CC BY
7состояние возбуждения сменяется снижением двигательной активности, проявления ориентировочной реакции подавлены.
При окклюзии левой ОСА с 3 по 30 сутки происходит снижение общей численной плотности нейронов в головном мозге, что согласуется с данными других авторов [9, 10]. Параллельно идет компенсаторное увеличение количества нейроглии для замещения погибших нейронов, достигающее своего пика к 30 суткам. Увеличивается количество нейронов, экспрессирующих каспазу-3, что связано с происходящими в данной ситуации процессами апоптоза: до 14 суток наблюдается нарастание их относительного содержания, после чего к 30 суткам их содержание снижается. Учитывая, что численная плотность тел нейронов к 30 суткам ниже по сравнению с 14 сутками, можно предположить, что на 30 сутки гибель нейронов происходит в основном за счет некроза, что возможно связано с ухудшением условий кровоснабжения каждого конкретного нейрона, как рассматривалось выше. Пирамидный слой страдает сильнее, чем ганглионарный. Учитывая функции, выполняемые нейронами этого слоя, можно сделать вывод, что в данной экспериментальной модели больше страдают межполушарные взаимодействия, чем кортикоспинальные пути. Это подтверждается отсутствием тяжелых неврологических нарушений (средняя сумма баллов по неврологическому статусу не превышает 5,0, что указывает на достаточно умеренные отклонения после пережатия левой ОСА.
Литература
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия: Руководство // М.: Медицина. - 1990. - 384 с.
2. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. - М.: Высшая школа. - 1991. - 399 с.
3. Васильев Ю.Г., Берестов Д.С. Гомеостаз и пластичность мозга - Ижевск: ФГБОУ ВПО Ижевская ГСХА. -2011. - 215 с.
4. Васильев Ю.Г., Вольхин И.А., Данилова Т.Г., Берестов Д.С. Оценка неврологического статуса домашних и лабораторных животных // Международный вестник ветеринарии. - 2013. - № 3. - С. 52-55.
5. Васильев Ю.Г., Чучков В.М. Нейро-глио-сосудистые отношения в центральной нервной системе (морфологическое исследование с элементами морфо-метрического и математического анализа). -Ижевск: Изд-во АНК. - 2003. - 164 с.
6. Васильев Ю.Г., Шумихина Г.В. Математическое моделирование микроциркуляции и трофического обеспечения в пирамидных нейронах ганглионар-ного слоя коры больших полушарий // Ангиология и сосудистая хирургия. Приложение. IV всероссийская научная конференция с международным участием «Микроциркуляция в клинической практике», 19-20 апреля 2012 г. - Т. 18. - С. 14.
7. Васильев Ю.Г., Шумихина Г.В., Соболевский С.А. Развитие сосудисто-трофических взаимодействий как фактор формирования нервной системы // Морфологические ведомости. Приложение. Тезисы V общероссийского съезда 17 -18.09.2004 г. -2004. - № 1-2. - С. 19.
8. Молчанова Л.Ф., Кудрина Е.А., Муравьева М.М., Жарина М.В. Статистическая оценка достоверности результатов научных исследований: Учебное пособие. - Ижевск. - 2004. - 96 с.
9. Мыцик А.В. Структурно-функциональная реорганизация популяции нейронов лобной коры большого мозга человека при хронической ишемии различной степени тяжести // Омский научный вестник. -2010. - №1 (94). - С. 13-16.
10. Поташев Д.Д. Влияние шунтирования общих сонных артерий при их острой окклюзии на цитоархи-тектонику неокортекса белых крыс: материалы докл. 8 конгр. Междунар. ассоц. морфологов // Морфология. - 2006. - № 4. - С. 102.
11. Ромейс Б. Микроскопическая техника (пер. с нем.).
- М.: Издательство иностранной литературы. - 1953.
- 719 с.
12. Сапожников А.Г., Доросевич А.Е. Гистологическая и микроскопическая техника: Руководство. - Смоленск: САУ - 2000. - 476 с.
13. Светухина, В.М. Цитоархитектоника новой коры мозга в отряде грызунов (белая крыса) // Архив анатомии, гистологии эмбриологии. - Л. - 1962. - Т. ХШ. - №2. - С. 31-44.
14. Семченко В.В., Барашкова С.А, Артемьев В.Н. Гистологическая техника: Учебное пособие. - Омск: Омская медицинская академия. - 2002. - 114 с.
15. Шорохова Т.Г. Морфология нейро-глио-сосудистых ансамблей вестибулярных и улитковых ядер: авто-реф. дис. канд. биол. наук // Ижевск: ГОУ ВПО ИГМА. - 2006. - 24 с.
