CC BY
7
Оригинальная статья
Экспрессия фосфорилированного варианта АКТ1-киназы (р-АКТ1) в высокодифференцированных нейроэндокринных опухолях поджелудочной железы: иммуногистохимическое исследование
Делекторская В.В.1 • Соловьева О.Н.1 • Чемерис Г.Ю.1 • Патютко Ю.И.1
Делекторская Вера Владимировна -
д-р мед. наук, заведующая лабораторией гистохимии и электронной микроскопии отдела патологической анатомии опухолей человека1
* 115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24, Российская Федерация. Тел.: +7 (499) 324 61 11. E-mail: delektorskaya@yandex.ru Соловьева Олеся Николаевна -аспирант хирургического отделения опухолей печени и поджелудочной железы1
Чемерис Галина Юрьевна - канд. биол. наук, ст. науч. сотр. отдела патологической анатомии опухолей человека1
Патютко Юрий Иванович - д-р
мед. наук, профессор, гл. науч. сотр. хирургического отделения опухолей печени и поджелудочной железы1
Актуальность. Высокодифференцированные нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы (НЭО ПЖ) образуют группу редких эпителиальных новообразований с крайне вариабельным клиническим течением. АКТ1 - одна из наиболее часто активируемых протеинкиназ в НЭО ПЖ, способствует усилению опухолевого роста и представляет интерес в качестве фактора прогноза и мишени для поиска новых подходов к лечению. Цель - изучить особенности экспрессии фосфорилированного варианта АКТ1-киназы (р-АКТ1) в первичных НЭО ПЖ и их метастазах в печени и определить корреляцию результатов с основными кли-нико-морфологическими характеристиками опухоли и прогнозом. Материал и методы. Особенности экспрессии р-АКТ1 были изучены с помощью иммуногистохимического анализа в первичных очагах и метастазах в печени 52 больных НЭО ПЖ. Результаты. Высокий уровень цитоплазматической и/или ядерной иммунореактивности был выявлен в 24 (46,2%) из 52 первичных НЭО ПЖ и в 16 (59,3%) из 27 метастазов НЭО ПЖ в печени. Экспрессия р-АКТ1 наблюдалась в 3 (21,4%) НЭО в1, в 14 (46,7%) НЭО в2 и в 7 (87,5%) НЭО в3. Экспрессия р-АКТ1 чаще выявлялась в категории НЭО в3 и увеличивалась в процессе опухолевой прогрессии
в метахронных метастазах в печени по сравнению с соответствующей первичной опухолью. Кроме того, р-АКТ1-позитивность была статистически значимо связана с увеличением степени злокачественности от в1 до в3 (р = 0,004), индекса Ю-67 (р = 0,029), стадии рТЫМ (р = 0,0008), наличием периневральной инвазии (р = 0,031) и уменьшением безрецидивной выживаемости (р = 0,05). Заключение. Полученные результаты демонстрируют, что р-АКТ1 играет важную роль в патогенезе НЭО ПЖ и может служить дополнительным параметром оценки прогноза и эффективности лечения опухолей данного типа.
Ключевые слова: нейроэндокринная опухоль, поджелудочная железа, р-АКТ1, иммуногисто-химия, прогноз
Для цитирования: Делекторская ВВ, Соловьева ОН, Чемерис ГЮ, Патютко ЮИ. Экспрессия фосфорилированного варианта АКТ1-киназы (р-АКТ1) в высокодифференцированных нейроэндокринных опухолях поджелудочной железы: иммуногистохимическое исследование. Альманах клинической медицины. 2018;46(4):314-22. аок 10.18786/2072-0505-2018-46-4-314-322.
Поступила 04.04.2018; принята к публикации 16.05.2018
1 ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; 115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24, Российская Федерация
Высокодифференцированные нейроэндо-кринные опухоли (НЭО) поджелудочной железы (ПЖ) образуют гетерогенную группу редких эпителиальных новообразований, для которых характерны общие морфологические характеристики и крайне вариабельное клиническое течение [1, 2]. В последние годы произошел значительный прогресс в понимании биологических особенностей этих опухолей, расширились возможности их лекарственного лечения, в том числе с использованием таргетных препаратов.
Сегодня основным показателем для выбора варианта лечения и оценки риска прогрессии новообразования считается уровень пролифера-тивной активности опухолевых клеток, который определяет степень злокачественности опухоли и оценивается главным образом с учетом пороговых значений индекса Ki-67. В соответствии с критериями четвертой редакции классификации Всемирной организации здравоохранения, опубликованной в 2017 г. (ВОЗ, 2017), высокодиф-ференцированные нейроэндокринные новообразования ПЖ включают опухоли трех степеней злокачественности (Grade, G): НЭО G1 (индекс Ki-67 < 3%), НЭО G2 (индекс Ki-67 от 3 до 20%), НЭО G3 (индекс Ki-67 > 20%) [3].
