CC BY
44
При цитохимическом исследовании не зарегистрировано изменения активности миелоперокси-дазы в ПМЯЛ (рис. 2а). Подавление неоксидант-ных механизмов фунгицидности нейтрофилов коррелировало с уменьшением уровня катионных белков в ПМЯЛ (см. рис. 1, 2а).
К 14-м суткам лейкопения сменилась лейкоцитозом (до 123,07%, р=0,0119) за счёт равномерного увеличения числа нейтрофилов и лимфоцитов. Это сопровождалось, однако, дальнейшим падением их функциональной активности. Так, происходило снижение фунгицидности в условиях как функционирования, так и блокады кислородозависимых механизмов цитолиза (см. рис. 1), что цитохимически подтверждалось снижением активности миелопероксидазы и уровня катионных белков в ПМЯЛ (рис. 2б). Это сочеталось со снижением поглотительной способности нейтрофильных грану-лоцитов.
ВЫВОДЫ
1. Полученные данные свидетельствуют о том, что подострая интоксикация гербицидом, содержащим аминную соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты, приводит к глубоким нарушениям функционирования нейтрофилов, которым принадлежит ведущая роль в механизмах неспецифической резистентности: снижается активность пероксида-зозависимых и пероксидазонезависимых оксидант-ных факторов микробицидности, кислородонезависимых механизмов цитолиза, поглотительная способность клеток.
2. Указанные нарушения не устранялись к 14-м суткам наблюдения, что свидетельствует о необходимости дальнейшего изучения иммуноповреждающего действия данного гербицида с целью изыскания возможных путей фармакологической коррекции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Волчегорский И.А., Долгушин И.И., Колесников ОЛ. и др. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма. — Челябинск:
УДК 612.084: 613.2: 615.9: 615.099.08: 616.36-002.4-003.826
Изд-во Челябинского государственного педагогического ун-та, 2000. — 167 с.
2. Гареев Е.М. Основы математико-статистической обработки медико-биологической информации. — Уфа: Башгосмедуниверситет Роздрава, 2009. — 346 с.
3. Долгушин И.И., Андреева Ю.С, Савочкина А.Ю. Нейтрофильные ловушки и методы оценки функционального статуса нейтрофилов. — М.: Изд-во РАМН, 2009. — 208 с.
4. Забродский П.Ф., Мандыч В.Г. Иммунотоксикология ксенобиотиков. — Саратов: Изд-во СВИБХБ, 2007. — 420 с.
5. Камилов Ф.Х. Патохимия токсического действия хлорорганических и ароматических соединений // Мед. вестн. Башкортостана. — 2007. — Т. 2, №6. — С. 76-80.
6. Комарова Н.В., Карцова А.А. Пестициды группы хлорфеноксикарбоновых кислот. Анализ в водных объектах методом капиллярного электрофореза // Аналит. хим. — 2004. — http://www.novedu.ru/2000/pitvod.htm#pes (дата обращения: 01.08.13).
7. Лебедева Н, Жамсаранова Д. Использование пептидных биорегуляторов при отравлении гербицидом
2.4-дихлорфеноксиуксусной кислоты // Гигиена и санитария. — 2004. — №4. — С. 68-70.
8. Мартыненко В.И., Прамоненков В.К., Кукален-ко С.С. и др. Пестициды (справочник). — М.: Агропро-миздат, 1992. — С. 209-212.
9. Справочник пестицидов и агрохимикатов, разрешённых к применению на территории Российской Федерации в 2012 году // Защита и карантин растений: прил. к ж. — 2012. — №6. — 850 с.
10. Хизбуллин Ф.Ф. Диоксины в жизненном цикле хлорорганических химических продуктов. — Уфа: Реактив, 2005. — 180 с.
11. Ягода А.В., Локтев Н.А. Клиническая цитохимия. — Ставрополь: СтГМА, 2005. — 485 с.
