± т)
Исследуемые параметры (на 1 самку) Варианты опытов (дозы веществ)
контрольная группа вода дистиллированная (20 мл/кг) опытная группа 1 вещество ВМА 99-82 (10 мг/кг) опытная группа 2 вещество ВМА 99-82 (150 мг/кг)
Желтые тела (количество) 12,60 ± 0,22 11,2 ± 0,4* 12,80 ± 0,52
Места имплантаций (количество) 10,90 ± 0,53 10,20 ± 0,36 10,20 ± 0,73
Резорбции (количество) 0,30 ± 0,13 0,20 ± 0,08 0,50 ± 0,18
Доимплантационная гибель (%) 12,90 ± 4,19 8,60 ± 1,93 20,50 ± 4,81
Послеимплантационная гибель(%) 2,50 ± 1,04 1,40 ± 0,75 5,90 ± 2,24
Количество плодов 10,60 ± 0,52 10,10 ± 0,35 9,70 ± 0,76
Размеры (см) 3,10 ± 0,04 3,10 ± 0,02 3,10 ± 0,03
Масса (г) 2,30 ± 0,05 2,40 ± 0,06 2,30 ± 0,06
*p < 0,01 результаты достоверны относительно контрольной группы 1.
^^^^^^^^^^^^^^^^^^ Выпуск 3 (59). 2016 = 71
Из представленных в таблице данных видно, что относительно контрольных групп у крыс-самок опытных групп произошло снижение количества желтых тел беременности в 1-й опытной группе на 11,1 % (р < 0,01), тогда как у крыс самок 2-й опытной группы различий не обнаружено. При этом количество мест имплантаций в рогах матки у данных опытных групп животных существенно не различалось с таковыми у контрольной группы. Однако в рогах матки у животных 2-й опытной группы отмечено повышение количества резорбиро-ванных плодов (66,7 %, р > 0,05), тогда как у 1-й опытной группы данные практически не отличались относительно контрольных величин. В этой связи у крыс самок 1-й опытной группы общая эмбриональная гибель была ниже контрольных значений, а у крыс самок 2-й опытной группы данные показатели были, наоборот, выше: доимплантационной гибели на 58,9 % (р > 0,05) и постимплантационной гибели плодов — в 2,4 раза (р > 0,05).
При анализе вещества ВМА 99-82, вводимого беременным крысам-самкам с 1-го по 6-й и с 16-го по 19-е дни беременности, не отмечено каких-либо повреждающих эффектов. Вместе с тем у беременных крыс-самок 3-й опытной группы отмечена недостоверная тен-
денция снижения мест имплантаций, резорбций и количества плодов относительно контроля (табл. 3).
В связи с этим у самок данной опытной группы доимплантационная гибель плодов была достоверно повышена на 90,5 % (р < 0,05), тогда как постимпланта-ционная гибель плодов практически не отличалась от контрольных значений. У беременных крыс самок 4-й опытной группы число желтых тел беременности, мест имплантаций и резорбций, а также и плодовитость были на уровне контрольных значений (табл. 4).
В этой связи у самок данной опытной группы до-имплантационная гибель плодов не изменялась, а по-стимплантационная гибель плодов недостоверно снижалась на 59,4 % (р > 0,05).
При визуальном обследовании плодов от самок опытных и контрольных групп не выявлено внешне видимых аномалий развития и уродств, а также не зарегистрировано и погибших плодов. Вместе с тем, при осмотре внешнего состояния плодов от самок 1-й и 2-й опытных групп различий с контролем не обнаружено, но было отмечено дозозависимое снижение количества плодов в рогах матки и отсутствие изменений по краниокаудальным размерам и по массе тела. Внешнее состояние плодов от самок 3-й опытной группы
Таблица3
Влияние вещества ВМА 99-82 (внутрижелудочно, 1—6 дни беременности) на процессы эмбрионального развития плодов (М ± т)
Исследуемые параметры (на 1 самку) Варианты опытов (дозы веществ)
контрольная группа вода дистиллированная (20 мл/кг) опытная группа 3 вещество ВМА 99-82 (150 мг/кг)
Желтые тела (количество) 11,7 ± 0,7 12,00 ± 0,58
Места имплантаций (количество) 10,4 ± 0,6 9,60 ± 0,54
Резорбции (количество) 0,30 ± 0,14 0,20 ± 0,09
Доимплантационная гибель (%) 10,60 ± 3,07 20,20 ± 2,34*
Послеимплантационная гибель (%) 1,90 ± 1,05 2,10 ± 1,05
Количество плодов 10,10 ± 0,55 9,40 ± 0,54
Размеры (см) 3,10 ± 0,05 3,20 ± 0,04*
Масса (г) 2,10 ± 0,07 2,30 ± 0,05**
*р < 0,05; **р < 0,01 результаты достоверны относительно контрольной группы 2.
