CC BY
14
© Коллектив авторов, 2022
Шевела Е.Я., Сахно Л.В., Максимова А.А., Тихонова М.А., Останин А.А., Черных Е.Р.
Экспрессия Argl и MerTK макрофагами человека, активированными М2-поляризующими стимулами, и их роль в детерминировании низкой аллостимуляторной активности
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 630099, г. Новосибирск, Российская Федерация
Резюме
Введение. Одно из универсальных проявлений иммуномодулирующей активности М2-макрофагов in vitro - способность детерминировать в смешанной культуре лейкоцитов низкий уровень пролиферации Т-клеток по сравнению с М1-макрофагами. У экспериментальных животных поляризация в М2-направлении во многом связана с метаболическим репрограммированием, в частности с изменением экспрессии аргиназы 1 (Argl) и тирозинкиназы Mer (MerTK). Однако у человека экспрессия и значение этих молекул в детерминировании низкой аллостимуляторной активности М2-макрофагов остаются неисследованными.
Цель исследования - оценить экспрессию Argl и MerTK в популяциях макрофагов, поляризованных М2-поляризующими стимулами, в сравнении с М1-клетками и оценить роль этих молекул в детерминировании низкой аллостимуляторной активности М2-макрофагов.
Материал и методы. Макрофаги генерировали из моноцитов периферической крови доноров в присутствии гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) с последующей поляризацией интерфероном-у (ИФН-у) в М1-, интер-лейкином-4 (ИЛ-4) - в М2а-, взаимодействием с апоптотическими клетками - в M2(LS)-фенотипы. Исследовали относительное содержание MerTK+- и Arg^-клеток, а также способность макрофагов стимулировать пролиферацию Т-лимфоцитов в смешанной культуре лейкоцитов (СКЛ).
Результаты. Показано, что макрофаги человека, генерированные из циркулирующих моноцитов в присутствии ГМ-КСФ, экспрессируют Arg1 и MerTK. Наиболее высокое содержание Arg1+- и MerTK+-клеток было выявлено в культурах макрофагов с М2-фенотипом, причем поляризованных не только под влиянием ИЛ-4 (М2а), но и в результате взаимодействия с апоптотическими клетками [М2^8)]. Установлено, что между экспрессией Arg1 и MerTK и аллостимуляторной активностью М2-макрофагов в СКЛ присутствует обратная корреляционная зависимость. Более того, блокирование этих молекул анти-MerTK-антителами и ингибитором Arg1 nor-NOHA приводит к усилению аллостимуляторной активности М2-клеток.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют об экспрессии Arg1 и MerTK макрофагами с М2-фенотипом и участии этих молекул в детерминировании низкой аллостимуляторной активности М2-макрофагов, что указывает на вовлечение Arg1 и MerTK в опосредованную макрофагами модуляцию адаптивного Т-клеточного ответа.
Ключевые слова: макрофаги человека; М2-фенотип; эффероцитоз; аргиназа-1; тирозин киназа Mer
Статья получена 01.07.2022. Принята в печать 31.08.2022.
Для цитирования: Шевела Е.Я., Сахно Л.В., Максимова А. А., Тихонова М.А., Останин А. А., Черных Е.Р. Экспрессия Arg1 и MerTK макрофагами человека, активированными М2-поляризующими стимулами, и их роль в детерминировании низкой аллостимуляторной активности. Иммунология. 2022; 43 (5): 515-524. DOI: https:// doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-5-515-524
Финансирование. Работа выполнена за счет средств федерального бюджета на проведение фундаментальных научных исследований (№ госрегистрации в ЕГИСУ НИОКТР 122011800324-4).
Для корреспонденции
Шевела Екатерина Яковлевна -доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клеточной иммунотерапии ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России, Новосибирск, Российская Федерация E-mail: shevelak@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-8997-3586
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Черных Е.Р.; сбор и обработка материала - Сахно Л.В., Максимова А.А., Шевела Е.Я.; цитофлуориметрия - Тихонова М.А.; статистическая обработка - Сахно Л.В., Шевела Е.Я.; написание текста - Шевела Е.Я., Сахно Л.В., Черных Е.Р.; редактирование - Останин А.А.
Shevela E.Ya., Sakhno L.V., Maksimova A.A., Tikhonova M.A., Ostanin A.A., Chernykh E.R.
Expression of Arg1 and MerTK by human macrophages activated by M2-polarizing stimuli and their role in determining low allostimulatory activity
Research Institute of Fundamental and Clinical Immunology, The Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation, 630099, Novosibirsk, Russian Federation
Abstract
Introduction. One of the universal manifestations of the immunomodulatory activity of M2 macrophages in vitro is the ability to determine a low level of T cell proliferation in a mixed leukocyte culture compared to Ml macrophages. In experimental animals, polarization towards M2 phenotype is largely associated with metabolic reprogramming, in particular, changes in the expression of arginase 1 and tyrosine kinase Mer. However, in humans, the expression and significance of these molecules in determining the low allostimulatory activity of M2 pheno-type macrophages remain unexplored.
The aim of the study was to evaluate the expression of Argl and MerTK in macrophages polarized by M2-polarizing stimuli in comparison with Ml, and to evaluate the role of these molecules in determining the low allostimulatory activity of M2 macrophages.
Material and methods. Macrophages were generated from donor peripheral blood monocytes in the presence of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) followed by polarization with interferon-y (IFN-y) - in Ml, interleukin-4 (IL-4) - in M2a, and by interaction in apoptotic cells - in M2(LS) phenotypes. We studied the relative content of MerTK and Argl+ cells, as well as the ability of macrophages to stimulate the proliferation of T-lymphocytes in mixed leukocyte culture (MLC).
Results. Human macrophages generated from circulating monocytes in the presence of GM-CSF express Argl and MerTK. The highest content of Arg1+ and MerTK+ cells was found in cultures of macrophages with the M2 phenotype, polarized not only under the influence of IL-4 (M2a), but also as a result of interaction with apoptotic cells (M2(LS)). The expression of Argl and MerTK was found to be inversely correlated to the allostimulatory activity of M2 macrophages in MLC. Moreover, blocking these molecules with anti-MerTK antibodies and the arginase l inhibitor nor-NOHA leads to an increase in the allostimulatory activity of M2 cells.
Conclusion. The data obtained indicate the expression of Argl and MerTK by M2 pheno-type macrophages and the involvement of these molecules in determining the low allostimu-latory activity of M2 macrophages, which indicates the implication of Argl and MerTK in macrophage-mediated modulation of the adaptive T-cell response.
Keywords: human macrophages; M2 phenotype; efferocytosis; arginase l; tyrosine kinase Mer
Received 0l.07.2022. Accepted 3l.08.2022.