Категория НЭО G3 введена в данной классификации впервые и объединяет группу редких опухолей, которые сходны по своим биологическим особенностям с НЭО G1/G2, но имеют худший прогноз, так как демонстрируют высокий уровень пролиферативной активности клеток. Прогрессия индекса Ki-67 часто наблюдается в метастазах НЭО G1/G2 в печени, и его значения во вторичных очагах опухолевого роста могут значительно увеличиваться по сравнению с исходной опухолью, нередко достигая уровня G3. Первичные и метастатические НЭО G3 требуют особых подходов к лечению, поскольку эти опухоли не демонстрируют такого высокоагрессивного клинического течения, как низкодиф-ференцированные варианты нейроэндокрин-ных новообразований (нейроэндокринный рак крупноклеточного и мелкоклеточного типов) [4]. В этой связи большое внимание уделяется изучению молекулярных маркеров, предсказывающих эффективность лекарственной терапии и прогноз НЭО ПЖ различной степени злокачественности. Кроме того, в настоящее время многие исследования сфокусированы на поиске молекул, которые могут служить потенциальными маркерами ответа на разные виды «таргетной» терапии.
Серин/треониновая протеинкиназа AKT1 (продукт гена Aktl) - мультифункциональная киназа. Она выступает ключевым компонентом сигнального каскада mTOR (mammalian target of rapamycin, мишень рапамицина у млекопитающих). Данный сигнальный путь играет определяющую роль в патогенезе НЭО, а ингибиторы mTOR занимают важное место среди возможностей лечения этих опухолей, в частности, ингибитор mTOR эверолимус (everolimus) одобрен для лечения распространенных НЭО ПЖ [5].
AKT1 входит в семейство протеинки-наз В (РКВ) наряду с еще двумя внутриклеточными белками AKT2 и AKT3. В активном состоянии АКТ1 регулирует широкий спектр биологических процессов, включая рост, дифференцировку и выживание клеток. Некоторые исследования демонстрируют, что AKTl-киназа усиливает процессы клеточной миграции и инвазии путем регуляции активности ряда нижестоящих молекул, в том числе mTOR [6].
Известно, что белок AKT1 вовлечен в развитие нескольких злокачественных новообразований человека, однако данные о влиянии экспрессии AKT-1 на биологические характеристики и прогноз течения НЭО ПЖ практически отсутствуют.
Целью исследования было изучение особенностей экспрессии активированной АКТ1-киназы в первичных НЭО ПЖ и их метастазах в печени и определение корреляции полученных результатов с ключевыми клинико-морфологическими характеристиками опухоли и прогнозом заболевания.
Материал и методы
Проведен ретроспективный анализ клинических данных и операционного материала 52 больных НЭО ПЖ, прошедших хирургическое лечение в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Собранные данные включали первичный диагноз, пол, возраст больного НЭО ПЖ, данные о хирургическом лечении (резекция опухоли ПЖ, первичное и повторное удаление метастазов в печени), локализацию опухоли (отдел ПЖ), первоначальную стадию по критериям AJCC/UICC (American Joint Committee on Cancer / Union for International Cancer Control, 2017).
В исследованную группу больных НЭО ПЖ вошли 23 мужчины и 29 женщин, возраст которых варьировал от 24 до 77 лет (средний возраст на момент диагностики составил 53 года). Диаметр опухолей был от 0,5 до 18 см (средний -5,2 см). В 14 (26,9%) случаях опухоль локализовалась в головке, в 38 (73,1%) - в хвосте и теле ПЖ. На момент установления диагноза у 33 (63,5%)
пациентов наблюдалась локализованная форма болезни, у 19 (36,5%) больных выявляли регионарное распространение и/или наличие отдаленных метастазов. Клинико-морфологическая характеристика материала дана в табл. 1.
Во всех случаях диагноз НЭО ПЖ верифицирован с помощью гистологического и иммуноги-стохимического (ИГХ) исследования. Изученный морфологический материал включал 52 первичные НЭО ПЖ и 27 метастатических опухолей (22 синхронных и 5 метахронных метастазов в печени), переоценка которых проведена с учетом критериев последней классификации опухолей эндокринных органов (ВОЗ, 2017) и обновленной системы определения Grade и pTNM-стадии для НЭО ПЖ (AJCC).
