CC BY
18
Оригинальные статьи 57
доклиническое изучение токсичности нового противогрибкового препарата амфамид
и.д. трещалин, в.А. Голибродо, м.и. трещалин, А.н. тевяшова, Э.р. Переверзева
ФГБНУ«Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе»; Россия, 119021 Москва, ул. Большая Пироговская, 11, стр. 1
Контакты: Иван Дмитриевич Трещалин idtivan@yandex.ru
Введение. Амфотерицин В остается препаратом первого выбора в лечении большинства тяжелых системных грибковых инфекций. Однако он характеризуется очень низкой растворимостью и высокой токсичностью. В ФГБНУ «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе» («НИИНА») было получено полусинтетическое производное амфотерицина В — амфамид, имеющее ряд преимуществ перед амфотерицином в экспериментах in vivo. Цель исследования — доклиническое изучение токсикологической безопасности лекарственной формы амфамида в хроническом эксперименте на крысах.
Материалы и методы. Исследование проведено на крысах Wistar, самках и самцах. Амфамид в лекарственной форме вводили ежедневно внутрибрюшинно в течение 30 дней в дозах, суммарно составляющих максимально переносимую дозу и ЛД50 (разовые дозы 0,07 и 0,17мг/кг соответственно). В ходе исследования определяли массу тела, проводили клинический и биохимический анализ крови, анализ мочи, снимали электрокардиограмму. На 1-е и 30-е сутки по окончании курса животных подвергали эвтаназии. Определяли массовые коэффициенты сердца, печени, почек, селезенки и тимуса, проводили патомор-фологическое исследование внутренних органов.
Результаты. Показано, что введение амфамида приводит к увеличению содержания мочевины и креатинина в сыворотке крови, изменению состава мочи и увеличению ее удельного веса. При патоморфологическом исследовании найдены повреждения структуры почек, печени, легких, желудка и семенников, интенсивность которых зависела от дозы препарата. У животных, получавших препарат в низкой дозе, структура этих органов к концу наблюдения полностью восстанавливалась. При использовании амфамида в высокой дозе найдены морфологические признаки токсической кардиомиопатии. Заключение. Данные клинико-лабораторных исследований, подтвержденные результатами патоморфологического изучения структуры почек, свидетельствуют о том, что нефротоксичность является основным лимитирующим видом токсичности препарата. Изменения, возникающие под действием амфамида, зависят от величины примененной дозы и обратимы в течение месяца, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения.
Ключевые слова: амфамид, полиены, противогрибковый антибиотик, хроническая токсичность, крысы
Для цитирования: Трещалин И.Д., Голибродо В.А., Трещалин М.И. и др. Доклиническое изучение токсичности нового противогрибкового препарата амфамид. Российский биотерапевтический журнал 2020;19(3):57—64.
DOI: 10.17650/1726-9784-2020-19-3-57-64
PRECLINICAL TOXICITY STODY oF THE NEw ANTIFuNGAL DRuG AMPHAMIDE
I.D. Treschalin, V.A. Golibrodo, M.I. Treschalin, A. N. Tevyashova, E.R. Pereverzeva
Gause Institute of New Antibiotics; Bld. 1, 11B. Pirogovskaya St., Moscow 119021, Russia
Introduction. Amphotericin B remains the drug of first choice in the treatment of most severe systemic fungal infections. However, it is characterized by very low solubility and high toxicity. Amphamide — semisynthetic derivative of Amphotericin B — have been prepared at the Gause Institute of New Antibiotics. It showed several advantages over amphotericin B in vivo.
Objective. The aim of the study was to investigate the toxicological safety of amphamide drug formulation in chronic experiment on rats. Materials and methods. The study was performed in male andfemale Wistar rats. Amphamide drug formulation was injected intraperi-tonealy at the total doses of MTD and LD0 (30 x 0,07mg/kg or 30 x 0,17mg/kg with 24-h interval). During the experiment body weight, hematological parameters, blood biochemical parameters, electrocardiography and urinalysis were performed. Animals were sacrificed on 1st and 30th day after the end of treatment. At necropsy, the mass coefficients of heart, liver, kidneys, spleen and thymus were calculated. The internal organs were subjected to histological evaluation.
