CC BY
11
ОРЕНБУРГСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК, ТОМ I, № 1
ЛИТЕРАТУРА:
1. ГАОО. Ф. 6. Оп. 2. Д. 1043.
2. ГАОО. Ф. 6. Оп. 3. Д. 4933.
3. ГАОО. Ф. 6. Оп. 3. Д. 4933.
4. ГАОО. Ф. 6. Оп. 4. Д. 8714.
5. ГАОО. Ф. 6. Оп. 4. Д. 8949.
6. ГАОО. Ф. 6. Оп. 4. Д. 9231.
7. ГАОО. Ф. 6. Оп. 4. Д. 9430.
8. ГАОО. Ф. 6. Оп. 5. Д. 11082. Ч. 1.
9. ГАОО. Ф. 6. Оп. 6. Д. 11708.
10. Блинкин, С. А. В борьбе с инфекциями (О героических буднях учёных и врачей) / С. А. Блинкин. -М.: Медицина, 1971. - 168 с.
11. Васильев, К. Г. История эпидемий в России (Материалы и очерки) / К. Г. Васильев, А. Е. Сегал. -М.: Медгиз, 1960. - 398 с.
12. Вишняков, В. Е. Ликвидация натуральной оспы в Азии (эпидемиологический и иммунные аспекты) /В. Е. Вишняков. - Л.: Медицина, 1977. - 144 с.
13. Губерт, В. О. Оспа и оспопрививание. Исторический очерк до XIX столетия / В. О. Губерт. - Т. 1. -СПб.: Типография П. П. Сойкина, 1896. - 536 с.
14. Дегтярёв, И. В. Челябинская старина: сборник статей и материалов по истории Челябинска
раннего периода (30-е гг. XVIII - серединаXIX веков) / И. В. Дегтярёв. - Челябинск: Центр ист.-культ. наследия, 1996. - 120 с.
15. Оспа // Энциклопедический словарь / Ф. А. Брокгауз, И. А. Ефрон. - Т. 22. - СПб.: Типолитография И. А. Ефрона, 1897. - С. 304-309.
16. Оспа натуральная // Большая медицинская энциклопедия / Гл. ред. Б. В. Покровский. -Т. 17. - М.: Советская энциклопедия, 1988. - С.456-461., с. 456.
17. Оспопрививание // Энциклопедический словарь / Ф. А. Брокгауз, И. А. Ефрон. - Т. 22. - СПб.: Типо-Литография И. А. Ефрона, 1897. - С. 309-316.
18. Петров, Б. Д. Трёхсотлетие указа об оспе (Страницы истории эпидемиологии) / Б. Д. Петров // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1981. - № 6. - С. 117-118.
19. Тудор, В. Оспа. Холера/В. Тудор, И. Страти. -Бухарест: Военное изд-во, 1981. - 360 с.
20. Черемшанский, В. Описание Оренбургской губернии в хозяйственно-статистическом, этнографическом и промышленном отношениях. - Уфа: Учёный Комитет Министерства Госимущества, 1899. - 472 с.
МИКРОБИОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯ
УДК 616.28-002-078-037-092.4 В. А. ДОЛГОВ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ РАЗРАБОТКА КРИТЕРИЕВ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИНОТУБАРНОЙ МИГРАЦИИ БАКТЕРИЙ
ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия», г. Оренбург V. A. DoLGov
EXPERIMENTAL DEVELOPMENT OF CRITERIA FOR PROGNOSTICATION OF RHINOTUBAR BACTERIAL MIGRATION
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА:МОДЕЛЬ РИНОТУБАРНОЙ МИГРАЦИИ БАКТЕРИЙ, СРЕДНИЙ ОТИТ, МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ.
РЕЗЮМЕ
Разработана экспериментальная модель рино-тубарной миграции бактерий. Выявлены микробиологические факторы ринотубарной миграции бактерий, определяющие патогенез среднего отита. Установлено, что повышение количественной пред-
Долгов Вячеслав Александрович - д. м. н., профессор кафедры оториноларингологии (ууасЬе81ау - сЗо^оу @ mail.ru), тел. (3532) 74-50-63
ставленности одного из симбионтов в микрофлоре носа (более 45% от общего показателя микробной обсемененности) в сочетании с высоким уровнем его антилизоцимной активности (3 мкг/мл и выше) способствует ринотубарной миграции возбудителя и развитию эндогенной формы инфекции. Разработан и внедрен в клинику способ прогнозирования ринотубарной миграции патогена, позволяющий выявлять группу риска по заболеванию средним отитом среди больных острым ринофарингитом.