For citation: Shevela E.Ya., Sakhno L.V., Maksimova A.A., Tikhonova M.A., Ostanin A.A., Chernykh E.R. Expression of Argl and MerTK by human macrophages activated by M2-polarizing stimuli and their role in determining low allostimulatory activity. Immunologiya. 2022; 43 (5): 5l5-24. DOI: https://doi.org/l0.33029/0206-4952-2022-43-5-5l5-524 (in Russian)
Funding. This study received financial support from the federal budget allocated for the fundamental scientific research area (registration No in EGISU NIOKTR l220ll800324-4).
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. The concept and design of the study - Chernykh E.R.; collection and processing of material - Sakhno L.V., Maksimova A.A., Shevela E.Ya.; cytofluorometry - Tikhonova M.A.; statistical processing -Sakhno L.V., Shevela E.Ya.; writing the text - Shevela E.Ya., Sakhno L.V., Chernykh E.R.; editing - Ostanin A.A.
For correspondence
Ekaterina Ya. Shevela -MD, PhD, Leading Researcher, Laboratory of Cellular Immunotherapy, RIFCI of the MSHE of Russia, Novosibirsk, Russian Federation E-mail: shevelak@mail.ru http://orcid.org/0000-000l-8997-3586
Введение
Макрофаги (Мф) характеризуются выраженной пластичностью и в зависимости от типа активирующего сигнала могут приобретать различные функциональные фенотипы, в частности при активации липополисаха-ридом (ЛПС) и/или интерфероном-у (ИФН-у) (классический путь) - провоспалительный (М1) фенотип, при активации интерлейкином-4 (ИЛ-4) и/или ИЛ-13 (альтернативный путь) - противовоспалительный (М2) фенотип [1, 2]. Помимо ТЬ2-цитокинов, М2-фено-тип может индуцироваться иммунными комплексами (М2Ь), глюкокортикоидами и ИЛ-10 (M2c). Одним из ключевых М2-поляризующих сигналов также является поглощение макрофагами апоптотических клеток [3]. Ранее нами был разработан протокол генерации Мф в условиях дефицита ростовых/сывороточных факторов (M2-LS, LowSerum), в котором сигналом к поляризации в М2-направлении являлся захват апоптотических клеток, образующихся в условиях депривации [4].
Одним из проявлений иммунорегуляторной активности макрофагов с М2-фенотипом является способность снижать пролиферацию Т-клеток в аллогенной смешанной культуре лейкоцитов (алло-СКЛ). Ранее нами было показано, что низкая аллостимуляторная активность является общим свойством М2-макрофагов - независимо от типа дифференцировочного фактора (мак-рофагальный или гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующие факторы, M-КСФ или ГМ-КСФ) и М2-поляризующего сигнала (ИЛ-4, декса-метазон, контакт с апоптотическими клетками) [5]. При этом низкая аллостимуляторная активность М2-макрофагов только частично корригировалась при блокировании молекул PD-L1 и TRAIL на М2(LS) [4]. Таким образом, вопрос о механизмах, посредством которых М2-макрофаги детерминируют низкий уровень пролиферации Т-лимфоцитов в алло-СКЛ, остается открытым.
Среди молекул, способных опосредовать иммуноре-гуляторную функцию макрофагов, большое внимание привлекают два фермента - аргиназа 1 (Arg1) и тиро-зинкиназа Mer (MerTK). Недостаточность аргинина вследствие его расщепления аргиназой оказывает ин-гибирующий эффект на Т-клетки [6]. MerTK является рецептором эффероцитоза, а также активирует сигнальный путь, приводящий к образованию липоксинов и резолвинов, участвующих в процессах репарации [7]. Кроме того, сигналинг через MerTK подавляет активность NF-kB, снижая ЛПС-индуцированную продукцию провоспалительных цитокинов/хемоки-нов и повышая продукцию ИЛ-10, трансформирующего фактора роста в (ТФРР) и фактора роста гепа-тоцитов (HGF), обладающих иммуносупрессивной активностью [8, 9].
В исследованиях на мышах показано, что поляризация макрофагов сопровождается выраженными изменениями в метаболизме аргинина. Так, классически активированные М1-макрофаги метаболизируют аргинин с помощью NO-синтазы (iNOS), а альтерна-
тивно активированные М2-макрофаги - с помощью Arg1. При этом у мышей экспрессия Arg1 является общим свойством макрофагов, активированных различными М2-поляризующими стимулами [10]. В то же время сведения о метаболическом репрограммирова-нии макрофагов человека представлены в единичных публикациях, в которых сообщается как об экспрессии Arg1 [11, 12], так и об отсутствии таковой [13]. В отношении MerTK имеется лишь одно сообщение о преимущественной экспрессии данной молекулы М-КСФ-дифференцированными макрофагами, поляризованными дексаметазоном [3].
Исходя из вышесказанного целью настоящей работы стало исследование экспрессии Arg1 и MerTK в популяциях макрофагов, поляризованных М2-поляризующими стимулами, в сравнении с М1-клетками, и оценка роли этих молекул в детерминировании низкой аллостиму-ляторной активности М2-макрофагов. Поскольку экспрессия данных молекул на макрофагах представляет наибольший интерес в условиях воспаления, диффе-ренцировку моноцитов в макрофаги индуцировали ГМ-КСФ, продукция которого существенно возрастает при воспалительных процессах. В качестве классического М2-поляризующего сигнала использовали ИЛ-4. Кроме того, учитывая ключевую роль апоптоза в регуляции воспаления, также оценивали макрофаги, М2-фенотип которых индуцировался взаимодействием с апоптоти-ческими клетками согласно ранее разработанному нами протоколу [4].
Материал и методы
Генерация макрофагов. Макрофаги генерировали из моноцитов периферической крови здоровых доноров (n = 51; 22-56 лет). Для этого мононуклеарные клетки (МНК) (3-5 • 106/мл) помещали в 6-луночные планшеты (TPP, Швейцария) в среде RPMI-1640, дополненной 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола, 2 мМ пиру-вата натрия, 0,3 мг/мл L-глутамина, 1 % незаменимых аминокислот (все реактивы Sigma-Aldrich, Германия), 10 % сыворотки крови плодов коровы (Биолот, Россия) и 50 нг/мл рекомбинантного ГМ-КСФ человека (Sigma-Aldrich, Германия). Через 1 ч культивирования в СО2-инкубаторе удаляли фракцию не прилипших к пластику клеток, а адгезивные клетки продолжали культивировать в течение 7 сут. Относительное содержание CD14+-моноцитов во фракции адгезивных клеток составляло 93-95 %. На 5-й день добавляли соответствующие поляризующие стимулы: ИФН-у (100 Ед/мл) - для получения М1, ИЛ-4 (20 нг/мл) - для М2а. Для получения М2 (LS, LowSerum) использовали аналогичную среду, дополненную ГМ-КСФ (50 нг/мл) и 2 % аутоплазмы (условия дефицита ростовых/сывороточных факторов) [14]. Все подтипы Мф были получены от одних и тех же доноров, что позволяло сравнить между собой Мф различных функциональных фенотипов, полученных от одного индивида. Все исследования проводились
Таблица 1. Аллостимуляторная активность ГМ-КСФ-дифференцированных макрофагов человека
Фенотип макрофагов n Ответ в СКЛ, имп/мин Индекс стимуляции в СКЛ, расч. ед.
