CC BY
6
УДК 614.777:815.285.71-074
Д. А. Чура, М. И. Гжегоцкий, А. К■ Маненко, Л. С. Еремеева, И. Ш. Задорожная, Я. Д. Пав люк, Л. А. Комиссарова, Л. В. Кирик, Л. В. Мугако, В. Г. Ребрин
* ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ К ОБОСНОВАНИЮ
ПРЕДЕЛЬНО ДОПУСТИМОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ РИЦИДА-П В ВОДЕ ВОДОЕМА
Львовский медицинский институт
Р Рицид-П — С|зН|2РОз(0,0-изопропнл-5-бензнлтиофос-фат) — новый фунгицнд отечественного производства, применяемый в борьбе с перикуляриозом риса. Состав: 95 % рицида-П, 4,2 % ксилола и 0,8 % бензилмеркаптана. Препарат представляет собой прозрачную жидкость с желтовато-коричневатым оттенком. Молекулярная масса 288,37, плотность 1,0999. температура кипения 133 °С, малолетуч, упругость пара 6,3-Ю2 Па, смешиваемость с водой 0,18%, константа диссоциации при 20°С в воде 1,2. При внесении в воду рицид-П придает ей хлорфеноль-ный запах, порог восприятия которого составляет 0,003 мг/л. Нагревание водных растворов препарата до 60 °С не изме-хняет одорометрических свойств, а хлорирование приводит ^к небольшому усилению интенсивности запаха. Водные растворы препарата в концентрациях, соответствующих 1 и 2 баллам по запаху, привкуса не имеют. В этих же условиях не обнаруживается окраски водных растворов и образования на их поверхности пены и пленки. При изучении стабильности концентрацию рицида-П в воде определяли разработанным нами методом хроматографии в тонком слое оксида алюминия после экстракции препарата растворителем н-гексаном. Чувствительность определения 0,001 дм/л. Согласно классификации [2], рицид-П относится к стабильным препаратам: время его полураспада более 2 сут, а изменение на 50 % одорометрических свойств воды наблюдается несколько недель.
В трехсерийном эксперименте изучены основные показатели самоочищающей способности воды модельных во-% доемов: биохимическое потребление кислорода (ВПК), бактериальная флора, содержание растворенного в воде кислорода, процессы аммонификации и нитрификации, активная реакция воды. Использованы следующие концентрации: 0,0003, 0,003, 0,03 и 3 мг/л. Присутствие в воде рицида-П в концентрациях 0,0003 и 0,003 мг/л не отражается на динамике ВПК. Увеличение содержания вещества в воде до 0,03 мг/л и более приводит к заметному возрастанию этого показателя. Константа скорости потребления кислорода 0.3054. Время окончания процессов окисления 6,5— 14,2 сут. Дефицит растворенного в воде кислорода вызывает резкое торможение роста бактериальной флоры и про-фцессов аммонификации и нитрификации. С учетом изложенного концентрацию рицида-П 0,003 мг/л можно считать пороговой по влиянию на санитарный режим модельных водоемов.
В остром опыте на морских свинках, белых мышах и белых крысах установлено, что рицид-П относится к сред-нетоксичным веществам. LDso его для свинок, мышей и крыс соответственно 420 (445—395) иг/кг, 435 (615— 225) мг/кг и 550 (730—370) мг/кг. Острая интоксикация сопровождается клоннко-тоннческими судорогами, коматозным состоянием с последующим параличом. Смерть наступает на 14-е сутки при явлениях адинамии и угнетения дыхания. Клиническая картина острого отравления рици-%дом-П свидетельствует об общетоксическом характере действия с преимущественным поражением нервной системы.
Изучение в остром опыте мутагенной активности ре-цида-П позволило выяснить целесообразность включения этих трудоемких исследований в подострый и хронический эксперименты. Применен цитогенетический анализ клеток костного мозга мышей на стадии анателофазы [3]. По полученным данным, вещество не является истинным мутагеном, так как по существующей генетико-гигиенической
классификации [1] уровень максимального эффекта, индуцированного исследованным веществом, является кратным контрольному уровню при однократном воздействии препарата только в среднесмертельных дозах, что указывает на общетоксическое, а не специфическое действие.
Подострый опыт проведен на 50 белых крысах массой 150 г (4 опытные и 1 контрольная группа). Испытуемое вещество в дозах, равных 1/10, 1/20, 1/50 и 1/250 ЬЭзд (50, 25, 10 и 2 мг/кг), вводили 6 раз в неделю внутриже-лудочно подопытным животным в водных растворах с применением 0,05 мл универсального растворителя ОП-7. Продолжительность опыта 2 мес. В течение этого периода регистрировали выживаемость и общее состояние крыс, через каждые 15 дней изучали динамику, массу тела, морфологический состав периферической крови, количество гемоглобина, суммационную способность ЦНС, поведенческие реакции, гексеналовый сон, активность аланинамино-трансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ) и щелочной фосфатазы, содержание мочевины в сыворотке крови, каталитический потенциал ацетилхолинэстеразы в кровн, сыворотке крови, печени и мозге, содержание тио-ловых групп в крови.
