Экспериментальная модель гастроэзофагеального рефлюкса с запором Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

о

00

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ ГАСТРОЭЗОФАГЕАЛЬНОГО РЕФЛЮКСА С ЗАПОРОМ

Лычкова А. Э., Янова О. Б., Машарова А. А.

Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии, Москва

РЕЗЮМЕ

Моделировали ГЭР введением донатора оксида азота метиленового синего в префундальный отдел желудка и запор — наложением нестягивающей лигатуры на терминальный отдел сигмовидной кишки. Показано увеличение ЭМА пищевода и снижение ЭМА сигмовидной кишки. Развитие запора сопровождается активацией слизеобразующей функции бокаловидных клеток.

Ключевые слова: гастроэзофагеальный рефлюкс, запор, ЭММА.

SUMMARY

GER was simulated with help of insertion of nitric oxide donator of methylene blue in prefundalny part of stomach. Constipation was simulated with help of overlaid of not brace ligatures on the terminal part of sigma. We found that esophagus EMA was increasing and sigma's EMA was reducing. Development of constipation is accompanied by activation of mucigenous functions of scyphiforms cells.

Keywords: gastroesophageal reflux, constipation, EMA

Известны основные патогенетические механизмы развития ГЭРБ: нарушение моторной функции пищевода, снижение тонуса нижнего пищеводного сфинктера, замедление эвакуации содержимого желудка, снижение резистентности слизистой оболочки пищевода, формирование грыжи пищеводного отверстия диафрагмы, побочное действие ряда лекарственных препаратов (холинолитиков, седативных и снотворных средств, в-адренобло-каторов, нитратов и т. д.) [2]. К провоцирующим факторам развития ГЭРБ относится повышение интраабдоминального давления (запоры, неадекватная физическая нагрузка, длительное наклонное положение туловища и т. д.). По данным В. М. Махова, Л. А. Берсеневой (2005), у пациентов с запорами достоверно чаще по сравнению с контролем определяется гиперсекреция соляной кислоты и именно у таких больных чаще встречается дуоденогаст-ральный рефлюкс.

Медикаментозное лечение нарушений моторной деятельности верхних и нижних отделов пищеварительного тракта при ГЭРБ и запоре представляет определенную сложность, что определило необходимость исследования этих состояний на модели.

00

о

о

СЧ

Цель настоящей работы — выявление особенностей электромоторной активности (ЭМА) пищевода, фундального отдела желудка и терминального отдела сигмовидной кишки при моделировании ГЭР с запором.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 12 крысах породы Вистар весом 220-250 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (40 мг/кг): 5 контрольных, в префундальный отдел желудка которых вводили физиологический раствор в объеме 0,1 -0,2 мл, и 7 опытных, которым моделировали ГЭРБ и запор. Проводили срединную лапаротомию, выделяли префундальный отдел желудка, нижнюю треть пищевода и терминальный отдел сигмовидной кишки и с помощью серебряных электродов осуществляли регистрацию электромоторной активности исследуемых органов. В префундальный отдел желудка опытной группы вводили метиленовый синий в объеме 0,1-0,2 мл одно- или двукратно и наблюдали появление красителя в нижней трети пищевода. На терминальный отдел сигмовидной кишки накладывали нестягивающую лигатуру. Спустя две

Л

недели в условиях наркоза проводили релапарото-мию и с помощью регистрирующих электродов изучали ЭМА исследуемых органов. В префундальный отдел желудка вновь вводили метиленовый синий и наблюдали попадание красителя в пищевод. Ввиду значительных макроскопических морфологических изменений сигмовидной кишки спустя две недели после наложения нестягивающей лигатуры было проведено микроскопическое исследование биоп-тата ткани сигмовидной кишки.

Ткань сигмовидной кишки фиксировали в 4%-ном растворе параформа на буфере Хенкса в течение 2 часов с последующей постфиксацией 1%-ном раствором четырехокиси осмия 2 часа). После обезвоживания ткань заключали в смесь эпона и аралдита. Состояние ткани оценивали на одномикронных срезах, окрашенных метиленовым синим, при оптическом увеличении микроскопа х240.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В контрольной серии экспериментов, проведенных на 5 животных, фоновая ЭМА пищевода составляла: частота — 7,7 ± 0,5 в мин, амплитуда — 0,26 ± 0,03 мВ. Фоновая ЭМА префундального отдела желудка составляла: частота — 5,5 ± 0,5 в мин, амплитуда — 0,15 ± 0,01 мВ. Фоновая ЭМА сигмовидной кишки составляла: частота — 5,5 ± 0,7 в мин, амплитуда — 0,1 ± 0,02 мВ.

Частота медленных волн ЭМА пищевода при введении физиологического раствора в префундальный отдел желудка практически не изменялась, составляя 7,6 ± 0,7 в мин (р > 0,1), амплитуда — 0,28 ± 0,04 мВ. Частота медленных волн ЭМА префундального отдела желудка при введении физиологического раствора составляла 5,6 ± 0,7 в мин (р > 0,1), амплитуда — 0,15 ± 0,03 мВ.

Частота медленных волн ЭМА сигмовидной кишки при введении физиологического раствора в префундальный отдел желудка не изменялась, составляя 5,5 ± 0,7 в мин (р > 0,1), амплитуда — 0,1 ± 0,03 мВ. То есть введение физиологического раствора в префундальный отдел желудка не изменяет ЭМА желудка, пищевода и сигмовидной кишки.