KEYWORDS: MODEL FOR RHINOTUBAR BACTERIAL MIGRATION, OTITIS MEDIA, MICROBIOLOGICAL INDEX, PROGNOSTICATION.
SUMMARY
Experimental model has been developed for rhinotu-bar bacterial migration. Microbiological factors have been revealed for rhinotubar bacterial migration, determining pathogenesis of otitis media. The increase of quantitative presentation of one of the symbionts in the nasal microflora (>45% from total microbial dissemination index) in combination with a high level of its anti-lysozime activity (3 mkg/ml and higher) was determined to contribute to rhinotubar bacterial migration of a causative agent and to the development of an endogenic form of infection. Mode for prognostication of rhinotubar migration of a pathogen, allowing to reveal a risk group for otitis media among patients with acute rhinopharingitis, has been developed and clinically introduced.
Распространение микроорганизмов из исходного биотопа организма хозяина в другие биотопы способствует развитию эндогенных форм инфекции, возникновению осложнений основного заболевания и генерализации инфекции [6]. Имеются работы, посвященные изучению распространения бактерий (транслокации) из микробиоценоза кишечника и определения роли данного явления в патогенезе хирургической инфекции [4, 8]. Практически не изучено распространение микроорганизмов из верхних дыхательных путей, хотя известно, что в патогенезе среднего отита тубарный путь по-ступления возбудителя из носа и носоглотки является реальным [3]. Усло-виями или факторами, провоцирующими миграцию бактерий из носа в барабанную полость, могут быть воспалительные процессы в полости носа и носоглотки [1, 9]. Механизмы ринотубарной миграции микроорганизмов не определены.
ЦЕЛь РАБОТы - разработать экспериментальную модель ринотубарной миграции бактерий и использовать ее для прогнозирования среднего отита у больных острым ринофарингитом.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
При разработке экспериментальной модели ринотубарной миграции (РТМ) бактерий на первом этапе проводилось изучение микрофлоры полости носа и барабанной полости у 22 взрослых кроликов породы шиншилла (вес 2-3 кг) без признаков «спонтанного среднего отита» (рис.). Бактериологическое исследование секрета слизистых оболочек проводилось классическим методом [2]. Видовую идентификацию бактерий проводили с помощью тест-систем фирмы LACHEMA (Чехия). Общий показатель микробной обсемененности (ОПМО) биотопа и показатель ми-
кробной обсемененности (ПМО) симбионтов определяли методом секторных посевов с последующим подсчетом числа колоний по секторам и расчетом ПМО в КОЕ/тампон по специальной таблице [4]. Факторы патогенности: антилизоцимную активность (АЛА), гемолитическую активность (ГА), лизоцимную активность (ЛА) изучали по известным методикам [6].
В качестве фактора, провоцирующего возможность ринотубарной миграции бактерий, был выбран экспериментальный стафилококковый гнойный средний отит (ЭСГСО). Поэтому на втором этапе вводили в барабанную полость вирулентный штамм Staphylococcus aureus, выделенный из гноя больного острым средним отитом. Штамм характеризовался набором факторов патогенно-сти: лизоцимной, гемолитической, лецитовител-лазной активностями, наличием плазмокоагула-зы, хлопьеобразующего фактора и относился к III фагогруппе, фаговару 84/95. Инфицированию подвергалось левое ухо (правое служило контролем): вводили 0,5 мл 5 млрд взвеси суточной агаровой культуры путем прокола барабанной перепонки. На третьем этапе исследования отоскопическими данными подтверждалось развитие ЭСГ-СО. На четвертом этапе с первых дней эСГСО проводили изучение микрофлоры полости носа и барабанной полости по описанным выше методикам.
На пятом этапе идентифицировали мигрирующие бактерии путем сравнения их биологических свойств и с помощью радиоизотопной метки штаммов одного вида, выделенных из носа и среднего уха. При выборе критериев РТМ бактерий изучали количественные показатели (доля ПМО мигранта в ОПМО носа) и факторы патогенности (ГА, ЛА, АЛА).
Результаты обрабатывали с использованием критерия значимости (t) корреляционного анализа в компьютерной программе SPSS 8,0 for Windows.
Результаты исследования. Слизистая оболочка барабанной полости среднего уха до инфицирования S.aureus была стерильной (табл. 1).
