CC BY
5© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018
О.Ю.Старостина1, А.Н.Летюшев2, С.М.Костюченко1, Н.Ю.Григорова3, А.Н.Коломеец1, В.В.Якименко1, Е.В.Дондукова3, К.С.Бондарчук3
ДИРОФИЛЯРИОЗ В ГОРОДЕ ОМСКЕ
1ФБУН «Омский НИИ природно-очаговых инфекций» Роспотребнадзора, г. Омск, 2Управление Роспотребнадзора по Омской области, г. Омск, 3ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Омской области», г. Омск
Представлены результаты паразитологических и молекулярно-биологических исследований на диро-филяриоз как переносчиков (комаров), так и крови домашних собак на территории г. Омска. Кроме того, проанализированы эпидкарты пациентов, зараженных дирофиляриями за период 2013 г. — февраль 2017 г.
Комаров собирали преимущественно в черте города. ДНК дирофилярий обнаружили в переносчиках, отловленных в различных районах города. В отдельных точках зараженность комаров составила 37,8+8,1%. По результатам паразитологических исследований зараженность домашних собак составила 3,2+0,8%. Из 15 зараженных животных 8 не вывозились за пределы Омской области. Методами ПЦР и секвенирования в окончательных хозяевах (собаках) и переносчиках (комарах) выявлено 2 вида дирофилярий: Dirofilaria repens и Dirofilaria immitis. У 11 из 16 инвазированных дирофиляриями жителей Омской области заражение расценено как местное. Делается вывод, что на территории г. Омска сформированы и функционируют очаги дирофиляриоза.
Ключевые слова: дирофиляриоз, зараженность дирофиляриями собак, зараженность дирофиляриями комаров, очаги дирофиляриоза.
O.Yu.Starostina1, A.N.Letyushev2, S.M.Kostyuchenko1, N.Yu.Grigorova3, A.N.Kolomeets1, V.V.Yakimenko1, E.V.Dondukova3, K.S.Bondarchuk3
DIROFILARIASIS IN THE CITY OF OMSK
'Omsk Research Institute of Feral Herd Infections, Russian Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Well-Being, Omsk;
2Directorate for the Omsk Region, Russian Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Well-Being, Omsk;
3Center of Hygiene and Epidemiology in the Omsk Region, Omsk
The paper presents the results of parasitological and molecular biological studies for dirofilariasis in both the vectors (mosquitoes) and blood of domestic dogs in the city of Omsk. In addition, the epidemiological maps of patients infected with Dirofilaria during the period of 2013 to February 2017 were analyzed.
Mosquitoes were collected primarily within the precincts of the city. Dirofilaria DNA was found in the vectors caught in different districts of the city. The mosquito infestation rates at certain points were 37.8+8.1%. Parasitological studies showed that the infection rates in domestic dogs were 3.2+0.8%. Eight of 15 infected animals were not exported outside of the Omsk Region. PCR and sequencing revealed that the final hosts (dogs) and vectors (mosquitoes) were found to have 2 Dirofilaria species: D. repens and D. immitis. The infection is regarded as local in 11 of 16 Dirofilaria infected residents of the Omsk Region. It is concluded that foci of dirofilariasis have formed and are functioning in the city of Omsk.
Key words: dirofilariasis; Dirofilaria infection in dogs; mosquito infestation with Dirofilaria; foci of dirofilariasis.
Дирофиляриоз — зоонозный гельминтоз, передающийся трансмиссивным путем. Окончательными хозяевами дирофилярий служат млекопитающие многих отрядов, переносчиками — комары родов Aedes, Anopheles, Culex и др. В мире описано более 20 видов дирофилярий, распространенных в различных географических регионах, однако, эпидемиологическое значение для РФ имеет преимущественно Dirofilaria repens и Dirofilaria immitis. В Европе и РФ подавляющее число случаев заражения дирофиляриозом человека связаны с D. repens [2]. Нематода этого вида локализуется в органе зрения, периорбитальном пространстве, коже, подкожной клетчатке. D. immitis паразитирует в полостях сердца, сосудах легких. Случаи дирофи-ляриоза, вызванного D. immitis, часто встречается у населения Северной и Южной Америки, Японии, и, редко — в Европе и других восточных странах.
