CC BY
20
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 71
более чем на 50 %. В системе in vivo изучали распределение GPX1, GSR, GSTT и TXN определяли методом полимераз-ФС в органах и тканях мышей с опухолью LLC. Фотоди- ной цепной реакции в реальном времени с помощью намическую терапию (ФДТ) проводили на 7-й день роста qPCRmix-HS SYBR («Евроген») согласно методике произ-опухоли LLC (светодиодный источник Xmax = 662 ± 14 нм). водителя. Программа амплификации стандартная. Амино-Противоопухолевый эффект оценивали по торможению нитроксильный комплекс платины (IV) — ВС-131 (e-ам-роста опухоли (ТРО), увеличению продолжительности мин-d- (4-амино-2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил) — a, жизни (УПЖ) и критерию излеченности (КИ). f-бис (пентаноато) — b, c-дихлороплатина (IV)) наносили Результаты. Показано, что 3MeChl_gal эффективно на- в концентрации полумаксимального ингибирования с экс-капливается в клетках культуры LLC и обладает более вы- позицией от 2 до 12 ч с шагом в 2 ч. Опыты проводили сокой фотоиндуцированной активностью по сравнению в 3-кратной повторности. с 3МеОД1 (концентрация полумаксимального ингибирова- Результаты. В ходе работы было определено влияние ния составляла 25 ± 2 и 171 ± 4 нМ соответственно). аминонитроксильного комплекса платины (IV) на экспрес-При оценке биораспределения ФС in vivo отмечено, что оба сию гена маркера окислительного стресса SOD2. Установ-соединения интенсивно накапливались в опухолевой тка- лено, что исследуемое соединение увеличивает экспрессию ни. Нормированная флуоресценция в опухоли LLC дости- данного гена, что предполагает накопление перекиси во-гала максимальных значений для 3MeCh1_ga1 в течение дорода в опухолевых клетках и развитие окислительного 5—15 мин, а для 3MeCh1 — в течение 15—60 мин и состав- стресса. Увеличение экспрессии генов TXN и GSTT об-ляла 34,1 ± 6,9 и 18,4 ± 0,7 усл. ед. соответственно. Отме- условлено их важной ролью в клеточных редокс-зависимых чена высокая флуоресцентная контрастность относительно процессах, защищающих от разрушительного действия окружающей ткани (кожа и мышца): 7,8 ± 0,3 и 3,6 ± 0,2 активных форм кислорода. Следует отметить, что экспрес-усл. ед. и 8,5 ± 0,3 и 4,2 ± 0,2 усл. ед. соответственно. сия генов SOD2, TXNи GSTTувеличивается синхронно к 12 ч. 3Ме^1 и 3MeCh1_ga1 показали высокую противоопухоле- Глутатион играет важную роль в поддержании редокс-ста-вую активность в системе in vivo (100 % ТРО, 100 % УПЖ, туса клеток, в механизмах системы детоксикации, в регу-100 % КИ) при оптимальных режимах проведения ФДТ. ляции клеточного цикла, экспрессии генов и развитии Заключение. Получен высокий противоопухолевый апоптоза, однако исследуемое соединение не вызывает эффект в системах in vitro и in vivo для обоих соединений. изменений в системе глутатиона. Экспрессия гена GPX1 Однако введение в хлориновый макроцикл углеводного при действии комплекса ВС-131 незначительно выражена фрагмента приводило к стремительному накоплению и вы- к 12 ч, в то время как экспрессия гена GSR не изменяется ведению ФС, что создавало сложности при проведении вовсе. сеанса ФДТ, а также к повреждению окружающих тканей, Заключение. Установлено, что действие аминонитро-что не позволяет отнести его к перспективным ФС ксильного комплекса платины ВС-131 в опухолевой линии для ФДТ и делает нецелесообразным проведение такой MCF-7 вызывает активацию транскрипции генов SOD2, модификации красителя. TXN и GSTT. В.А. Мумятова, А.А. Балакина, В.Д. Сень, А.А. Терентьев Р.Д. Мустафаев, Г.