CC BY
46
Лтратура
1. Житенева Л. Д. Атлас нормальных и патологически измененных клеток крови рыб / Л. Д. Житенева, Т. Г. Полтавцева, О. А. Рудницкая - Ростов-на-Дону: Ростовское издательство, 1989. — 112 с.
2. Житенева Л. Д. Эколого-гематологические характеристики некоторых видов рыб: Справочник / Л. Д. Житенева, Т. Г. Полтавцева, Т. И. Калюжная. - Ростов-на-Дону: АзНИИРХ, 1997. - 149 с.
3. Житенева Л. Д. Экологические закономерности ихтиогематологии / Л. Д. Житенева // Ростов-на-Дону: АзНИ-ИРХ, 2000. - 56 с.
4. Крейтцманн Х. Л. Гематологические методы исследований - вклад в диагностическую программу контроля службы здоровья рыб: пер. с нем. Х.Л. Крейтцманн, П.Франке - М.: ЦНИИТЭИРХ, 1983. - 22 с.
5.Кондрахин И. П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: справочное издание / И. П. Кондрахин, Н. В. Курилова, А. Г. Малахов и др. - М.: Агропромиздат, 1985. - 115 с.
6. Лакин Г. Ф. Биометрия. Учеб. пособие для биол. спец. вузов. - 4-е изд., перераб. и доп. / Г. Ф. Лакин. - М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.
7. Лянзберг О. В. Динамжа гематолопчних показнишв коропових риб протягом зимового використання / О. В. Лянзберг, I. М. Шерман / Рибогосподарська наука Украши. -2008. - №4. - С.104-107.
References
Zhiteneva, L. D., Poltavceva, T. G., Rudnickaja, O. A. (1989). Atlas normal'nyh i patologicheski izmenennyh kletok krovi ryb / L. D.Zhiteneva, - Rostov-na-Donu: Rostovskoe izdatel'stvo, 112. (in Russian). Zhiteneva, L. D., Poltavceva, T. G., Kaljuzhnaja, T. I. (1997). Jekologo-gematologicheskie harakteristiki nekotoryh vidov ryb: Spravochnik / Rostov-na-Donu: AzNIIRH, 149. (in Russian).
Zhiteneva, L. D. (2000). Jekologicheskie zakonomernosti ihtiogematologii / L. D. Zhiteneva //
Rostov-na-Donu: AzNI-IRH, 56. (in Russian). Krejtcmann, H. L. (1983). Gematologicheskie metody issledovanij - vklad v diagnosticheskuju programmu kontrolja sluzhby zdorov'ja ryb: per. s nem. H.L. Krejtcmann, P.Franke - M.: CNIITJelRH, 22. (in Russian). Kondrahin, I. P., Kurilova, N. V., Malahov, A. G. (1985). Klinicheskaja laboratornaja diagnostika
v veterinarii: spravochnoe izdanie. M.: Agropromizdat, 115. (in Russian). Lakin, G. F. (1990). Biometrija. Ucheb. posobie dlja biol. spec. vuzov. - 4-e izd., pererab. i dop. -
M.: Vysshaja shkola, 352. (in Russian). Ljanzberg O. V. Dynamika gematologichnyh pokaznykiv koropovyh ryb protjagom zymovogo vykorystannja / O. V. Ljanzberg, I. M. Sherman / Rybogospodars'ka nauka Ukrai'ny. -2008. - №4. - S.104-107. (in Ukrainian).
Стаття надшшла доредакцп 28.04.2016
УДК 619:616.98:579
Ткаченко О. А., д. вет. н., професор, Глебенюк В. В., к. вет. н., доцент, Глебенюк О.Г., здобувач © Днтрпетровський державный аграрно-економ1чний утверситет, м. Днтропетровськ, Украгна
ЕФЕКТИВН1СТЬ ПОЛ1МЕРАЗНО1 ЛАНЦЮГОВО1 РЕАКЦП ЗА ДЕТЕКЦП ДИСОЦ1АТИВНИХ ВАР1АНТ1В MYCOBACTERIUM BOVIS ШВИДКОРОСЛОГО ШТАМУ
У статтг наведено результати визначення ефективностг полгмеразног ланцюговог реакцггза детекцгг дисоцгативних варгантгв М. bovis швидкорослого штаму.
