CC BY
9
УДК 636.2:612.621.9
Шаран М.М., © кандидат бюлопчних наук 1нститут б1ологп тварин УААН, м. Львгв
ЕФЕКТИВН1СТЬ ЗАСТОСУВАННЯ ФОЛ1КОТРОП1НУ У СКЛАД1 Л1ПОСОМАЛЬНО1 ЕМУЛЬСП ДЛЯ ШДУКЦП ПОЛЮВУЛЯЦП У КОР1В-ДОНОР1В ПРИ БАГАТОРАЗОВОМУ IX ВИКОРИСТАНН1
Наведено дат про результати вивчення впливу фол1кулостимулюючого гормону (ФСГ) з лтосомальною емульсгею на р1вень множинног овуляцп та яюсть ембрюпродукци у коргв-доноргв. Встановлено, що дворазова гнекцгя препарату ФСГ у складг лтосомально'г емульсп викликае множинну овуляцт у коргв-доноргв на ргвнг стандартног схеми введення «Фолгкотропгну», кглькгсть морфолог1чно якгсних ембрюшв при цьому приблизно однакова. Застосування комплексу лтосома-ФСГ для ¡ндукцИ' множинног овуляцп у коргв забезпечуе одержання стабыьтших результат1в ембрюпродукци (быя 4 доброякгсних ембр1отв) протягом усього пергоду використання посттних доноргв.
Ключовi слова: корова-донор, множинна овуляц1я, ембрюн, ембргопродукцгя, фолжулостимулюючий гормон, фолжотротн.
Вступ. Дослщження методу викликання множинно! овуляци у корiв спрямоваш на максимальне одержання морфолопчно яюсних ембрюшв [1]. Проте шдукування яюсно! i стабшьно! полювуляцп донорiв ВРХ залишаеться одшею з проблем сучасно! трансплантаци ембрюшв [2]. Хоч вказаному технолопчному етапу присвячена значна частина наукових дослщжень, у практичнш ембрюлогп за результатами ембрюпродуктивност спостерiгаеться висока варiабельнiсть. При цьому лише 60 % корiв-донорiв реагують полiовуляцiею i 60 % ембрiонiв вiд кшькост отриманих е життездатними [3, 4].
Для шдукци полювуляцп застосовують два гонадотропних препарати: гонадотропiн сироватки жеребних кобил (ГСЖК) i фолiкулостимулюючий гормон (ФСГ). Використання ФСГ е ефектившшим, оскшьки дае стабiльнiшi результати ембрюпродукци, швидше проходять iнволюцiйнi процеси в матщ i яечниках, що дозволяе використовувати корiв-донорiв 2-4 рази на рш [5, 6].
Однак, застосування ФСГ передбачае багаторазовi внутрiшньом'язовi ш'екци 8-10 разiв, що викликае додатковi стреси, а також трудовi затрати. У зв'язку з цим дослщники намагалися застосовувати пролонгуючi речовини рiзного походження, проте добитися стабiльних результат !м не вдалося.
Чисельнi л^ературш данi у галузi бюлоги i медицини вказують на ефективнiсть застосування лшосом (водних суспензiй фосфолiпiдiв), як використовуються для введення рiзних лжарських i косметичних форм в оргашзм з метою тривало! !х дп [7, 8]. У ветеринарнiй практицi зроблена ефективна спроба використання лшосомально! емульси для стимуляцп репродуктивно! функцп корiв [9, 10].
© Шаран М.М., 2008
419
У зв'язку з цим метою наших дослщжень було з'ясування ефективност застосування лшосомально! емульси у комплекс з ФСГ для викликання множинно! овуляцп у корiв-донорiв при багаторазовому !х використаннi.
Матер1ал 1 методи. Дослiдження проведенi у СП «Укра!на-Лайвсток» на коровах чорно-рябо! голштишзовано! худоби вiком 4-7 роюв.
Було вiдiбрано 48 корiв i сформовано 4 групи: контрольну i три дослiднi. Гормональну iндукцiю множинно! овуляцп проводили, використовуючи препарат ФСГ «Фолжотропш» (Чехiя) за традицiйною 4-денною схемою, суть яко! полягала у наступному:
1. Дворазове введення естрофану в сумарнiй дозi 1000 мкг клопростенолу з iнтервалом 11 дшв.