В. Тихов ВЛИЯНИЕ АМИНОНИТРОКСИЛЬНОГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ КОМПЛЕКСА ПЛАТИНЫ (IV) НА ИЗМЕНЕНИЕ ТЕРАПИИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ ПЕРИТОНИТА СИСТЕМЫ ФГБУ ГНЦЛМ ФМБА России, Москва ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область Введение. Широкое развитие фотодинамической тера-Введение. Известно, что действие многих противоопу- пии (ФДТ) и успешное внедрение методики в клиниче-холевых соединений сопровождается образованием и на- скую практику лечения воспалительных процессов разной коплением активных форм кислорода. Аминонитроксиль- локализации, а также наличие выраженного антибактери-ные радикалы являются антиоксидантами и способны ального эффекта, маловероятность развития резистентности улучшать свойства различных противоопухолевых соеди- и возможность локального использования без губительно-нений. В связи с этим актуальным является изучение вли- го воздействия на нормальную микрофлору организма яния аминонитроксильных радикалов и возможности позволяют, с нашей точки зрения, осуществить попытку их применения для смягчения побочных эффектов в со- изучения возможности применения метода ФДТ для лече-ставе противоопухолевых соединений. ния распространенного перитонита в эксперименте. Цель исследования — изучение функционирования ан- Цель исследования — оценить эффективность приме-тиоксидантной системы опухолевых клеток линии MCF-7 нения ФДТ при лечении разлитого перитонита. при действии аминонитроксильного комплекса платины (IV). Материалы и методы. Исследование выполнено на 68 Материалы и методы. Работа проводилась на опухоле- крысах линии Вистар массой тела 200—250 г. Для создания вой линии MCF-7 (аденокарцинома молочной железы модели острого распространенного калового перитонита человека). Выделение суммарной РНК проводили с ис- применена модифицированная методика В. А. Лазаренко пользованием реагента ExtractRNA («Евроген») согласно и соавт. с использованием профильтрованной 10 % каловой методике производителя. Синтез первичной цепи кДНК взвеси в дозе 0,5 мл на 100 г. После введения каловой взве-проводили с помощью MMLV PT kit («Евроген») согласно си в брюшную полость подопытным крысам на 3-и сутки методике производителя. Уровень экспрессии генов SOD2, у них развивалась клиническая картина острого перитони-
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
72
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
та, выражающаяся в вялости и малоподвижности животных, вздутии живота, отказе от пищи и отсутствии стула. Для оценки эффективности лечения острого разлитого перитонита животные были поделены на основную и контрольную группы (22 крысы), в которых санацию брюшины проводили наиболее распространенным в клинической практике способом — 0,02 % раствором хлоргексидина. Кроме того, в течение 3 сут в послеоперационном периоде проводили антибактериальную терапию гентамицином из расчета 2 мг/кг внутримышечно. Основная группа состояла из 43 крыс, у которых санацию брюшной полости выполняли методом ФДТ Подопытным животным внутривенно вводили фотосенсибилизатор Фотодитазин в дозе 0,8 мг/кг. Через 2—2,5 ч после введения Фотодитазина, предположительно после максимального накопления фотосенсибилизатора в воспаленной брюшине, подопытным крысам проводили оперативное вмешательство. В качестве источника света для ФДТ использовали лазер «Аткус-2» с выходной мощностью от 1 до 2 Вт, в непрерывном режиме красного оптического диапазона (длина волны 661 нм).
Результаты. Летальность в основной группе составила 9,5 % (4 крысы, из которых 2 скончались в течение 24 ч и 2 — в последующие 48 ч вследствие продолжающегося перитонита). В контрольной группе летальность составила 27,3 % (6 крыс) в течение первых 24 ч при явлениях продолжающегося перитонита.
Заключение. Оценка летальности при экспериментальном перитоните свидетельствует о преимуществах санации брюшной полости методом ФДТ по сравнению с традиционными методами санации.
