CC BY
60
УДК 616.891.4:57.083.3
В. Г. Подсеваткин, С. В. Кирюхина, Д. С. Блинов, И. Я. Моисеева
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-КЛИНИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ИММУНОКОРРЕКТОРОВ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ НЕВРАСТЕНИИ
В опытах на мышах было установлено, что стресс приводит к развитию гуморального иммунного дисбаланса, усугубляющегося на фоне монотерапии диазепамом. Применение тимогена и полиоксидония, а также их комбинаций с диазепамом способствует восстановлению иммунных реакций. В клиническом разделе работы показано, что применение иммуномодуляторов на фоне иммуномониторинга в терапии неврастении патогенетически обосновано и может быть рекомендовано в качестве обязательного компонента фармакотерапевти-ческих схем коррекции стресс-опосредованных нарушений.
Введение
Наибольший удельный вес среди всех неврозов составляет неврастения [1]. Причем особенностью заболевания является то, что пациенты, как правило, обращаются в стационар в гипостеническую стадию при появлении негативной симптоматики, приводящей к социально-трудовой дезадаптации. Традиционная терапия анксиолитиками не всегда эффективна, в то время как патогенетическая терапия заболевания не до конца разработана. Развитие представлений об участии иммунной системы в формировании неврозов [2] и возможности образования «порочного круга» взаимоотягощающих патологических процессов при первичном поражении нервной или иммунной систем определяет актуальность оптимизации фармакотерапии этой группы пограничных состояний.
К сожалению, иммунный статус больных неврозами и его изменения в ходе фармакотерапии обычно не учитываются. В связи с этим исследование особенностей влияния иммуномодуляторов на гуморальные показатели крови при экспериментальном стрессе и у больных неврастенией, а также определение места иммунокорректоров в комплексной терапии пограничных психических расстройств с учетом особенностей влияния на иммунный статус пациентов является актуальной задачей.
Цель настоящей работы заключается в экспериментальном подтверждении необходимости включения иммуномодуляторов в комплексную терапию стресс-обусловленных заболеваний и клиническом обосновании патогенетической роли иммунокорректоров в лечении неврастении.
Материалы и методы исследования
Эксперименты выполнены на белых нелинейных лабораторных мышах обоего пола весом 18-22 г. В зависимости от условий содержания и фармакологического воздействия животные были разделены на семь групп. Первую группу составили животные, находящиеся в условиях обычного двигательного режима и не получавшие фармакологического воздействия (интактные, n = 86). Животных второй группы (n = 20) подвергали иммобилизационному стрессу (который моделировали по методу И. А. Коломейцевой и Hecht et. al. [3]) и введению 0,9% раствора хлористого натрия 0,5 мл внутрибрюшинно однократно в
течение пяти дней. Животным последующих групп на фоне иммобилизацион-ного стресса вводили соответственно диазепам в виде монотерапии (реланиум
0,5% раствор в ампулах по 2 мл, «Польфа А.О.», Польша) в дозе 0,2 мг/кг; ти-моген в виде монотерапии (0,01% раствор в ампулах по 1 мл, ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 2 мкг/кг; полиоксидоний в виде монотерапии (ООО «Иммафарма», Россия) в дозе 0,17 мг/кг; диазепам 0,2 мг/кг и тимо-ген 2 мкг/кг; диазепам 0,2 мг/кг и полиоксидоний 0,17 мг/кг. Препараты вводили ежедневно внутрибрюшинно общим объемом 0,5 мл в течение пяти дней. Общепринятыми методами определяли гуморальные показатели иммунитета: комплементарную активность сыворотки крови гемолитическим методом E. Kabat и M. Mayer [4] в модификации Л. С. Резниковой [5] и U. S. Dept [6]; уровень мелких, средних и крупных циркулирующих иммунных комплексов устанавливали способом осаждения на полиэтиленгликоле [7].
