CC BY
112
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2013
J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. - 2001. - Vol. 280. - P. R1483-R1487.
22. Smith R.G., Van der Ploeg L.H.T., Howard A.D. et al. Peptido-mimetic regulation of growth hormone secretion // Endocr. Rev. - 1997. - Vol. 18. - P. 621-645.
23. Taub D.D. Novel connections between the neuroendocrine and immune systems: the ghrelin immunoregulatory network // Vi-tam. and Horm. - 2008. - Vol. 77. - P. 325-346.
24. Tena-Sempere M. Roles of ghrelin and leptin in the control of re-
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013
УДК 615.322.03:616-092:612.017.1]-008.64].076.9
ГА. Шахмурова1, А.А. Батырбеков2, Ф.Р Эгамова3, З.А. Хушбактова3, В.Н. Сыров3
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ИММУНОТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ СУММАРНЫХ ЭКДИСТЕРОИДСОДЕРЖАЩИХ пРЕпАРАТОв Из SILENE BRAHuIcA И AjuGA
turkestanica
1Ташкентский государственный педагогический университет им. Низами (100064, Республика Узбекистан, г Ташкент, ул. Юсуфа Хос Ходжиба, д. 103); 2Институт иммунологии АН РУз (100060, Республика Узбекистан, г Ташкент, ул. гуломова, д. 74); 3Институт химии растительных веществ им. акад. С.Ю. Юнусова АН РУз (100170, Республика Узбекистан, г. Ташкент, пр-т Мирзо Улугбека, д. 77)
productive function //Neuroendocrinology. - 2007. - Vol. 86. - P. 229-241.
25. Tumer C., Bilgin H.M., Obay B.D. et al. Effect of ghrelin administration on phagocytic activity in acute cold-restraint stress exposed rats // Regul. Pept. - 2007. - Vol. 2-3. - P. 113-117.
26. Waseem T., Duxbury M., Ito H. et al. Exogenous ghrelin modulates release of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines in LPS-stimulated macrophages through distinct signaling pathways // Surgery. - 2008. — Vol. 143. - Р. 334-342.
Поступила 10.03.12
Суммарные экдистероидсодержащие препараты из Silene brahuica и Ajuga turkestanica при введении мышам одновременно с иммунизацией их эритроцитами барана стимулируют процесс первичного антителообразования, существенно увеличивая в селезенке количество антителообразующих клеток. Под действием исследуемых препаратов также достоверно возрастают клеточность центральных и периферических органов иммунитета, содержание эритроцитов и лейкоцитов в крови. Достаточно четкое иммуностимулирующее действие обоих экдистероидсодер-жащих препаратов проявляется и в модельных опытах, воспроизводящих состояние вторичных иммунодефицитов (острый токсический гепатит, облучение в сублетальной дозе). По своей активности суммарные экдистероидсодержащие препараты из Silene brahuica и Ajuga turkestanica во всех проведенных экспериментах проявили более выраженный эффект, чем взятый для сравнения препарат иммунал.
Ключевые слова: экдистероидсодержащие препараты, иммуностимулирующее действие 5. G.A. Shakhmurova, A.A. Batyrbekov, Egamova F.R., Khushbaktova Z.A., Syrov V.N.
experimental evaluation of immunotropic actions of total ecdysteroid containing
DRUGS from SILENE BRAHUICA AND AJUGA TURKESTANICA
Total total ecdysteroid containing drugs from Silene brahuica and Ajuga turkestanica with the mice at the same time with immunization their erythrocytes of sheep stimulate the process of primary formation, a substantial increase in the spleen number of antibody forming
cells. Under the influence of investigational products also reliably increases клеточность Central and peripheral organs immunity, the content of erythrocytes and leukocytes in the blood. A fairly clear immunostimulating effect of both ecdysteroid containing drugs is seen in the model experiments that simulate the state of secondary immunodeficiency (acute toxic hepatitis, irradiation in subletal dose). In its activity the total ecdysteroid containing drugs from Silene brahuica and Ajuga turkestanica in all the experiments showed more pronounced effect than taken for comparison the drug immunal.
Key words: ecdysteroid containing drugs, the immunostimulating effect
Поиск и разработка новых эффективных лекарственных средств для использования при иммунодефицитных состояниях - одна из важных задач сегодняшнего дня. Наряду с уже хорошо зарекомендовавшими себя в этом плане синтетическими препаратами (левамизол, полиоксидоний), а также препаратами пептидной природы, получаемыми из вилочковой железы крупного рогатого скота (Т-активин, ти-
Шахмурова Гюльнара Абдуллаевна - доц. каф. зоологии, анатомии и физиологии, e-mail: [email protected]
моптин, вилозен), из культуры клеток костного мозга животных (миелопид), и другими [5, 12], стали появляться работы, свидетельствующие о достаточно высокой иммуностимулирующей активности экстрактов некоторых растений (элеутерококк, женьшень, лимонник, аралия) [3, 14] и отдельных выделенных из них веществ различных химических классов: флавоноиды, пектины и др. [7, 10].