Матергалом для дослгджень були дисоцгативнг варганти М. bovis швидкорослого штаму та музейнг штами мгкобактергй (Vallee, BCG «Шахтар»,«Курка»). Морфологгю та тинктор1альш властивостг мгкобактергй
© Ткаченко О. А., Глебенюк В. В., Глебенюк О.Г., 2016
185
вивчали тсля виготовлення мазтв гз колоти i фарбуванням ix за методом Цтя-Нтьсена. Для проведення ПЛР використовували амnлiфiкатор iCycler iQ5 та комплект реагентiв для ПЛР-амплiфiкацii ДНК (M. tuberculosis-M. bovis complex) з детек^ею в режимi реального часу.
У результатi мiкроскопiчниx до^джень встановлено, що дисощативт варiанти мжобактерш представлен некислотостшкими полiморфними кокоподiбними та паличкоподiбними мiкроорганiзмами.
За результатами амплiфiкацii ДНК М. bovis штамiв Vallee, «Шахтар» та BCG було виявлено ДНК-мшеш збудника. ДНК дисощативних варiантiв, на вiдмiну вiд виxiдноi культури, М. bovis швидкорослого штаму не вдалося детектувати.
Генно-молекулярними до^дженнями встановлено генетты змти ДНК-мШен дисощативних варiантiв М. bovis швидкорослого штаму, що вказуе на мутацт збудника туберкульозу за дисощаци.
Ключов1 слова: мiкобактерii, збудник туберкульозу, морфологiя, швидкорослий штам, дисощативн варiанти, музейш штами, ДНК, полiмеразна ланцюгова реакщя, детекщя, мутащя.
УДК 619:616.98:579
Ткаченко А. А., д. вет. н., профессор, Глебенюк В. В., к. вет. н., доцент, Глебенюк Е. Г., соискатель
Днепропетровский государственный аграрно-экономический университет,
г. Днепропетровск, Украина
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ПРИ ДЕТЕКЦИИ ДИССОЦИАТИВНЫХ ВАРИАНТОВ MYCOBACTERIUM BOVIS БЫСТРОРАСТУЩЕГО ШТАММА
В статье приведены результаты определения эффективности полимеразной цепной реакции при детекции диссоциативних вариантов М. bovis быстрорастущего штамма.
Материалом для исследований были диссоциативные варианты М. bovis быстрорастущего штамма и музейные штаммы микобактерий (Vallee, BCG «Шахтар», «Курка»). Морфологию и тинкториальные свойства микобактерий изучали после приготовления мазков из колоний и окраской их по методу Циля-Нильсена. Для проведения ПЦР использовали Амплификатор iCycler iQ5 и комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК (M. tuberculosis-M. bovis complex) с детекцией в режиме реального времени.
В результате микроскопических исследований установлено, что диссоциативные варианты микобактерий представлены некислотоустойчивыми полиморфными коккоподобными и палочковидными микроорганизмами.
По результатам амплификации ДНКМ. bovis штаммов Vallee, «Шахтер» и BCG было обнаружено ДНК-мишени возбудителя. ДНК диссоциативных вариантов, в отличие от исходной культуры, М. bovis быстрорастущего штамма не удалось детектировать.
Генно-молекулярными исследованиями установлены генетические изменения ДНК-мишени диссоциативных вариантов М. bovis быстрорастущего штамма, что указывает на мутацию возбудителя туберкулеза при диссоциации.
Ключевые слова: микобактерии, возбудитель туберкулеза, морфология, быстрорастущий штамм, диссоциативные варианты, музейные штаммы, ДНК, полимеразная цепная реакция, детекция, мутация.
UDC 619:616.98:579
Tkachenko O.A., Glebenyuk V.V., Glebenyuk O.G.,
Dnipropetrovsk state agro-economic university, Dnipropetrovsk, Ukraine
186
EFFICIENCY BY PCR DETECTION DISSOCIATIVE VARIANTS MYCOBACTERIUM BOVIS QUICKLY GROWING STRAIN
The results determine the effectiveness PCR for detection M. bovis dissociative variants quickly growing strain.