Клинические наблюдения проводили с участием больных неврастенией, находящихся на лечении в Мордовской республиканской психиатрической больнице. Все исследования осуществляли с согласия пациентов в соответствии с «Законом о психиатрической помощи и гарантиях прав граждан при ее оказании». Критерием включения пациентов в исследование являлось отсутствие сопутствующей соматической патологии. В исследовании участвовали 30 мужчин и 50 женщин в возрасте от 25 до 45 лет, средний возраст 34,6 ± 2,3. У всех пациентов была гипостеническая стадия заболевания. Пациенты были рандомизированы на две группы. В первой группе лечение осуществляли традиционными методами: с первого дня пребывания в стационаре назначался диазепам (релани-ум 0,5% раствор в ампулах по 2 мл, «Польфа А.О.», Польша) по 2 мл внутримышечно 2 раза в день в течение 20 дней. Пациентам второй группы наряду с диазепамом с первого дня лечения внутримышечно вводили тимоген по 1 мл (0,01% раствор в ампулах по 1 мл, ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в течение пяти дней, затем по 1 мл внутримышечно через день, общий курс составил 10 инъекций. Оценка психопатологических симптомов, осуществлявшаяся по картам Авруцкого-Зайцева [8], и гуморальных иммунных реакций проводилась при поступлении в стационар, а также на 10-й и 20-й день лечения.
Определение общей комплементарной активности, компонентов системы комплемента, циркулирующих иммунных комплексов разной молекулярной массы в сыворотке крови проводили вышеописанными методами. Уровень иммуноглобулинов классов А, М и G устанавливали методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини [9].
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью стандартного пакета программ Statistics 6.0.
Результаты исследования и их обсуждение
На первом этапе исследовали показатели гуморального иммунитета у животных в условиях иммобилизационного стресса. Ограничение двигательного режима приводило к снижению общей комплементарной активности более чем в два раза преимущественно за счет С1, С4 и С5 компонентов комплемента. Мы отмечали и значительное увеличение образования циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК): количество крупных ЦИК возросло на порядок, средних и мелких - в 3 и 2 раза соответственно (таблица 1).
Таблица 1
Показатели гуморального иммунитета у животных исследуемых групп
№ п/п Исследуемый показатель Интактные животные п = 86 Животные с иммобилизационным стрессом п = 20 Жтотные с иммобилизационным стрессом, получавшие диазепам и = 20 Жтотные с иммобішизационньїм стрессом, получавшие тимоген и = 20 Жтотные с иммобилизационным стрессом, получавшие полиоксидоний п = 20 Жтотные с иммобішизационньїм стрессом, получавшие диазепам и тимоген и = 20 Жтотные с иммобилизационным стрессом, получавшие диазепам и полиоксидоний и = 20
1 Комплемент общий, у.е. 0,38 ± 0,09 0,88 ± 0,23а 1,17 ± 0,12а 0,27 ± 0,076в 0,3 ± 0,066в 0,36 ± 0,07 6в 0,32 ± 0,06в
2 С]-компонент комплемента, у.е. 0,2 ± 0,037 0,3 ± 0,03а 1,1 ±0,03а6 0,24 ± 0,07° 0,1 ± 0,03абБ 0,21 ± 0,06в 0,11 ± 0,03а6
3 С2-компонент комплемента, у.е. 0,01 ± 0,001 0,01 ± 0,001 1,1 ±0,01а6 0,2 ± 0,03а6в ОД 7 ± 0,06а6в 0,12 ± 0,03а6в ОД 1 ± 0,06а6в
4 С3-компонент комплемента, у.е. 0,02 ± 0,002 0,02 ± 0,002 1,08 ± 0,04а6 ОД 6 ± 0,04а6в ОД 7 ± 0,06а6в 0,06 ± 0,04а6в 0,07 ± 0,04а6в
5 С4-компонент комплемента, у.е. 0,01 ± 0,001 0,02 ± 0,002а 1,10±0,03а 0,1 ± 0,01а6в 0,07 ± 0,03а6в 0,05 ± 0,01а6в 0,06 ± 0,03а6в
6 С5-компонент комплемента, у.е. 0,28 ± 0,07 0,54 ± 0,004а 1,38 ± 0,07 іа6 0,2 ± 0,016в 0,2 ± 0,016в 0,2 ± 0,016в 0,2 ± 0,016в
7 ЦИЗС крупные, у.е. 0,9 ± 0,3 8,5 ± 0,3 1,2 ± 0,56 1,2 ± 0,1ь 3,2 ± 0,2а6 0,9 ±0,1ь 3,1 ±0,1а6
8 ЦИК средние, у.е. 3,0 ±0,4 9,7 ± 2,63а 18,7 ±2,6а6 4,0 ± 1,76в 17,9 ± 1 ,За6 5,5 ±1,86в 15,5 ± 1,4а6
9 ЦИК мелкие, у.е. 39,3 ± 8,3 64,3 ± 6,За 46,5 ± 9,9 39,8 ± 6,2Ь 10,7 ±5,4а6в 41,8 ± 6,Зь 50,7 ± 5,6
Примечания: а - отличие от группы интактных животных, достоверно при р < 0,05; б - отличие от группы животных со стрессом, достоверно при р < 0,05; в - отличие от группы животных, получавших диазепам в виде монотерапии, достоверно при р < 0,05.