Иммуногистохимическое окрашивание выполнено на серийных парафиновых срезах ткани опухолей с использованием антител к цитокера-тинам широкого спектра (клон АЕ1/АЕ3), цито-кератину 18, хромогранину А, синаптофизину, CD56, р53, Ki-67 (клон MIB-1, "Dako"), рецепторам к соматостатину 2А типа - SSTR-2A (клон UMB-1, "Epitomics") и системы детекции Super Sensitive Polymer-HRP ("BioGenex").
Для ИГХ-анализа экспрессии фосфорилиро-ванного варианта АКТ1 (р-АКТ1) использовали кроличьи моноклональные антитела к фосфо-рилированному по остатку серина-473 варианту АКТ1 (phospho Ser473, клон EP2109Y, "Epitomics"). Оценку иммунореактивности проводили с учетом локализации (цитоплазматическое и/или ядерное окрашивание) и интенсивности реакции, а также процента антигенпозитивных клеток. Реакция считалась негативной (0) в отсутствие окрашивания и позитивной (+) при окрашивании более 10% опухолевых клеток. При этом наличие иммунореак-тивности оценивали от 1+ при слабом окрашивании до 3+ при сильном окрашивании цитоплазмы и/или ядер клеток. Оценка реакции «2+/3+» соответствовала высокому уровню и «0/1+» - низкому уровню экспрессии р-АКТ1. Экспрессию маркера оценивали два независимых морфолога с учетом как процента антигенпозитивных клеток, так и интенсивности ядерного и цитоплазматического окрашивания антителами к p-AKT1.
В процессе дальнейшего исследования проводили анализ зависимости ИГХ-статуса р-АКТ1 с гистологической степенью злокачественности (Grade), стадией, наличием нейро- и ангиоинва-зии, статусом метастазов в лимфатических узлах и печени, индексом пролиферации Ki-67, экспрессией SSTR-2A, а также показателями общей и безрецидивной выживаемости.
Таблица 1. Клинико-морфологическая характеристика 52 пациентов с высокодифференцированными нейроэндокринными опухолями поджелудочной железы
Характеристика n %
Возраст
< 60 19 36,5
> 60 33 63,5
Пол
мужчины 23 44,2
женщины 29 55,8
Grade
G1 14 26,9
G2 30 57,7
G3 8 15,4
Внутрисосудистая инвазия
нет 27 51,9
да 25 48,1
Периневральная инвазия
нет 26 50
да 26 50
Первичная опухоль (рТ)
Т1 5 9,6
Т2 11 21,2
Т3 35 67,3
Т4 1 1,9
Метастазы в лимфоузлах (pN)
нет 33 63,5
да 19 36,5
Метастазы в печени (М)
нет 33 63,5
да 19 36,5
Стадия рТNM (AJCC)
I 3 5,8
11а 8 15,4
IIb 15 28,8
Illa 1 1,9
IIIb 5 9,6
IV 19 36,5
Биологический материал
первичная опухоль 52 100
метастазы в печени 27 51,9
Математический анализ полученных результатов проводился с использованием статистических программ SPSS 17.0 for Windows и Microsoft Office Access 2007. Рассчитывалось среднее значение показателей, стандартная ошибка среднего, медиана. Статистическая значимость различий частот признаков в изучаемых группах определялась с помощью теста Краскела - Уоллиса (различия считались статистически значимыми при р < 0,05). Анализ актуриальной выживаемости и построение кривых выживаемости проводились
Рис. 1. Гистологические и иммуногистохимические особенности нейроэндокринных опухолей (НЭО) поджелудочной железы: А - альвеолярная модель строения опухоли (х 400); Б - экспрессия хромогранина А в клетках НЭО в3 (х 600); В - экспрессия ББТ^А в клетках метастаза НЭО в3 в печени (х 600); Г - индекс Ю-67 в клетках метастаза НЭО в3 в печени составляет 40% (х 200). Окраска гематоксилином и эозином (А); иммуногистохимическое исследование, ядра клеток докрашены гематоксилином Майера (Б-Г)
методом Каплана - Мейера. Статистическая значимость различий в выживаемости оценивалась с помощью критерия Вилкоксона и лог-ранк теста. Различия при использовании двух методов считали статистически значимыми при допустимой вероятности ошибки 0,05.
Результаты
Во всех исследованных случаях высокодифферен-цированные НЭО ПЖ имели характерную ней-роэндокринную морфологию и были представлены мелкими округлыми клетками, образующими солидно-альвеолярные, трабекулярные или аци-нарные структуры (рис. 1А). Иммунофенотип клеток опухолей характеризовала экспрессия хромогранина А (рис. 1Б), синаптофизина, СБ56, а также различная степень выраженности экспрессии 88ТВ.-2А (рис. 1В) и отсутствие диффузной ядерной экспрессии р53.