Material for research were dissociative variants M. bovis quickly growing strain and museum strains mycobacterium (Vallee, BCG «Шахтар»,«Курка»). Morphology and tinctirial properties mycobacterium studied after making smears from colonies and staining them by y Ziehl-Neelsen method. Used to perform PCR thermocyclers iCycler iQ5 and reagents for PCR amplification DNA (M. tuberculosis-M. bovis complex) with detection in real time.
As a result of microscopic studies found that dissociative variants mycobacterium are polymorphic acid-nonproof coccus and sticks bacteria.
The results amplification DNA of M. bovis strain Vallee, BCG «Шахтар» DNA was detected target causative agent tuberculosis. DNA dissociative variants, unlike the original culture of M. bovis quickly growing strain could not be detected.
Found genetic changes in the DNA target dissociative variants M. bovis quickly growing strain, indicating a mutation of Mycobacterium tuberculosis in the dissociation.
Key words: mycobacterium, the causative agent tuberculosis, morphology, quickly growing strain, dissociative variants, museum strains, DNA, polymerase chain reaction, detection, mutation.
Вступ. Останшм часом все частше визначення наявност ДНК M. bovis i M. tuberculosis у бюлопчному матерiалi ввд шфшованих та хворих на туберкульоз тварин проводиться за допомогою полiмеразно! ланцюгово! реакци (ПЛР). Серед сучасних генетичних технологш метод полiмеразно! ланцюгово! реакци займае особливе мюце. Цей метод дозволяе провести виявлення збудника або генетично! мутацп [3, 4].
Найбшьш поширена форма мiнливостi мшобактерш туберкульозу - дисощащя, тобто виникнення в популяцп мiкроорганiзмiв особин, ям вiдрiзняються ввд вихвдного типу (виду) зовшшшм виглядом i структурою колонш, а також нащадково закрiпленими змшами деяких морфолопчних ознак та бiохiмiчних i фiзiологiчних властивостей, зi збереженням головних таксономiчних ознак конкретного виду [2, 3].
Багаторiчнi дослiдження морфологiчних, культуральних, патогенних та сенсибiлiзувальних властивостей дисоцiативних форм M. bovis вказують на суттевi !х змiни. Тривале пасажування збудника туберкульозу через живильне середовище призвело до втрати вiрулентностi, кислотоспйкосп, змiни метаболiзму, ферментативно! активности, набуття здатност до пiгментоутворення, росту за 3 °С, на м'ясо-пептонному агарi i бульйонi та iн. [1, 5, 6]. Тому вивчення генетичних ознак змшених, у тому числi дисощативних, мiкобактерiй лишаеться актуальним.
Метою нашо! роботи було визначення ефективностi полiмеразно! ланцюгово! реакци за детекцп дисощативних варiантiв М. bovis швидкорослого штаму.
Матерiали i методи. Матерiалом для до^джень були дисоцiативнi (240А, 240Б, 240В, 240/118) та вихвдний варiанти М. bovis швидкорослого штаму. В якост контролю використовували M. bovis музейних штамiв (Vallee, BCG «Шахтар») та M. avium штаму «Курка».
Морфолопю та тинкторiальнi властивост мiкобактерiй вивчали пiсля виготовлення мазшв iз колонiй i фарбуванням !х за методом Цiля-Нiльсена [3].
Для проведения детекцп ДНК мiкобактерiй попередньо накопичували бiомасу культури на живильному середовищi з рН 7,0-7,2 за 3 (дисощативш варiаити) та 37 °С (вихiдний варiант та музейн штами) впродовж 30 дiб iз часу появи росту i готували 0,2 см3 завис мiкобактерiй у концетрацл 1 мг/см3.