М1(ИФН-у) 17 3410(2275-5675) 4,2 (3,1-6,8)
М2а(ИЛ-4) 17 2923 (1525-4230)* 2,8 (1,4-4,8)*
М2^) 17 1316 (804-2882)* 2,4 (1,3-4,5)*
Примечание. Здесь и в последующих таблицах данные представлены в виде Ме и (в скобках); * -р < 0,05, достоверность
различий по сравнению с М1(ИФН-у) (критерий Вилкоксона для связанных выборок); СКЛ - смешанная культура лейкоцитов.
в соответствии с положениями Хельсинкской декларации ВМА после получения письменного информированного добровольного согласия.
Относительное содержание МегТК+-клеток и Arg1+-клеток анализировали с помощью проточной цито-флуориметрии. МегТК+-клетки определяли в гейте HLA-БК(РегСР)-позитивных клеток в популяциях CD86+- (для М1) и CD206+- (для М2) макрофагов с использованием анти-Ш86-Р1ТС, анти-Ш206-РБ (BD Pharmingen, США) и AlexaFluor 647 анти-МегТК-антител (Biolegend, США). Для оценки внутриклеточной экспрессии Arg1 Мф, меченные анти-HLA-DR-, анти-ОТ86- и анти-CD206-антителами, обрабатывали пермеабилизирую-щими растворами (Transcription Factor Buffer Set, BD Pharmingen, США) и метили APC-конъюгированными анти-Arg1-антителами (R&D Systems, США).
Аллостимуляторную активность макрофагов определяли по способности Мф стимулировать пролиферацию аллогенных Т-клеток в смешанной культуре лейкоцитов (СКЛ). Для этого МНК (1 • 105 /лунку) культивировали в 96-луночном планшете в RPMI-1640, содержащей 10 % инактивированной сыворотки до-
Q
ü
"â 62% PUft'r
Q
ü
• -,vs 50%
•ft'l'. : /.i'" iV^4, ".
Arg-APC
Arg-APC
v-v^
Î vr V •
>". - Irt*
'> ¡SjfiWS 42%
-
Mer-APC
Mer-APC
Рис. 1. Относительное содержание Arg+- и MerTK+-макрофагов в популяции HLA-DR+CD206+-клеток
норов [AB(IV) группы], в отсутствие (контроль) или в присутствии различных типов макрофагов (в соотношении МНК : Мф 10 : 1). Пролиферацию Т-клеток оценивали радиометрически на 5-й день по включению [3Н]-тимидина, внесенного за 18 ч до окончания культивирования (1 мкКю/лунку). Аллостимуляторную активность Мф выражали в виде индекса стимуляции (ИС) (отношение пролиферативного ответа МНК в присутствии Мф к уровню спонтанной пролиферации МНК).
Анти-ЬМег-антитела (5 мкг/мл; R&D Systems, США) или ингибитор аргиназы №-гидрокси-Ь-нораргинин (nor-NOHA; 50 мкМ; Sigma-Aldrich, Гер -мания) добавляли в алло-СКЛ на 5 сут. В отдельной серии экспериментов nor-NOHA использовали для предобработки макрофагов в течение 1 ч с последующей отмывкой и исследованием аллостимуляторной активности в СКЛ.
Статистическая обработка данных. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью пакета программ Statistica 8.0 (StatSoft. Inc., США). Данные представлены в виде медианных значений (Ме) и интерквартильного диапазона (LQ-UQ, 2575 % квартили). При сравнении вариационных рядов использовали непараметрические критерии для связанных (критерий Вилкоксона) и несвязанных (критерий Манна-Уитни) выборок. Различия считали значимыми при уровне p < 0,05.
Результаты
Характеристика аллостимуляторной активности Мф
Анализ аллостимуляторной активности генерированных макрофагов показал, что все исследуемые типы Мф индуцировали пролиферацию Т-клеток в алло-СКЛ (табл. 1). При этом макрофаги с М1- и М2-фенотипом значимо различались по выраженности стимулирующего эффекта. Наиболее высокую аллостимуляторную активность проявляли Мф с М1-фенотипом - М1(ИФН-у), индекс стимуляции которых на уровне медианы составлял 4,2. Способность макрофагов с М2а- и M2(LS)-фенотипами стимулировать пролиферацию Т-клеток была достоверно ниже, не различаясь между указанными фенотипами.
Экспрессия Argl и MerTK макрофагами человека с М1- и М2-фенотипом
Внутриклеточную экспрессию Arg1 и поверхностную экспрессию MerTK поляризованными М1(ИФН-у) макрофагами оценивали в гейте HLA-DR+CD86+-клеток, а макрофагами с М2-фенотипом, М2а(Ш-4) и М2(LS) -среди HLA-DR+CD206+-клеток (рис. 1).
Таблица 2. Содержание Arg+- и MerTK+-клеток в различных популяциях ГМ-КСФ-дифференцированных макрофагов человека
Фенотип макрофагов Arg1 MerTK
% MFI % MFI
М1(ИФН-у) 14,5 (9,5-27,5) n = 12 160 (104-213) 11 (7,7-13,1) n = 16 142 (109-178)
М2а(ИЛ-4) 66 (50-67)** n = 13 91 (82-200) 62 (43-67)** n = 15 160 (136-168)
М2^) 52,5 (31-60)** n = 32 102 (73-145) 51,5 (34-68)** n = 32 120 (73-169)
Примечание. МР1 - средняя интенсивность флуоресценции; ** - достоверность различий (р < 0,01) по сравнению с М1(ИФН-у) (и-критерий Манна-Уитни).
Из данных, представленных в табл. 2, видно, что экспрессия А^1 выявлялась во всех популяциях ГМ-КСФ-дифференцированных макрофагов, при этом уровень экспрессии фермента значительно варьировал. Наименьшее количество А^Г-клеток (Ме 14,5 %) регистрировалось в культурах М1(ИФН-у). В оппозит-ной популяции М2а(ИЛ-4) содержание А^1+-клеток было в 4 раза выше и значимо превышало показатели М1(ИФН-у) (р = 0,0004). В культурах М2(Ь8) относительное количество А^1+-клеток достоверно не отличалось от такового в М2а(ИЛ-4) (р = 0,066) и значимо превышало уровень экспрессии Аг^1 в популяциях М1(ИФН-у) (р = 0,0002).
