CC BY
37
7. Семененко, М.П. Эффективность применения фармикса при желудочно-кишечной патологии молодняка свиней / М.П. Семененко, А.В. Ферсу-нин, Е.В. Кузьминова // Ветеринария Кубани -2011. - № 4. - С. 13-14
8. Тамбиев, Т.С. Ассоциативные желудочно-кишечные инфекции молодняка свиней в Ростовской области / Т.С. Тамбиев, Л.А. Малышева // Ветеринарная патология - 2010. - № 4 - С. 88-92
9. Чхенкели, В.А. Препараты последнего поколения на основе грибов-ксилотрофов рода Trametes: обнаруженные эффекты, механизмы действия и
применение: Монография / В.А. Чхенкели -Москва: Перо, 2014. - 255 с. 10. Этиологическая структура желудочно-кишечных болезней поросят в специализированных свиноводческих хозяйствах / С.В. Борисенко, Ю.Н. Бригадиров, И.А. Никулин, Н.А. Борисенко, Н.А. Хренова // Вестник Воронежского государственного аграрного университета - 2013. - № 4. - С. 168-171.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВРЕМЕНИ КРОВОТЕЧЕНИЯ ДЛЯ ОЦЕНКИ ФУНКЦИИ ГЕМОСТАЗА У ЗДОРОВЫХ СОБАК
Ю.Л. Ошуркова
Канд. биологических наук зав. кафедрой анатомии и физиологии,
Е.С. Баруздина
Старший преподаватель кафедры анатомии и физиологии
А. Новожилова
Студентка факультета ветеринарной медицины и биотехнологий ФГБОУ ВПО «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина», Россия,
г. Вологда
Аннотация. Показана зависимость времени свертывания крови с показателями сосудисто-тромбоцитарного, плазменно-коагуляционного гемостаза, а так же противосвертывающей и фибринолитической системы у здоровых собак, что позволяет использовать этот тест для экспресс-оценки свертывающей системы организма. Ключевые слова: время кровотечения; гемостаз; здоровые собаки.
Несмотря на очевидную важность процессов гемостаза у животных результаты исследования параметров этой функциональной системы крайне редко учитываются в клинической практике. В зарубежной ветеринарной литературе для экспресс-оценки физиологических механизмов гемостаза предлагается проводить измерение времени кровотечения [2], [4], [5], [7]. В отличие от лабораторных методов диагностики системы гемостаза этот тест можно легко и быстро провести в любых, в том числе и экстренных ситуациях. Данные о диагностической значимости теста на определение времени кровотечения из пульпы когтя (Cuticle Bleeding Time) сильно отличаются в разных источниках [2], [5], [6], [7] что и определило цель нашего исследования.
Целью нашего исследования стало изучение связи времени свертывания крови с показателями сосуди-сто-тромбоцитарного, плазменно-коагуляционного гемостаза, противосвертывающей и фибринолитической системы, а так же анализ эффективности определения времени кровотечения из пульпы когтя для оценки функции гемостаза у здоровых собак.
Материалы и методы исследования. В нашем исследовании участвовали клинически здоровые собаки разных пород в возрасте от 2 до 8 лет (n = 7).
Время кровотечения определяли, обрезая кончик когтя с пульпой с помощью когтереза и, одновременно, запускали секундомер. Каждые 15 секунд снимали каплю крови на фильтровальную бумагу, не прикасаясь к ране. Секундомер останавливали одновременно с остановкой кровотечения [5], [7].