Фоновая ЭМА пищевода опытной группы животных до введения метиленового синего составляла: частота — 7,3 ± 0,9 в мин, амплитуда — 0,23 ± 0,03 мВ; частота фоновой ЭМА префундального отдела желудка составляла 4,8 ± 0,6 в мин, амплитуда — 0,30 ± 0,05 мВ; частота фоновой ЭМА сигмовидной кишки составляла 3,5 ± 0,5 в мин, амплитуда — 0,2 ± 0,04 мВ.

Электромоторная активность пищевода после введения метиленового синего в префундальный отдел желудка на фоне моделирования запора была повышена: частота — до 10,1 ± 1,2 в мин (38,3%, р < 0,05), амплитуда — до 0,29 ± 0,03 мВ (26,0%, р < 0,05). ЭМА

префундального отдела желудка после введения метиленового синего соответственно составляла: частота — 7,6 ± 0,7 в мин (58,3%, р < 0,05), амплитуда — 0,47 ± 0,05 мВ (56,6%, р < 0,05). Усиление ЭМА префундального отдела желудка опережало усиление ЭМА пищевода на 3-10 сек, что свидетельствует о ретроградном распространении волн ЭМА при развитии ГЭРБ. ЭМА сигмовидной кишки при моделировании запора составляла: частота — 3,8 ± 0,4 в мин (30,9%, р < 0,05); амплитуда — 0,2 ± 0,03 мВ (р > 0,1), то есть моторная активность сигмовидной кишки при моделировании запора снижалась на 31%.

Макроскопически терминальный отдел толстой кишки выполнен плотным содержимым, увеличен в объеме в 3-4 раза. Желудок в большинстве случаев не заполнен.

Таким образом, наложение нестягивающей лигатуры сопровождается снижением ЭМА сигмовидной кишки и приводит к развитию запора в течение двух недель. Введение донатора оксида азота метиленового синего приводит к расслаблению нижнего пищеводного сфинктера и возникновению антиперистальтической медленноволновой активности пищевода и префундального отдела желудка как у интактных животных, так и у животных с моделью запора.

Микроскопически просветы крипт свободны, местами встречаются энтероциты с окрашенной цитоплазмой и ядром, расположенным в области базальной части клетки. Ядра обычного строения. Слизистые (бокаловидные клетки) окрашены интенсивно. Венозные сосуды, в том числе посткапилляры, расширены, содержат форменные элементы крови. Капилляры недилатированы, некоторые содержат эритроциты. Лимфатические сосуды несколько расширены, содержат лимфоциты.

В просвете отдельных крипт содержится слегка окрашенное содержимое. Бокаловидных клеток относительно много. В большинстве слизесодержащих клеток четко видна глобулярная структура слизи. Глобулы определяются по более интенсивной периферической окраске. В некоторых клетках четко видна более светлая окраска гранул, расположенных в апикальной части клетки. В процессе выделения секрета глобулы утрачивают способность окрашиваться толуидиновым синим. На определенных этапах содержимое бокаловидных клеток сохраняет нечеткую глобулярную структуру, которая постепенно исчезает. Иногда рядом с клетками, имеющими четкую глобулярную структуру, расположены клетки, содержимое которых плотное, гомогенное.

Межклеточный матрикс неравномерно уплотнен и наряду с рыхлой структурой содержит неориентированные коллагеновые волокна, однако

О

экспериментальная гастроэнтерология

experimental gastroenterology

Я 2008

(N

00

встречаются участки со значительно более плотной соединительной тканью, содержащей полисахариды. Волокнистые структуры расположены между криптами, образуя тонковолокнистую сеточку. В просвете отдельных крипт содержится слизь с плотными мелкими гранулами.

Полученная микроскопическая картина состояния слизистой толстой кишки несколько отличается от описанной в работе [3], в которой запор моделировали с помощью известного ан-тидиарейного средства — лоперамида. Было показано, что запор существенно уменьшает толщину защитного слизистого слоя в толстой кишке. Крипты эпителиальных клеток содержали меньше слизи, чем в контроле. То есть медикаментозно индуцированный запор способствует уменьшению слизеобразования эпителиальными клетками крипт. В предложенной модели запора, наоборот, наблюдается гиперпродукция слизи бокаловид-

ными клетками, что точнее моделирует состояние толстой кишки в клинике.

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Таким образом, введение донатора оксида азота метиленового синего в префундальный отдел желудка приводит к активации ретроградной медленноволновой активности желудка с последующей ретроградной активацией ЭМА пищевода. Наложение нестягивающей лигатуры приводит к развитию запора, что сопровождается уменьшением ЭМА сигмовидной кишки. Развитие запора сопровождается активацией слизеобразующей функции бокаловидных клеток, что может способствовать устранению запора при снижении электромоторной активности гладких мышц терминального отдела толстой кишки.

ЛИТЕРАТУРА

1. Махов, В. М. Системные факторы при хроническом запоре/В. М. Махов, Л. А. Береснева//Лечащий врач. — 2005. — Т. 2. — С. 12-14.

2. Шульпекова, Ю. О. Патогенез и лечение запоров/Ю. О. Шульпекова, В. Т. Ивашкин//Рос. мед. журн. — 2004. — Vol. 6, № 1. — Р. 49-52.

3. Shimotoyodome, A. Decreased colonic mucus in rats with loperamide — induced constipation/A. Shimotoyodome, S. Meguro,

T. Hase et al.//Comp. Biochem. Physiol. — 2000. — Vol. 126, № 2. — P. 203 - 212.