Results It has been shown that the treatment with total dose of amphamide produces an increase of urea and creatinine level in serum, changes in urine composition and its specific gravity. Microscopic pathology observation showed dose-dependent structure abnormalities in kidneys, liver, lungs, stomach, and testes. Multiple administration of low dose of the drug produces transient toxic effects completely reversible within 30 days. When amphamide was used in a high dose, morphological signs of toxic cardiomyopathy were found.
SB Оригинальные статьи
Conclusion. The results of the clinical and laboratory studies and microscopic pathology observation of kidneys demonstrate that nephrotoxicity is the main limiting type of drug toxicity. Dose dependence and reversibility within a month of toxic effects of amphamide allows us to recommend it to further advance. Key words: amphamide, polyenes, antifungal antibiotic, chronic toxicity, rats For citation: Treschalin I.D., Golibrodo V.A., Treschalin M.I. et al. Preclinical toxicity study of the new antifungal drug amphamide. Rossiyskiy bioterapevticheskiy zhurnal = Russian Journal of Biotherapy 2020;19(3):57—64. (In Russ.). Введение (амфамид), проявившее ряд преимуществ перед Aмфотерицин В (AмВ) остается незаменимым амфотерицином в экспериментах in vivo [11]. препаратом для лечения тяжелых системных гриб- Цель исследования — изучение хронической ток-ковых инфекций. Открытый в 50-х годах прошлого сичности амфамида на крысах. века, он до сих пор является «золотым стандартом» при лечении системных микозов [1]. Материалы и методы Как и все полиеновые антибиотики, AмВ харак- Работа выполнена в соответствии с этическими теризуется очень низкой растворимостью, поэтому нормами обращения с животными, принятыми Ев-при создании лекарственных форм (ЛФ) для парен- ропейской конвенцией по защите позвоночных жи-терального введения часто используют солюбили- вотных, используемых для исследовательских и иных зирующие агенты [2]. Терапия AмВ сопровождается научных целей [12]. значительными нежелательными эффектами [3, 4]. Исследование проведено на 60 крысах Wistar Приблизительно у SO % пациентов возникают раз- (30 самцах и 30 самках) массой 150—170 г, полученных личные острые побочные реакции (температура, из питомника РAH «Aндреевка». Животных содержа-рвота, головная боль), у 30 % — тяжелые нарушения ли в условиях вивария ФГБHУ «HИИHA» на стан-функции почек [5, 6]. С целью преодоления этих дартном рационе гранулированных кормов со свобод-недостатков в 90-е годы XX в. был инициирован ным доступом к питьевой воде. После 2-недельного поиск новых аналогов с высокой растворимостью карантина было сформировано 6 групп животных и антифунгальной активностью, проведены интен- (по 3 группы самцов и самок) по 10 особей. сивные исследования по разработке новых ЛФ (ли- В работе использован препарат амфамид в ЛФ, посом, эмульсий, наночастиц) [7]. В результате бы- представляющей собой лиофилизат для приготовле-ли созданы такие инновационные продукты, как ния раствора для внутривенного введения. Действу-АмВ-липидные комплексы, липосомальные препа- ющее вещество: L-глутамат ^(2-аминоэтил)амида раты, коллоидные суспензии и др. По биодоступно- амфотерицина В (2 мг в расчете на основание ам-сти липосомальные ЛФ, в частности амбисом, зна- фамида); вспомогательные вещества: 2-(гидрокси-чительно превосходят эмульсии или коллоидные пропил)^-циклодекстрин (10 мг), производитель суспензии. Они позволяют применять высокие (вы- ФГБHУ «HИИHA», Россия. ше в 5 раз и более) дозы по сравнению с раствором Выбор доз для исследования был основан