Известия высших учебных заведений.
Традиционным препаратом, использующимся для лечения пограничных психических расстройств, является диазепам, поэтому мы посчитали необходимым изучить влияние этого препарата на иммунологический профиль стрессированных животных. Внутрибрюшинное курсовое введение препарата сопровождалось тенденцией к еще большему угнетению активности системы комплемента, причем в отличие от группы животных с им-мобилизационным стрессом в крови снижалась концентрация всех компонентов комплемента. Концентрация С2, Сз и С4 компонентов комплемента снижалась в десятки раз. Вместе с тем мы наблюдали нормализацию уровня крупных и мелких иммунных комплексов и одновременное увеличение средних ЦИК.
В сыворотке крови животных, получавших тимоген и полиоксидоний, отмечали нормализацию уровня общего комплемента и С5 компонента комплемента. Тимоген при использовании в виде монотерапии повышал активность С компонента комплемента до уровня интактных животных, а полиоксидоний стимулировал избыточную продукцию С компонента комплемента.
Активность С2, С3 и С4 компонентов комплемента под воздействием иммунокорректоров снижалась, однако это снижение несопоставимо с прогрессивным падением активности данных компонентов на фоне монотерапии диазепамом. Курсовое введение тимогена сопровождалось нормализацией уровня крупных, средних и мелких циркулирующих иммунных комплексов, в то время как у животных, получавших полиоксидоний, наблюдалось количественное перераспределение иммунных комплексов: средних -в сторону увеличения, крупных и мелких - в сторону снижения, причем уровень мелких ЦИК уменьшался более чем в три раза по сравнению с группой интактных животных.
Комбинированное введение тимогена и диазепама сопровождалось отчетливым иммуномодулирующим эффектом: уровень общего комплемента у стрессированных мышей повышался до нормального значения. То же происходило и с уровнями Сь С3 и С5 компонентов комплемента, циркулирующих иммунных комплексов разной молекулярной массы. Сочетания диазепама с полиоксидонием давали менее сбалансированный иммунный ответ: наряду с достоверной нормализацией общей комплементарной активности, уровней С4 и С5 компонентов комплемента, наблюдалась гиперактивация С1 компонента комплемента и недостаточное снижение циркулирующих средних и крупных иммунных комплексов в сыворотке крови животных с иммобилизационным стрессом.
Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что стрессор-ное воздействие на животных сопровождается дисфункцией гуморальных иммунных реакций. Снижение и общей комплементарной активности, и активности отдельных компонентов комплемента, вероятно, не могут объясняться снижением их продукции, поскольку параллельно происходит интенсификация образования антигенов и циркулирующих иммунных комплексов разной молекулярной массы. В настоящее время общеизвестно, что субстратом для образования иммунных комплексов наряду с антигенами и антителами являются компоненты комплемента, поэтому, очевидно, в нашем случае
снижение уровней белков системы комплемента обусловлено избыточным их расходованием на образование ЦИК.
Нами установлено, что диазепам при введении в среднетерапевтической дозе усугубляет дисбаланс гуморальных факторов иммунитета у животных, подвергавшихся стрессу. Наряду с дальнейшим снижением уровня белков системы комплемента С1-С5, наблюдался рост ЦИК средней молекулярной массы. Выявленные иммунодепрессивные свойства стресса и диазепама на фоне стресса обуславливают необходимость в назначении иммунокорректоров при стресс-обусловленной патологии.