Р. Д. Мустафаев, Г. В. Тихов
ОЦЕНКА АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ЭФФЕКТА
ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПЕРИТОНИТЕ
ФГБУ ГНЦЛМФМБА России, Москва
Введение. Появление новых штаммов микроорганизмов, резистентных к антибиотикам, заставляет исследователей постоянно искать, разрабатывать и внедрять в практику новые, в том числе и нефармакологические, способы воздействия на патогенную флору.
Цель исследования — изучить антибактериальные свойства фотодинамической терапии (ФДТ) при остром экспериментальном перитоните, вызванном внутрибрюшинным введением монокультуры кишечной палочки (штамм 25922).
Материалы и методы. Для оценки эффективности различных способов санации брюшной полости при перитоните существенное значение имеет определение числа колониеобразующих единиц микроорганизмов в послеоперационном периоде. Определение концентрации микробных тел кишечной палочки проводили в контрольной и основной группе, где санацию брюшной полости проводили методом ФДТ Подопытным животным внутривенно вводили фотосенсибилизатор Фотодитазин в дозе 0,8 мг/кг. Через 2—2,5 ч после введения препарата, предположительно после максимального накопления фотосенсибилизатора в воспаленной брюшине, подопытным крысам проводили сеанс облучения. В качестве источника света при ФДТ использовали лазер «Аткус-2» с выходной мощностью от 1
до 2 Вт и длиной волны 661 нм. В контрольной группе санацию проводили наиболее распространенным в клинической практике способом — 0,02 % раствором хлоргексидина. Животных выводили из эксперимента передозировкой анестетика через 1, 3, 5 и 7 сут после оперативного вмешательства.
Результаты. До проведения санации содержание микробных тел кишечной палочки у животных с острым разлитым перитонитом составляло 107—108 в 1 мл экссудата. Через 1 сут после санации брюшины методом ФДТ у выведенных из эксперимента животных число микробных тел значительно снижалось и составляло 102 в 1 мл экссудата, а через 3 сут после операции микрофлоры в брюшной полости не выявляли. В контрольной группе концентрация микробных тел кишечной палочки в 1 мл экссудата составила через 1 сут после операции — 104, через 3 сут — 103, через 5 сут — 102. К 7-м суткам после операции брюшная полость становилась стерильной.
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о высокой стерилизующей способности ФДТ при остром экспериментальном перитоните у крыс, вызванном монокультурой кишечной палочки. Простота способа, его доступность и надежность, исключение термического повреждения брюшины дают основание для дальнейшего изучения применения ФДТ для лечения острого перитонита.
Н.А. Наволокин, Д.А. Мудрак, Н.В. Полуконова, С.А. Тычина, Т.П. Байтман, Н.В. Корчаков, М.О. Воронков, А.Б. Бучарская, Т.Н. Маслякова СРАВНЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ И АНТИКАХЕКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФЛАВОНОИДСОДЕРЖАЩИХ ЭКСТРАКТОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА ЖИВОТНЫХ С ПЕРЕВИТОЙ САРКОМОЙ 45
ГБОУВПО «Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского» Минздрава России, Саратов
Введение. Известно, что наиболее перспективной группой веществ растительного происхождения для создания препаратов являются флавоноиды. Ранее нами было установлено, что флавоноидсодержащие экстракты, наряду с противоопухолевой активностью, способны активировать антиоксидантные системы и снижать скорость пе-рекисного окисления липидов.
Цель исследования — изучить противоопухолевую и ан-тикахексическую активность флавоноидсодержащих экстрактов аврана лекарственного и бессмертника песчаного в эксперименте in vivo на белых крысах с перевитой саркомой 45.
Материалы и методы. Сырье собрано на территории Саратовской области, экстракты аврана и бессмертника получены авторским способом (патент № 2482863). Дизайн эксперимента: животные с перевитой саркомой 45 были разделены на 3 группы. Первая — группа сравнения с опухолью без воздействия. Вторая и третья группы — экспериментальные с многократным внутримышечным введением аврана (доза 110 мг/мл) и бессмертника (доза 1000 мг/мл) в течение 2 нед после достижения опухолями объема 1 см3. Во время эксперимента производили измерение объема опухоли и массы животных. Крыс выводили из экспери-
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