на ре-AмВ без индукции тяжелых побочных эффектов зультатах, полученных при изучении острой токи в настоящее время являются препаратами первого сичности препарата [11]. Лиофилизат растворяли выбора [8]. Однако высокая стоимость лечения в 5 % растворе глюкозы и в 1 % концентрации вводили не позволяет их использовать широко [9]. К тому же внутрибрюшинно ежедневно в течение 30 дней с ин-существуют ограничения по времени и условиям тервалом 24 ч в разовых дозах 0,07 (1/30 максимально-хранения, сложности при стерилизации. Все это переносимой дозы (МПД)) и 0,17 мг/кг (1/30 ЛД50). Кур-заставляет продолжать поиски оптимальных про- совые дозы составили соответственно 2,1 и 5,1 мг/кг). изводных AмВ. Важность этого препарата сохра- Шблюдение продолжали в течение 30 сут после пре-няется еще и потому, что случаи формирования ле- кращения введений препарата. карственной устойчивости к AмВ регистрируются Оценку токсического воздействия амфамида на крайне редко [10]. структуру и функцию органов и тканей животных В ФГБHУ «HИИHA» разработаны методы хими- осуществляли в соответствии с правилами экспери-ческой трансформации полиеновых антибиоти- ментального изучения фармакологических веществ ков. Получены серии полусинтетических аналогов, [13]. H протяжении всего эксперимента наблюдали изучена их биологическая активность [11]. Среди за состоянием и поведением животных, определяли новых соединений, перспективных для дальнейшего их массу тела, производили исследование состава пе-изучения, было отобрано полусинтетическое про- риферической крови (лейкоциты, эритроциты, гемо-изводное ^(2-аминоэтил)амид амфотерицина В глобин, тромбоциты, лейкоформула, гематокрит)
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ I RUSSiAN JOURNAL OF BiOTHERAPY 3'2020 том 19 I vol. 19
при помощи автоматического гематологического анализатора "Abacus Junior Vet" (Diatron, Австрия). С использованием автоматического биохимического анализатора "ChemWell" (Awareness Technology Inc., США) на 1-е и 30-е сутки после окончания курса введений препарата в сыворотке крови определяли уровни аланиновой и аспарагиновой аминотрансфе-разы, щелочной фосфатазы, креатинина, мочевины, билирубина (прямого и общего), общего белка, альбумина и глюкозы. В эти же сроки полуколичественным методом производили клинический анализ мочи (рН, лейкоциты, эритроциты, кетоновые тельца, белок, уробилиноген, удельный вес, глюкоза, нитраты) при помощи автоматического анализатора мочи "Laura Smart" (Erba Lachema, Чехия) и регистрировали электрокардиограмму во 2-м стандартном отведении (электрокардиограф «ЭК1Т-07» (Аксион, Россия)).
На 1-е и 30-е сутки после проведения курса половину животных из каждой группы подвергали эвтаназии. Сердце, печень, почку, селезенку и тимус взвешивали и определяли их массовые коэффициенты. Для патоморфологического исследования участки органов и тканей фиксировали в 10 % нейтральном формалине, по стандартной методике за-
ливали в парафин, срезы окрашивали гематоксилин-эозином. Результаты обрабатывали статистически при помощи компьютерной программы StatPlus 2006 Professional 3.8.0 с применением t-критерия Стью-дента. Различия определяли как достоверные при р <0,05.
Результаты и обсуждение
На протяжении эксперимента отклонений в состоянии и поведении животных подопытных групп не отмечено. Крысы хорошо переносили введение препарата, нормально прибавляли в массе тела. Гематологические показатели оставались в пределах физиологической нормы. Признаков анемии, лейкопении, тромбоцитопении, характерных как для конвенционального АмВ, так и для липосомальных ЛФ [7, 14], обнаружено не было.