Пролиферативная активность клеток НЭО ПЖ варьировала в широких пределах. В большей части изученных опухолей показатели индекса К1-67 составляли < 20% и соответствовали НЭО 01 или НЭО 02 (44/52; 84,6%). Однако в 8 (15,4%) наблюдениях НЭО ПЖ демонстрировали высо-кодифференцированную морфологию, но при этом пролиферативная активность опухолевых клеток превышала пороговый уровень 20%, варьируя от 35 до 55% (рис. 1Г). Данные наблюдения были диагностированы как НЭО 03 и включали не только первичные, но и, в 5 случаях, метастатические опухоли, в которых индекс К1-67 достиг высоких значений в процессе прогрессии НЭО 01/02.
Иммуногистохимические особенности экспрессии р-АКТ1 изучены в высокодифференци-рованных НЭО ПЖ различной степени злокачественности, включая НЭО 01, 02, 03, а также их
Таблица 2. Экспрессия р-АКТ1 в первичных и метастатических высокодифференцированных нейроэндокринных опухолях поджелудочной железы
Р-АКТ1 Первичные, п (%) Метастазы, п (%) п (%) п (%) п (%)
Высокий уровень 24 (46,2) 16 (59,3)
Низкий уровень 28 (53,8) 11 (40,7)
Всего 52 (100) 27 (51,9)
синхронные и метахронные метастазы в печени. Спектр иммунореактивности варьировал от полностью негативного до разного уровня позитивного специфического окрашивания и включал разные типы распределения маркера в виде цито-плазматической, ядерной или ядерно-цитоплаз-матической экспрессии. Иммунореактивность к р-АКТ1 не была ограничена опухолевыми
3 (21,4) 14 (46,7) 7 (87,5)
11 (78,6) 16 (53,3) 1 (12,5)
14 (26,9) 30 (57,7) 8 (15,4)
клетками, а наблюдалась также в нормальной ткани поджелудочной железы: р-АКТ1-позитив-ное окрашивание было обнаружено в ацинарных клетках и не было выявлено в эндокринных клетках островков Лангерганса.
Все опухоли были классифицированы в соответствии с уровнем иммунореактивности как НЭО с высоким (2+/3+) и низким (0/1+) уровнем
Рис. 2. Иммуногистохимический статус р-АКТ1 в нейроэндокринных опухолях (НЭО) поджелудочной железы: А - умеренная цитоплазматическая (2+) экспрессия в клетках НЭО в1; Б - сильная цитоплазматическая (3+) экспрессия в клетках НЭО в2; В - сильная ядерно-цитоплазматическая (3+) экспрессия в клетках НЭО в3; Г - сильная ядерная (3+) экспрессия и отсутствие цитоплазматической реакции в клетках метастаза НЭО в3. Иммуногистохимическое исследование, ядра клеток докрашены гематоксилином Майера, х 400
Ф
0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
-
А
0 24 48 72 96 120 144 168 192
Время наблюдения, месяцы
216 240
264
Общая выживаемость - 0
1 + 2 + 3 + жив о умер
1
0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
24
48
72
96 120 144 168 192 Время наблюдения, месяцы
216 240
264
Безрецидивная выживаемость
- 0
1 + 2 + 3
+ жив
о умер
Рис. 3. Сравнение общей (А) и безрецидивной (1) выживаемости (%) в зависимости от статуса р-АКТ1 в нейроэндокринных опухолях поджелудочной железы (метод Каплана - Мейера); р = 0,1 (А); р = 0,05 (1)
0
экспрессии р-АКТ1. Высокий уровень экспрессии р-АКТ1 был выявлен в 24 (46,2%) из 52 исследованных первичных НЭО ПЖ и 16 (59,3%) из 27 синхронных и метахронных метастатических очагов (табл. 2).
При анализе экспрессии р-АКТ1 в опухолях разной степени злокачественности среди 14 наблюдений НЭО 01 обнаружено только 3 (21,4%) антигенпозитивных случая (рис. 2А). В метастазах НЭО 01 в печени экспрессия маркера не выявлена.