В настоящей работе рассмотрено в соответствующем аспекте действие суммарных экстрактивных препаратов из растений, произрастающих в Узбекистане - Silene brahuica Boiss и Ajuga turkestanica (Rgl.) Brig, содержащих в основном
- 24 -
РЕГУЛЯЦИЯ ИММУНИТЕТА
реакция иммунной системы мышей на иммунизацию их ЭБ и введение силекбина и аюстана н- 3 S II о Таблица 1
Условия эксперимента Количество ядросодержащих клеток в селезенке, -106 Количество АОК Количество клеток тимуса, 106 Количество клеток костного мозга, -106 Количество клеток брыжеечных лимфатических узлов, -106
на селезенку на 1 млн спленоцитов
Интактные мыши 184 ± 14,3 5100 ± 478,8 28,2 ± 3,4 28,4 ± 2,8 12,6 ± 1,1 18,2 ± 1,5
Силекбин 248 ± 23,6* 15 342 ± 894,2* 61,8 ± 7,8* 48,2 ± 5,2* 22,7 ± 1,9* 32,7 ± 4,2*
Аюстан 262 ± 21,8* 17 196 ± 1102,3* 65,6 ± 6,9* 51,4 ± 4,9* 24,6 ± 2,5* 34,5 ± 3,6*
Иммунал 234 ± 18,4* 11 958 ± 957,6* 51,1 ± 4,1* 39,7 ± 4,1* 18,9 ± 1,4* 29,4 ± 1,9*
Примечание. Здесь и в табл. 2, 3: * - достоверно к соответствующим показателям у интактных животных (р < 0,05).
Таблица 2
Реакция иммунной системы мышей с развившимся ОТГ на иммунизацию их ЭБ и введение силекбина и аюстана (M ± m; n = 10)
Условия экспери- Количество ядросо- Количество АОК Количество Количество Количество клеток брыжеечных лимфатических узлов, -106
мента держащих клеток в селезенке, -106 на селезенку на 1 млн спленоцитов клеток тимуса, -106 клеток костного мозга, -106
Интактные мыши 185,8 ± 12,3 5401,1 ± 328,4 29,3 ± 3,6 30,0 ±2,5 9,4 ± 0,6 19,0 ± 1,8
Контроль (гепатит) 116,2 ± 16,7* 740,0 ± 176,1* 6,36 ± 0,9* 16,6 ± 1,6* 5,4 ± 0,4* 11,2 ± 1,0*
Гепатит + силек-бин 218,1 ± 14,5** 3788,3 ± 265,6*,** 17,36 ± 1,3*,** 22,4 ± 1,9*,** 7,1 ± 0,5*,** 14,8 ± 1,2**
Гепатит + аюстан 229,2 ± 19,9** 4203 ± 319,4*,** 18,4 ± 1,4*,** 28,2 ± 2,2** 8,2 ± 0,8** 17,6 ± 1,8**
Гепатит + имму-нал 210,0 ± 11,4 3620,5 ± 207,8*,** 17,24 ± 1,4*,** 21,6 ± 1,7*,** 7,2 ± 0,6*,** 15,0 ± 1,3**
Примечание . Здесь и таблице 3: ** — достоверно к соответствующим показателям в контроле (р < 0,05).
Таблица 3
реакция иммунной системы мышей, подвергнутых облучению, на иммунизацию их ЭБ и введение силекбина и аюстана
Условия эксперимента Количество ядросодержащих клеток в селезенке, -106 Количество АОК Количество клеток тимуса, -106 Количество клеток костного мозга Количество клеток брыжеечных лимфатических узлов, -106
на селезенку на 1 млн спленоцитов
Интактные мыши 172,9 ± 18,5 4350,0 ± 354,5 25,3 ± 1,8 24,2 ± 1,5 10,8 ± 1,2 15,7 ± 1,2
Контроль (облучение) 28,4 ± 3,7* 151,2 ± 17,3* 5,4 ± 0,4* 8,2 ± 0,6* 5,2 ± 0,6* 4,8 ± 0,6*
Облучение + силекбин 92,6 ± 9,8*,** 581,2 ± 31,2*,** 6,5 ± 0,8* 15,2 ± 0,8*,** 7,4 ± 0,4*,** 7,5 ± 0,6*,**
Облучение + аюстан 96,8 ± 10,1*,** 680,8 ± 40,2*,** 7,03 ± 0,7*,** 18,4 ± 1,2*,** 8,8 ± 0,6*,** 8,2 ± 0,7*,**
Облучение + иммунал 82,4 ± 8,1*,** 572,6 ± 36,5*,** 6,5 ± 0,5* 14,8 ± 1,3*,** 6,8 ± 0,7* 7,2 ± 0,6*,**
соединения, относящиеся к фитоэкдистероидам (соединения, идентичные или близкие по структуре гормонам линьки и метаморфоза насекомых). В ранее проведенных экспериментах показана способность фитоэкдистероидов оказывать общеукрепляющее действие на организм высших животных, адаптировать их к стрессирующим факторам внешней среды за счет оптимизирующего влияния на белковый и другие виды обмена веществ [9]. Все это позволяло предполагать наличие у них также иммуноактивных свойств.