Также у каждой исследуемой собаки брали кровь из подкожной вены предплечья в 2 пробирки объемом 2,7 мл с 3,8 % раствором цитрата натрия для определения показателей гемостаза. Адгезивно-агрегационную активность тромбоцитов определяли количественным методом с применением ФЭК по Howard M.A. [1],[3]. Определяли суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) с индукторами агрегации - АДФ (концентрация 0,1 мг/мл), коллагеном (концентрация 20 мг/мл) и ристомицином (концентрация 15 мг/мл). Параметры плазменно-коагуляционного гемостаза определяли на двухканальном коагулометре Thrombostat производства Behnk Elektronik (Германия). Для оценки состояния плазменно-коагуляционного гемостаза определяли следующие показатели: АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время), ПВ (про-тромбиновое время), ТВ (тромбиновое время), количественный анализ фибриногена [2], [4], [7]. Функцию противосвертывающей системы оценивали с помощью измерения активности антитромбина III (АТ III) с хромогенным субстратом в бедной тромбоцитами плазме (принцип U. Abildgaard в модификации А.П. Момота и А.Н. Мамаева) [2]. Фибринолитическую активность в плазме исследуемых животных измеряли с помощью обнаружения растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК) в о- фенантролиновой пробе (планшетный вариант) [2]. Подсчет тромбоцитов производили по Фонио в мазке крови, стабилизированной ЭДТА, и окрашенных по Романовскому [2].
Полученные результаты обрабатывались с помощью программного пакета Microsoft Excel. Силу связи между признаками оценивали по величине полученного коэффициента корреляции : - от 0 до 0,29 - слабая (низкая) степень корреляции; - от 0,3 до 0,69 - средняя степень корреляции; - от 0,7 до 1,0 - сильная (высокая) степень корреляции.
Результаты исследования. Среднее время кровотечения из кутикулы когтя у исследуемых здоровых собак составило 4,9 ± 1,16 минуты, что не выходило за рамки ре-ференсных значений (3-6 минут) [4]. Также у всех исследуемых собак были определены основные параметры системы гемостаза (Табл.1)
Таблица 1
Основные параметры системы гемостаза у исследуемых собак.
Показатели Единицы измерения Среднее значение (М) Ошибка (m) Уровень вероятности
ПВ Сек 11,33 0,52 P<0,001
ТВ Сек 13,74 0,62 P<0,001
Фибриноген г/л 2,16 0,14 P<0,001
АЧТВ Сек 13,99 0,35 P<0,001
СИАТ АДФ % 79,46 7,67 P<0,001
ИДТ АДФ % 4,75 4,71 -
СИАТ Коллаген % 74,21 10,15 P<0,001
ИДТ Коллаген % 7,43 2,09 P<0,01
СИАТ Ристомицин % 66,11 12,5 P<0,001
ИДТ Ристомицин % 9,19 6,11 P<0,05
Антитромбин III % 119,46 7,12 P<0,001
Тромбоциты 109/л 338,00 44,86 P<0,001
РФМК мг/100мл 4,79 0,54 P<0,001
Время кровотечения Мин. 4,9 1,16 P<0,01
Количество тромбоцитов имеет обратную достаточно сильную связь со временем кровотечения из пульпы когтя (Рис. 1). Ристомициновая агрегация применяется для количественной оценки фактора Виллебранда, кото-
рый вырабатывается эндотелием сосудов и участвует в адгезии тромбоцитов к стенке сосуда. СИАТ здоровых собак с ристомицином и АДФ имеет обратную связь средней силы со временем кровотечения, а СИАТ с коллагеном и ИДТ вовсе не зависит от времени кровотечения.
Корреляционная зависимость времени кровотечения с показателями тромбоцитарного звена гемостаза у здоровых собак
0,40 0,20 0,00 -0,20 -0,40 -0,60 -0,80
0,11
0,17
0,02
томицин Рис томиц ин Тромбоц СИАТ
АДФ СИАТ АДФ ИДТ Коллаген Коллаген Рис
СИАТ-ИДТ
-0,32
ИДТ -0,11
-0,46
-0,69
Рисунок 1. Корреляционная зависимость времени кровотечения с показателями тромбоцитарного
звена гемостаза у здоровых собак.
Исследуя связь времени кровотечения и показателей вторичного гемостаза у здоровых собак мы выявили сильную отрицательную зависимость с тромбиновым временем. ТВ используется для оценки как третьей фазы свертывания крови - образования фибрина, так и состояния естественных и патологических антикоагулянтов. С АЧТВ, характеризующим первую фазу свертывания крови (образование протромбиназы), время кровотечения имеет прямую связь средней силы. С протромбиновым
временем и количеством фибриногена время кровотечения коррелирует слабо (Рис. 2). Активность физиологического антикоагулянта - антитромбина III у исследуемых собак имеет сильную отрицательную корреляцию со временем кровотечения. Количество РФМК, являющихся маркерами внутрисосудистого свертывания [2], коррелирует со временем кровотечения у здоровых собак со средней силой.