12. Troudi A., Soudani N, Mahjoubi SA. et al.
2.4-Dichlorophenoxyacetic acid effects on nephrotoxicity in rats during late pregnancy and early postnatal periods // Ecotoxicol. Environ. Saf. — 2011. — Vol. 74, N 8. — P. 23162323.
13. Schreinemachers D.M. Perturbation of lipids and glucose metabolism associated with previous 2,4-D exposure: a crosssectional study of NHANES Ш data, 1988-1994 // Environm. Health. — 2010. — Vol. 9. — P. 11.
14. Soloneski S., González N.V., Reigosa MA. et al. Herbicide
2.4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D)-induced cytogenetic damage in human lymphocytes in vitro in presence cf erythrocytes // Cell Biol. Int. — 2007. — Vol. 31. — P. 1316-1322.
Н002
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТАКТИВИНА И ТОКОФЕРОЛА ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ГЕПАТОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ АМИННОЙ СОЛИ 2,4-ДИХЛОРФЕНОКСИУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ
Зайтуна Алексеевна Ахметченко1, Наталья Альбертовна Муфазалова2,
Ляйсан Фагимовна Муфазалова2*, Анна Дмитриевна Ремезова2, Альбина Яхиевна Мухаметзянова2
башкирский государственный университет, г. Уфа,
2Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа
Реферат
Цель. Изучить эффективность индивидуального и сочетанного применения тимуса экстракта (тактивина) и витамина Е (токоферола) для коррекции гепатотоксических эффектов аминной соли 2,4дихлорфеноксиуксус-ной кислоты.
Адрес для переписки: lya-mufazalova@ya.ru
Методы. Эксперименты выполнены на 75 белых неинбредных половозрелых крысах с массой тела 200-220 г. Животные были разделены на пять групп (по 15 животных в группе): контроль; соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты; соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты + тактивин; соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты + токоферол; соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты + тактивин + токоферол. Аминную соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты вводили внутрижелудочно в дозе 42 мг/кг в течение 28 дней. Токоферол (50 мг/кг) и тактивин (0,25 мг/кг) вводили ежедневно с 1-го по 6-й дни после окончания введения токсиканта. Определяли уровень ала-нинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, общего и прямого билирубина. Морфологическое состояние печени оценивали путём микроскопии срезов ткани печени, окрашенных гематоксилином и эозином, а также выполняли электронно-микроскопическое исследование. Результаты регистрировали на 7-е сутки от окончания введения токсиканта.
Результаты. Воздействие аминной соли 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты приводило к повышению уровня аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, общего и прямого билирубина. Морфологически отмечены гемодинамические нарушения, уменьшение количества митозов, увеличение некротизированных ге-патоцитов, замещение их грубоволокнистой тканью. Применение тактивина уменьшало выраженность морфологических нарушений, также снижало, но не нормализовало показатели аминотрансфераз и билирубина. Использование токоферола нормализовало уровень трансаминаз, билирубина, морфологически усиливались процессы регенерации и митотической активности гепатоцитов. Сочетанное применение тактивина и токоферола устраняло повышение активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, нормализовало содержание билирубина. Морфологические данные свидетельствовали об активации регенераторных и белковосинтетических процессов в гепатоцитах.
Вывод. Тактивин и токоферол корригируют гепатотоксическое действие аминной соли 2,4дихлорфеноксиук-сусной кислоты, наибольшая эффективность выявлена при сочетанном применении данных препаратов.
Ключевые слова: аминная соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты, тактивин, токоферол, печень.
EFFICIENCY OF TACTIVIN AND TOCOPHEROL FOR 2,4-DICHLOROPHENOXYACETIC ACID AMINE SALT HEPATOTOXICITY CORRECTION Z.A. Akhmetchenkol, N.A. Mufazalova2, L.F. Mufazalova2, A.D. Remezova2, A.Ya. Mukhametzyanova2. 1Bashkir State University, Ufa, Russia, 2Bashkir State Medical University, Ufa, Russia. Aim. To study the efficiency of individual and combined use of thymus extract (tactivin) and vitamine E (tocopherol) for
2.4-dichlorophenoxyacetic acid amine salt hepatotoxicity correction. Methods. Experiments were carried out on 75 white non-imbred mature rats. Animals were distributed to 5 groups 15 animals each: controls, receiving 2,4-dichlorophenoxyacetic acid amine salt, receiving 2,4-dichlorophenoxyacetic acid amine salt and tactivin, receiving 2,4-dichlorophenoxyacetic acid amine salt and tocopherol, receiving 2,4-dichlorophenoxyacetic acid amine salt and both tactivin and tocopherol.