Микрофлора слизистой оболочки носа подопытных животных на всех сроках отита была представлена S.epidermidis, Corynebacterium spp., Pseudomonas pseudoalcaligenes, E. coli, Bacillus spp. В первые сутки ЭСГСО из барабанной полости кроликов высевался только штамм S.aureus, использованный для воспроизведения отита.
На второй день экспериментального среднего отита в гнойном экссудате барабанной полости, кроме штамма S.aureus, обнаружена культура Pseudomonas pseudoalcaligenes, ПМО которой был равен 4,5±0,02 lg КОЕ/тампон. На 3-4 день ЭСГСО
в барабанной полости дополнительно обнаружены с высоким ПМО штаммы Corynebacterium spp. (ПМО 5,0±0,02 lg КОЕ/тампон). На 5-6 день отита - S.epidermidis (ПМО 6,4±0,04 lg КОЕ/тампон) и Bacillus spp. (ПМО 4,9±0,02 lg КОЕ/тампон).
Через 6 месяцев течения отита наблюдали вытеснение из барабанной полости штамма s.aureus за счет проявления антагонизма мигрантов по отношению к первичному возбудителю ЭСГСО. Установлено, что 33,3% штаммов коагулазоотрицатель-ных стафилококков были бактериоциногенными против s.aureus, также подавляли рост s.aureus 25% штаммов неферментирующих грамотрицательных бактерий, 28,6% штаммов коринебактерий и 57,9% штаммов бацилл. Кроме того, мигрирующие штаммы в 13,3-20,0% случаев подавляли ЛА и АЛА штаммов S.aureus. Видовой состав микрофлоры гнойного экссудата барабанной полости был аналогичен видовому составу микрофлоры на слизистой оболочке носа, идентичность микроорганизмов, выделенных из двух биотопов, свидетельствовала о факте РТМ бактерий.
Сравнительная характеристика биологических свойств мигрирующих и немигрирующих микроорганизмов полости носа представлена в таблице № 2. Из данных таблицы видно, что мигрирующие штаммы отличались более высокими показателями микробной обсемененности биотопа и уровнем АЛА.
У мигрирующих штаммов доля ПМО в ОПМО была > 45% (в среднем 50,9%) и АЛА > 3 мгк/мл (в среднем 3,9 мкг/мл). У немигрирующих штаммов средняя доля ПМО/ОПМО равнялась 32,2%, а АЛА - 1,7 мкг/
мл. Полученные микробиологические критерии идентификации мигрирующих штаммов были использованы в клинико-лабораторной практике для выявления группы риска по заболеванию средним отитом среди больных острым ринофарингитом. К больным группы риска относили лиц, у которых со слизистой оболочки носа выделялись штаммы микроорганизмов с долей ПМО/ОПМО > 45% и АЛА > 3 мгк/мл (патент РФ на изобретение № 2286574).
Штаммы-мигранты, обладая высоким антагонистическим и персистентным потенциалом, закрепляются в барабанной полости. Они могут проявлять себя по-разному в зависимости от микроэкологической ситуации: либо как возбудители эндогенной инфекции или как факторы колонизационной резистентности биотопа.
выводы
1. Создана экспериментальная модель риноту-барной миграции бактерий.
2. Установлено, что у мигрирующих штаммов микроорганизмов доля ПМО в ОПМО полости носа составляет более 45%, а уровень АЛА выше 3,0 мкг/мл.
3. Мигрирующие штаммы обладают бактериоци-ногенными свойствами против З.аигеш, который является первичным возбудителем среднего отита, подавляют его рост и вытесняют из барабанной полости.
4. В группу риска по заболеванию средним отитом относятся больные с острым ринофарингитом, у которых со слизистой оболочки полости носа высеваются штаммы микроорганизмов с ПМО в ОПМО биотопа более 45% и уровнем АЛА выше 3,0 мкг/мл.
I ЭТАП^
II ЭТАП ^
III ЭТАП ^
IV ЭТАП ^
V ЭТАП^
Рис. Экспериментальная модель ринотубарной миграции (РТМ) бактерий.
Таблица 1
Сравнительная характеристика видового состава микрофлоры барабанной полости и слизистой оболочки носа в динамике ЭСГСО.