Для проведення ПЛР використовували амплiфiкатор iCycler iQ5 (виробник BioRad, США) та комплект реагенпв для ПЛР-амплiфiкацi! ДНК (M. tuberculosis-M. bovis complex, у тому чи^ штаму BCG) з детекщею в режимi реального часу («МИКО-
187
ГЕН», виробник НУО ДНК-технолопя, Росшська Федеращя). Режим амплiфiкащl наведено у табл. 1.
Таблиця 1
№ циклу Кшькють повтор1в Час Температура, °С
1 1 1 хв 80
1 хв 30 сек 94
2 5 30 сек 94
45 сек 64
3 45 10 сек 94
45 сек 64
Результати дослщжень. У результат! до^джень було встановлено, що за мшроскопп мазшв, зафарбованих методом Цшя-Ншьсена, виготовлених i3 колонiй вихвдного варiанту М. bovis швидкорослого штаму у полi зору мiкроскопу виявлялися кислотостiйкi короткi палички. Дисоцiативнi варiанти мiкобактерiй були представленi некислотоспйкими полiморфними кокоподiбними та паличкоподiбними мiкроорганiзмами. За мшроскотчних дослiджень бактерiальних препаратiв, виготовлених iз колонiй М. bovis музейних штамiв (Vallee, BCG «Шахтар») спостер^алися червонi товстi короткi палички, а iз колонiй M. avium - червой тони полiморфнi палички.
За результатами амптфшаци ДНК М. bovis штамiв Vallee, «Шахтар» та BCG було виявлено ДНК-мiшенi збудника (табл. 2).
Як видно з табл. 2, ДНК дисощативних варiантiв, на вiдмiну вiд вихвдно! культури, М. bovis швидкорослого штаму не вдалося детектувати.
Таблиця 2
Результати амп^фжащ! ДНК мжобактерш_
Вид мжобактерш Штам (дисощативний вар1ант) мжобактерш Результат детекци продукпв ампл1ф1кацп
М. bovis швидкорослий (вихвдний вар1ант) +
швидкорослий (240А) -
швидкорослий (240Б) -
швидкорослий (240В) -
швидкорослий (240/118) -
Vallee +
«Шахтар» +
BCG +
M. avium «Курка» -
Таким чином, генно-молекулярними дослiдженнями встановлено генетичн змiни ДНК-мiшенi дисоцiативних варiантiв М. bovis швидкорослого штаму, що вказуе на мутащю збудника туберкульозу за дисощацп.
Висновок. Дисоцiативнi варiанти М. bovis швидкорослого штаму не детектуються до комплексу M.tuberculosis—M.bovis методом полiмеразноl ланцюгово! реакци в режимi реального часу внаслвдок мутацп мiкроорганiзмiв.
Перспективи подальших дослiджень полягають у визначеннi генетичного коду дисоцiативних мiкобактерiй.
Л1тература
1. Аспекти морфогенезу та бюлопчш властивосп M. bovis дисоцiативних форм за рiзних температур культивування / О. А. Ткаченко, I. М. Шендрик, В. В. Мюшв, А. В.Ковальов // Вюник Днiпропетр. держ. аграр. ун-ту. - 2013. - № 1. - С. 74-83.
2. Вейсфейлер Ю. К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулёза и атипичные микобактерии / Ю.К. Вейсфейлер. - Будапешт: Изд-во АН Венгрии, 1975. - 336 с.
188
3. Лабораторна дiагностика туберкульозу тварин: практичный поабник / [Ткаченко О. А., Бшан М. В., Зажарський В. В., Ковальова Л. О.]. - Дшпропетровськ: Вид-во «Свщлер А. Л.», 2010. - 208 с.
4. Скрыпник А.В. Применение молекулярно-генетических методов для изучения видового соотношения микобактерий, изолированных в Украине от реагировавшего на туберкулин КРС / А. В. Скрыпник // Вет. патология. - 2007. - № 4. - С. 111-117.
5. Ткаченко О. А. Вплив температури культивування на вiрулеитиiсть мжобактерш / О. А. Ткаченко, В. В. Глебенюк // Вюник Дншропетр. держ. аграр. ун-ту. - 2008. - № 2. -С. 112-114.