2.4-Dichlorophenoxyacetic acid amine salt (42 mg/kg) was introduced into the stomach during 28 days. Tocopherol (50 mg/ kg) and Tactivin (0,25 mg/kg) were injected from day 1 to day 6 after the discontinuation of toxin administration. Serum levels of alanine aminotransferase, aspartate transaminase, total and direct bilirubin were examined. The liver morphological state was assessed by microscopy of the liver tissue slices stained with hematoxylin and eosin, electron microscopy was also performed.The results were registered on the 7th day after the toxin discontinuation. Results. 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid amine salt led to alanine aminotransferase, aspartate transaminase, total and direct bilirubin levels increase. Hemodynamic alterations, reduced number of mitoses, increased number of necrotic hepatocytes, fiber tissue scarring were observed morphologically. The use of tactivin reduced the severity of morphological changes, and decreased, but did not normalized the level of transaminases and bilirubin. The use of tocopherol normalized the level of transaminases, bilirubin, there were morphological signs of the regeneration processes and hepatocyte mitotic activity intensification. The combined use of tactivin and tocopherol normalized alanine aminotransferase, aspartate transaminase bilirubin levels. Morphologically, signs of regenerative processes and protein synthesis activation were observed in hepatocytes. Conclusion. Tocopherol and Tactivin effectively compensate the hepatotoxic effect of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid amine salt, the best result was obtained when both of the drugs used in combination. Keywords: 2,4-dichlorophenoxyacetic acid amine salt, tactivin, tocopherol, liver.
Одна из актуальных медико-биологических проблем современности — поиск путей коррекции повреждающего действия экотоксикантов на организм человека. Среди этих соединений наибольшее внимание привлекают стойкие органические загрязнители, к числу которых относится и аминная соль 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты (2,4-ДА) — эффективный и широко используемый в сельском хозяйстве гербицид [13]. Эти соединения обладают выраженными кумулятивными свойствами, значительной токсичностью, а отдалённые последствия воздействия даже малых доз связаны с гонадотропным, эм-брио-, иммуно- и гепатотоксическим действиями [2]. Среди механизмов повреждающего действия стойких органических загрязнителей ведущее место занимает активация свободнорадикального окисления липидов биологических мембран, что неизбежно приводит к развитию синдрома пероксидации [2, 8]. Особую важность представ-
ляет изучение токсического влияния стойких органических загрязнителей на гепатобилиарную систему, а также разработка методов коррекции последствий их воздействия.
Ранее нами были уточнены механизмы повреждающего воздействия гербицида 2,4-ДА на иммунную систему [3, 6, 7]. Учитывая механизмы токсического действия 2,4-ДА, для коррекции могут быть использованы препараты, сочетано обладающие иммуномодулирующим, гепатопротективным и антиоксидантным действиями. В связи с этим в качестве средств корригирующей терапии нами выбран иммуномодулятор тимуса экстракт (тактивин) [9, 12, 14] и витамин Е (токоферол), характеризующийся антиоксидантным, иммуномодулирующим, мембраностабилизирующим и гепатопротектив-ным действиями [4, 11, 15, 16].
Целью исследования было изучение эффективности индивидуального и сочетанного при-
менения тактивина и токоферола для коррекции гепатотоксических эффектов гербицида
2,4-ДА.