Материалы и методы. В работе использовали суммарные экдистероидсодержащие препараты, выделенные из Si-lene brahuica Boiss, собранной в долине реки Ангрен, ущелье Ер-Ташсай Ташкентской области Узбекистана, и содержащей экдистерон, силенеозиды А, В, С, Д, Е и др. [8] (условное название препарата силекбин) и Ajuga turkestanica, собранной в окрестностях селения Байсун Сурхандарьинской области Узбекистана и содержащей экдистерон, туркестерон, циасте-рон и др. [13] (условное название препарата аюстан). Эксперименты проводили на белых беспородных мышах массой 20—22 г — интактных и с развившимися вторичными иммунодефицитными состояниями. Острый токсический гепатит (ОТГ) вызывали подкожным введением CCl4 в виде 20% масляного раствора по 0,2 мл в течение 3 дней [6]. Тотальное
облучение осуществляли в сублетальной дозе 5 Гр. В первом случае иммунизацию животных тимусзависимым антигеном эритроцитами барана (ЭБ) (внутрибрюшинно в дозе 2-107/ мышь) и введение исследуемых препаратов (перорально 5 мг/ кг) осуществляли в последний день введения избранного токсиканта, во втором — ЭБ и препараты вводили аналогичным образом, но по прошествии 5 дней после облучения. В обоих случаях животных на 5-е сутки после введения препаратов и антигенного стимула брали в опыт. Для суждения о влиянии исследуемых препаратов на первичный иммунный ответ определяли количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке [15]. Кроме того, подсчитывали общее количество клеток в центральных (тимус, костный мозг — использовали бедренную кость) и периферических (брыжеечные лимфатические узлы, селезенка) органах иммунитета, используя камеру Горяева. Дополнительно оценивали влияние исследуемых препаратов на некоторые гематологические показатели, для чего в периферической крови подсчитывали количество эритроцитов и лейкоцитов [2]. Референс-препаратом в проведенных экспериментах служили иммунал (высушенный сок из свежесобранной травы цветущей эхинацеи пурпурной — Echinacea purpurea L., содержащей флавоноиды, производные кофейной и цикориевой кислот, сапонины, полисахариды,
- 25 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2013
Влияние силекбина, аюстана и иммунала на содержание в крови эритроцитов (светлые столбики) и лейкоцитов (темные столбики) у мышей, иммунизированных ЭБ, в норме и при развившемся вторичном иммунодефиците в условиях ОТГ и облучения (в % к соответствующим показателям у интактных животных).
1 - силекбин; 2 - аюстан; 3 - иммунал; 4 - гепатит; 5 - гепатит + си-лекбин; 6 - гепатит + аюстан; 7 - гепатит + иммунал; 8 - облучение; 9 - облучение + силекбин; 10 - облучение + аюстан; 11 - облучение + иммунал.
ряд фитостеролов и др.) [1] фирмы-производителя «Lek d. d.» (Словения), вводимые аналогичным способом из расчета 50 мг/кг Полученные данные обрабатывали статистически с использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение. Как видно из табл. 1, введение силекбина и аюстана интактным мышам заметно повышает процесс первичного антителообразования, увеличивая в селезенке количество АОК, секретирующих IgM в ответ на иммунизацию ЭБ. Это четко прослеживается и при расчете количества АОК на всю селезенку и на 1 млн спле-ноцитов, уровень которых также имел явную тенденцию к повышению. В единичных работах [4] на примере некоторых индивидуальных фитоэкдистероидов также показано, что помимо активации гуморального ответа они (в значительно больших дозах) способствуют незначительной активации и клеточного звена иммунного ответа, свидетельствующего о повышении функциональной активности Т-лимфоцитов. Отмечено и небольшое увеличение количества фагоцитирующих перитонеальных макрофагов [4]. Из других выявленных фактов первичной оценки иммунобиологических свойств си-лекбина и аюстана следует отметить повышение под их влиянием обшей клеточности центральных и периферических органов иммунитета, а также заметную стимуляцию эритро- и лейкопоэза (см. табл. 1, рисунок). Во всех проведенных экспериментах аюстан выглядел более активным препаратом, чем силекбин. Это может быть связано с наличием в его составе туркестерона - наиболее активного среди фитоэкдисте-роидов стимулятора белково-анаболических процессов в организме высших животных [11], что в данном случае может иметь решающее значение, если рассматривать образование антител плазматическими клетками как частный случай проявления указанными соединениями активизирующего влияния на синтез белковых макромолекул в органах и тканях.
