CC BY
54
УДК 618.36:611.018.1
ЭКСПРЕССИЯ CD-68-ПОЗИТИВНЫХ МАКРОФАГОВ ПРИ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ
СD-68 POSITIVE MACROPHAGES EXPRESSION IN CASE OF PLACENTAL INSUFFICIENCY
Т. Л. Смирнова, В. Е. Сергеева T. L. Smirnova, V. E. Sergeeva
ФГОУ ВПО « Чувашский государственный университет имени И. Н. Ульянова», г. Чебоксары
Аннотация. Изучены локализация и количество CD-68-позитивных макрофагов в плаценте родильниц с плацентарной недостаточностью. Экспрессия CD-68 маркера макрофагов у пациенток с компенсированной, субкомпенсированной, декомпенсированной формами плацентарной недостаточности повышается. Обнаружено, что при плацентарной недостаточности возрастают содержание биогенных аминов в люминесцирующих гранулярных макрофагах и экспрессия CD-68-позитивных макрофагов.
Abstract. СD-68 expression of macrophages marker in case of patients' with compensated, subcompensated, decompensated forms of placental insufficiency increases. It is discovered that in case of placental insufficiency the quantity of biogenic amines in luminiscent granular macrophages and СD-68 positive macrophages expression increases.
Ключевые слова: CD-68-позитивные макрофаги, биогенные амины, плацента, плацентарная недостаточность.
Keywords: СD-бS positive macrophages, biogenic amines, placenta, placental insufficiency.
Актуальность исследуемой проблемы. Плацентарная недостаточность (ПН) является основной проблемой акушерства и неонатологии. В ходе научных исследований были выявлены микроструктуры, активность которых различна в норме и ряде осложнений беременности.
Плацента является провизорным нейроэндокринноиммунным органом, клеточные элементы которого синтезируют биологически активные вещества: гепарин, гистамин, серотонин, катехоламины, мелатонин, оксид азота, простагландины. Важнейшая роль в биосинтезе медиаторов принадлежит люминесцирующим гранулярным макрофагам. В настоящее время изучению реакции плаценты при осложнениях беременности уделяется значительное внимание. Выявлены мелатонинсодержащие макрофаги в плаценте [4]. Наши исследования показали наличие в люминесцирующих гранулярных клетках биогенных аминов: катехоламинов, серотонина, гистамина. Целью настоящего исследования явилась морфологическая идентификация люминесцирующих гранулярных биоаминсодержащих клеток.
Материал и методика исследований. Материалом для исследования служила плацента родильниц с доношенной беременностью. Пациенты разделены на группы: контрольную группу (КГ) составили 50 родильниц с физиологически протекавшей беременностью; экспериментальную группу составили 125 родильниц с ПН.
Для проведения иммуногистохимической реакции с антителами CD-68 (маркер макрофагов, 1:60 Novocasta) использовали одностандартный протокол с высокотемпературной демаскировкой антигена в цитратном буфере (pH 6,0). В качестве вторичных антител использовали универсальный набор, содержащий биотинилированные анти-мышиные иммуноглобулины. Для визуализации реакции применяли комплекс авидина с биотинилированной пероксидазой хрена, затем для проявления использовали диами-нобензидин (АВС-kit, Dako).
Для морфометрического исследования использовали систему компьютерного анализа микроскопических исследований микроскопических изображений, состоящую из цифровой камеры Canon A 540 с разрешением 6.0 Мп, персонального компьютера на базе Intel Pentium 4, программного обеспечения «SigmaScan Pro 5.0». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при увеличении микроскопа 400. Относительную площадь экспрессии CD-68 рассчитывали как отношение площади, занимаемой иммунопо-зитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в процентах. Оптическую плотность экспрессии CD-68 измеряли в условных единицах.
Результаты исследований и их обсуждение. При иммуногистохимическом исследовании обнаружено, что макрофаги плаценты дают CD-68-позитивное мембранное окрашивание (рис. 1).
тЩШт
f * ♦ iJgT» ~ ►
Т/ - ^ \ ^ <
»А hi * 'т * - * * J.
> *• л? -SVlps ‘.. *• v Ж * Л-У
*41
V#*
Рис. 1. Иммуногистохимическая реакция с моноклональными антителами СБ-бв в строме ворсин плаценты. Увеличение х400
Экспрессия СБ-68-позитивных плацентарных макрофагов у пациенток с ПН выше, чем у пациенток с физиологически протекавшей беременностью (табл. 1).