При исследовании биохимических показателей сыворотки крови на 1-е сутки после окончания курса введений амфамида в обеих изученных дозах и у самцов, и у самок было отмечено повышение уровня креатинина и мочевины (табл. 1). У животных, получавших препарат в высокой дозе, достоверно повышенный уровень креатинина сохранялся до 30 сут после окончания курса введений.
таблица 1. Содержание креатинина и мочевины в сыворотке крови крыс после курса введений амфамида Table 1. Creatinine and blood urea nitrogen (BUN) in the blood serum of rats post treatment using amphamide formulation
Группа Group Самцы Males Самки Females
креатинин, мкмоль/л мочевина, мкмоль/л креатинин, мкмоль/л мочевина, мкмоль/л
1-е сутки после курса
Контроль Control 80,30 ± 12,09 7,32 ± 1,19 85,84 ± 9,66 7,36 ± 0,69
1/30 МПД х 30/24 1/30 MTD х 30/24 114,84 ± 5,27* 9,74 ± 0,25* 119,96 ± 8,10* 9,78 ± 0,58*
1/30 ЛД50 х 30/24 1/30 LD50 х 30/24 156,22 ± 11,25* 10,30 ± 0,37* 135,06 ± 9,96* 10,62 ± 0,54*
30-е сутки после курса
Контроль Control 92,46 ± 7,83 7,86 ± 0,20 80,96 ± 5,48 7,70 ± 0,21
1/30 МПД х 30/24 1/30 MTD х 30/24 94,36 ± 10,27 7,30 ± 0,66 95,56 ± 8,33 7,16 ± 0,88
1/30 ЛД50 х 30/24 1/30 LD50 х 30/24 101,16 ± 3,59* 7,06 ± 0,98 109,94 ± 8,30* 7,06 ± 1,00
*Различия с контролем достоверны при р <0,05.
Примечание. Здесь и в табл. 2, 3: M — среднее значение; m — стандартное отклонение; МПД — максимально-переносимая доза; ЛД0 — доза половинной выживаемости, среднесмертельная доза. *Differences with the control are significant atp <0.05.
Note. Here and in tables 2, 3: M — average value; m — standard deviation; MTD — maximum-tolerated dose; LD50 — lethal dose 50.
При исследовании состава мочи на 1-е сутки по окончании курса введений амфамида в высокой дозе у самцов и самок были зарегистрированы повышение уровня уробилиногена, белка, нитратов и удельного веса, появление кетоновых тел. Кроме того, независимо от величины примененной дозы у самок в моче были найдены лейкоциты и эритроциты. При применении препарата в низкой дозе у самок также было отмечено повышение уровня белка и удельного веса мочи (табл. 2). На 30-е сутки после окончания курса введений препарата различий между подопытными и контрольными группами не выявлено.
На 1-е сутки после окончания курса введений препарата в обеих изученных дозах и у самцов, и у самок было выявлено увеличение массовых коэффициентов почек. На 30-е сутки их значения не отличались от контроля (табл. 3).
Признаки нефротоксического действия препарата были обнаружены и при патоморфологическом исследовании. Курсовое введение амфамида приводило к развитию экстракапиллярного гломерулонеф-рита, который выражался в гиперплазии париетального эндотелия клубочков в виде полулуний, атрофии их капиллярной сети (рис. 1а, б), а также дистрофических, атрофических и деструктивных изменениях эпителия канальцев (рис. 1в). Масштаб патологиче-
ских изменений и скорость репарации зависели от величины примененной дозы препарата. Так, при применении амфамида в дозе, суммарно составляющей МПД, на 1-е сутки после курса были найдены единичные небольшие очаги некроза извитых канальцев. Утолщение париетального листка капсулы, очаговая деструкция капиллярной сети были отмечены в единичных клубочках юкстамедуллярной зоны. При введении амфамида в высокой дозе множественные изменения такого же характера обнаружены не только в юкстамедуллярной, но и в корковой зоне. На месте поврежденных дистальных канальцев формировались кисты.