2. 0-й день - статева охота (спостереження за проявами).
3. Введення фолжотрошну:
8-й день 8 год. - 80 1О (2 фл). 20 год. - 80 1О (2 фл.);
9-й день 8 год. - 40 1О (2 фл.) 20 год. - 40 1О (2 фл.);
10-й день 8 год. - 40 1О (1 фл.) + 20 год. - 40 1О (1 фл.); 2 мл естрофану
11-й день 8 год. - 40 1О (1 фл.) 20 год. - 40 1О (1 фл.);
4. 12-й день 16 год. - штучне оаменшня;
5. 13-й день 9 год. I 16 год. - штучне оЫменшня;
6. 19-й день - вимивання ембрюшв i !х морфолопчна ощнка. Коровам-донорам дослщних груп шдукщю суперовуляци проводили
дворазовим введенням фолжотрошну з використанням лшосомально! емульси, у склад яко! входили: трив^ - 4 мл, лецитин - 1 мл, твш - 0,2 мл (табл. 1).
Таблиця 1
Схема шдукцн множинноУ овуляцп у ко|Мв-донор1в
3
дослщна 10
140
1О на 8-й
день та
140
1О на 10-й день + 2 мл естрофану
Штучне осшеншня корiв-донорiв проводили цервшальним методом з ректальною фшсащею шийки матки, використовуючи подвшну дозу сперми буга!в голштинсько! породи згщно iз закрiпленням.
Нехiрургiчне вимивання ембрюшв проводили, застосовуючи катетери МтйиЬ (Нiмеччина) згiдно з методикою, описаною у Довiднику з репродуктивно! бютехнологи [11]. Ембрiони були використанi у дослщженнях з крiоконсервацi! i трансплантаци реципieнтам.
Показ ники
Кшью сть кор1в-донор1в
Спос1 б викликання множинно! овуляцп
контро льна
12
400 1О
за
вищевказаною схемою
1
дослщна 14
Групи тварин
на 8
на
+
200 1О -й день та 200 1О 10-й день 2 мл
естрофану
2
дослщна 12
160
1О на 8-й
день та
160
1О на 10-й день + 2 мл естрофану
420
Наступним етапом роботи були повторш шдукцн полювуляци у пщдослщних rapÎB, якi проводили згщно розроблених нами схем, що передбачали застосування методiв, спрямованих на завершення iнволюцiйних процесiв у статевих органах донорiв при багаторазовому використаннi [11].
Отримат цифрое1 дат опрацьовували статистично за допомогою программ Microsoft Office Excel.
Результати дослщження. Аналiзуючи результати дослщжень, слiд вiдзначити, що дворазова ш'екщя препарату ФСГ (доза 400 10) у складi лiпосомальноï емульси викликае множинну овуляцiю у корiв-донорiв на рiвнi стандартно! схеми введення «Фолжотрошну». Застосування «Фолжотрошну» з лшосомальною емульсiею забезпечуе одержання понад 4 морфолопчно якiсних ембрiони, що становить 57,8 % вщ загально! кшькост вимитих ембрiонiв. Зменшення дози «Фолжотротну» на 20,0 % i 30,0 % у складi лiпосомальноï емульси знижуе кiлькiсть доброякiсних ембрiонiв у корiв-донорiв вiдповiдно на 60,0 % (p<0,01) та у 2 рази (p<0,001).
Враховуючи те, що застосування «Фолжотрошну» у дозi 400 10 у складi лiпосомальноï емульсiï викликало найвищi результати полi овуляцiï i ембрюпродукцн, у подальших дослiдженнях ми використовували вказану дозу препарату.
Аналiзуючи рiвень полiовуляцiï, слiд вiдзначити, що суттевох' рiзницi мiж контрольною i дослщною групами корiв при всiх гормональних обробках не встановлено. Проте, з кожною черговою iндукцiею множинноï овуляцп у донорiв контрольноï групи спостер^аеться тенденцiя до бiльшоï розбiжностi за рiвнем полiовуляцiï (табл. 2).