При анализе группы НЭО 02 позитивная реакция в виде цитоплазматической (рис. 2Б) и, частично, ядерной экспрессии была обнаружена примерно в половине случаев (14/30, 46,7%). Выраженная ядерно-цитоплазматическая
р-АКТ1-позитивность была также выявлена в метастазах НЭО 02 в печени в 7 (46,7%) из 15 случаев. Следует отметить, что в подгруппе р-АКТ1-по-зитивных наблюдений наиболее интенсивное окрашивание часто было видно в клетках, расположенных в инвазивном фронте, по сравнению с клетками, которые находились в центральных участках опухоли. При этом специфическое р-АКТ1-окрашивание усиливалось преимущественно в ядрах клеток, а интенсивность цито-плазматического окрашивания не изменялась.
Значительное увеличение экспрессии р-АКТ1 наблюдалось в серии случаев НЭО 03 с индексом К1-67, превышающим 20% (рис. 2В). Высокий уровень маркера был выявлен как в первичных опухолях (7/8; 87,5%), так и в их синхронных
и метахронных метастазах в печени (9/12; 75%). При этом иммунореактивность имела преимущественно ядерную локализацию, а интенсивность цитоплазматического окрашивания значительно уменьшалась (рис. 2Г). Следует отметить, что гиперэкспрессия р-АКТ1 с увеличенной ядерной локализацией и уменьшением цитоплазматиче-ского окрашивания наблюдалась наиболее часто в НЭО 03 по сравнению с НЭО 01/02.
В случаях метастатических НЭО ПЖ выполнен парный анализ первичных опухолей и соответствующих синхронных и/или метахронных метастазов в печени. Не было обнаружено статистически значимых различий в уровне экспрессии р-АКТ1 в клетках первичных опухолей и синхронных метастазов. Метахронные метастазы в печени, в которых наблюдалась прогрессия индекса К1-67 с течением времени, часто демонстрировали увеличение уровня ядерной экспрессии р-АКТ1 и процента антигенпозитив-ных клеток по сравнению с соответствующими первичными опухолями.
При оценке связи клинических характеристик больных НЭО ПЖ с наличием р-АКТ1-позитив-ности в опухоли обнаружена статистически значимая корреляция высокого уровня экспрессии маркера и увеличения степени злокачественности НЭО ПЖ от 01 до 03 (р = 0,004). Кроме того, выявлена значимая ассоциация между высоким уровнем экспрессии р-АКТ1 и увеличением пролифе-ративной активности клеток опухоли с учетом индекса К-67 (р = 0,029), стадии рТМЫ (р = 0,0008), наличием периневральной инвазии (р = 0,031). Не было обнаружено статистически значимых различий при сравнении экспрессии маркера с полом и возрастом пациентов, размером опухоли, наличием ангиоинвазии, регионарных и отдаленных метастазов и статусом 88ТВ.-2А в опухоли.
Анализ прогностической значимости маркера проведен с учетом высокого (2+/3+) и низкого (0/1+) уровня экспрессии р-АКТ1 в опухоли, при этом общая 5-летняя выживаемость в группах с высокой и низкой экспрессией составила 84 и 86% соответственно (р = 0,54), а 5-летняя безрецидивная выживаемость - 76 и 41% соответственно (р = 0,21). С учетом ошибки разница была статистически незначимой в обеих группах.
При сравнении выживаемости в группах с полным отсутствием экспрессии (0) и наличием экспрессии р-АКТ1 любого уровня (1+, 2+, 3+) общая 5-летняя выживаемость также не демонстрировала статистически значимых различий и составила в негативной группе 100%, в позитивной - 82% (р = 0,103) (рис. 3А). Однако
безрецидивная 5-летняя выживаемость статистически значимо различалась в зависимости от наличия или отсутствия маркера и составила в группах пациентов, опухоли которых были р-АКТ1-негативны, 100%, а р-АКТ1-позитивны -54% (метод Каплана - Мейера, р = 0,05) (рис. 3Б).
Таким образом, показано, что наличие р-АКТ1-позитивности в опухоли было связано с уменьшением показателей безрецидивной выживаемости с пограничным уровнем статистической значимости и не демонстрировало статистически значимой связи с показателями общей выживаемости.
Обсуждение
Высокодифференцированные НЭО ПЖ характеризуются различной степенью злокачественности, непредсказуемым клиническим течением и высоким риском развития метастазов в печени. Параметры оценки прогноза и особенностей лекарственного лечения НЭО ПЖ требуют дальнейшей разработки.
Накопленные данные свидетельствуют, что белок АКТ1 - важная сигнальная молекула, способствующая развитию и прогрессии целого ряда опухолей человека, включая рак молочной железы, желудка, легкого и другие опухоли [7-14].