Протоколы экспериментов и условия содержания животных были составлены в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и приказом МЗ РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики». Эксперименты выполнены на 75 белых неинбредных половозрелых крысах с массой тела 200-220 г. Животные были разделены на пять групп (по 15 животных в каждой): контроль; 2,4-ДА; 2,4-ДА + тактивин; 2,4-ДА + токоферол; 2,4-ДА + тактивин + токоферол. Гербицид 2,4-ДА вводили внутрижелудочно в течение 28 дней в дозе 42 мг/кг, что соответствует суммарной полулетальной дозе 1200 мг/кг [10]. Токоферол (в дозе 50 мг/кг, внутрижелудочно) и тактивин (в дозе 0,25 мг/кг, внутримышечно) вводили ежедневно с 1-го по 6-й дни, считая день окончания введения токсиканта нулевым днём [11, 12].
Для исследования активности аланинамино-трансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ) и содержания билирубина использовали стандартные тест-наборы. Морфологическое состояние печени оценивали путём микроскопии срезов ткани печени, окрашенных гематоксили-А
ном и эозином. Электронно-микроскопические исследования выполнены на электронном микроскопе JEM-100S. Результаты регистрировали на следующий день после окончания введения препаратов коррекции (7-е сутки).
Статистическую обработку проводили с использованием методов вариационной статистики [1], пакета программ Sta.tistica 8.0. Нормальность распределения данных проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка. При нормальности распределения признака оценку значимости различий проводили с использованием ^ритерия Стьюдента, в противном случае вычисляли медиану и межквартильный интервал. Дисперсионный анализ проводили с использованием Н-критерия Краскела-Уоллиса, для множественных сравнений использован Q-критерий Дана. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05. Данные представлены в процентах по отношению к контролю.
Гепатотоксические эффекты 2,4-ДА проявились повышением содержания аминотрансфе-раз, нарушением процессов конъюгации билирубина и морфологическими изменениями. Так, на 7-е сутки отмечено повышение уровня АЛТ до 426,32% (р <0,00001) и АСТ до 345,65% (р <0,00001, рис. 1), что может свидетельствовать не только о повышении проницаемости мембран, но и об их
Б 7,5 , , ,
I
I
I
ДА+Т Группы
Рис. 1. Влияние аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты (ДА) и её комбинации с тактивином (Т) и витамином Е (Е) на содержание аминотрансфераз (А — аланинаминотрансфераза, Б — аспартатаминотрансфераза) в сыворотке крови экспериментальных животных.
А
&.
П
ДА+Т
Группы
>±'
Б
ДА+Т Группы
Рис. 2. Влияние аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты (ДА) и её комбинации с тактивином (Т) и витамином Е (Е) на содержание билирубина (А — общего, Б — прямого) в сыворотке крови экспериментальных животных.
деструкции. Также гербицид вызывал развитие ги-пербилирубинемии: концентрация общего и прямого билирубина увеличивалась соответственно до 155,21% (р <0,00001) и 142,99% (р <0,00001) (рис. 2).
При светооптических исследованиях выявлены отчётливые нарушения гемодинамики, дистрофические и некротические процессы в ге-патоцитах с замещением их грубоволокнистой соединительной тканью. Наблюдали преимущественное повреждение «светлых» гепатоцитов, которым присуща дезинтоксикационная функция (рис. 3). При электронно-микроскопическом исследовании отмечены вакуолизация цитоплазмы, фрагментация гранулярной эндоплазматической сети, бесструктурные зоны, набухание митохондрий и уменьшение количества крист, что свидетельствует о снижении их функциональной активности (рис. 4).
Рис. 3. Печень крысы при воздействии аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты. Полнокровие центральных вен и синусоидных капилляров. Гиперемия сосудов портальных трактов. Сглаженность балочного рисунка. Нерезкая белковая дистрофия (мутное набухание) гепатоцитов. Гематоксилин и эозин, х400.
Рис. 4. Печень крысы при воздействии аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты (электронная микрофотография, х5000); 1 - ядро гепатоцита; 2 - глыб-ки гетерохроматина; 3 - фрагментация гранулярной эндоплазматической сети; 4 - набухшие митохондрии; 5 - микроорганизмы; 6 - бесструктурные зоны.