Терапия иммуномодуляторами тимогеном и полиоксидонием корреги-ровала гуморальные иммунные расстройства стрессированных мышей, при этом для тимогена свойственен более мягкий - иммуномодулирующий - эффект, а для полиоксидония характерна стимуляция гуморального иммунитета. Оптимальный иммуномодулирующий эффект получен в группе животных, получавших комбинацию анксиолитика диазепама и иммунокорректора тимогена. Показатели гуморального иммунитета мышей данной группы были наиболее приближены к контрольной серии.
Полученные результаты явились экспериментальным обоснованием необходимости включения иммунокорректора тимогена в комплексную терапию больных неврастенией.
Иммунный статус больных неврастенией (таблица 2) характеризовался дисбалансом в системе компонентов комплемента при сохранении уровня общей комплементарной активности: активность С2-С4 компонентов комплемента снижалась, а С1 и С5 - повышалась. Наблюдалось перераспределение циркулирующих иммунных комплексов: средних в сторону уменьшения, мелких в сторону увеличения. Регистрировалась истинная гипоиммуногло-булинемия класса А и снижение уровня иммуноглобулинов класса в по сравнению с группой здоровых доноров, однако 1§ в оставались в пределах физиологической нормы.
«Традиционная» терапия диазепамом усугубляла гуморальные иммунные расстройства, вызванные заболеванием. На 10-й день терапии регистрировали снижение общей комплементарной активности сыворотки крови, уровней С1, С2, С5 компонентов комплемента, коррегирующего влияния на С3, С4 компоненты диазепам не оказывал. Перераспределение уровней циркулирующих иммунных комплексов выражалось в снижении крупных ЦИК и значительном увеличении количества средних и мелких. Количество иммуноглобулинов не менялось. Продолжение лечения диазепамом в еще большей степени усугубляло дисфункцию гуморального звена иммунитета, что подтверждало наличие у препарата иммунодепрессивных свойств, впервые обнаруженных нами в эксперименте.
Комплексное лечение неврастении с включением тимогена характеризовалось восстановлением гуморальных иммунных реакций и предотвращало опосредованную диазепамом иммунодепрессию, за исключением С3 компонента комплемента и 1§ в, уровни которых на 20-е сутки лечения оставались сниженными, большинство изученных нами показателей не отличались от группы здоровых доноров.
Таблица 2
Показатели гуморального иммунитета у больных неврастенией на разных сроках лечения
№ п/п Исследуемый показатель Здоровые доноры я = 55 Пациенты с неврастенией при поступлении п = 80 Пациенты с неврастенией на 10 день терапии диазепамом п = 40 Пациенты с неврастенией на 20 день терапии диазепамом я = 40 Пациенты с неврастенией на 10 день терапии диазепамом и тимогеном п = 40 Пациенты с неврастенией на 20 день терапии диазепамом и тимогеном п = 40
1 Комплемент общий, у.е. 4,95 ± 0,04 4,82 ±0,14 5,2 ± 0,06а6 5,32 ± 0,04а6 4,9 ±0,14 4,95 ± 0,19°
2 С!-компонент комплемента, у.е. 4,91 ± 0,03 4,66 ± 0,04а 5,01 ±0,196 4,9 ± 0,056 4,58 ±0,19Ш 4,82 ± 0,056
3 С2-компонент комплемента, у.е. 4,06 ±0,17 4,31 ± 0,07 а 4,81 ±0,12а6 4,62 ± 0,1а6 4,28 ±0,13° 4,42 ±0,16
