CC BY
57
ЭКСПРЕССИЯ CD8 КАК МАРКЕРА РИСКА НЕВЫНАШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ У ЖЕНЩИН С ГЕСТОЗОМ
Н.С. Линькова, А.В. Костылев, И.Н. Костючек, В.О. Полякова
Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН пр. Динамо, 3, Санкт-Петербург, Россия, 197110
Проанализирована экспрессия CD8, маркера Т-супрессоров, тканью плаценты у здоровых женщин и пациенток с гестозом в младшей и старшей возрастной группе. Получены данные об увеличении риска развития невынашиваемости беременности у женщин младшей возрастной группы с гестозом вследствие отсутствия Т-супрессоров.
Неблагоприятная демографическая ситуация в нашей стране и большой процент потерь желаемых беременностей обусловливают не только медицинскую, но и социальную значимость данной проблемы [1]. За последнее десятилетие значительно возросла доля беременных с невынашиванием беременности и ОПГ-гес-тозами, и резко сократилось число нормальных родов, удельный вес которых в 1997 году составил в среднем по России 31,8% [3]. В последние годы появилось много работ, посвященных изучению роли иммунных процессов в патогенезе невынашивания беременности [7, 14]. При беременности нормальное развитие фе-топлацентарного комплекса осуществляется за счет взаимодействия различных субпопуляций иммунокомпетентных клеток. Гестоз и привычное невынашивание беременности обусловлены иммунологическим «конфликтом», который возникает в результате реакции иммунной системы матери на антигены эмбриона. Вынашивание беременности на фоне ОПГ-гестозов нередко сопровождается дополнительными нарушениями деятельности сердечно-сосудистой, эндокринной, иммунной и других систем материнского организма, которые обычно возникают в связи с ускорением обменных процессов между кровью матери и плода. В результате этих процессов часто развивается полиорганная патология, называемая ОПГ-гестозом, которая вызывает компенсаторно-приспособительные и патологические изменения плаценты [4, 5]. Одним из проявлений нарушения функционирования иммунной системы может быть усиление цитотоксичности клеток и тканей [2, 10, 11, 12, 13]. Ряд исследований приводят данные о роли плацентарных факторов в развитии невынашивания беременности [15]. Согласно данным А.В. Мещеряковой, в генезе невынашивания беременности в 67% наблюдений определенная роль принадлежит нарушениям иммунного статуса плаценты. Для пациенток с невынашиванием беременности характерно снижение содержания Т-супрессоров, В-лимфоцитов и естественных киллеров [8, 9]. В механизмах развития привычного выкидыша важная роль принадлежит материнскому иммунному ответу, развивающемуся путем активации материнских макрофагов и НК-клеток, и изменения уровня продуцируемых цитокинов, однако о роли в этом процессе Т-супрессоров известно мало. По клиническим данным [1, 6], в настоящее время для предупреждения и прогнозирования невынашивания беременности очень важно проведение тщательного
клинико-лабораторного обследования пациенток с использованием современных методов диагностики, прежде всего исследования общего и локального иммунного статуса.
Целью настоящей работы явилось изучение экспрессии Т-супрессоров в ворсинах плаценты у женщин различных возрастных групп с нормально протекающей беременностью и гестозом.
Материал и методы исследования. Материалом для исследования служила ткань 43 доношенных плацент. Все пациентки были разделены на 4 группы — две опытных и две контрольных. Первая группа (n = 12) включала в себя здоровых женщин в возрасте до 30 лет, а вторая (n = 9) — здоровых женщин старше 30 лет. Третью группу (n = 12) составили пациентки до 30 лет с гестозом и четвертую (n = 10) — женщины старшего фертильного возраста, также перенесшие гестоз. У всех женщин роды были срочными (в 38—40 недель). Для проведения иммуногистохимической реакции с антителами к маркеру CD8 на Т-су-прессорах и Т-киллерах (1 : 300 Novocastra) использовали стандартный одноэтап-ный протокол с высокотемпературной демаскировкой антигена в цитратном буфере (рН = 6.0). В качестве вторичных антител использовали универсальный набор, содержащий биотинилированные антимышиные иммуноглобулины. Для визуализации реакции применяли комплекс авидина с биотинилированной про-ксидазой хрена, затем для проявления использовали диаминобензидин (ABC-kit Dako). Морфометрическое исследование проводили с помощью системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа Nikon Eclipse E400, цифровой камеры Nikon DXM1200, персонального компьютера на базе Intel Pentium 4 и программного обеспечения «Видеотест — морфология 5.0». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при увеличении 40. Относительную площадь экспрессии CD8 рассчитывали как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в процентах. Оптическую плотность экспрессии CD8 измеряли в условных единицах. Определяемые параметры характеризуют выраженность иммуногистохимической реакции. Для статистической обработки данных использовали дескриптивный метод, критерий Стьюдента и ранговую корреляционную оценку по Спирману. По рассчитанным значениям коэффициента Спир-мана проводилась оценка тесноты связи между выборками значений относительной площади экспрессии CD8 и возраста женщин и выдвигалась статистически обоснованная гипотеза о характере зависимости между исследуемыми выборками.