Применение тактивина статистически значимо снижало, но не нормализовало активность АЛТ (до 160,53%, р=0,0069) и АСТ (до 129,35%, р=0,0036, см. рис. 1). Тактивин устранял индуцированную гербицидом гипербилирубинемию (100,0%, р=1,00), но не изменял содержание прямого билирубина (см. рис. 2).
На светооптическом уровне выявлено умень-
шение некротизированных клеток, увеличение количества клеток Купфера и двухъядерных гепатоцитов, что свидетельствует об усилении репаративных процессов. Отмечено увеличение количества митохондрий, рибосом и цистерн гранулярной эндоплазматической сети в гепато-цитах.
Известно, что функциональное состояние печени и системы иммунитета тесно взаимосвязано. Рядом авторов показано, что состояние моно-нуклеарных фагоцитов, а в последние годы — и нейтрофилов, оказывает значительное влияние на процессы репаративной регенерации печени [5, 6, 14]. В ранее проведённых нами исследованиях установлено выраженное корректирующее влияние тактивина и токоферола на повреждающее влияние гербицида, функциональное состояние мононуклеарных фагоцитов и нейтрофилов (микробицидность, кислородозависимый метаболизм, поглотительная активность) [3, 7]. Также известно, что пептиды вилочковой железы (тимуса) оказывают наряду с иммуномодулирующим и гепатопротективное действие: усиливают регенерацию после частичной гепатэктомии [14]. Показаны уменьшение гепатотоксического действия циклофосфана тактивином [6], восстановление гипоплазии Т-зависимых зон пейеровых бляшек, повышение пролиферации, снижение степени деструктивных изменений клеток тактивином при хроническом токсическом гепатите [9], что можно связать с активацией макрофагов, которые служат регуляторами функций фибробластов [14]. Вероятно, указанные механизмы лежат в основе гепатопротективного эффекта тактивина.
Использование токоферола существенно ослабляло повреждающее действие гербицида: нормализовалось содержание трансаминаз и прямого билирубина (см. рис. 1, 2). Морфологически определялось уменьшение жировой дистрофии, количества некротизированных клеток и увеличение двухъядерных гепатоцитов. Отмечены сохранность клеточных и субклеточных мембран гепа-тоцитов, увеличение количества митохондрий, цистерн гранулярной эндоплазматической сети, агранулярного эндоплазматического ретикулума. При введении токоферола усиливались процессы регенерации и митотической активности гепато-цитов. Гепатопротективный эффект токоферола обусловлен, вероятно, его антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием, способностью усиливать синтетические процессы, что согласуется с данными других авторов [4, 8, 16].
Сочетанное применение токоферола и такти-вина оказывало большее нормализующее влияние на морфофункциональное состояние гепатобили-арной системы: отмечено устранение гиперфер-ментемии и гипербилирубинемии (см. рис. 1, 2). Происходило увеличение числа митозов, уменьшение белковой и жировой дистрофии гепатоци-тов (рис. 5). Ультраструктурный анализ выявил увеличение количества удлинённых митохондрий с многочисленными кристами, элементов гранулярной эндоплазматической сети, тесно вза-
Рис. 5. Печень крысы при воздействии аминной соли
2.4-дихлофеноксиуксусной кислоты и коррекции комбинацией «тактивин + витамин Е». Незначительная лимфоцитарная инфильтрация вблизи междольковой вены и междолькового жёлчного протока. Окраска гематоксилином и эозином.
имодействующих с митохондриями, что отражает активность окислительно-восстановительных процессов и свидетельствует об активации регенераторных и белковосинтетических процессов в гепатоцитах (рис. 6).
ВЫВОД
Углублены представления о повреждающем воздействии гербицида аминной соли 2,4-дих-лофеноксиуксусной кислоты на морфофункциональное состояние печени. Установлено корригирующее влияние тактивина и токоферола на гепатотоксическое действие аминной соли
2.4-дихлофеноксиуксусной кислоты, наибольшая эффективность показана при сочетанном применении препаратов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гареев Е.М. Основы математико-статистической обработки медико-биологической информации. — Уфа: Изд-во ГОУ ВПО «Башгосмедуниверситет Роздрава»,
2009. — 346 с.
