Экспрессия ПБР в клетках меланомы кожи и в клетках невусов Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЭКСПРЕССИЯ ПБР В КЛЕТКАХ МЕЛАНОМЫ КОЖИ И В КЛЕТКАХ НЕВУСОВ

А.В. ЗУБОВА, Т.Г РУКША

Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого,

г. Красноярск

Актуальность. Развитие меланомы кожи является сложным патологическим процессом, сопровождающимся большим числом молекулярных изменений в меланоцитах. Пролиферация, дифференцировка и миграция меланоцитов являются критическими событиями, находящимися под строгим регуляторным контролем, генетические изменения которых регистрируются у пациентов с меланомой кожи. На этапе развития меланомы происходит активация нескольких механизмов передачи сигнала, что приводит к увеличению пролиферации меланоцитов, нарушениям кинетики клеточного цикла и чувствительности клеток к апоптогенным стимулам.

Периферический бензодиазепиновый рецептор (ПБР, TsPO) является внутриклеточным белком с молекулярным весом 18кДа, который принимает участие в регуляции пролиферации клеток, апоптоза и синтеза стероидных гормонов. Было отмечено изменение уровня экспрессии, а также функционирования данного белка при многих злокачественных новообразованиях, в том числе при раке толстого кишечника, молочной железы, опухолях нервной ткани. Ранее нами было показано, что уровень экспрессии ПБР меняется при злокачественных новообразованиях кожи - происходит уменьшение числа ПБР+ клеток как в опухолевых комплексах, так в непораженном эпидермисе при базально-клеточном, плоскоклеточном раке и меланоме кожи. Исходя из того, что мелано-цитарные невусы, в частности диспластические невусы, характеризующиеся повышенной пролиферативной активностью меланоцитов, могут являться предшественниками меланомы, нами был проведен сравнительный анализ уровня экспрессии ПБР в коже больных меланомой кожи и доброкачественными меланоцитарными новообразованиями для оценки возможности

использования ПБР в качестве маркера при развитии меланомы кожи.

Цель исследования - определение уровня экспрессии ПБР в коже больных меланомой кожи и меланоцитарными невусами.

Материал и методы. Биоптаты кожи больных меланомой кожи и меланоцитарными невусами, а также здоровых добровольцев (п=15) фиксировались в 10% нейтральном забуфе-ренном формалине. Срезы толщиной до 5 мкн подвергались иммуногистохимическому окрашиванию по стандартной методике с моноклональными антителами к ПБР (Trevigen, разведение 1:300). Для визуализации использовались система детекции Ready-to-Use (Novocastra) и диаминобензидин (Novocastra) в качестве хромогена. В дальнейшем срезы докрашивались гематоксилином. Подсчет положительно окрашенных клеток производился при увеличении х400. Оценивалось количество положительно окрашенных клеток на 100 клеток. Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью критерия Манна-Уитни.

Результаты. ПБР определялся в опухолевых очагах, в непораженном эпидермисе, в невусных клетках с преимущественной ядерной локализацией. В коже здоровых добровольцев, составлявших контрольную группу, уровень ПБР+ клеток был 92,28±7,05, в коже больных меланомой кожи среднее число ПБР+ клеток составляло 45,8±6,95, пациентов с меланоцитарными невусами - 39,12±4,76. Различия между средними значениями числа ПБР+ при меланоме кожи и в нормальной коже, а также между средними значениями числа ПБР+ клеток у пациентов с меланоцитарными доброкачественными новообразованиями и контрольной группой достоверны (р<0,005). Не было выявлено достоверных различий между уровнями ПБР у пациентов с меланомой кожи и меланоцитарными невусами.

Выводы. Выявленное снижение уровня ПБР свидетельством нарушенного функционирова-

при доброкачественных и злокачественных ме- ния ПБР при данной патологии.

ланоцитарных новообразованиях кожи является

МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ГЛИКОЗИДА ВИТАМИНА С (ДДС) В ЗАЩИТЕ СИСТЕМЫ КРОВЕТВОРЕНИЯ У МЫШЕЙ ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ В СУБЛЕТАЛЬНОЙ ДОЗЕ

А.А. ИВАНОВА, В.А. ШЕПИЛОВА

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск

Актуальность. Задача защиты организма от повреждающего действия лучевой терапии остается актуальной. Гликозид аскорбиновой кислоты, который был разработан японскими учеными, имеет ряд преимуществ по сравнению с аскорбиновой кислотой - характеризуется высокой устойчивостью к нагреванию и окислительной дегидратации в водных растворах, является эффективной ловушкой ОН- радикала и предотвращает разрывы ДНК. Нами ранее получены данные о том, что введение AAG животным, получавшим циклофосфан в токсической дозе 250 мг/кг, предотвращает снижение числа лейкоцитов крови, спленоцитов и клеток костного мозга. В опытах in vivo показана способность AAG защищать систему кроветворения и костный мозг у мышей, подвергшихся облучению в сублетальной дозе. Принимая во внимание данные о широком спектре действия AAG, целью нашей работы явилось изучение механизма защитного действия AAG на костномозговое кроветворение у мышей после воздействия облучения в сублетальной дозе (5,6 Гр).

Материал и методы. Эксперименты проводились на мышах, линии C57B1/6, массой 2022 г, разводки лаборатории экспериментального биомоделирования НИИ фармакологии СО РАМН (сертификат имеется). Животных содержали на стандартном рационе вивария со свободным доступом к воде в соответствии с Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей.

Мышей облучали на рентгеновском аппарате РУМ-17 (фильтр 0,5 мм меди + 1,0 мм алюминия, напряжение на трубке 200 кВ, анодный ток 5

мА). Доза облучения составила 5,6 Гр, при мощности дозы 0,5 Гр в мин. Гликозид витамина С (AAG) был любезно предоставлен профессором В.Т. Кагией (Киото, г. Япония). AAG и аскорбиновую кислоту вводили внутрижелудочно при помощи зонда в концентрации 100 мг/кг за 1 ч до облучения; контрольной группе - перорально по 0,5 мл физиологического раствора. Животных забивали под эфирным наркозом, соблюдая правила работы с лабораторными животными. Об интенсивности окислительного стресса судили по уровню гидроперекисей липидов с использованием FOX-2 метода. Концентрацию восстановленного (GSH) и окисленного (GSSG) глутатиона определяли, используя циклический метод. Вычисляли отношение GSH/GSSG. Значимость различий показателей между группами оценивали с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты. Тотальное облучение мышей в сублетальной дозе вызывает значительное увеличение продуктов ПОЛ в гомогенате спленоци-тов. Максимальное увеличение было зафиксировано через сутки после облучения и составило в контроле 20,14±2,31 мкмоль/г ткани (р<0,05) в сравнении с интактной группой животных, у которых данный показатель составил 4,49±0,65 мкмоль/г ткани. Введение AAG за 1 ч до облучения приводило к подавлению выработки гидроперекисей 12,49±2,68 мкмоль/г ткани (р<0,05), в сравнении с группой животных, которые подвергались только облучению. Введение мышам АА в меньшей степени подавляло образование гидроперекисей (17,16±1,42 мкмоль/г ткани