Таблиця 2
Р1вень множннноУ овуляцн та якчсть ембршшв при багаторазовому використанш кор1в-донор1в
Кратнiсть шдукцп полювуляцп
Показники перша друга третя
к Д К Д К Д
Кшькють 111111
K0piB^0H0piB, n 2 4 2 3 0 2
Пр°реагува g 9 7 8 6 8
П0%п0лi0вуляцieю, _66,7 _64,3 ' _58,3 _61,5 -60,0 -66,7
9 9 8 8 7 8
PiBeHb ,25± ,00± ,71± ,87± ,83± ,12±
полювуляцп, M±m С 1 С С С С
,85 ,01 ,83 ,95 ,75 ,94 Одержано 6 7 7 6 6 6
ембрюшв на ,75± ,11± ,00± ,62± ,50± ,12±
донора, всього 0 0 0 0 0 0
M±m ,62 ,78 ,83 ,58 ,64 ,54
444433 доброякюни ,00± ,11± ,14± ,00± ,50± " ,87± х, M±m С С С С С С
,36 ,42 ,33 ,26 ,27 ,33 дегенерован 2 2 2 1 2 1
421
их, М±т ,00± ,22± ,14± ,87± ,33± ,75±
С 0 0 0 0 0
,18 ,20 ,17 ,16 ,18 ,15*
0 0 0 0 0 0
яйцекл1тин, ,75± ,78± ,71± ,75± ,67± ,50±
М±т 0 0 0 0 0 0
,09 ,10 ,08 ,07 ,07 04**
Примтка: статистична в1рог1дтсть м1ж контрольною I дослгдною групами* -р<0,05, ** - p<0,01; К — контрольна IД — дослгдна групи тварин.
При кожнш наступнш шдукци множинно! овуляци кшькють морфолопчно яюсних ембрюшв зменшувалася. Так, за результатами першо! i друго! шдукци полювуляци одержано майже однакову кшькють доброякiсних ембрiонiв (4,00-4,14) та незаплщнених яйцеклiтин (0,71-0,78). Натомкть пiсля друго! iндукцil суперовуляци у дослщних донорiв одержали дегенерованих ембрюшв на 12,7 %, а тсля третьо! — на 24,9 % (р<0,05) менше порiвняно з контрольними тваринами.
Шсля третьо! iндукцi! множинно! овуляцi! кшьюсть морфологiчно якiсних ембрiонiв у корiв контрольно! групи зменшилася на 15,5 %, в той час як у донорiв дослщно! групи вона майже не змшилася i становила 3,87±0,33. Крiм того, кiлькiсть незаплщнених яйцекл^ин у корiв дослiдно! групи на 33,3 % менша (р<0,01), нiж пiсля друго! iндукцi! полювуляци. Це свiдчить про те, що введення препарату ФСГ у складi лiпосомально! емульсi! забезпечуе точнiшу синхроншсть овуляцi! за рахунок продовження тривалоси дi! гонадотропiну.
Таким чином, iндукцiя полiовуляцi! у корiв-донорiв за допомогою препарату ФСГ у складi лшосомально! емульсi! дозволяе при менших стресових навантаженнях та трудових затратах забезпечити задовшьш результати ембрюпродукци.
Застосування комплексу лiпосома-препарат мае ряд переваг перед використанням лише препараив. По-перше, лiпосоми дозволяють доставляти в кл^ини-мшеш гормони, перiод пiврозпаду яких короткий. По-друге, препарат, шкапсульований в лшосоми, забезпечуе бiльший ефект, оскiльки час його ди збiльшуеться [12].
Отже, використання комплексу лшосома-ФСГ забезпечуе дозовану дiю гормону на функцiю яечниюв, що проявляеться одержанням достатньо! кшькоси морфологiчно повноцiнних ембрiонiв при багаторазовому використаннi корiв-донорiв.
Висновки.
1. Дворазова ш'екщя препарату ФСГ у складi лiпосомально! емульсi! викликае множинну овуляцш у корiв-донорiв на рiвнi стандартно! схеми введення «Фолжотротну».
2. Застосування комплексу лшосома-ФСГ для шдукцп множинно! овуляци у корiв забезпечуе «м'якше» проходження iнволюцiйних процесiв у статевих органах, що виражаеться в одержанш стабiльнiших результатiв ембрiопродукцi! (бiля 4 доброякюних ембрiонiв) протягом усього перюду використання постiйних донорiв.