Достаточно четко иммуностимулирующее действие исследуемых суммарных экдистероидсодержащих препаратов проявлялось при воспроизведенных вторичных иммунодефицитных состояниях, при которых выявляют глубокие нарушения в иммунологической реактивности организма. Так, при ОТГ и облучении количество АОК в селезенке уменьшается на 86,3 и 96,5%, количество ядросодержащих клеток (ЯСК) селезенки понижается на 37,5 и 83,6% (при пересчете количества АОК на 1 млн спленоцитов уменьшение составляет 78,3 и 78,7). Крайне глубокие изменения отмечают и в общей клеточности центральных и периферических органов
иммунитета, а также со стороны эритро- и лейкопоэза. Именно в этих условиях силекбин и аюстан (в большей степени) проявляли отчетливую тенденцию к восстановлению исследуемых показателей (табл. 2, 3, см. рисунок).
Таким образом, суммарные экдистероидсодержащие препараты силекбин и аюстан однозначно являются иммуноактивными средствами. При абсолютно однонаправленном действии в отношении иммунно- и гемокоррекции силекбина и аюстана с референс-препаратом иммуналом обращало внимание явное преимущество обоих экдистероидсодержащих препаратов особенно при моделировании иммунодефицитных состояний. Все это открывает перспективу использования препаратов, содержащих фитоэкдистероиды, в качестве новых иммуномодулирующих средств.
ЛИТЕРАТУРА
1. Демин М.С., Осипов В.И., Демина Н.Б. и др. Состав метаболитов липофильной фракции плодов эхинацеи пурпурной // Вопр. биол., мед. и фармац. химии. - 2010. - № 5. -С. 52-56.
2. Камышников В.С. (ред.). Методы клинических лабораторных исследований. - М., 2011.
3. Корсун В.Ф., Корсун Е.В., Захаров Ю.А. Лекарственные растения в педиатрии. - М., 2003. - С. 19-20.
4. Кузьмицкий Б.Б., Голубева М.Б., Конопля Н.А. и др. Новые возможности изыскании иммуномодуляторов среди соединений стероидной структуры // Фармакол. и токсикол. - 1990. - Т. 53, № 3. - С. 20-22.
5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М., 2008 -С. 735-743.
6. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств / Петров Р.В. и др. - М., 1984.
7. Оводов Ю.С., Головненко В.В., Гюнтер Е.А., Попов С.В. Пектиновые вещества растений Европейского Севера России. -Екатеринбург, 2009.
8. Саатов З. Фитоэкдистероиды растений рода Silene: Авто-реф. дис. ... канд. хим. наук. - Ташкент, 1982.
9. Сыров В.Н. Фитоэкдистероиды: биологические эффекты в организме высших животных в перспективе использования в медицине // Экспер. и клин. фармакол. - 1994. - № 5. -С. 61-66.
10. СыровВ.Н., БатырбековА.А., КилиневаГХ. Иммуномодулирующие свойства флавоноидов из флоры Среднеазиатского региона. - Ташкент, 2011.
11. СыровВ.Н., Саатов З., Сагдуллаев Ш.Ш., Маматханов А.У. Зависимость структура-анаболическое действие фитоэкди-стероидов, выделенных из растений центрально-азиатского региона // Хим.-фарм. журн. - 2001. - № 12. - С. 23-27.
12. Тепляков А.Т., Болотская Л.А., Вдовина Т.В. и др. Клинические и иммуномодулирующие влияния полиоксидония для коррекции вторичного иммунодефицита у больных ишемической болезнью сердца, ассоциированной с сахарным диабетом типа 2 // Иммунология. - 2008. - Т. 29, № 1. -С. 44-50.
13. Усманов Б.З., Горовиц М.Б., Абубакиров Н.К. Фитоэкдизоны Ajuga turkestanica. III. Строение туркестерона // Химия природ. соедин. - 1975. - № 4. - С. 466-470.
14. Чубарев В.Н., Рубцова Е.Р., Филатова И.В. и др. Иммуно-тропное влияние настойки из биомассы культуры ткани клеток женьшеня и экстракта элеутерококка у мышей // Фарма-кол. и токсикол. - 1989. - Т. 52, № 2. - С. 55-59.
15. Jerne N.K., Nordin A.A. Plaque-formation in agar by single antibody producing cells // Science. - 1963. - Vol. 105. - P. 405407.
Поступила 07.04.12
- 26 -