К 30-м суткам по окончании курса введений у большинства животных, получавших амфамид в низкой дозе, структура почек не отличалась от контроля. У 2 самцов и 2 самок, получивших суммарно дозу, равную ЛД50, морфологических изменений ткани почек на этот срок наблюдения не найдено. У остальных в корковой и юкстамедуллярной зонах встречались единичные клубочки с фиброзированной капсулой или рубцующиеся клубочки и очаги некроза извитых канальцев в состоянии организации (рис. 1г).
Изучение патологических изменений внутренних органов крыс показало, что применение препарата в обеих дозах вызывает изменения тканей печени, легких, желудка и семенников. У животных, получавших
Таблица 2. Клинический анализ мочи крыс на 1-е сутки после курса введений амфамида Table 2. Clinical analysis of rat urine post treatment using amphamide formulation
Группа Group Эритроциты, ед/мкл Erythrocytes, u/Hl Лейкоциты, ед/мкл Leucocytes, u/Hl Уробилиноген, мкмоль/л Urobilinogen, Hmol/l Кетоны, ммоль/л Нитраты И Белок, % Protein, % Удельный вес, г/л
Самцы
Контроль Control - - - - - 0-0,3 1,020-1,024
1/30 МПД x 30/24 1/30 MTD x 30/24 - - - - - 0-0,3 1,021-1,022
1/30 ЛД50 x 30/24 1/30 LD50 x 30/24 - - 10-17* 0-0,05* + 0,3-0,5* 1,025-1,030*
Самки
Контроль Control - - - - - 0-0,3 1,024-1,026
1/30 МПД x 30/24 1/30 MTD x 30/24 0-10 0-10 - - - 0,3-0,5* 1,027-1,030*
1/30 ЛД50 x 30/24 1/30 LD50 x 30/24 0-10 10-15 10-17* 0-0,07* + 0,5-0,7* 1,028-1,031*
*Значение превышает контроль. *Value is greater than the control.
таблица 3. Массовые коэффициенты почек крыс после курса введений амфамида Table 3. Weight indices of rat kidneys post treatment using amphamide formulation
Группа Group массовый коэффициент почки (м ± m)
1-е сутки после курса 30-е сутки после курса
Самцы
Контроль Control 0,22 ± 0,02 0,23 ± 0,04
1/30 МПД х 30/24 1/30 MTD х 30/24 0,28 ± 0,03* 0,23 ± 0,02
1/30 ЛД50 х 30/24 1/30 LD50 х 30/24 0,29 ± 0,01* 0,24 ± 0,01
Самки
Контроль Control 0,24 ± 0,02 0,25 ± 0,01
1/30 МПД х 30/24 1/30 MTD х 30/24 0,27 ± 0,0* 0,26 ± 0,02
1/30 ЛД50 х 30/24 1/30 LD50 х 30/24 0,29 ± 0,02* 0,26 ± 0,02
*Различия с контролем достоверны при р <0,05. *Differences with the control are significant atp <0.05.