Популяции М1- и М2-макрофагов существенно различались и по уровню экспрессии МегТК (табл. 2). Наиболее высокое содержание МегТК+-клеток выявлялось в культурах макрофагов с М2-фенотипом - М2а(ИЛ-4) и М2(Ь8), где уровень экспрессии был сопоставимым и примерно в 5 раз превышал соответствующий показатель в популяции М1(ИФН-у) (p < 0,01). В то же время исследуемые макрофаги не различались по средней интенсивности флуоресценции указанных ферментов. Анализ корреляционных взаимосвязей выявил прямую кор-
реляционную связь между экспрессией MerTK и Arg1 в макрофагах с М2-фенотипом (суммированные данные для М2а- и М2^)-макрофагов) (rs = 0,62; p = 0,0026; n = 21).
Взаимосвязь экспрессии Argl и MerTK и аллостимуляторной активности макрофагов
Учитывая высокий уровень экспрессии Arg 1 и MerTK ГМ-КСФ-дифференцированными М2а-макрофагами, мы предположили, что эти молекулы могут опосредовать низкую аллостимуляторную способность макрофагов с М2-фенотипом. Для проверки этого предположения использовали два подхода: 1) проанализировали связь аллостимуляторной активности с экспрессией Arg1 и MerTK и 2) исследовали влияние ингибиторов Arg1 и MerTK на уровень ответа в СКЛ.
Анализ корреляционных связей аллостимуляторной активности с экспрессией Arg1 и MerTK был проведен в объединенной выборке, суммирующей данные для М2а- и М2(LS)-клеток. Полученные результаты продемонстрировали обратную корреляционную зависимость индекса стимуляции в СКЛ с количеством Arg1+-макрофагов (rS = -0,47; p = 0,035; n = 20) и MerTK+-макрофагов (rs = -0,68; p = 0,0018; n =18) (рис. 2). Эти
Рис. 2. Корреляционная взаимосвязь между экспрессией и МегТК и индексом стимуляции в СКЛ макрофагов с М2-фенотипом ИС - индекс стимуляции; СКЛ - смешанная культура лейкоцитов.
Таблица 3. Влияние добавления анти-MerTK-антител и nor-NOHA на аллостимуляторную активность М2-макрофагов
Фенотип макрофагов n анти-hMer (-) анти-hMer (+) Pu
М2а(ИЛ-4) Пролиферация, имп/мин Индекс стимуляции, расч. ед. 11 683 (447-2206) 2,2 (1,2-7,5) 1430 (843-2713)* 4,3 (1,4-10,5)* 0,021 0,013
М2(Ъ8) Пролиферация, имп/мин Индекс стимуляции, расч. ед. 16 772 (535-1247) 1,58 (1,1-2,3) 1083 (837-1627)** 2,14 (1,4-3,6)** 0,002 0,005
nor-NOHA (-) nor-NOHA (+)
М2а(ИЛ-4) Пролиферация, имп/мин Индекс стимуляции, расч. ед. 24 2497 (1347-3714) 2,8 (1,4-4,8) 2211 (1627-3958) 2,4 (1,67-4,1) 0,55 0,69
М2(Ъ8) Пролиферация, имп/мин Индекс стимуляции, расч. ед. 17 1316 (804-2882) 3,0 (1,3-4,5) 832 (439-2623) 1,46 (0,78-3,0) 0,17 0,27
Примечание. ри - достоверность различий с соответствующим показателем в отсутствие ингибитора (и-критерий Манна-Уитни).
данные свидетельствуют об участии А^1 и МегТК в опосредовании сниженной аллостимуляторной способности макрофагов с М2-фенотипом.
Влияние ингибиторов Arg1 и MerTK на аллостимуляторную активность М2-макрофагов
Поскольку экспрессия А^1 и МегТК находилась в обратной зависимости с индексом стимуляции в СКЛ, было логично предположить, что блокирование ферментов будет приводить к повышению исходно сниженной аллостимуляторной активности макрофагов с М2-фенотипом. Для проверки этого предположения мы оценили влияние ингибиторов МегТК (анти-ИМег-антител) и А^1 (№-гидрокси-Ь-нораргинина, пог-ЫОИА) на уровень ответа Т-лимфоцитов в алло-СКЛ (табл. 3). Видно, что добавление анти-МегТК-антител оказывало стимулирующее влияние на способность М2-макрофагов индуцировать ответ в СКЛ, в то время как в присутствии пог-ЫОИА наблюдалось снижение аллостимуляторной активности М2-макрофагов, которое, однако, не было статистически достоверным.
№г-ЫОИА - один из ингибиторов аргиназы, который широко используется в культуральных моделях и клинических исследованиях у человека для изучения биологической роли аргиназы. Однако при взаимодействии пог-ЫОИА с содержащимся в культу-
ральной среде рибофлавином происходит спонтанное освобождение биологически активных NO-подобных молекул [15], способных оказывать ингибирующее действие на пролиферацию культивируемых клеток. Для исключения этого эффекта в следующей серии экспериментов макрофаги преинкубировали в течение 1 ч с nor-NOHA и после отмывки использовали в качестве стимуляторов в алло-СКЛ. Из данных табл. 4 видно, что предобработка М2а(ИЛ-4) и М2(LS) ингибитором аргиназы оказывала стимулирующее влияние на аллостиму-ляторную активность М2-макрофагов.
Таким образом, более высокая экспрессия Arg1 и MerTK макрофагами человека с М2-фенотипом, наличие обратной корреляционной связи между экспрессией этих молекул и аллостимуляторной активностью макрофагов, а также усиление аллостимуляторной активности макрофагов при блокировании Arg1 и MerTK в совокупности свидетельствуют об участии указанных молекул в детерминировании низкой аллостимулятор-ной активности М2-макрофагов.
Обсуждение
Полученные нами результаты позволили сделать несколько заключений: а) макрофаги человека, генерированные из циркулирующих моноцитов в присутствии ГМ-КСФ, экспрессируют Arg1 и MerTK; б) содержание Arg1+- и MerTK+-клеток значимо выше
Таблица 4. Влияние предобработки nor-NOHA на стимуляцию М2-макрофагами ответа в алло-СКЛ
Фенотип макрофагов n nor-NOHA (-) nor-NOHA (+) Pw
М2а(ИЛ-4)
Пролиферация, имп/мин 11 611 (374-1398) 2093 (682-2378) 0,01
Индекс стимуляции, расч. ед. 1,43 (1,07-1,66) 1,8 (1,59-7,1) 0,016
М2(Ъ8)
Пролиферация, имп/мин 8 916 (642-1635) 1728 (1300-2463) 3 ,53 0,012
Индекс стимуляции, расч. ед. 1,46 (0,72-3,47) (1,19-5,37) 0,012
Примечание. р№ - достоверность различий по критерию Вилкоксона для связанных пар. Иммунология ■ Том 43 ■ № 5 ■ 2022
в культурах макрофагов с М2-фенотипом, причем поляризованных не только ИЛ-4 (М2а), но ив результате эффероцитоза [M2(LS)]; в) данные молекулы обладают иммуносупрессорной функцией, поскольку детерминируют низкую аллостимуляторную активность макрофагов.