Показано, что в НЭО ПЖ АКТ1 - одна из наиболее часто активируемых протеинкиназ и связана с ускорением опухолевого роста и агрессивностью течения заболевания [15]. Результаты нашего исследования подтверждают эти данные, демонстрируя экспрессию р-АКТ 1 в различных группах больных НЭО ПЖ. При этом высокий уровень экспрессии маркера выявлен в 3 из 14 (21,4%), 14 из 30 (46,7%) и 7 из 8 (87,5%) случаев НЭО ПЖ 01, 02 и 03 соответственно. Самый высокий уровень и ядерная локализация иммунореактивности выявлены в категории НЭО 03, которые составляют наиболее прогностически неблагоприятную группу. Кроме того, экспрессия маркера часто увеличивалась в клетках инвазивного фронта первичной опухоли. Экспрессия р-АКТ1 выявлена также в синхронных и метахронных метастазах НЭО ПЖ в печени, при этом высокий уровень экспрессии маркера наблюдался в 7 из 15 (46,7%) и 9 из 12 (75%) метастазов в печени НЭО ПЖ 02 и 03 соответственно. Следует отметить, что экспрессия р-АКТ1 увеличивалась в процессе опухолевой прогрессии в метахронных метастазах в печени по сравнению с соответствующей первичной опухолью.
Как установлено рядом исследований, в НЭО бронхопульмональной системы гиперэкспрессия
фосфорилированного варианта АКТ1 усиливает клеточную пролиферацию и метастазирование опухолевых клеток, а также связана с плохой общей выживаемостью [16, 17]. В опухолях больных НЭО ПЖ, по нашим данным, наблюдается схожая тенденция, при этом наличие ядерной и/или цитоплазматической экспрессии р-АКТ1 связано с увеличением степени злокачественности (р = 0,004), индекса К1-67 (р = 0,029), стадии рТМЫ (р = 0,0008), наличием периневральной инвазии (р = 0,031) и уменьшением безрецидивной выживаемости (р = 0,05). Экспрессия маркера не демонстрировала значимой связи с показателями общей выживаемости, а также наличием регионарных и/или отдаленных метастазов, что может быть обусловлено недостаточно большим количеством наблюдений, включенных в настоящее исследование.
В нескольких работах показано, что про-теинкиназа АКТ1 является важной мишенью для поиска новых подходов к лечению НЭО и потенциальным предиктивным маркером ответа на терапию ингибиторами шТОВ. [18, 19]. Результаты проведенного нами исследования демонстрируют наличие выраженной имму-нореактивности в клетках опухоли, при этом
иммуногистохимическая экспрессия активированного варианта АКТ1 часто наблюдается не только в первичных, но и в метастатических НЭО ПЖ и связана с агрессивным течением и плохим прогнозом заболевания. Полученные данные служат основанием для дальнейшего изучения потенциальных возможностей применения терапии с использованием ингибиторов сигнального пути АКТ/шТОВ для лечения пациентов с НЭО ПЖ.
Заключение
Таким образом, р-АКТ1 можно рассматривать как важный фактор патогенеза НЭО ПЖ, экспрессия которого в опухоли ассоциирована с большей клинической агрессивностью, увеличением гистологической степени злокачественности и уменьшением безрецидивной выживаемости. Связь экспрессии р-АКТ1 с факторами риска прогрессии НЭО ПЖ позволяет предположить потенциальную значимость данного компонента сигнального пути шТОВ как дополнительного параметра оценки прогноза и эффективности лечения опухоли, а также мишени для молеку-лярно-направленной терапии данной категории больных. <£>
Конфликт интересов
Авторы статьи заявляют об отсутствии конфликта интересов. Финансирование
Работа проведена без привлечения дополнительного финансирования со стороны третьих лиц.
Литература / References
1. Ohmoto A, Rokutan H, Yachida S. Pancreatic neuroendocrine neoplasms: basic biology, current treatment strategies and prospects for the future. Int J Mol Sci. 2017;18(1). pii: E143. doi: 10.3390/ijms18010143.
2. Simtniece Z, Vanags A, Strumfa I, Sperga M, Vasko E, Prieditis P, Trapencieris P, Gardo-vskis J. Morphological and immunohistochem-ical profile of pancreatic neuroendocrine neoplasms. Pol J Pathol. 2015;66(2):176-94. doi: 10.5114/pjp.2015.53015.
3. Klöppel G, Couvelard A, Hruban R, Klimstra D, Komminoth P, Osamura R. Neoplasms of the neuroendocrine pancreas. Introduction. In: Lloyd RV, Osamura RY, Klöppel G, Rosai J, editors. WHO classification of tumours of endocrine organs. Lyon: IARC; 2017. p. 211-4.
4. Rinke A, Gress TM. Neuroendocrine cancer, therapeutic strategies in G3 cancers. Digestion. 2017;95(2):109-14. doi: 10.1159/000454761.