Таблица 4
Влияние вещества ВМА 99-82 (внутрижелудочно, 16—19 дни беременности) на процессы эмбрионального развития плодов (М ± т)
Исследуемые параметры (на 1 самку) Варианты опытов (дозы веществ)
контрольная группа вода дистиллированная (20 мл/кг) опытная группа 4 вещество ВМА 99-82 (150 мг/кг)
Желтые тела (количество) 10,6 ± 0,6 10,40 ± 0,64
Места имплантаций (количество) 9,50 ± 0,73 9,30 ± 0,55
Резорбции (количество) 0,20 ± 0,12 0,20 ± 0,08
Доимплантационная гибель (в %) 12,40 ± 3,76 10,00 ± 2,92
Послеимплантационная гибель(в %) 2,40 ± 1,45 1,50 ± 0,81
Количество плодов 9,30 ± 0,72 9,10 ± 0,54
Размеры (см) 3,20 ± 0,03 3,20 ± 0,02
Масса (г) 2,30 ± 0,03 2,30 ± 0,03
I^rnpfc ©©СаГГГМЩ
также не различалось с контролем, но было отмечено недостоверное снижение количества плодов и достоверное повышение массы тела (12,1 %, p < 0,01) и их краниокаудальных размеров (4,9 %%, p < 0,05). У плодов от самок 4-й опытной группы внешнее состояние, плодовитость, а также краниокаудальные размеры и масса тела не различались с контрольными величинами.
Таким образом, из результатов проведенных исследований можно заключить, что ароматический аналог пуринового нуклеозида аденозина, вещества под лабораторным шифром ВМА 99-82, при внутрижелудоч-ном введении беременным крысамсамкам в периоды: органогенеза в дозах 10 и 150 мг/кг; имплантации и пла-центации, фетогенеза в дозе 150 мг/кг не обладает эм-бриотоксическим и тератогенным действием. При этом вещество ВМА 99-82 в различные периоды беременности не оказывает патологического влияния на общее состояние крыс самок, а также и на процессы эмбрио-, органо- и фетогенеза, регистрируемые в антенатальном периоде развития плодов крыс. Вместе с тем не отмечено отрицательного влияния вещества ВМА 99-82 на качество антенатального развития плодов, общей эмбриональной гибели, плодовитости и процессов фе-тогенеза. При этом у плодов под действием вещества ВМА 99-82 не отмечено уродств и внешне видимых аномалий развития.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Новый ароматический аналог пуринового нук-леозида аденозина, вещество под лабораторным шифром ВМА 99-82, не обладает эмбрио- и фетотоксичес-ким действием, регистрируемым в антенатальном периоде развития плодов крыс.
2. Новый ароматический аналог пуринового нук-леозида аденозина при внутрижелудочном введении беременным крысам (вещество ВМА 99-82) в дозах 10 и 150 мг/кг не вызывает уродств и внешне видимых аномалий развития и не угнетает качество антенатального развития плодов крыс.
ЛИТЕРАТУРА
1. Березовская И. В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения / И. В. Березовская // Химико-фармацевтический журнал. — 2003. — Т. 37, № 3. — С. 32—34.
2. Бугаева Л. И., Озеров А. А., Денисова Т. Д., Морозова Ю. А., Лебедева С. А. Токсические свойства нового производного нуклеозида при однократном интра-
гастральном введении половозрелым животным / Л. И. Бугаева, А. А. Озеров, Т. Д. Денисова, Ю. А. Морозова, С. А. Лебедева // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. — 2013. — № 4. — С. 101—103.
3. Ковалев Д. Г., Бугаева Л. И., Озеров А. А. Изучение уровня безвредности нового производного аденина, проявляющего антидепрессивную активность при однократном введении в максимальных дозах / Д. Г Ковалев, Л. И. Бугаева, А. А. Озеров // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. — 2010. — № 4. — С. 15—17.
4. Ковалев Д. Г., Бугаева Л. И., Озеров А. А. Нейроток-сикологический профиль новых производных аденина, обладающих противовирусной активностью / Д. Г Ковалев, Л. И. Бугаева, А. А. Озеров // Саратовский научно-медицинский журнал. — 2010. — № 2. — Т. 6. — С. 253—256.
5. Ковалев Д. Г., Николаенко Н. А. Исследование антидепрессивной активности нового соединения ряда 9-(2-арилоксиэтил)аденина ВМА 99-82 / Д. Г. Ковалев, Н. А. Николаенко // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. — 2007. — № 4. — С. 50—52.
6. Озеров А. А., Ковалев Д. Г., Носко Е. Н., Абу Салха Ахмадж. Синтез и психофармакологическая активность новых производных 5-^-пиперидино)- и 5-^-морфоли-но) урацила с ароматическим ядром в боковой цепи / А. А. Озеров, Д. Г. Ковалев, Е. Н. Носко, Абу Салха Ахмадж // Вестник Волгоградской медицинской академии. — 2000. — № 6. — С. 60—62.
7. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под общ. ред. д. м. н. А. Н. Миронова. — М., 2012. - Ч. I. — C. 80—92.
8. Саноцкий И. В., Фоменко В. Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм / И. В. Саноцкий, В. Н. Фоменко. — М.: Медицина, 1979. — 390 с.
9. Трахтенберг И. М. В кн. Проблемы нормы в токсикологии / И. М. Трахтенберг, Р. Е. Сова, В. О. Шефтель, Ф. А. Оникенко // Современные представления и методические подходы, основные параметры. — М.: Медицина, 1991. — 204 с.
10. Dora Kohen Применение психотропных препаратов во время беременности (Обзор современной психиатрии) / Dora Kohen // Advances in Psychiatric Treatment. — 2004. — Vol. 10. — Р. 59—66.
Контактная информация
Денисова Татьяна Дмитриевна — к. б. н., ассистент кафедры фармакологии, НИИ фармакологии, Волгоградский государственный медицинский университет, e-mail: [email protected]