Большинство исследований по изучению экспрессии макрофагами Argl проведено на мышах. Поскольку индукция Argl ассоциирована с активацией макрофагов ИЛ-4 и/или ИЛ-13 [16], этот фермент часто описывается как маркер альтернативной активации [17]. Усиление экспрессии Argl под действием ИЛ-10 и апоптотических клеток [18, 19] позволяет рассматривать указанную молекулу более широко -в качестве маркера макрофагов с М2-фенотипом. С другой стороны, имеются данные об усилении экспрессии данного фермента в макрофагах под действием ЛПС. Причем ИФН-у подавляет экспрессию Arg1 в макрофагах, активированных как ЛПС, так и ИЛ-4 [20]. Кроме того, недавно появились данные о том, что усиление экспрессии Arg1 в миелоидных клетках индуцируется ГМ-КСФ [21]. В этом аспекте повышение уровня ГМ-КСФ и ЛПС в условиях воспаления объясняет данные об экспрессии Arg1 в макрофагах у пациентов с инфекционными заболеваниями [11, 22]. В нашем исследовании для моделирования воспаления in vitro макрофаги генерировали в присутствии ГМ-КСФ. Экспрессия Arg1 в полученных таким образом макрофагах выявлялась как при активации по классическому пути (причем в культурах ИФН-у-поляризованных макрофагов), так и по альтернативному (ИЛ-4-поляризованные макрофаги) пути, однако содержание Arg1+-клеток в последнем случае было достоверно выше.
Высокое содержание Arg1+-клеток выявлялось также в культурах M2(LS), поляризация которых индуцировалась взаимодействием с апоптотическими клетками. Роль апоптотических клеток в индукции Arg1 ранее была продемонстрирована для макрофагов мыши [18]. Впоследствии мы показали, что поглощение апоптоти-ческих нейтрофилов ГМ-КСФ-дифференцированными неполяризованными макрофагами человека также приводило к существенному возрастанию доли Arg1+-клеток [23]. Полученные в настоящей работе данные являются еще одним подтверждением роли апоптоти-ческих клеток (образующихся в условиях депривации) в индукции экспрессии Arg1. Согласно данным литературы, синтез Arg1 стимулируется L-аргинином, высвобождаемым из поглощенного апоптотического материала, и этот фермент участвует в регуляции различных стадий эффероцитоза, влияя на образование фаголизо-сом, регулируя переваривание поглощенного апоптоти-ческого материала и обеспечивая непрерывность эффероцитоза [19].
MerTK - один из основных рецепторов, взаимодействующих с апоптотическими клетками. Однако данные об экспрессии MerTK клетками макрофагального ряда человека представлены единичными работами. Так,
G. Zizzo и соавт. обнаружили, что макрофаги человека, генерированные в присутствии М-КСФ и ИЛ-10 (M2c) и способные поглощать апоптотические тельца, экспрес-сируют высокий уровень этого фермента [3]. F.N. Mohd Idrus и соавт. при исследовании макрофагов у пациентов с ишемической болезнью сердца показали, что макрофаги с М2-фенотипом (М-КСФ-дифференцированные макрофаги, активированные ИЛ-4 и ИЛ-13), характеризовались более высокой экспрессией MerTK, чем макрофаги с М1-фенотипом (ГМ-КСФ-дифференцированные макрофаги, активированные ЛПС и ИФН-у) [24]. Нами впервые продемонстрирована экспрессия MerTK на М2-макрофагах человека, генерированных из моноцитов крови в присутствии ГМ-КСФ, причем поляризованных как ИЛ-4, так и взаимодействием с апоптотическими клетками, и показано, что содержание MerTK+-клеток в культурах этих макрофагов достоверно выше, чем в культурах макрофагов с М1-фенотипом (поляризованных ИФН-у). Учитывая, что ТАМ-рецепторы тирозинкиназ ингибируют продукцию провоспалительных цитокинов, индуцированную сигналами через Толл-подобные рецепторы [9], экспрессия MerTK на ГМ-КСФ-дифференцированных М2-макрофагах человека, в том числе на М2(Ь8), может представлять еще один механизм формирования противовоспалительной активности макрофагов с М2-фенотипом.
Одним из наиболее важных результатов настоящего исследования являются данные, демонстрирующие причастность Argl и MerTK к детерминированию низкой аллостимуляторной активности макрофагов с М2-фенотипом. Ранее R. Cabezón и соавт. показали, что повышенная экспрессия MerTK на индуцированных дексаметазоном толерогенных дендритных клетках ассоциирована с подавлением Т-клеточного ответа, а нейтрализация MerTK приводит к усилению Т-клеточной пролиферации и продукции ИФН-у [25]. V. Vonwirth и соавт. также показали, что ингибирование Argl повышает иммуностимуляторную активность нейтрофиль-ных гранулоцитов в отношении Т-лимфоцитов [26]. В то же время роль этих молекул в регуляции аллости-муляторной активности макрофагов ранее не исследовалась.
Полученные нами результаты об обратной корреляции между пролиферацией Т-клеток в алло-СКЛ и экспрессией Argl и MerTK на макрофагах, а также усиление аллостимуляторной активности при блокировании указанных молекул свидетельствуют о важной роли Argl и MerTK в регуляции способности макрофагов стимулировать пролиферацию Т-лимфоцитов. Согласно данным литературы, одним из механизмов, посредством которых М2-макрофаги подавляют Т-клеточный ответ, является их способность активировать Th2-клетки. Низкая аллостимуляторная активность М2-макрофагов - еще один механизм модуляции адаптивного Т-клеточного ответа, и данная функция реализуется с участием Argl и MerTK.
■ Литература
1. Vega M.A., Corbi A.L. Human macrophage activation: Too many functions and phenotypes for single cell type. Immunologia. 2006; 25 (4): 248-72.