Корреляционная зависимость времени кровотечения с показателями коагулограммы, противосвертывающей и фибринолитической систем у здоровых собак
1 0,5 0
-0,5 -1
0,53
0,29
ПВ ТВ Фибриноген АЧТВ РФМК АТ III
-0,28 -0,32
-0,85 -0,85
Рисунок 2. Корреляционная зависимость времени кровотечения с показателями коагулограммы, противосвертывающей и фибринолитической систем у здоровых собак
Выводы. Анализируя результаты исследования, мы пришли к выводу, что:
- поскольку существует корреляционная зависимость времени кровотечения из пульпы когтя у собак с количеством тромбоцитов, с СИАТ с АДФ и ристомицином (обратная, средней силы), но отсутствует зависимость времени кровотечения со всеми показателями агрегации с коллагеном (рис. 1) - применение данного теста для оценки сосудисто - тромбоцитарного гемостаза оправдано в качестве экспресс-метода, не исключающего лабораторные методы исследования.
- для исследования плазменно - коагуляционного (вторичного) гемостаза у здоровых собак тест на определение времени свертывания крови из пульпы когтя недостаточно эффективен, так как из четырех основных показателей вторичного гемостаза только тромбиновое время имеет сильную отрицательную зависимость, с АЧТВ время кровотечения имело прямую связь средней силы, с протромбиновым временем и количеством фибриногена время кровотечения коррелирует слабо (рис. 2).
- тест на определение времени кровотечения из пульпы когтя у здоровых собак эффективен для оценки противосвертывающей системы, так как активность антитромбина III в нашем исследовании имела сильную отрицательную зависимость со временем кровотечения.
- с количеством РФМК - маркером внутрисосуди-стого свертывания крови - время кровотечения имело прямую зависимость средней силы, но мы считаем данный результат недостаточным, чтобы сделать выводы об
эффективности данного теста для оценки фибринолитической системы. Желательно провести исследования зависимости времени кровотечения из пульпы когтя у здоровых собак с другими показателями фибринолитической системы (ПДФ-Ф, д-димеры и т.д.). Список литературы.
1. Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза/ В.П. Балуда, З.С. Баркаган, Е.Д. Гольдберг. - Томск, 1980. - 304 с.
2. Долгов В.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза/ В.В. Долгов, П.В. Свирин. - ООО «Издательство «Триада», 2005. - 223 с.
3. Ошуркова Ю.Л. Состояние тромбоцитарного звена системы гемостаза у лактирующих коров// Ю.Л.Ошуркова, Л.Л.Фомина, Е.Н.Соболева, - Мо-лочнохозяйственный вестник, № 1, II кв. 2011.
4. Linda Duncan. Handbook of small animal practice: fifth edition/ Linda Duncan et al.- USA, Library of Congress Control, 2008. - Р. 1270
5. Lisa Smart., Assessing platelet function in clinical medicine. - USA, ACVSc College Science Week 2010,
- Р. 26.
6. Pijnappels M. Evaluation of the cuticle bleeding time in canine haemophilia A// Pijnappels M., Briët E., van der Zwet G.T., Huisden R., van Tilburg N.H., Eulderink F., - Canadian Veterinary Journal, 1989. - Р. 344-345
7. Susan G. Hackner. Bleeding disorders: diagnostic approach simplified. - USA, Cornell University, 2010.
- Р. 1 - 15.
КОРРЕКЦИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ И УВЕЛИЧЕНИЕ СОХРАННОСТИ ПОГОЛОВЬЯ
Рунов Виталий Евгеньевич
старший преподаватель кафедры ветеринарии Костеша Николай Яковлевич
доктор биологических наук, профессор кафедры ветеринарии
Томский сельскохозяйственный институт - филиал Новосибирского государственного аграрного университета