рис. 1. Почка крысы: а — контроль; б — амфамид, 0,17 мг/кг х 30; 1-е сутки после курса; в клубочке утолщение париетального листка капсулы в виде полулуния, атрофия капиллярной сети; в — амфамид, 0,17 мг/кг х 30; 1-е сутки после курса; очаги некроза извитых канальцев вокруг сосуда и клубочков, кисты; г — амфамид, 0,17 мг/кг х 30; 30-е сутки после курса; очаг некроза канальцев в стадии организации; фиброз капсулы клубочка и капиллярных петель; окраска гематоксилин-эозином. х200
Fig. 1. Rat kidney: a — control; б — amphamide, 30 х 0,17 mg/kg/day; 1 day post treatment; thickening of the parietal leaf of the glomerulus capsule in the form of a half moon, atrophy of the capillary network; в — amphamide, 30 х 0,17 mg/kg/day; 1 day post treatment; necrotic foci of convoluted tubules around blood vessels and glomeruli, cysts; г — amphamide, 30 х 0,17 mg/kg/day; 30 day post treatment; the focus of tubal necrosis in the stage of organization; fibrosis of the glomerular capsule and capillary loops; staining with haematoxillin-eosin. х 200
Рис. 2. Легкое крысы: а — контроль; б — амфамид, 0,07 мг/кг х 30; 1-е сутки после курса; полнокровие капилляров альвеолярных перегородок, стаз крови в венулах; в — амфамид, 0,17 мг/кг х 30; 1-е сутки после курса;резкая гипертрофия мышечной оболочки крупной артерии; окраска гематоксилин-эозином. х 200
Fig. 2. Rat lung: a — control; б — amphamide, 30 х 0,07 mg/kg/day; 1 day post treatment; congested alveolar capillaries, blood stasis in the venules; в — amphamide, 30 х 0,17 mg/kg/day; 1 day post treatment; pronounced thickening of the medial layer of arteriolar wall; staining with haematoxillin-eosin. х 200
Рис. 3. Желудок крысы: а — контроль; б — амфамид, 0,17 мг/кг х 30; 1-е сутки после курса; преобладание обкладочных клеток в области дна желез, активация их функции в области тела; в — амфамид, 0,17мг/кг х 30; 30-е сутки после курса; единичные кисты в области тела желез; окраска гематоксилин-эозином. х200
Fig. 3. Rat stomach: a — control; б — amphamide, 30 х 0,17 mg/kg/day; 1 day post treatment; prevalence of the parietal cells in the bottom of the gastric glands, activation of theirfunction in the body of the gastric glands; в — amphamide, 30 х 0,17 mg/kg/day; 30 day post treatment; single cysts in the body of the gastric glands; staining with haematoxillin-eosin. х200
препарат в курсовой дозе, составляющей МПД, структура печени, слизистой оболочки желудка, легкого и сперматогенного эпителия к концу наблюдения полностью восстанавливалась.
При использовании амфамида в курсовой дозе, равной ЛД50, у части крыс сразу после курса введений были найдены мелкие очаги отека и токсической кар-диомиопатии. К концу эксперимента эти явления нарастали и наблюдались уже у всех животных.
Гепатотоксические свойства амфамида морфологически проявлялись в виде очаговых дистрофических и деструктивных изменений гепатоцитов. При применении амфамида в дозе, суммарно составляющей ЛД50, у отдельных животных на 30-е сутки после курса были обнаружены единичные мелкие очаги микронекроза с признаками организации.
У крыс, получавших амфамид в обеих изученных дозах, в легком были выявлены полнокровие капилляров альвеолярных перегородок, стаз крови в сосудах малого калибра (рис. 2а, б), а при использовании высокой дозы препарата еще и резкая гипертрофия медии крупных артерий (рис. 2в). Изменения такого рода
являются морфологическим признаком артериальной гипертензии, которая может быть следствием повреждающего воздействия амфамида на структуру почек.
При курсовом введении амфамида в низкой дозе изменения структуры слизистой оболочки желудка были связаны, главным образом, с транзиторной активацией функции главных клеток. Использование препарата в высокой дозе приводило к уменьшению числа главных клеток в области дна желез, активации функции обкладочных клеток в области тела желез (рис. 3а, б), а на отдельных участках и к деструкции эпителия желез с образованием кист. Через месяц после курса в слизистой оболочке желудка были найдены единичные кисты (рис. 3в). В остальном ее структура практически не отличалась от контроля.
Применение амфамида в суммарной дозе, равной ЛД50, приводило к дискомплексации сперматогенного эпителия в значительной части канальцев. К концу эксперимента у большинства животных структура органа восстанавливалась. Лишь у отдельных животных в единичных канальцах все еще можно было обнаружить незрелые клетки.