2. Fraternale A., Brundu S., Magnani M. Polarization and Repolarization of Macrophages. J. Clin. Cell. Immunol. 2015; 6 (2): 319. DOI: https:// doi.org/10.4172/2155-9899.1000319
3. Zizzo G., Hilliard B.A., Monestier M., Cohen P.L. Efficient clearance of early apoptotic cells by human macrophages requires «M2c» polarization and MerTK induction. J. Immunol. 2012; 189 (7): 3508-20. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.1200662
4. Sakhno L.V., Shevela E.Ya., Tikhonova M.A., Ostanin A.A., Cherykh E.R. The phenotypic and functional features of human M2 macrophages generated under low serum conditions. Scand. J. Immunol. 2015; 83 (2): 151-9. DOI: https://doi.org/10.1111/sji.12401
5. Yankovskaya A.A., Shevela E.Y., Sakhno L.V., Tikhonova M.A., Dome A.S., Ostanin A.A., Chernykh E.R. Allostimulatory activity as a criterion of the functional phenotype of human macrophages. Hum. Immunol. 2019; 80 (10): 890-6. DOI: https://doi.org/10.1016/j.humimm.2019.08.003
6. Munder M. Arginase: an emerging key player in the mammalian immune system. Br. J. Pharmacol. 2009; 158: 638-51. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1476-5381.2009.00291.x
7. Cai B., Kasikara C., Doran A. C., Ramakrishnan R., Birge R.B., Tabas I. MerTK signaling in macrophages promotes the synthesis of inflammation resolution mediators by suppressing CaMKII activity. Sci. Signal. 2018; 11 (549): eaar3721. DOI: https://doi.org/10.1126/scisignal.aar3721
8. Crittenden M.R., Baird J., Friedman D., Savage T., Uhde L., Alice A., Cottam B., Young K., Newell P., Nguyen C., Bambina S., Kramer G., Akporiaye E. Mertk on tumor macrophages is a therapeutic target to prevent tumor recurrence following radiation therapy. Oncotarget. 2016; 7: 78 653-66. URL: https://www.oncotarget.com/article/11823/text/
9. Paolino M., Penniger J.M. The role of TAM family receptors in immune cell function: implications for cancer therapy. Cancers. 2016; 8: 97. DOI: https://doi.org/10.3390/cancers8100097
10. Viola A., Munari F., Sánchez-Rodríguez R., Scolaro T., Castegna A. The metabolic signature of macrophage responses. Front. Immunol. 2019; 10: 1462. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.01462
11. Mattila J.T., Ojo O.O., Kepka-Lenhart D., Marino S., Kim J.H., Eum S.Y., Via L.E., Barry C.E. 3rd, Klein E., Kirschner D.E., Morris S.M. Jr., Lin P.L., Flynn J.L. Microenvironments in tuberculosis granulomas are delineated by distinct populations of macrophage subsets and expression of nitric oxide synthase and arginase isoforms. J. Immunol. 2013; 191: 773-84. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.1300113
12. Thomas A.C., Sala-Newby G.B., Ismail Y., Johnson J.L., Paster-kamp G., Newby A.C. Genomics of foam cells and nonfoamy macrophages from rabbits identifies arginase-1 as a differential regulator of nitric oxide productionю Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2007; 27: 571-7. DOI: https://doi.org/10.461/01.ATV.0000256470.23842.94
13. Munder M., Mollinedo F., Calafat J., Canchado J., Gil-Lamaig-nere C., Fuentes J.M., Luckner C., Doschko G., Soler G., Eichmann K., Müller F.M., Ho A.D., Goerner M., Modolell M. Arginase I is consti-tutively expressed in human granulocytes and participates in fungi-cidal activity. Blood. 2005; 105; 2549-56. doi: https://doi.org/10.1182/ blood-2004-07-2521
14. Сахно Л.В., Шевела Е.Я., Тихонова М.А., Останин A.A., Черных Е.Р. Влияние депривационного апоптоза на GM-CSF-индуциро-ванную дифференцировку макрофагов. Иммунология. 2017; 38 (2): 8790. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-2-87-90
15. Momma T.Y., Ottaviani J.I. Arginase inhibitor, Nm-hydroxy-L-norarginine, spontaneously releases biologically active NO-like molecule:
limitations for research applications. Free Radic. Biol. Med. 2020; l52: 74-S2. DOI: https://doi.org/l0.l0l6/j.freeradbiomed.2020.02.033
16. Daseke M.J., Tenkorang-Impraim M.A.A., Ma Y., Chalise U., Konfrst S.R., Garrett M.R., DeLeon-Pennell K.Y., Lindsey M.L. Exogenous IL-4 shuts off pro-inflammation in neutrophils while stimulating antiinflammation in macrophages to induce neutrophil phagocytosis following myocardial infarction. J. Mol. Cell. Cardiol. 2020; 145: 112-21. DOI: https://doi.org/l0.l0l6/j.yjmcc.2020.06.006
17. Van Dyken S.J., Locksley R.M. Interleukin-4- and interleukin-13-mediated alternatively activated macrophages: roles in homeostasis and disease. Annu. Rev. Immunol. 2013; 31: 317-43. DOI: https://doi. org/l0.ll46/annurev-immunol-0327l2-095906
1S. Makita N., Hizukuri Y., Yamashiro K., Murakawa M., Hayashi Y. IL-10 enhances the phenotype of M2 macrophages induced by IL-4 and confers the ability to increase eosinophil migration. Int. Immunol. 20l5; 27 (3): 131-41. DOI: https://doi.org/l0.l093/intimm/dxu090
19. Yurdagul A. Jr., Subramanian M., Wang X., Crown S.B., Ilka-yeva O.R., Darville L., Kolluru G.K., Rymond C.C., Gerlach B.D., Zheng Z., Kuriakose G., Kevil C.G., Koomen J.M., Cleveland J.L., Muo-io D.M., Tabas I. Macrophage metabolism of apoptotic cell-derived argi-nine promotes continual efferocytosis and resolution of injury. Cell Metab. 2020; 31: 5lS-33.el0. DOI: https://doi.org/l0.l0l6/j.cmet. 2020.01.001
20. Menzies F.M., Henriquez F.L., Alexander J., Roberts C.W. Sequential expression of macrophage anti-microbial/inflammatory and wound healing markers following innate, alternative and classical activation. Clin. Exp. Immunol. 2010; 160 (3): 369-79. DOI: https://doi.org/l0.llll/ j.l365-2249.2009.040S6.x
21. Su X., Xu Y., Fox G.C., Xiang J., Kwakwa K.A., Davis J.L., Belle J.I., Lee W.C., Wong W.H., Fontana F., Hernandez-Aya L.F., Kobayashi T., Tomasson H.M., Su J., Bakewell S.J., Stewart S.A., Egbulefu C., Karmakar P., Meyer M.A., Veis D.J., DeNardo D.G., Lanza G.M., Achilefu S., Weil-baecher K.N. Breast cancer-derived GM-CSF regulates arginase 1 in my-eloid cells to promote an immunosuppressive microenvironment. J. Clin. Invest. 2021; 131 (20): el45296. DOI: https://doi.org/l0.ll72/JCIl45296
22. Thomas A.C., Mattila J.T. «Of mice and men»: arginine metabolism in macrophages. Front. Immunol. 2014; 5: 479. DOI: https://doi. org/l0.33S9/fimmu.20l4.00479
23. Сахно Л.В., Шевела Е.Я., Тихонова M.A., Ыаксимова A.A., Тыринова Т.В., Останин A.A., Черных Е.Р. Эффероцитоз усиливает экспрессию аргиназы-1 и тирозинкиназы Mer ГЫ-КСФ-дифференцированными макрофагами человека. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2020; l2: 76S-79. DOI: https://doi. org/l0.47056/0365-96l5-2020-l70-l2-76S-77l
24. Mohd Idrus F.N., Ahmad N.S., Hoe C.H., Azian M., Norfuad F.A., Yusof Z., Wan I.W.Y.H., Mohamed A.A.A., Yvonne-Tee G.B. Differential polarization and the expression of efferocytosis receptor MerTK on Ml and M2 macrophages isolated from coronary artery disease patients. BMC Immunol. 2021; 22: 21-9. DOI: https://doi.org/l0.llS6/sl2S65-02l-004l0-2
25. Cabezón R., Carrera-Silva E.A., Flórez-Grau G., Errasti A.E., Calderón-Gómez E., Lozano J.J., España C., Ricart E., Panés J., Roth-lin C.V., Benítez-Ribas D. MERTK as negative regulator of human T cell activation. J. Leukoc. Biol. 2015; 97: 751-60. DOI: https://doi.org/l0.llS9/ jlb.3A07l4-334R
26. Vonwirth V., Bülbül Y., Werner A., Echchannaoui H., Windschmitt J., Habermeier A., Ioannidis S., Shin N., Conradi R., Bros M., Ten-zer S., Theobald M., Closs E.I., Munder M. Inhibition of arginase 1 liberates potent T cell immunostimulatory activity of human neutrophil gran-ulocytes. Front. Immunol. 2021; 11: 617699. DOI: https://doi.org/l0. 33S9/fimmu.2020.6l7699
и References
1. Vega M.A., Corbi A.L. Human macrophage activation: Too many functions and phenotypes for single cell type. Immunologia. 2006; 25 (4): 248-72.