Результаты и их обсуждение. Средний возраст в младшей и старшей контрольных группах и в группах пациенток с гестозом соответственно, достоверно не отличался. В группе контроля у молодых женщин относительная площадь экспрессии Т-супрессоров была в 2,5 раза ниже, чем у старых первородящих. Так же было отмечено снижение оптической плотности экспрессии исследуемого антигена в 2,3 раза у женщин до 30 лет по сравнению с пациентками в возрасте после 30 лет. Коэффициент Спирмана в объединенной группе контроля, включающей в себя женщин всех возрастов, составил 0,38, что указывает на достоверную (р < 0,05) прямую положительную связь слабой тесноты между возрастом роже-
ниц и относительной площадью экспрессии Т-супрессоров. При этом зависимость между указанными величинами носит нелинейный характер и может быть аппроксимирована квадратичной кривой с уравнением у = 0,01х2 - 0,62х + 7,78. Обобщая полученные результаты, можно сказать, что в норме с возрастом и площадь экспрессии Т-супрессоров, и количество рецепторов на одной клетке, косвенно оцениваемое по оптической плотности, увеличиваются. В период с 19 до 28 лет возрастание площади экспрессии маркера CD8 довольно незначительно, а после 28 лет этот показатель стремительно возрастает.
У всех обследуемых женщин в возрасте до 30 лет с гестозом изучаемый маркер отсутствует. При этом у старородящих женщин, перенесших гестоз, относительная площадь экспрессии Т-супрессоров в 8 раз ниже, чем рожениц этой же возрастной группы в норме. Относительная площадь экспрессии изучаемого маркера у женщин в возрастной категории после 30 лет в норме и при гестозе достоверно не отличается. Расчет коэффициента Спирмана при объединении двух возрастных групп пациенток с гестозом составил 0,71, что позволяет выявить наличие достоверной (р < 0.05) прямой положительной связи сильной тесноты между возрастом рожениц и относительной площадью экспрессии Т-супрессоров. Эта зависимость носит нелинейный характер и аппроксимируется уравнением параболы четвертой степени у = -0,0002х4 + 0,0198х3 - 0,746х2 + 10,635х - 57,673. Следовательно, при гестозе у женщин до 28 лет экспрессия Т-супресоров полностью отсутствует, а у женщин старше 28 лет она хотя и проявляется, но не достигает нормальных значений.
При гестозе экспрессия Т-супрессоров в плаценте по сравнению с нормой резко снижается, вплоть до полного их отсутствия у женщин в возрасте до 30 лет, что может привести к нарушению работы защитной иммуносупрессорной системы плаценты и, в дальнейшем, к развитию иммунной агрессии, а также служить одним из факторов риска развития выкидышей.
Женщины в возрасте до 30 лет, норма Женщины в возрасте после 30 лет, норма Женщины в возрасте до 30 лет, гестоз Женщины в возрасте после 30 лет, гестоз А
Б
Рис. 1. Характеристики экспрессии CD8 в 1—4 группах:
А — относительная площадь иммуногистохимического окрашивания, Б — оптическая плотность (р < 0.05)
Таблица 1
Средние показатели относительной площади иммуногистохимического окрашивания и оптической плотности экспрессии CD8
Возраст женщин Характеристика материала Средний возраст в группе, лет Относительная площадь окрашивания, % Оптическая плотность, отн. ед.