Общее состояние, поведение и внешний вид подопытных крыс отличались от таковых в контроле. В разные сроки от начала затравки в дозах 50, 25 и 10 мг/кг отмечались снижение двигательной активности, ослабление реакции на раздражение, ухудшение аппетита, снижение массы тела, статистически достоверный лейкоэритроцитоз, увеличение активности щелочной фосфатазы АЛТ и АСТ. содержания мочевины, уменьшение количества БН-групп в крови. Наблюдалось ингибирование холинэстеразной активности в крови рицидом-П, связанное, возможно, с его анти-холинэстеразным действием. Нарушения в деятельности ЦНС при введении препарата в дозах, равных 1/10 и 1/50 Ь05о, выразились в снижении способности ее суммировать подпороговые раздражения и уменьшении активности животных в поведенческих тестах, что свидетельствовало о развитии застойных очагов торможения в ЦНС. При проведении электронно-микроскопических исследований обнаружены дистрофические изменения эпителиальных клеток извитых канальцев почек, некроз отдельных клеток, а в печени — очаговые поражения, носящие деструктивный характер (дозы 50 и 25 мг/кг). Коэффициент кумуляции составил 4,3, что позволило отнести препарат к веществам со средневыраженным кумулятивным эффектом. С учетом сказанного в хронический эксперимент была включена в качестве максимальной доза, равная 1/50 ЬО60. Минимальные дозы были на уровне 1/250, 1/1000, 1/5000 и 1/250 000 ЬОм (10,2, 0,5, 0,1 и 0,02 мг/кг). В опыт было взято 120 белых крыс. При наблюдении за введением препарата в течение 6 мес выявлено выраженное воздействие его в наибольших количествах на организм крыс. Зарегистрированы отставание в приросте массы тела, снижение количества гемоглобина, повышение числа лейкоцитов и эритроцитов, изменение лейкоцитарной формулы, обусловленное, на наш взгляд, общетоксической реакцией. Существенными были колебания количества тиоловых групп, связанные с нарушением окислительно-восстановительных процессов в печени. Изменение функционального состояния печени проявилось также увеличением активности щелочной фосфатазы и трансаминаз в сыворотке кровн. Длительная
Таблица I
Показатели специфической агломерации и лизиса лейкоцитов крови белых крыс, подвергашихся хронической затравке рицидом-П (М±т)
Время наблюдения Контроль Доза вещества, мг/кг
0,1 0.02 0,002
Процент агломерированных
лейкоцитов
1 нед 1,8±0,2 2,0±0,22 1,9±0,24 1,97±0,25
2 нед 1,9±0,32 3,8±0,23* 2,0±0,29 2,2±0,27
4 нед 2,0±0,28 3,8±0,24* 3,5±0,25* 2,4±0,24
2 мес 1,7±0,24 4,2±0,23* 3,6±0,27* 1,9±0,27
3 мес 1,8±0,26 3,7±0,3* 2,0±0,24 2,0±0,22
4 мес 1,9±0,24 3,5±0,28* 3,2±0,28 2,3±0,23
5 мес 1,76±0,2 2,0±0,22 •1,85±0,24 2,0±0,25
6 мсс 1,84±0,28 3,0±0,23* 3,9±0,28* 2.2±0,2
Про цент лнзированных лейкоцитов
1 нед 9,0±0,6 10,2±0,5 10,0±0,4 9,8±0,4
2 нед 9,5±0,4 25,5±0,4* 15,5±1,5* 11,0±2,0
4 нед 8,8±0,4 27,7±3,6* 20,6±2,6* 10,0±0,9
2 мес 8,5±0,5 30,3±2,28* 20,8±2,8» 9,5±0,4
3 мес 7,8±0,7 28,8±2,5* 26,6±2,6* 11,0±2,2
4 мес 9,5±3,2 30,0±2,8* 32,5±3,2* 10,8± 1,8
5 мес 9,0±0,37 15,5± 1,48* 14,4±2,0* 11,0± 1,18
6 мес 8,3±0,33 22,8±2,5* 20,8±2,8* !0,8±2,8
* Здесь и в табл. 2 статистически достоверные результаты (/><0,05).