Изучаемые объекты До воспроизве- Сроки отита
дения отита 1 день 2 день 3-4 день 5-6 день 2G день 6 месяцев
Микрофлора барабанной полости - S.aureus S.aureus Pseudomonas pseudoalca-ligenes S.aureus Pseudomonas pseudoalca- ligenes, Corynebac-terium spp. S.aureus Pseudomonas pseudoalca- ligenes, Corynebac-terium spp. S.epider-midis S.aureus Pseudomonas pseudoalca- ligenes, Corynebac-terium spp. S.epider-midis, E.coli, Bacillus spp. Pseudomonas pseudoalca-ligenes, S.epider-midis, E.coli, Bacillus spp.
Микрофлора слизистой оболочки носа S.epider-midis, Corynebac-terium spp., Pseudomonas pseudoalcalig- enes, E.coli, Bacillus S.epider-midis, Corynebac-terium spp., Pseudomonas pseudoalca-ligenes, E.coli, Bacillus S.epidermi-dis, Corynebac-terium spp., Pseudomonas pseudoalca-ligenes, E.coli, Bacillus S.epider-midis, Corynebac-terium spp., Pseudomonas pseudoalca-ligenes, E.coli, Bacillus S.epidermi-dis, Corynebac-terium spp., Pseudomonas pseudoalca-ligenes, E.coli, Bacillus S.epider-midis, Corynebac-terium spp., Pseudomonas pseudoalca-ligenes, E.coli, Bacillus S.epider-midis, Corynebac-terium spp., Pseudomonas pseudoalca-ligenes, E.coli, Bacillus
sPP. sPP. sPP. sPP. sPP. sPP. sPP.
Таблица 2
Средние количественные (ПМО/ОПМО) и качественные (АЛА, ГА, ЛА) показатели мигрирующих и немигрирующих микроорганизмов при ЭОСГО
Изучаемые показатели Мигрирующие штаммы n = 9 немигрирующие штаммы n = 9 р
ПМО/ОПМО > 45% 9 G <0,05
< 45% G 9 <0,05
Средний показатель ПМО симбионтов в ОПМО полости носа в % (М±т) 50,9±4,4 32,2±3,5 <0,05
АЛА микроорганизмов
>3,0 мкг/мл 9 G <0,05
<3,0 мкг/мл G 9 <0,05
Средний уровень АЛА микроорганизмов в мкг/мл (М±т) 3,9±0,5 1,7±0,6 <0,05
ГА микроорганизмов в мм зоны лизиса 7,9±1,2 7,4±1,9 >0,05
ЛА микроорганизмов в мм зоны лизиса 9,4±1,8 8,9±21 >0,05
ЛИТЕРАТУРА:
1. Енин, И. П. Клинико-бактериологические параллели при острых воспалительных заболеваниях верхних дыхательных путей и среднего уха / И. П. Енин [и др.] // Российская ринология. - 2005. -№ 2. - С. 22.
2. Лабинская, А. С. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований / А. С. Лабинская, Л. П. Блинкова, Е. Л. Чащина. - М.: Медицина, 2005.
3. Лучихин, Л. А. Острый средний отит / Л. А. Лучихин //Лечащий врач. - 2003. - № 8. - С. 35-41.
4. Митрохин, С. Д. Инфекция и антимикробная химиотерапия / С. Д. Митрохин. - 2003. - Т. 4. - С. 124-130.
5. Никитенко, В. И. Роль транслокации бактерий в патогенезе хирургической инфекции / В. И. Никитенко [и др.] // Хирургия. - 2001. - № 2. - С. 63-66.
6. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / под ред. акад. РАМН О. В. Бухарина. - М.: Медицина; УрО РАН, 2002.
7. Сергеев, М. М. Отогенный и риносинусо-генный сепсис у детей / М. М. Сергеев, А. Н. Зинкин, А. А. Горностаев // Вестн. оториноларингологии. -2001. - № 6. - С. 49-52.
8. Шевченко, Ю. Л. Роль современных факторов во взаимодействии человека и микроорганизмов. Значения национального здравоохранения в профилактике и лечении инфекционных болезней / Ю. Л. Шевченко // Журн. микробиол. - 2000. -№ 6. - С. 3-6.
9. Berg, R. D. Bacterial translocation from the gastrointestinal tract / R. D. Berg // Adv. Exp. Med. Biol. -1999. - Vol. 473. - Р. 11-30.
10. Dubreuil, C. Inflammation and acute otitis media / С. Du-breuil // Presse Med. - 2001. - V. 39. - Р. 19-25.