2. Fraternale A., Brundu S., Magnani M. Polarization and Repolarization of Macrophages. J Clin Cell Immunol. 2015; 6 (2): 319. DOI: https:// doi.org/10.4172/2155-9899.1000319
3. Zizzo G., Hilliard B.A., Monestier M., Cohen P.L. Efficient clearance of early apoptotic cells by human macrophages requires «M2c» po-
larization and MerTK induction. J Immunol. 2012; 189 (7): 3508-20. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.1200662
4. Sakhno L.V., Shevela E.Ya., Tikhonova M.A., Ostanin A.A., Cherykh E.R. The phenotypic and functional features of human M2 macrophages generated under low serum conditions. Scand J Immunol. 2015; 83 (2): 151-9. DOI: https://doi.org/10.1111/sji.12401
5. Yankovskaya A.A., Shevela E.Y., Sakhno L.V., Tikhonova M.A., Dome A.S., Ostanin A.A., Chernykh E.R. Allostimulatory activity as a cri-
terion of the functional phenotype of human macrophages. Hum Immunol. 2019; 80 (10): 890-6. DOI: https://doi.org/10.1016/j.humimm.2019.08.003
6. Munder M. Arginase: an emerging key player in the mammalian immune system. Br J Pharmacol. 2009; 158: 638-51. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1476-5381.2009.00291.x
7. Cai B., Kasikara C., Doran A. C., Ramakrishnan R., Birge R.B., Tabas I. MerTK signaling in macrophages promotes the synthesis of inflammation resolution mediators by suppressing CaMKII activity. Sci Signal. 2018; 11 (549): eaar3721. DOI: https://doi.org/10.1126/scisignal.aar3721
8. Crittenden M.R., Baird J., Friedman D., Savage T., Uhde L., Alice A., Cottam B., Young K., Newell P., Nguyen C., Bambina S., Kramer G., Akporiaye E. Mertk on tumor macrophages is a therapeutic target to prevent tumor recurrence following radiation therapy. Oncotarget. 2016; 7: 78 653-66. URL: https://www.oncotarget.com/article/11823/text/
9. Paolino M., Penniger J.M. The role of TAM family receptors in immune cell function: implications for cancer therapy. Cancers. 2016; 8: 97. DOI: https://doi.org/10.3390/cancers8100097
10. Viola A., Munari F., Sánchez-Rodríguez R., Scolaro T., Castegna A. The metabolic signature of macrophage responses. Front Immunol. 2019; 10: 1462. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.01462
11. Mattila J.T., Ojo O.O., Kepka-Lenhart D., Marino S., Kim J.H., Eum S.Y., Via L.E., Barry C.E. 3rd, Klein E., Kirschner D.E., Morris S.M. Jr., Lin P.L., Flynn J.L. Microenvironments in tuberculosis granulomas are delineated by distinct populations of macrophage subsets and expression of nitric oxide synthase and arginase isoforms. J Immunol. 2013; 191: 773-84. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.1300113
12. Thomas A.C., Sala-Newby G.B., Ismail Y., Johnson J.L., Paster-kamp G., Newby A.C. Genomics of foam cells and nonfoamy macrophages from rabbits identifies arginase-1 as a differential regulator of nitric oxide production. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2007; 27: 571-7. DOI: https:// doi.org/10.461/01.ATV.0000256470.23842.94
13. Munder M., Mollinedo F., Calafat J., Canchado J., Gil-Lamaig-nere C., Fuentes J.M., Luckner C., Doschko G., Soler G., Eichmann K., Müller F.M., Ho A.D., Goerner M., Modolell M. Arginase I is consti-tutively expressed in human granulocytes and participates in fungi-cidal activity. Blood. 2005; 105; 2549-56. doi: https://doi.org/10.1182/ blood-2004-07-2521
14. Sakhno L.V., Shevela E.Y., Tikhonova M.A., Ostanin A.A., Chernykh E.R. Influence of deprivation apoptosis on GM-CSF-induced macrophage differentiation. Immunologiya. 2017; 38 (2): 87-90. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-2-87-90 (in Russian)
15. Momma T.Y., Ottaviani J.I. Arginase inhibitor, N™-hydroxy-L-norarginine, spontaneously releases biologically active NO-like molecule: limitations for research applications. Free Radic Biol Med. 2020; 152: 74-82. DOI: https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2020.02.033
16. Daseke M.J., Tenkorang-Impraim M.A.A., Ma Y., Chalise U., Konfrst S.R., Garrett M.R., DeLeon-Pennell K.Y., Lindsey M.L. Exogenous IL-4 shuts off pro-inflammation in neutrophils while stimulating antiinflammation in macrophages to induce neutrophil phagocytosis following myocardial infarction. J Mol Cell Cardiol. 2020; 145: 112-21. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.yjmcc.2020.06.006
17. Van Dyken S.J., Locksley R.M. Interleukin-4- and interleukin-13-mediated alternatively activated macrophages: roles in homeostasis and disease. Annu Rev Immunol. 2013; 31: 317-43. DOI: https://doi. org/10.1146/annurev-immunol-032712-095906
18. Makita N., Hizukuri Y., Yamashiro K., Murakawa M., Hayashi Y. IL-10 enhances the phenotype of M2 macrophages induced by IL-4 and confers the ability to increase eosinophil migration. Int Immunol. 2015; 27 (3): 131-41. DOI: https://doi.org/10.1093/intimm/dxu090
19. Yurdagul A. Jr., Subramanian M., Wang X., Crown S.B., Ilkaye-va O.R., Darville L., Kolluru G.K., Rymond C.C., Gerlach B.D., Zheng Z., Kuriakose G., Kevil C.G., Koomen J.M., Cleveland J.L., Muoio D.M., Tabas I. Macrophage metabolism of apoptotic cell-derived arginine promotes continual efferocytosis and resolution of injury. Cell Metab. 2020; 31: 518-33.e10. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cmet. 2020.01.001