Таблица 2
Показатели РСЛЛ, РСАЛ и количество АБОК в крови морских свинок, подвергавшихся месячной внутрижелудочной затравке рицидом-П (М±т)
Время наблюдения Контроль Доза, мг/кг
0,02 0,002 0,0002
Процент лнзированных лейкоцитов
2 нед I 9,0±0,4 I 35,7±2,2* I 13,0±2,0* I 10,5±0,5 4 нед | 9,3±0,3 | 38,8±2,3* 13,0±2,1* | 10,7±0,9
Процент агломерированных лейкоцитов
2 нед 4 нед
2 нед 4 нед
1,8±0.17 И7,7±0,33»| 2,5±0,5 2,0±0,16 | 15,8±0,3* I 2,3±0,7
Процент АБОК
2,6±0,1 2,84±0,09
6,4±0,06* 5,9±0,08*
3,0±0,2 3,2±0,27
2.2±0,2 2,5^0,3
3.1±0,3 3,0±0,2
интоксикация рицидом-П сопровождалась снижением активности холинэстеразы на 30—35 %.
Воздействие препарата в дозах 2 и 0,5 мг/кг проявилось существенными колебаниями активности холинэстеразы в крови и повышением возбудимости ЦНС. При введении рицнда-П в дозе 0,02 мг/кг колебания изучаемых показателей не отличались от контроля. Таким образом, в хроническом эксперименте установлены пороговая (0,5 мг/кг) и подпороговая (0,02 мг/кг) дозы.
Возможность воздействия рицида-П на гонады изучали в хроническом эксперименте на крысах-самцах. Установле-
но, что вещество в дозах 0,1 и 0,02 мг/кг не оказывает гонадотоксического действия.
Проведенный анализ материала, полученного после затравки крыс на протяжении всего срока беременности рицидом-П в пороговых и подпороговых дозах, позволил сделать вывод о том, что в указанных дозах он не обладает избирательным действием на генеративную функцию бела| крыс. ^
Сенсибилизирующие свойства рицида-П изучали на морских свинках массой 200 г и белых крысах массой 150— 180 г. В кожу наружной поверхности уха морской свинки вводили однократно 50 мкг рнцнда-П (из расчета 250 мг на 1 кг массы) в объеме 0,02 мл. Для разведения препа рата использовали физиологический раствор, который вво дили и контрольным животным в количестве 0,02 мл. Ал лергическую перестройку организма морских свинок изуча ли спустя 14 дней, оценивая все типы аллергических реак ций (немедленный, замедлснно-немедленныЪ, замедленный) Тестирование начинали с кожных проб. В качестве прово кационного теста применяли внутрисердечное введение ве щества с оценкой выраженности анафилактического шока Для выявления скрытых аллергозов использовали реакцию специфической агломерации и лизиса лейкоцитов. Тестиро вание in vitro осуществляли после последней аппликации с помощью реакций специфического лизиса лейкоцитов и агломерации лейкоцитов (РСЛЛ и РСАЛ соответственно). Эти реакции выявили состояние сенсибилизации у животных при отсутствии клинических аллергических проявлений.
Возможность развития сенсибилизации при пероральном введении рнцнда-П в организм белых крыс изучали в хроническом санитарно-токсикологическом эксперименте. Результаты представлены в табл. 1.
Как следует из табл. 1, рицид-П в дозах 0,1 и 0,02 проявляет скрытие аллергенные свойства, которые подтверждаются результатами РСЛЛ и РСАЛ. Таким образом, ориентировочная пороговая доза рицида-П как аллергена составляет 0,02 мг/кг, подпороговая — 0,002 мг/кг.
Уточнение пороговой и подпороговой доз аллергена, установленных в опытах на крысах, осуществляли в опытах по энтеральному воздействию на морских свинках, поскольку чувствительность крыс к действию аллергена значительно меньше, чем морских свинок. Рицид-П вводили в пороговой, подпороговой по сенсибилизирующему эффек-. ту дозах и на порядок ниже (0,02, 0,002 и 0,0002 мг/кг). Длительность опыта 1 мес. С целью определения выраженности аутоиммунной реакции на внедрение в организм аллергена использован интегральный показатель активации аутоиммунитета — ощ>еделение в крови аутобляшкооб-разующих клеток (АБОК) по Н. Н. Клемпарской. Данные по уточнению пороговой и подпороговой доз представлены в табл. 2.
На основании проведенных опытов по уточнению пороговой и подпороговой доз аллергена установлены следующие концентрации по аллергенному эффекту: 0,02 мг/кг (0,4 мг/л) — действующая и 0,002 мг/кг (0,04 мг/л) — недействующая, подпороговая.
Таким образом, комплексная оценка всего экспериментального материала и сравнение пороговых концентраций по всем изученным признакам вредности позволили установить ПДК рицнда-П на уровне концентрации, эквивалентной пороговой концентрации по органолептическому признаку вредности — 0,003 мг/л.
Литература
1. Куринный А. И., Пилинская М. А. Исследование пестицидов как мутагенов внешней среды. Киев, 1975.
2. Мазаев В. Т. Гигиенические аспекты охраны водоемов при производстве и применении оловоорганнческих соединений. Автореф. дис. докт. мед. наук. М., 1978.
3. Саноцкий И. В., Фоменко В. Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. М., 1979.
Поступила 28.12.84