Таким образом, основным лимитирующим видом токсичности амфамида, также как и АмВ, является нефротоксичность. Клиническая и морфологическая картина повреждения почек при его применении практически такая же, как при использовании АмВ, поэтому можно предположить, что механизм нефротоксичности этих препаратов идентичен и определяется как сродством к холестерину, так и способностью резко снижать скорость клубочковой фильтрации за счет вазоконстрикции [15, 16].
Как и АмВ, амфамид обладает гепатотоксиче-скими свойствами, но если введение АмВ приводит к нарушениям функции печени [4], то амфамид в переносимой дозе вызывает минимальные морфологические изменения этого органа, полностью обратимые в течение месяца.
Внутривенная инфузия АмВ часто сопровождается резким снижением уровня калия в крови, что приводит к изменениям функции сердца (гипер-тензии, гипотензии, брадикардии, вентрикулярной аритмии) [17]. В наших экспериментах на крысах эти явления обнаружены не были, однако при пато-морфологическом исследовании миокарда установлено, что при введении препарата в курсовой дозе, равной ЛД50, у животных развивается токсическая кардиомиопатия. В литературе, посвященной исследованиям побочного действия АмВ, описаны еди-
ничные случаи токсической кардиомиопатии у пациентов, длительно получавших препарат [4].
Поскольку изменения структуры внутренних органов крыс, возникающие под действием амфамида, зависят от величины примененной дозы и в большинстве случаев обратимы в течение 30 сут, препарат можно рекомендовать для дальнейшего изучения.
Выводы
Применение амфамида в изученных дозах не оказывает влияния на клинико-лабораторные показатели функции органов и систем крыс, за исключением тех, которые характеризуют функцию почек.
Нефротоксичность является лимитирующим видом токсичности амфамида, что подтверждается как клинико-лабораторным, так и патоморфологи-ческим исследованием. Степень ее проявления и обратимость токсического действия зависят от величины примененной дозы препарата.
Применение препарата приводит к повреждению структуры печени, легкого, семенников и желудка. У животных, получавших амфамид в дозе, суммарно составляющей МПД, морфологическое строение этих органов полностью восстанавливается через месяц после курса.
Кардиотоксические свойства амфамида проявляются только морфологически при введении препарата в высокой дозе.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
1. Anderson C.M. Sodium chloride treatment of amphotericin B nephrotoxicity — standard of care? West J Med 1995;162(4):313-7. PMID: 7747495.
2. Plumb D.C. Veterinary Drug Handbook. PharmaVet. Publishing, White Bear Lake, USA, 1999. 853 p.
3. Johnson R.H., Einstein H.E. Amphotericin B and coccidioidomicosis. Ann NY Acad Sci 2007;1111:434-41. DOI: 10.1196/annals.1406.019.
4. Laniado-Laborin R., Cabrales-Vargas M.N. Amphotericin B: side effects and toxicity. Rev Iberoam Micol 2009;26(4):223-7.
DOI: 10.1016/j.riam.2009.06.003.
5. Ostrosky-Zeichner L., Marr K.A., Rex J.H., Cohen S.H. Amphotericin B: time for a new "gold standard". Clin Infect Dis 2003;37:415-25.
DOI: 10.1086/376634.
6. Sawaya B.P., Briggs J.P., Schnermann J. Amphotericin B nephrotoxicity:
the adverse consequences of altered membrane properties. J Am Soc Nephrol 1995;6:154-64. PMID: 7579079.
7. Lemke A., Kiderlen A.F., Kayser O. Amphotericin B. Applied Microbiol
Biotechnol 2005;68(2):151-62. DOI: 10.1007/s00253-005-1955-9.
8. Hamill R.J. Amphotericin
B formulations: a comparative review of efficacy and toxicity. Drugs 2013;73(9):919-34. DOI: 10.1007/s40265-013-0069-4.
9. Borba H.H.L., Steimbach L.M., Riveros B.S. et al. Cost-effectiveness of amphotericin B formulations
in the treatment of systemic fungal infections. Mycoses 2018;61(10):754-63. DOI: 10.1111/mic.12801.