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА TUBB3: СВЯЗЬ С КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ ХАРАКТЕРИСТИКАМИ У ПАЦИЕНТОВ С ПЕРВИЧНО-ДИССЕМЕНИРОВАННЫМ РАКОМ
МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Демидчик Юрий Евгеньевич
Доктор медицинских наук, профессор, БелМАПО, Минск
Третьяк Ирина Юрьевна Младший научный сотрудник, РНПЦ ОиМР им. Н.Н. Александрова, Минск
Костюк Светлана Андреевна Доктор медицинских наук, доцент, БелМАПО, Минск Руденкова Татьяна Владимировна Научный сотрудник, НИЛ БелМАПО, Минск
Полуян Ольга
Научный сотрудник, НИЛ БелМАПО, Минск
EXPRESSION TUBB3: ASSOTIATION WITH CLINICAL AND MORFOLOGICAL CHARACTERISTICS IN PATIENTS WITH METASTATIC BREAST CANCER
Demidchik Yrii, Doctor of Science, professor, Belarusian medical academy of post-graduate education, Minsk Tratsiak Irina, Junior researcher, N.N. Alexandrov National Cancer Centre of Belarus, Minsk
Kostiuk Svetlana, Candidate of Science, assistant professor, Belarusian medical academy ofpost-graduate education, Minsk Rudenkova Tatiana, scientific associate, Belarusian medical academy of post-graduate education. Research laboratory, Minsk Poluyan Olga, scientific associate, Belarusian medical academy of post-graduate education. Research laboratory, Minsk АННОТАЦИЯ
Цель: определить связь экспрессии гена TUBB3 с клиническими и морфологическими характеристиками у пациентов с метастатическим раком молочной железы.
Материалы и методы: экспрессия гена TUBB3 определена методом ОТ-ПЦР у 6 пациентов с метастатическим раком молочной железы, получавших химиотерапию 1-ой линии с включением таксанов.
Результаты: Выявлена статистически значимая корреляционная взаимосвязь между уровнем нормализованной экспрессии TUBB3 и развитием прогрессирования опухолевого процесса в срок до 6 месяцев (Rs 0,83, p 0,04). ABSTRACT
Background: expression of class III в-tubulin correlates with tumor progression and resistance to taxane-based therapies for several human malignancies. The objective of this explorative study was to determine whether TUBB3 expression in breast cancer correlated with clinical and morphological characteristics in patients with metastatic cancer.
Methods: We determined TUBB3 expression by RT-PCR methods in 6 breast cancers, treated with taxane-based chemotherapy.
Results: TUBB3 expression was significantly associated with progression of tumor in up to 6 months (Rs 0,83, p 0,04). Ключевые слова: Рак молочной железы, химиотерапия, в-тубулин класса 3, TUBB3 Keywords: Breast cancer; Chemotherapy; Class III в-tubulin, TUBB3.
Введение. Лекарственная устойчивость, как первичная, так и приобретенная, является основным фактором, затрудняющим клиническое применение цитостати-ков, в связи с этим изучение молекулярных основ химио-резистентности представляет собой активно исследуемую сферу. Таксаны - доцетаксел и паклитаксел - обладают высокой активностью при лечении метастатического рака молочной железы, в том числе у пациенток с резистентностью к антрациклинам [10], и отсутствие эффекта от лечения таксанами определяет низкую выживаемость пациентов раком молочной железы [9].
Изменения в тубулине/микротрубочках, представляют собой важный механизм, лежащий в основе химио-резистентности опухолевых клеток к антимитогенам, в том числе таксанам [11]. Эти изменения включают как приобретенные мутации тубулина на участках связывания с химиопрепаратами [7, 6], так и изменение динамики микротрубочек [8], экспрессии различных изотипов тубулина [9], а также изменения в регуляторных белках [10, 3].