4 С3-компонент комплемента, у.е. 4,06 ±0,18 4,43 ± 0,07 а 4,56 ± 0,2а 4,61 ± 0,2а6 4,10 ± 0,35 ш 4,48 ± 0,12а
5 С4-компонент комплемента, у.е. 4,29 ±0,19 4,71 ±0,12а 4,88 ± 0,21а 4,89 ±0,16а 4,10± 0,386е 4,48 ± 0,096в
6 С5-компонент комплемента, у.е. 4,92 ±0,15 4,63 ±0,12а 4,85 ±0,026 4,88 ±0,12 4,72 ± 0,2в 4,78 ±0,12
7 ЦИК крупные, у.е. 2,0 ± 0,95 2,0 ± 0,48 0,64 ± 0,21 аЬ 0,25 ± 0,11 а6 1,07 ±0,35ь 1,0 ± 0,386в
8 ЦИК средние, у.е. 6,2 ±1,0 3,8 ± 0,5а 15,2 ± 1,0аЬ 21,8 ± 0,5аЬ 3,12 ± 1,0” 3,0 ± 0,3 “
9 ЦИК мелкие, у.е. 45,8 ±1,1 60,3 ± 5,0а 77,1 ±11,1 а 82,3 ±11,3 55,8 ±15,1 62,3 ±12,0а
10 А, мг % 160,2 ±11,2 130,1 ±7,9а 126,2± 11,6а 129,1 ±9,91 148,2 ±5,2 = 150,1 ± 7,2ЬБ
11 ^ М, мг % 149,9 ±14,9 149,6 ±10,5 129,6 ±14,9 131,8 ± 18,5 145,5 ±14,0 138,9 ±10,5
12 ^ мг % 1167,6 ± 43,3 1019,1 ± 28,0а 948,0 ± 56,3а 965,8 ±18,0а 1023,6 ± 45,3а 1008,1 ± 38,0а
Примечания: а - отличие от группы здоровых доноров, достоверно прир < 0,05; б - отличие от пациентов с неврастенией
при поступлении, достоверно при р < 0,05; в - отличие от пациентов, получавших диазепам в виде монотерапии, достоверно при р < 0,05.
л
Си
к
•е
к
ж
С)
№ 1, 2007 Медицинские науки. Теоретическая и экспериментальная
Заключение
Таким образом, полученные нами результаты подтверждают необходимость обследования иммунного статуса пациентов с пограничными психическими расстройствами, а выявление дисбаланса иммунных реакций делает применение иммуномодуляторов в терапии стресс-опосредованных заболеваний патогенетически обоснованным и может быть рекомендовано в качестве обязательного компонента фармакотерапевтических схем коррекции неврастении.
Список литературы
1. Александровский, Ю. А. Неврозы и перекисное окисление липидов / Ю. А. Александровский. - М. : Наука, 1997. - 98 с.
2. Крыжановский, Г. Н. Нейроиммунология / Г. Н. Крыжановский, С. В. Ма-гаева, С. В. Макаров. - М., 1997. - С. 89-102.
3. Коломейцева, И. А. Изменение структуры сна при разных сроках стрессиро-вания / И. А. Коломейцева // Экспериментальные неврозы и их фармакологическая терапия. - М. : Наука, 1988. - С. 53-60.
4. Kabat, E. Expérimental Immunochemistry / E. Kabat, M. Mayer. - 1964. - P. 22.
5. Резникова, Л. С. Комплемент и его значение в иммунологических реакциях / Л. С. Резникова. - М., 1967. - 210 с.
6. Debt, V. S. Health, Education and Wellfare, Public Health Service Atlanta: A Guide to the performance of standardized diagnostic CF method and adaption to micro test / V. S. Debt. - Revised Ed., 1974. - P. 312.
7. Меньшиков, В. В. Лабораторные методы исследования в клинике : справочник / В. В. Меньшиков, Л. Н. Делекторская, Р. П. Золотницкая ; под ред. В. В. Меньшикова. - М. : Медицина, 1987. - 368 с.
8. Авруцкий, Г. Я. Стандартизированная регистрация клинических данных о течении эндогенных психозов и пограничных состояний под влиянием психофармакотерапии : методические рекомендации / Г. Я. Авруцкий, С. Г. Зайцев ; под ред. А. А. Портнова. - М., 1975.
9. Mancini, G. Immunological quantitation of antigens by single radial immunodiffusion / G. Mancini, A. Carbonara, G. Heremans // Immunochemistry. - 1965. - V. 2. -№ 3. - Р. 235-254.