6. Ткаченко О. А. Вплив пасажу через морських свинок на бюлопчну актившсть та лiпiдиий склад M. bovis швидкорослого штаму / О. А. Ткаченко, М. В. Бшан, В. В. Глебенюк // Науковий вюник Львiвського НУВМ та БТ iм. С.З. Гжицького. - 2008. -Т. 10, № 2 (37), Ч. 2.- С. 2628 -267.
References
Tkachenko, O., Shendryk, I., Miskiv, V., Kovalov, A. (2013). Aspekty morfohenezu ta biolohichni vlastyvosti M. bovis dysotsiatyvnykh form za riznykh temperatur kultyvuvannia / Visnyk Dnipropetr. derzh. ahrar. un-tu. 1, 74-83. (in Ukrainian). Veisfeiler, Iu. K. (1975). Byolohyia y yzmenchyvost mykobakteryi tuberkuloza y atypychnye
mykobakteryy / Budapesht: Yzd-vo AN Venhryy, 336. (in Russian). Tkachenko, O. A., Bilan, M. V., Zazharskyi, V. V., Kovalova, L. O. (2010). Laboratorna diahnostyka tuberkulozu tvaryn : praktychnyi posibnyk / Dnipropetrovsk : Vyd-vo «Svidler A.L.», 208. (in Ukrainian). Skrpnyk, A. V. (2007). Prymenenye molekuliarno-henetycheskykh metodov dlia yzuchenyia vydovoho sootnoshenyia mykobakteryi, yzolyrovannukh v Ukrayne ot reahyrovavsheho na tuberkulyn KRS / Vet. patolohyia. 4, 111-117. (in Russian). Tkachenko, O. A., Hlebeniuk, V. V. (2008). Vplyv temperatury kultyvuvannia na virulentnist
mikobakterii / Visnyk Dnipropetr. derzh. ahrar. un-tu. 2, 112-114. (in Ukrainian). Tkachenko, O. A., Bilan, M. V., Hlebeniuk, V. V. (2008). Vplyv pasazhu cherez morskykh svynok na biolohichnu aktyvnist ta lipidnyi sklad M. bovis shvydkorosloho shtamu / Naukovyi visnyk Lvivskoho NUVM ta BT im. S. Z. Hzhytskoho. - T. 10, № 2 (37), 2, 2628 -267. (in Ukrainian).
Стаття надшшла доредакцп 1.04.2016
УДК 636.22/.28.09:618.11:616-085 *
Федоренко С. Я., к. вет. н., доцент ©
Харювська державна зооветеринарна академiя, м. Харюв
СПОС1Б ТЕРАПП КОР1В З ГОНАДОДИСТРО Ф1€Ю
Проведеними до^дженнями встановлено, що за дефщиту в органiзмi корiв ß-каротину, втамту А та цинку зростае концентращя втьнорадикальних оки^в (малонового диальдегiду) та знижуеться вмют антиоксидантiв - каталази, супероксиддисмутази i вiдновленого глутатiону. Це супроводжуеться розвитком дистрофП тканин яечниюв та яйцеклтин зокрема.
У яечниках корiв при гонадодистрофiею встановлено зменшення кiлькостi примордiальниx фолiкулiв, разом з тим збiльшуеться юльюсть фiброзниx тт. Також за дисmрофiчниx процеив у яечниках спостерiгали дезттеграцт фолiкулiв на вах етапах розвитку, порушення цiлiсносmi ¡х оболонки. При цьому вiдмiчаеmься зменшення mинкmорiальниx властивостей везикулярних фолiкулiв.
Таю змти гонад у корiв завершуються аmрезiею фолiкулiв - дегенеративних процеив, як призводять до руйнування яйцеклтини та навколо розмщених нег структур. Гонадодисmрофiя у корiв проявляеться неповноцтними статевими циклами, що призводить до неплiдносmi тварин.
Вiдомi фактори виникнення та розвитку дистрофП яечниюв у корiв гтотетично можна доповнити юнуванням порушень, збо1в у сисmемi антиоксидантного захисту.
* Науковий консультант © Федоренко С. Я., 2016
- д.б.н., проф. Кошевой В.П.
189