2. Камилов Ф.Х. Патохимия токсического действия хлорорганических и ароматических соединений // Мед. вестн. Башкортостана. — 2007. — Т. 2, №6. — С. 76-80.
3. Камилов Ф.Х., Муфазалова Н.А., Ахметченко ЗА. Влияние тактивина, витамина Е и их комбинации на функциональное состояние фагоцитов и монооксигеназ-ную систему печени при воздействии хлорфеноксигерби-цидов // Мед. наука и образов. Урала. — 2007. — №5. — С. 19-22.
4. Катикова О.Ю., Ших Е.В. Особенности витаминного статуса у больных с заболеваниями печени различной этиологии. Возможности витаминотерапии // Рос. ж. гастроэнтерол., гепатол. и колопроктол. — 2009. — Т. 19, №3. — С. 21-31.
5. Макарова О.П, Цырендоржиев Д.Д., Шкурупий ВА. Перекисное окисление липидов в печени мышей при развитии гранулематозного воспаления после сочетан-
Рис. 6. Печень крысы при воздействии аминной соли 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты и коррекции комбинацией «тактивин + витамин Е». Увеличение количества митохондрий, цистерн гранулярной эн-доплазматической сети, двухъядерных гепатоцитов. Электронная микрофотография, х6500.
ного инфицирования C. albicans и M. tuberculosis // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2008. - Т. 146, №11. - С. 503-506.
6. Муфазалова НА. Фармакологическая коррекция иммуно- и гепатотоксических эффектов ксенобиотиков. — Уфа: Иммунопрепарат, 2002. — 136 с.
7. Муфазалова Н.А., Ахметченко ЗА, Камилов Ф.Х. и др. Эффективность применения тактивина, миелопида и токоферола для коррекции иммунотоксических эффектов гербицида 2,4-ДА // Башкир. экологич. вестн. —
2010. — №1. — С. 14-15.
8. Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Бакиров А.Б. Поражение печени химическими веществами (функционально-метаболические нарушения, фармакологическая коррекция). — Уфа: Гилем, 2007. — С. 45-65.
9. Отажонова А.Н., Азизова Ф.Х., Тухтаев К.Р. Влияние тактивина на структурное состояние пейеровых бляшек в условиях хронического токсического гепатита // Врач-аспирант. — 2011. — Т. 45, №2. — С. 39-43.
10. Пестициды (справочник) / Под ред. В.И. Мартыненко, В.К. Промоненкова, С.С. Кукаленко и др. — М.: Агропромиздат, 1992. — С. 209-212.
11. Прошина Л.Г. Макрофаги подкожной соединительной ткани при введении а-токоферола и дегидратации // Бюл. эксперим. биол. и мед. — 1998. — №5. — С. 587-591.
12. Сибиряк С.В. Иммуностимуляторы и аутоиммунитет // Фармакол. и токсикол. — 1990. — №3. — С. 67-72.
13. Хизбуллин Ф.Ф. Диоксины в жизненном цикле хлорорганических химических продуктов. — Уфа: Реактив, 2005. — 180 с.
14. Юшков Б.Г., Данилова И.Г., Храмцова Ю.С. Влияние иммуномодуляторов на регенерацию печени // Эксперим. и клин. фармакол. — 2006. — Т. 69, №1. — С. 53-55.
15. Meydani S.N., Han S.N., Wu D. Vitamin E and immune response in the aged: molecular mechanisms and clinical implications // Immunol. Rev. — 2005. — Vol. 205. — P. 269-284.
16. Singh M., Sandhir R., Kiran R. Effects on antioxidant status of liver following atrazine exposure and its attenuation by vitamin E // Exp. Toxicol. Pathol. — 2011. — Vol. 63, №3. — P. 269-276.