20. Menzies F.M., Henriquez F.L., Alexander J., Roberts C.W. Sequential expression of macrophage anti-microbial/inflammatory and wound healing markers following innate, alternative and classical activation. Clin Exp Immunol. 2010; 160 (3): 369-79. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-2249.2009.04086.x
21. Su X., Xu Y., Fox G.C., Xiang J., Kwakwa K.A., Davis J.L., Belle J.I., Lee W.C., Wong W.H., Fontana F., Hernandez-Aya L.F., Ko-bayashi T., Tomasson H.M., Su J., Bakewell S.J., Stewart S.A., Egbulefu C., Karmakar P., Meyer M.A., Veis D.J., DeNardo D.G., Lanza G.M., Achi-lefu S., Weilbaecher K.N. Breast cancer-derived GM-CSF regulates arginase 1 in myeloid cells to promote an immunosuppressive microenvironment. J Clin Invest. 2021; 131 (20): e145296. DOI: https://doi.org/10.1172/JCI145296
22. Thomas A.C., Mattila J.T. «Of mice and men»: arginine metabolism in macrophages. Front Immunol. 2014; 5: 479. DOI: https://doi. org/10.3389/fimmu.2014.00479
23. Sakhno L.V., Shevela E.Y., Tikhonova M.A., Maximova A.A., Tyrinova T.V., Ostanin A.A., Chernykh E.R. Efferocytosis modulates ar-ginase-1 and tyrosine kinase Mer expression in GM-CSF-differentiated human macrophages. Byulleten' eksperimental'noi biologii i meditsiny [Bulletin of Experimental Biology and Medicine]. 2020; 12: 768-79. DOI: https://doi.org/10.47056/0365-9615-2020-170-12-768-771 (in Russian)
24. Mohd Idrus F.N., Ahmad N.S., Hoe C.H., Azian M., Norfuad F.A., Yusof Z., Wan I.W.Y.H., Mohamed A.A.A., Yvonne-Tee G.B. Differential polarization and the expression of efferocytosis receptor MerTK on M1 and M2 macrophages isolated from coronary artery disease patients. BMC Immunol. 2021; 22: 21-9. DOI: https://doi.org/10.1186/s12865-021-00410-2
25. Cabezón R., Carrera-Silva E.A., Flórez-Grau G., Errasti A.E., Calderón-Gómez E., Lozano J.J., España C., Ricart E., Panés J., Roth-lin C.V., Benítez-Ribas D. MERTK as negative regulator of human T cell activation. J Leukoc Biol. 2015; 97: 751-60. DOI: https://doi.org/10.1189/ jlb.3A0714-334R
26. Vonwirth V., Bülbül Y., Werner A., Echchannaoui H., Windschmitt J., Habermeier A., Ioannidis S., Shin N., Conradi R., Bros M., Ten-zer S., Theobald M., Closs E.I., Munder M. Inhibition of arginase 1 liberates potent T cell immunostimulatory activity of human neutrophil granu-locytes. Front Immunol. 2021; 11: 617699. DOI: https://doi.org/10.3389/ fimmu.2020.617699
Сведения об авторах
Шевела Екатерина Яковлевна - д-р мед. наук, вед. науч. сотр., лаб. клеточной иммунотерапии ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России, Новосибирск, Российская Федерация E-mail: shevelak@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-8997-3586
Сахно Людмила Васильевна - канд. биол. наук, ст. науч. сотр., лаб. клеточной иммунотерапии ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России, Новосибирск, Российская Федерация E-mail: lsahno53@mail.ru http://orcid.org/0000-0003-3290-7910
Authors' information
Ekaterina Ya. Shevela - MD, PhD, Leader Researcher, Cellular Immunotherapy Lab., RIFCI of the MSHE of Russia, Novosibirsk, Russian Federation E-mail: shevelak@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-8997-3586
Ludmila V. Sakhno - PhD, Senior Researcher, Cellular Immunotherapy Lab., RIFCI of the MSHE of Russia, Novosibirsk, Russian Federation E-mail: lsahno53@mail.ru http://orcid.org/0000-0003-3290-7910
Максимова Александра Александровна - канд. мед. наук, науч. сотр., лаб. клеточной иммунотерапии ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России, Новосибирск, Российская Федерация E-mail: parkinson.dses@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0884-0226
Тихонова Марина Александровна - канд. биол. наук, ст. науч. сотр., лаб. клеточной иммунотерапии ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России, Новосибирск, Российская Федерация Email: martix-59@mail.ru http://orcid.org/0000-0002-2366-1667
Останин Александр Анатольевич - д-р мед. наук, проф., гл. науч. сотр., лаб. клеточной иммунотерапии ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России, Новосибирск, Российская Федерация E-mail: ostanin62@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-6895-938X
Черных Елена Рэмовна - д-р мед. наук, проф., член-корр. РАН, зав. лаб. клеточной иммунотерапии ФГБНУ НИИФКИ Минобрнауки России, Новосибирск, Российская Федерация E-mail: ct_lab@mail.ru http://orcid.org/0000-0003-2346-6279
Alexandra A. Maximova - PhD, Researcher, Cellular Immunotherapy Lab., RIFCI of the MSHE of Russia, Novosibirsk, Russian Federation E-mail: parkinson.dses@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0884-0226
Marina A. Tikhonova - PhD, Senior Researcher, Cellular Immunotherapy Lab., RIFCI of the MSHE of Russia, Novosibirsk, Russian Federation E-mail: martix-59@mail.ru http://orcid.org/0000-0002-2366-1667
Alexandr A. Ostanin - MD, PhD, Prof., Chief Researcher, Cellular Immunotherapy Lab., RIFCI of the MSHE of Russia, Novosibirsk, Russian Federation E-mail: ostanin62@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-6895-938X
Elena R. Chernykh - MD, PhD, Prof., Corresponding Member of RAS, Head of the Cellular Immunotherapy Lab., RIFCI of the MSHE of Russia, Novosibirsk, Russian Federation
E-mail: ct_lab@mail.ru http://orcid.org/0000-0003-2346-6279