Определение экспрессии р-тубулина класса 3 в качестве маркера резистентности к таксанами у пациенток с раком молочной железы проведено в ряде исследований. В научном исследовании Yuan SF et al. [4] проведено им-муногистохимическое исследование р-тубулина класса 3 в 74 образцах опухолевой ткани пациентов с распространённым раком молочной железы, получавших как часть специального лечения химиотерапию с включением до-цетаксела. Позитивное окрашивание наблюдалось в 38.1%. Частота объективного ответа была статистически значимо ниже у подгруппе пациентов с наличием экспрессии р-тубулина класса 3 (P<0.05), также следует отметить статистически значимые различия в 1 и 2-летней выживаемости, медиане без прогрессирования заболева-ния(Р<0.05) у пациентов с наличием и отсутствием экспрессии р-тубулина класса 3 [4]
Экспрессия р-тубулина класса 3 и р-тубулина класса 4 была проанализирована Paradiso A. et al. с помощью им-муногистохимического метода в 70 случаях распростра-
ненного рака молочной железы. В 1-ой линии специального лечения у всех пациенток использована схема химиотерапии ЕТ. При этом было выявлено 84% р-тубулин класс 3-позитивных и 87% р-тубулин класс 4 -позитивных опухолей молочной железы. При определении клинического ответа на цитостатическую терапию отмечена значительная разница между р-тубулин класс 3-положитель-ным и р-тубулин класс 4-негативным раком молочной железы (p=0,000), однако для р-тубулина класса 4 подобной зависимости выявлено не было. Авторы заключают, что иммуногистохимическая экспрессия р-тубулина класса 3может быть независимым предиктором резистентности к паклитакселу у пациенток с распространённым раком молочной железы [1].
Tomassi S. et al. [2] оценивали экспрессию р-тубу-лина класса 3 (как уровень mRNA, так и белка) - и ее роль в прогнозе чувствительности к паклитакселу. Были исследованы образцы опухолей молочной железы от 92 пациентов с распространённым процессом. Выявлена статистически значимая связь между низкой экспрессией р-ту-булина класса 3 и лучшим ответом на химиотерапию (р< 0.002). Был сделан вывод, что о возможном использовании р-тубулина класса 3 как биомаркера резистентности к паклитакселу у пациенток с раком молочной железы [2].
При этом в исследовании Wang Y et al.[5] р-тубулин класс 3- позитивные опухоли были связаны с более низкой гистологической степенью злокачественности опухоли (P =. 003), но не с размером опухоли или гормон ре-цепторным статусом опухоли. В эстроген негативных опухолях высокая экспрессия р-тубулина класса 3 была ассоциирована с более высокой вероятностью достижения объективного ответа при неоадъювантной полихимиотерапии (НПХТ) (P =0,02l).
Таким образом, в трех [1,2,4] из представленных выше исследований выявлена взаимосвязь между высоким уровней экспрессии р-тубулина класса 3 и резистентностью к химиотерапии таксанами и в одном [5] напротив выявлена взаимосвязи между высокая экспрессией р-ту-булина класса 3 в эстроген негативных опухолях и лучшим
ответом на химиотерапию. Следует отметить, что только в одном исследовании производилось определение экспрессии как mRNA, так и белка р-тубулина класса 3 [2], в трех исследованиях определение экспрессии производилось только иммуногистохимическим методом [1,4,5]. Так как ген TUBB3 кодирует белок р-тубулин класса 3, изменение экспрессии TUBB3 приводит к изменению содержания цитоплазматического глобулярного белка р-тубулина класса 3, что может модифицировать чувствительность к химиотерапии. Таким образом, научная гипотеза данного исследования состояла в предположении о наличии связи между экспрессией гена TUBB3 и развитием химиорези-стентности к таксанам.
Материалы и методы. Нами проведен анализ первичной медицинской документации 154 пациенток, получивших лечение в РНПЦ ОиМР им. Н.Н. Александрова, с установленным в 2009-2013 гг. диагнозом «рак молочной железы» IV стадии. Для пациенток с РМЖ IV стадии анализируемые признаки включали: биографические данные, клинические данные (cTNM, локализацию отдаленных метастазов), патоморфологические характеристики опухоли - (гормон рецепторный статус опухоли, уровень экспрессии HER2neu, степень злокачественности опухоли, результаты FISH), данные, связанные с проводимым специальным лечением. В ряде случаев искомые данные отсутствовали в связи с ретроспективным характером материала.
Данные первичной медицинской документации отсутствовали у 5,2% (n=8) пациентов. Анализ диагностических и лечебных мероприятий произведен у 94,8% (n=146) пациентов с IV стадией заболевания.
В 84,9% (n=124) случаях в консервативном лечении пациентов применялась системная химиотерапия, из них только у 8,9% (n=11) в 1-ой линии специального лечения использованы таксаны. Определение уровня экспрессии гена TUBB3 проведено у 54,5% (n=6) пациенток с IV стадией РМЖ, у которых проводилась химиотерапия с включением таксанов в1-ой линии специального лечения. В 4,5% (n=5) случаях пациенток с IV стадией РМЖ определение уровня экспрессии гена TUBB3 не производилось. Критерии исключения из исследования были следующие: отсутствие гистологического исследования до начала хи-миотерапевтического лечения (n=1), отсутствие оценки эффекта химиотерапии (n=1), первично-множественный синхронный рак с поражением обеих молочных желез (n=1), отсутствие/недостаточное количество материала для исследования в парафин-фиксированных образцах (n=2).