5. Robbins HL, Hague A. The PI3K/Akt Pathway in Tumors of Endocrine Tissues. Front Endocrinol (Lausanne). 2016;6:188. doi: 10.3389/ fendo.2015.00188.
6. Ocana A, Vera-Badillo F, Al-Mubarak M, Tem-pleton AJ, Corrales-Sanchez V, Diez-Gonzalez L, Cuenca-Lopez MD, Seruga B, Pandiel-la A, Amir E. Activation of the PI3K/mTOR/ AKT pathway and survival in solid tumors:
systematic review and meta-analysis. PLoS One. 2014;9(4):e95219. doi: 10.1371/journal. pone.0095219.
7. Kirkegaard T, Witton CJ, McGlynn LM, Tov-ey SM, Dunne B, Lyon A, Bartlett JM. AKT activation predicts outcome in breast cancer patients treated with tamoxifen. J Pathol. 2005;207(2):139-46. doi: 10.1002/path.1829.
8. Xiao L, Wang YC, Li WS, Du Y. The role of mTOR and phospho-p70S6K in pathogenesis and progression of gastric carcinomas: an immu-nohistochemical study on tissue microar-ray. J Exp Clin Cancer Res. 2009;28:152. doi: 10.1186/1756-9966-28-152.
9. Yu G, Wang J, Chen Y, Wang X, Pan J, Li G, Jia Z, Li Q, Yao JC, Xie K. Overexpression of phos-phorylated mammalian target of rapamycin predicts lymph node metastasis and prognosis of Chinese patients with gastric cancer. Clin Cancer Res. 2009;15(5):1821-9. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-08-2138.
10. Oh MH, Lee HJ, Yoo SB, Xu X, Choi JS, Kim YH, Lee SY, Lee CT, Jheon S, Chung JH. Clinico-pathological correlations of mTOR and pAkt expression in non-small cell lung cancer. Vir-chows Arch. 2012;460(6):601-9. doi: 10.1007/ s00428-012-1239-6.
11. Trigka EA, Levidou G, Saetta AA, Chatziandre-ou I, Tomos P, Thalassinos N, Anastasiou N,
Spartalis E, Kavantzas N, Patsouris E, Korkol-opoulou P. A detailed immunohistochemical analysis of the PI3K/AKT/mTOR pathway in lung cancer: correlation with PIK3CA, AKT1, K-RAS or PTEN mutational status and clinico-pathological features. Oncol Rep. 2013;30(2): 623-36. doi: 10.3892/or.2013.2512.
12. Yu Z, Weinberger PM, Sasaki C, Egleston BL, Speier WF 4th, Haffty B, Kowalski D, Camp R, Rimm D, Vairaktaris E, Burtness B, Psyrri A. Phosphorylation of Akt (Ser473) predicts poor clinical outcome in oropharyngeal squamous cell cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2007;16(3):553-8. doi: 10.1158/1055-9965. EPI-06-0121.
13. Wu N, Du Z, Zhu Y, Song Y, Pang L, Chen Z. The expression and prognostic impact of the PI3K/ AKT/mTOR signaling pathway in advanced esophageal squamous cell carcinoma. Technol Cancer Res Treat. 2018;17:1533033818758772. doi: 10.1177/1533033818758772.
14. Yeung Y, Lau DK, Chionh F, Tran H, Tse JWT, Weickhardt AJ, Nikfarjam M, Scott AM, Teb-butt NC, Mariadason JM. K-Ras mutation and amplification status is predictive of resistance and high basal pAKT is predictive of sensitivity to everolimus in biliary tract cancer cell lines. Mol Oncol. 2017;11(9):1130-42. doi: 10.1002/1878-0261.12078.
15. Komori Y, Yada K, Ohta M, Uchida H, Iwashita Y, Fukuzawa K, Kashima K, Yokoyama S, Inoma-ta M, Kitano S. Mammalian target of rapamy-cin signaling activation patterns in pancreatic neuroendocrine tumors. J Hepatobiliary Pancreat Sci. 2014;21(4):288-95. doi: 10.1002/ jhbp.26.
16. All G, Boldrini L, Capodanno A, Pelliccioni S, Servadio A, Crisman G, Picchi A, Davini F, Mussi A, Fontanini G. Expression of p-AKT and p-mTOR in a large series of broncho-pulmonary neuroendocrine tumors. Exp
Ther Med. 2011;2(5):787-92. doi: 10.3892/ etm.2011.291.