422
Лггература
1. Бугров А. Д. Значение генетических и паратипических факторов при получении эмбрионов от коров-доноров [Текст]: Сучасш методи репродукци сшьськогосподарських тварин: стан i перспективи розвитку /Бугров А. Д., Ткачева И. В., Погорелов А. С. — Матер. мiжнар. наук.-практ. конф. 2930.01.08. — Харюв, 2008. — С 76-80.
2. Мадисон В.В. Полиовуляция коров-доноров — поиск продолжается. Гонадотропины для индуцирования полиовуляции [Текст]: Сучасш методи репродукци сшьськогосподарських тварин: стан i перспективи розвитку /Мадисон В. В., Мадисон Л. В. — Матер. мiжнар. наук.-практ. конф. 2930.01.08. — Харюв, 2008. — С 258-260.
3. Бугров О.Д. Трансплантация ембрюшв у молочному скотарст [Текст]: /Бугров О. Д. Тваринництво Укра!ни. — К. 1996. — №10. — С 14-15.
4. Осташко Ф. И. Биотехнология воспроизведения крупного рогатого скота [Текст]: / Осташко Ф.И. К.: Аграрная наука. — 1995. — 184 с.
5. Сергеев Н. И. Руководство по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота [Текст]: /Сергеев Н. И., Решетникова Н. М., Абилов А. И. и др. Дубровицы — 2008. — 115 с.
6. Шаловило С. Г. Розробка наукових i практичних методiв тдвищення ефективност трансплантацп ембрюшв у племшному скотарствi [Текст] : автореф. дис. ... д-ра с.-г. наук : 22.05.96 / Степ. Григорович Шаловило; [Украшсью технологи]. — Чубинське, 1996.
7. Барсуков Л. И. Липосомы [Текст]: /Соросовский образовательный журнал, 1998. — №10. — С 2-9.
8. Lasic D. D. Liposomes: From Physics to Applications.Amsterdam [Text]: /Lasic D. D. Elsevier, 1993.
9. Сливчук Ю. I. Окисно-вщновш процеси в м^охондаях тканин телиць i корiв за умов полювуляцп, викликано! гонадотрошнами [Текст] : автореф. дис. ... канд вет. наук : 17.05.05 / Юрш 1ванович Сливчук; [НВЕД УАД]. — Мв, 2005.
10. Сливчук Ю. I. Вплив фолшотрошну i «Полiфолу» на окремi показники енергетичного обмiну в деяких внутршшх органах статевозрших телиць [Текст]: Бюлопчш та сшьськогосподарсью науки /Сливчук Ю. I. — Аграрний вкник Причорномор'я. — Одеса, 2004. — Вип. 23. — С 167-173.
11. Буркат В. П. Довщник з репродуктивно! бютехнологн велико! рогато! худоби [Текст] : довщник /Буркат В. П., Кравщв Р. Й., Влiзло В. В. i ствавт. За редакщею Шаловила С. Г. — Львiв, — 2004. —150 с.
12. Марголис Л. Б. Липосомы и их взаимодействие с клетками [Текст]: /Марголис Л. Б., Бергельсон Л. Д. — М.: Наука, 1986.
Summary M.M. Sharan
EFFECTIVENESS OF FOLICOTROPINE AS A COMPONENT OF LIPOSOMAL EMULSION FOR INDUCTION OF POLIOVULATION IN
COWS-DONORS BY ITS REPEATED USE.
423
The results of studying the influence of foliculostimulating hormone (FSH) with liposomal emulsion upon level of multiple ovulation and embryoproduction quality in cows-donors are shown. Revealed, that twice injected FSH preparation in composition of liposomal emulsion induces multiple ovulations in cows-donors with the number of morphologically qualitative embryos on nearly the same level as after standard scheme of FSH treatment. The use of liposome-FSH complex for induction of multiple ovulations in cows provides the obtainment of much stable results of embryoproduction (around 4 good-quality embryos) during all period of permanent donor usage.
Стаття надшшла до редакцИ 9.04.2008
424