Таблица 1
Показатели относительной площади иммуногистохимического окрашивания и оптической плотности экспрессии СБ-68
Клинические группы Относительная плотность окрашивания, % Оптическая плотность в относительных единицах
Контрольная группа 0,89±0,21 0,13±0,06
Плацентарная недостаточность:
- компенсированная стадия 1,95±0,45* 0,26±0,08*
- субкомпенсированная стадия 2,85±0,36 0,30±0,02
- декомпенсированная стадия 2,35±0,12 0,34±0,07
Примечание: *Р<0,05 по отношению к контрольной группе
У родильниц КГ относительная плотность окрашивания СБ-68-позитивных макрофагов составила 0,89±0,21 %, а при развитии компенсированной формы ПН -1,95±0,45 %. При усугублении тяжести форм ПН наблюдается также повышение относительной плотности окрашивания макрофагов.
При изучении оптической плотности макрофагов плаценты выявлено, что в плаценте родильниц контрольной группы СБ-68-позитивные макрофаги имеют плотность 0,13±0,06 относительных единиц, а при декомпенсированной форме фетоплацентарной недостаточности оптическая плотность достигает 0,34±0,07 относительных единиц.
Полученные данные показывают, что при ПН экспрессия СБ-68-позитивных плацентарных макрофагов возрастает. В ряде научных работ отмечены иммунологические механизмы контроля развития плаценты. Хроническая гипоксия приводит к усилению выработки ряда факторов макрофагами плаценты [5]. Учитывая, что макрофаги плаценты синтезируют и накапливают биогенные амины, можно предположить, что данный механизм обеспечивается нейроэндокриноиммунной системой организма беременной женщины.
В последнее время появляются данные, свидетельствующие о наличии взаимосвязей между молекулярными механизмами, вовлеченными в трансдукцию сигнализации аминов, и молекулярными факторами, обеспечивающими иммунную реакцию [6]. Повышение уровня медиаторов и реакция клеток плаценты на них являются мощным стимулом к прогрессированию ПН [7].
В ряде научных работ описаны клеточно-опосредуемые механизмы: ТЬ2-клетки способствуют сохранению беременности, а реакции, опосредованные ТЫ-клетками, индуцируют преждевременные роды при ряде осложнений беременности [1].
В научных работах последних лет отмечена роль гормонов в обеспечении геста-ционного процесса. При физиологическом течении беременности прогестерон воздействует на СБ-56-клетки иммунной системы, способствует выработке интерлейкинов 3, 4, 10, 13 и блокирует выработку провоспалительных цитокинов ФНО-а, интерферон, интерлейкины 1, 6 [2], [3]. Известно, что при ПН снижается продукция прогестерона и, следовательно, усиливается выработка провоспалительных цитокинов. В свою очередь, провоспалительные цитокины, вырабатываемые макрофагами, приводят к тромбообра-зованию в плаценте за счет влияния на все звенья системы свертывания крови.
Возможно включение постановки гистохимической реакции СБ-68 в диагностику ПН наряду с комплексом гистологических подходов выявления патологии плаценты и степени выраженности патоморфологических нарушений с учетом маркеров апоптоза и клеточной пролиферации.
Резюме. Полученные результаты показывают, что СБ-68-позитивные макрофаги способствуют формированию плацентарной недостаточности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Березовский, Ю. С. Иммунокомпетентные клетки в децидуальной ткани при нормальной беременности и раннем невынашивании / Ю. С. Березовский // Арх. патологии. - 2001. - № 4. - С. 44-48.
2. Зубжицкая, А. Б. Роль цитокинов в механизме дисфункции эндотелия при гестозе / А. Б. Зуб-жицкая, Л. А. Иванова, Е. В. Мозговая // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2003. -№ 2. - С. 16-21.
3. Линькова, Н. С. Роль плацентарных макрофагов в патогенезе гестоза у женщин разных возрастных групп / Н. С. Линькова, А. В. Костылев, И. Н. Костючек, И. М. Кветной // Успехи геронтологии. -2009. - № 22. - Т. 22. - С. 503-506.
4. Рулева, А. В. Роль биогенных аминов в формировании плацентарной недостаточности при гестозе : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.01, 14.00.15 / А. В. Рулева. - СПб., 2007. - 24 с.
5. Сельков, С. А. Иммунологические механизмы контроля развития плаценты / С. А. Сельков, Д. И. Соколов // Журн. акуш. и жен. болезней. - 2010. - № 1. - С. 6-10.
6. Сергеева, В. Е. Люминесцентно-гистохимическая характеристика ранней реакции моноаминсодержащих структур тимуса на антигенные воздействия / В. Е. Сергеева, Д. С. Г ордон. - Чебоксары : Изд-во Чуваш. ун-та, 1992. - 352 с.
7. Смирнова, Т. Л. Плацента. Этапы развития / Т. Л. Смирнова // Вестник Чувашского университета. - 2009. - № 2. - С. 73-79.