В качестве материала для исследования использовали парафин-фиксированные срезы образцов опухолевой ткани пациенток с диагнозом «рак молочной железы IIIB/IV стадии». Выделение РНК из парафин-фиксирован-ных срезов образцов опухолевой ткани пациентов с использованием набора реагентов «Recover All Total Nucleic acid isolation kit» (Ambion, США). Обратную транскрипцию проводили с использованием набора SuperScript III reverse transcriptase, dNTP и Ribonuclease inhibitor (Invitrogen, США). Полученную в результате обратной транскрипции кДНК использовали для постановки TaqMan ПЦР в режиме реального времени с участием Platinum PCR SuperMix (Invitrogen, США), праймеров и зонда для таргетного гена TUBB3 [12] и референсного house-keeping гена HGUS.
Расчет процента уровня нормализованной экспрессии генов проводился по формуле:
2Л(-(И интересующего гена образца-Q гена HGUSобразца) )х100% (2)
где Ct - пороговый цикл (cycle threshold). Результаты. Из 6 (100%) пациенток, у которых проводилось определение экспрессии гена TUBB3, прогрес-сирование опухолевого процесса у 2 (33,3%) развилось прогрессирование опухолевого процесса в срок до 6 месяцев.
Медиана уровня нормализованной экспрессии гена TUBB3: 3,13% (1,19- 3,17%).
При анализе взаимосвязи уровня нормализованной экспрессии исследуемого гена с развитием прогрес-сирования опухолевого процесса в срок до 6 месяцев, выявлена статистически значимая корреляционная взаимосвязь (Rs 0,83, p 0,04), что согласуется с данными Yuan SF et al. [4].
В нашем исследовании не установлена связь экспрессии изучаемого гена в опухоли с возрастом пациенток, размером и HER2neu статусом опухоли (p>0,05), что согласуется с данными Wang Y et al. [5]. Также в данном исследовании, нами не выявлено взаимосвязи между уровнем нормализованной экспрессии гена TUBB3 и мо-лекулярно-генетическими подтипами опухоли (p>0,05). Интересны полученные данные о наличии корреляции между уровнем нормализованной экспрессии гена TUBB3 и низкой степенью злокачественности опухоли (Grade 1) (Rs 0,83, p 0,04), что противоречит данным, полученным Wang Y et al. [5], в которых установлена взаимосвязь высокой экспрессии b-тубулина класса 3 и высокой степенью злокачественности опухоли (Grade III).
Также установлено наличие ассоциации между уровнем экспрессии таргетного гена и локализацией отдаленных метастазов при первом контакте в контралате-ральных лимфатических узлах (Rs 0,82, p 0,04)
Таким образом, уровень экспрессии TUBB3 у пациенток, получавшим химиотерапию с включением такса-нов, коррелирует с прогрессированием заболевания в течение 6 месяцев.
Список литературы
1. Biomarkers predictive for clinical efficacy of taxol-based chemotherapy in advanced breast cancer / Paradiso A [et al.] // Ann Oncol. - 2005. -Vol. 16, № 24. - P. 14-19.
2. Cytoskeleton and paclitaxel sensitivity in breast cancer: the role of p-tubulins / Tomassi S [et al.] // Int J Cancer. - 2007. -Vol. 120. - P. 2078-2085.
3. DNA damage increases sensitivity to vinca alkaloids and decreases sensitivity to taxanes through p53-dependent repression of microtubule-associated protein 4 / Zhang CC [et al.] // Cancer Res. -1999. -Vol. 59, № 15. - P. 3663-70.
4. Expression of p-tubulin III and survivin in advance stage breast cancer correlates with chemotherapeutic effects of docetaxel / Yuan SF. [et al.] // Asian Pac J Cancer Prev. -2012. - Vol.13, №1. - P. 361-5.
5. High expression of class III p-tubulin predicts good response to neoadjuvant taxane and doxorubicin/ cyclophosphamide-based chemotherapy in estrogen receptor-negative breast cancer/ Wang Y. [et al.] // Clin Breast Cancer. -2013. -Vol.13, №2. - P. 103-8.