До 30 лет норма (п = 12) 25,58 ± 1 ,.61 1,49 ± 0,44* 0,14 ± 0,04*
гестоз(п =12) 24,08 ± 2,05 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00
После 30 лет норма (п = 9) 34,08 ± 1,10 3,67 ± 0,91* 0,32 ± 0,09*
гестоз(п =10) 35,40 ± 1,90 0,46 ± 0,14* 0,17 ± 0,05*
Примечание: * — р < 0.05 по отношению к группам контроля
А
Б
Рис. 2. Зависимость относительной площади окрашивания от возраста:
А — в контроле, Б — при гестозе. (черная линия без точек — аппроксимирующая кривая)
Рис. 3. Экспрессия CD8 в плацентарной ткани у женщин в норме (группа контроля) у женщин в возрасте до 30 лет,х40
Рис. 4. Отсутствие экспрессии CD8 в плацентарной ткани у женщин с гестозом в возрасте до 30 лет, х40
Заключение. Гестоз является одним из факторов риска невынашиваемости плода во время беременности. Одним из патофизиологических механизмов развития невынашиваемости беременности на фоне гестоза, проявляющихся на морфологическом уровне, может быть резкое снижение или полное отсутствие экспрессии T-супрессоров. При этом в группу максимального риска развития данной патологии попадают женщины в возрасте до 30 лет.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Аушева A.A. Реабилитация репродуктивной функции у женщин с неразвивающейся беременностью в анамнезе (обзор литературы) // A.A. Аушева, Ю.Л. Доброхотова, T.A. Чер-нышенко // Русский медицинский журнал. — 2006. — Вып. 26. — С. 15—19.
[2] Баркаган З.С. Невынашиваемость беременности и мертворождаемость при нарушениях в системе гемостаза / З.С. Баркаган, Г.В. Сердюк // Гематология и трансфузиология. — 1991. — № 4. — С. 36—41.
[3] Бурдули Г.М. Репродуктивные потери / T.M. Бурдули, А.Г. Фролова. — M., 1997. — 412 c.
[4] Вихляева Е.М. Справочник по акушерству и гинекологии / Под ред. T.M. Савельева // E.M. Вихляева, В.И. Кулаков, В.Н. Серов. — 2-е изд. — M., 1967. — 324 с.
[5] Глуховец Б.И. Патология последа // Б.И. Глуховец, Н.Г. Глуховец. — СПб., 2002. — 447 с.
[6] Зароченцева Н.В. Особенности ведения I триместра беременности у женщин с невынашиванием в анамнезе // Н.В. Зароченцева, Ю.П. Капрова, С.Ю. Mарченко и др. — 2006. — № 4— C. 19—22.
[7] Краснопольский В.И. Прегравидарная подготовка женщин с невынашиванием беременности / В.И. Краснопольский, Л.С. Логутова, О.Ф. Серова. // Информационно-методическое письмо M3 MО. — 2003. — 22 с.
[8] Кулаков В.И. Эндокринное бесплодие у женщин диагностика и лечение / В.И. Кулаков, T.A. Назаренко, Э.Р. Дуринян // Практическое руководство. — M., 2000. — 80 c.
[9] Мещерякова A.B. Иммуноморфологические изменения в децидуальной ткани при неразвивающейся беременности сопутствующей урогенитальной хламидийной инфекции / А.В. Mещерякова, E.M. Демидова, T.A. Старостина и др. // Акушерство и гинекология. — 2001. — № 3. — № 3. — С. 22—24.
[10] Сидельникова В.М. Гормональные аспекты в клинике невынашивания / ВМ. Сидель-никова // Русский медицинский журнал. — 2001. — T. 9. — № 19. — С. 817—819.
[11] Сидельникова В.М. Иммунологические аспекты привычного невынашивания беременности. Иммунология и иммунопатология системы мать — плод — новорожденный / ВМ. Сидельникова, Г/Г. Сухих. — M., 2001. — 104 c.
[12] Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности / ВМ. Сидельникова. — M.: Tриада-X, 2002. — 304 с.
[13] Стукорлова Т.И. Охрана репродуктивного здоровья женщин. Новые технологии в акушерстве и гинекологии: Mатериалы научного форума / TÄ Стукорлова. — M., 1999. — С. 8—9.
[14] Raziel A. Hypercoagulable thrombophilic defects and hyperhomoceysteinemia in patients with recurrent pregnancy loss / A. Raziel, Y. Kornberg, S. Friedler // Am J. Reprod lmmu-nol. — 2001 Feb. — 45(2). — P. 65—71
[15] Taylor R.N. Effects of progestins and relaxin on glycodelin gene expressions in human endometrial cells / R.N. Taylor, G.L. Vigne, P. Zhang, Hoang P. // Am. J. Obstet Gynecol. — 2000. — V. 182. — N 4. — Р. 841—847.
EXPRESSION OF CD8 LIKE A MARKER OF RISK
Linkova N.S., Kostilev A.V., Kostuchek I.N., Polyakova V.O.
Institute of Bioregulation and Gerontology Russian Academy of Medical Sciences Dinamopr., 3, Saint-Petersburg, Russian Federation, 197110
We have analyzed expression of CD8, which is a marker of T-supressors, in placental tissue specimens from healthy women of young and old fertility age and women with gestosis from the same age groups. We have obtained data that shows that women with gestosis from young group have increased risk of habitual noncarrying of pregnancy in case of absence of T-supressors.