10. Kaur L., Abhijeet J.S.K. Safe and Effective Delivery of Amphotericin B: A Survey of Patents. Recent Pat Nanotech-nol 2017;11(3):214-34. DOI: 10.2174/ 1872210511666170105130210.
11. Tevyashova A. N., Bychkova E.N., Solovieva S.E. et al. Discovery
of Amphamide, a Drug Candidate for the Second Generation of Polyene Antibiotics. ACS Infect Dis 2020;6:2029-44. ttps://dx.doi. org/10.1021/acsinfecdis.0c00068
12. European Convention for the protection of vertebrate animals used for experimental and other scientific purposes (Council of Europe), ETS No. 123, 1986.
13. Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. М., 2008. [Guskova T.A. Drug toxicology. Moscow, 2008. (In Russ.)].
14. Fielding R.M., Singer A.W., Wang L.H. et al. Relationship of pharmacokinetics and drug distribution in tissue
to increased safety of amphotericin B colloidal dispersion in dogs. Antimicrob Agents Chemother 1992;36(2):299-307. DOI: 10.1128/aac.36.2.299.
15. Fanos V., Cataldi L. Amphotericin B-induced nephrotoxicity: A review. J Chemother 2000;12(6):463-70. DOI: 10.1179/joc.2000.12.6.463.
16. Sabra R., Takahashi K.,
Branch R.A., Badr K.F. Mechanisms of amphotericin B induced reduction of the glomerular filtration rate: a micropuncture study. J Pharmacol Exp Ther 1990;253:34-7. PMID: 2329517.
17. Danaher P.J., Cao M.K., Anstead G.M., Matthew J. et al. Reversible dilated cardiomyopathy related to amphotericin B therapy. J Antimicrob Chemother 2004;53:115-7.
DOI: 10.1093/jac/dkg472.
64 Оригинальные статьи
Вклад авторов
И.Д. Трещалин: руководство доклиническими исследованиями препарата, анализ полученных результатов, написание статьи;
В.А. Голибродо: получение данных для анализа, введение препарата, исследование мочи, статистическая обработка данных;
М.И. Трещалин: биохимическое исследование сыворотки крови, получение данных для анализа, статистическая обработка данных;
А.Н. Тевяшова: разработка субстанции и лекарственной формы амфамида, наработка препарата для проведения исследования;
Э.Р. Переверзева: патоморфологическое исследование внутренних органов животных, анализ полученных результатов, написание
статьи.
Authors contributions
I.D. Treschalin: a guide to preclinical studies of the drug, analysis of the obtained results, writing an article; V.A. Golibrodо: receiving data for analysis, drug administration, urinalysis, statistical data processing;
M.I. Treschalin: biochemical analysis of blood serum, hematological analysis of peripheral blood, data analysis, statistical data processing;
A.N. Tevyashova: development of substances and drug formulation of amphamide, production of the drug to conduct the study; E.R. Pereverzeva: pathomorphological evaluation of internal organs of animals, analysis of the results obtained, writing an article.
ORCID авторов / ORCID of authors
И.Д. Трещалин / I.D. Treschalin: https://orcid.org/0000-0001-7331-5490
B.А. Голибродо / V.A. Golibrodo: https://orcid.org/0000-0001-8643-6427 М.И. Трещалин / M.I. Treschalin: https://orcid.org/0000-0002-5652-8686 А.Н. Тевяшова / A.N. Tevyashova: https://orcid.org/0000-0003-1091-1011 Э.Р. Переверзева / E.R. Pereverzeva: https://orcid.org/0000-0001-7368-9695
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Финансирование. Исследование проведено без спонсорской поддержки. Financing. The study was performed without external funding.
Статья поступила: 18.06.2020. Принята в печать: 17.09.2020. Article submitted: 18.06.2020. Accepted for publication: 17.09.2020.