6. Multiple microtubule alterations are associated with Vinca alkaloid resistance in human leukemia cells / Kavallaris M [et al.] // Cancer Res. - 2001. -Vol. 61, №15. - P. 5803-9.
7. Paclitaxel-resistant human ovarian cancer cells have mutant beta-tubulins that exhibit impaired paclitaxel-driven polymerization / Giannakakou P [et al.] // Biol Chem. - 1997. -Vol. 272, № 27. - P. 17118-25.
8. Resistance to Taxol in lung cancer cells associated with increased microtubule dynamics/ Goncalves A et al.] // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2001. -Vol. 98, №20. - P. 11737-42.
9. Taxol-resistant epithelial ovarian tumors are associated with altered expression of specific beta-
tubulin isotypes / Kavallaris M [et al.] // J Clin Invest. -1997. -Vol. 100, № 5. - P. 1282-93.
10. Wei Dai, Checkpoint Responses in Cancer Therapy / Dai Wei // Springer Science & Business Media, 2008. -P.323
11. Zhou, J., Giannakakou, P. Targeting microtubules for cancer chemotherapy / J. Zhou, P. Giannakakou // Curr Med Chem Anticancer Agents. -2005. -Vol. 5. - P.65-71.
12. Юмов, Е.Л. Комбинированное лечение немелко-клеточного рака легкого и молекулярные аспекты химиорезистентности / Е.Л. Юмов // Томск, 2014, С.116.
ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КСЕНОНОВОЙ АНЕСТЕЗИИ В АМБУЛАТОРНОЙ
ХИРУРГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
Еремин В. С.
ГБОУ ВПО Уральский государственный медицинский университет Минздрава России. МБУ ЦГКБ №1
Октябрьского района, г. Екатеринбург.
Давыдова Н. С.
Профессор. Доктор медицинских наук. ГБОУ ВПО Уральский государственный медицинский университет
Минздрава России. Собетова Г. В.
Доцент. Кандидат медицинских наук. ГБОУ ВПО Уральский государственный медицинский университет
Минздрава России. МБУ ЦГКБ №1 Октябрьского района, г. Екатеринбург.
POSSIBILITY OF USING XENON ANESTHESIA IN OUTPATIENT SURGICAL
Eremin VS, Ural State Medical University. Central Clinic №1 Oktyabrsky District, Yekaterinburg. Davydova NS, Professor. MD. Ural State Medical University.
Sobetova GV, Associate Professor. PhD. Ural State Medical University. Central Clinic №1 Oktyabrsky District, Yekaterinburg. АННОТАЦИЯ
Современные тенденции развития здравоохранения ведут к формированию амбулаторной медицины - стационаров «одного дня», одним из основных условием работы, которых является максимально быстрая и эффективная послеоперационная реабилитация пациентов (enhanced recovery after surgery/fast track surgery). Показателем эффективной работы анестезиолога здесь является время восстановления после анестезии. Для объективной оценки этого критерия ASA рекомендует использовать модифицированную шкалу Aldrete (fast track-шкала). Современные анестетики (севофлуран, десфлуран, пропофол, ремифентанил) позволяют достигать высокой управляемости анестезиологического пособия и уменьшить частоту неприятных побочных эффектов и время восстановления после анестезии. И одним из таких препаратов, отвечающий требованиям, предъявляемым к ингаляционным анестетикам, в том числе и в амбулаторной практике, является ксенон.
Ключевые слова: стационар «одного дня»; fast track-хирургия; анестезия; ксенон. ABSTRACT
Modern trends in health care lead to the formation of outpatient medicine - hospitals "one day". One of the basic conditions of work which is the most rapid and effective post-operative rehabilitation of patients (enhanced recovery after surgery/fast track surgery). Performance indicators anesthesiologist here is the recovery time after anesthesia. For an objective assessment of this criterion ASA recommends the use of a modified scale Aldrete (fast track-scale). Modern anesthetics (sevoflurane, desflurane, propofol, remifentanil) offers high controllability of anesthetic and reduce the frequency of unpleasant side effects and recovery time after anesthesia. And one of those drugs that meets the requirements of inhalation anesthetics, including in-patient practice is xenon.
Keywords: hospital, "one day"; fast track-surgery; anesthesia; xenon.
Современные тенденции развития здравоохранения ведут к формированию амбулаторной медицины -стационаров «одного дня». Развитие стационарозамеща-ющих форм медицинской помощи - один из путей повы-
шения экономической эффективности системы здравоохранения и более экономичного использования больничных ресурсов [2].
Пока еще Россия отстает от других стран в плане организации полноценной и повсеместной амбулаторной