17. Gagliano T, Bellio M, Gentilin E, Mole D, Tagliati F, Schiavon M, Cavallesco NG, Andriolo LG, Ambrosio MR, Rea F, Degli Uberti E, Zatelli MC. mTOR, p70S6K, AKT, and ERK1/2 levels predict sensitivity to mTOR and PI3K/mTOR inhibitors in human bronchial carcinoids. Endocr Relat Cancer. 2013;20(4):463-75. doi: 10.1530/ERC-13-0042.
18. Falletta S, Partelli S, Rubini C, Nann D, Doria A, Marinoni I, Polenta V, Di Pasquale C, Deg-li Uberti E, Perren A, Falconi M, Zatelli MC.
mTOR inhibitors response and mTOR pathway in pancreatic neuroendocrine tumors. Endocr Relat Cancer. 2016;23(11):883-91. doi: 10.1530/ERC-16-0329.
19. Pellat A, Dreyer C, Couffignal C, Walter T, Lom-bard-Bohas C, Niccoli P, Seitz JF, Hentic O, André T, Coriat R, Faivre S, Zappa M, Ruszniews-ki P, Pote N, Couvelard A, Raymond E. Clinical and biomarker evaluations of sunitinib in patients with grade 3 digestive neuroendocrine neoplasms. Neuroendocrinology. 2018;107(1): 24-31. doi: 10.1159/000487237.
Expression of the phosphorylated variant of the AKT1-kinase (p-AKT1) in well-differentiated pancreatic neuroendocrine tumors: immunohistochemical evaluation
V.V. Delektorskaya1 • O.N. Solov'eva1 • G.Yu. Chemeris1 • Yu.I. Patyutko1
Background: Well-differentiated pancreatic neuroendocrine tumors (pNETs) represent a group of rare epithelial neoplasms with a highly variable clinical course. AKT1 is one of the most frequently activated protein kinases in pNETs, which promotes the tumor growth and is of interest as a prognostic factor and a target for new treatment approaches. Aim: To study the expression of the phosphorylated variant of AKT1-kinase (p-AKT1) in primary pNETs and their liver metastases and to correlate the results with various clinical and pathological parameters and the disease prognosis. Materials and methods: P-AKT1 expression was studied by the immunohistochemical analysis of the primary lesions and liver metastases in 52 pNETs patients. Results: A high level of cytoplasmic and/or nuclear immunoreactivity was detected in 24/52 of the primary pNETs (46.2%) and in 16/27 of their liver metastases (59.3%). p-AKT1 expression was observed in 3 (21.4%) of NET grade (G) 1, in 14 (46.7%) of NET G2, and in 7 (87.5%) of NET G3. p-AKT1 expression was more frequently identified in pNET G3 category and increased during the tumor progression in metachronous
liver metastases, as compared to the corresponding primary tumor. In addition, p-AKT1 positivity was significantly associated with an increase of grade from G1 to G3 (p = 0.004), the Ki-67 index (p = 0.029), the pTNM stage (p = 0.0008), perineural invasion (p = 0.031) and a decrease in disease-free survival (p = 0.05). Conclusion: The results suggest that p-AKT1 plays an important role in the pathogenesis of pNETs and may be an additional criterion for assessment of the prognosis and treatment effectiveness in this type of tumors.
Key words: neuroendocrine tumor, pancreas, p-AKT1, immunohistochemistry, prognosis
For citation: Delektorskaya VV, Solov'eva ON, Chemeris GYu, Patyutko Yul. Expression of the phosphorylated variant of the AKT1-kinase (p-AKT1) in well-differentiated pancreatic neuroendocrine tumors: immunohistochemical evaluation. Almanac of Clinical Medicine. 2018;46(4):314-22. doi: 10.18786/20720505-2018-46-4-314-322.
Received 4 April 2018; accepted 16 May 2018
Vera V. Delektorskaya - MD, PhD, Head of Histochemistry and Electron Microscopy Laboratory, Department of Pathology of Human Tumors' * 24 Kashirskoe shosse, Moscow, 115478, Russian Federation. Tel.: +7 (499) 324 61 11. E-mail: delektorskaya@yandex.ru Olesya N. Solov'eva - MD, Postgraduate Student, Department of Liver and Pancreatic Tumors1 Galina Yu. Chemeris - PhD (in Biology), Senior Research Fellow, Department of Pathology of Human Tumors1
Yuri I. Patyutko - MD, PhD, Professor, Chief Research Fellow, Department of Liver and Pancreatic Tumors1
Conflict of interests
The authors declare no conflicts of interests.
1 N.N. Blokhin National Medical Research Centre of Oncology; 24 Kashirskoe shosse, Moscow, 115478, Russian Federation