Омская область географически располагается в пределах 54°—58° град. северной широты, и, согласно предложенной Дарченковой Н.Н. с соавт. (2009 г.) [2] градации риска заражения дирофиляриями, относится к территории низкого риска передачи инвазии.
Цель исследования. Изучение вероятности формирования очагов дирофиляриоза в усло-в и я х
г. Омска.
М а т е р и а л ы и м е т о д ы. Комаров собирали в июне—августе 2016 г. в нескольких точках в черте города: в местах выгула собак вблизи водоемов, на территории частного домовладения, на территориях 2 садоводческих товариществ, а также в одной точке рекреационной зоны, расположенной в 15 км от города. Самок комаров отлавливали с помощью эксгаустера или на себе в утренние и вечерние часы. Всего было собрано 673 комара, из которых сформировали 60 пулов по 5—10 особей в пуле, 83 комара исследовали индивидуально. Кроме того, в исследование были взяты комары из коллекции, собранной в 2010 г. на территории детских оздоровительных лагерей Омской области и частных домовладений в г. Омске (293 шт, из них 76 штук исследованы индивидуально). Зараженность переносчиков дирофиляриями исследовали в ПЦР с видоспецифическими праймерами. Индивидуальную зараженность комаров при определении ее в пулах, проводили с использованием таблиц, предложенных Тагильцевым А.А. с соавт (1990 г.) и рассчитанных исходя из распределений редких событий по Пуассону [6].
Расчет числа оборотов инвазии за один сезон проводили по формуле, предложенной Ганушкиной Л.А с соавт. [1] N1l2,...t [Т°С ср. фактическая — Т°С пороговая (14°С)]=130°С.
За период с июня 2016 г. по август 2017 г. обследовано 476 домашних собак из различных районов города. Кровь собак забирали в пробирки с ЭДТА. Для выявления микрофилярий применяли метод центрифугирования с дистиллированной водой [7]. ДНК дирофилярий в крови собак выявляли методом ПЦР с видоспецифическими праймерами. ДНК выделяли с использованием наборов реагентов «ДНК-сорб-В» (Амплипрайм, ООО «НекстБио»), согласно инструкции. В информационной базе Genbank были выбраны специфичные для Dirofilaria repens праймеры, амплифицирующие участок митохондриального гена ци-тохромоксидазы I : DiR F- ctc-ctg-aga-tgg-ggt-ttc-c и DiR R- cca-aac-aaa-cga-tcc-tta-tc, амплифицирующие участок митохондриального гена цитохромоксидазы I, длина фрагмента 538 bp. Для скрининга ДНК Dirofilaria immitis использовали праймеры Dim- F и Dim -R, направленные на участок 16S г RNA и амплифицирующие фрагмент, размером 440 bp [10]. Режимы амплификации: начальная денатурация при 94°С — 5 мин, затем 35 циклов, включающие 94°С — 30 сек, 55°С — 40 сек, 72°С, элонгация при 72°С — 10 мин. Продукты амплификации визуализировали в 2% агарозном геле с 0,01% бромистого этидия. Определение последовательностей полученных ампликонов определяли прямым секвенированием на генетическом анализаторе AB 3500xL (Life Technologies, США). Анализ полученных электрофореграмм и ассемблирование последовательностей осуществляли с использованием «DNA Dragon» (Sequenti X, Германия). Уровень гомологии последовательностей определяли с использованием GenBank.
Проанализировали эпидкарты пациентов с дирофиляриозом за 2013 г. — февраль 2017 г. (16 человек).
Статистическую обработку материала проводили в программе Microsoft Excel 2010. Вычислялась доля и ошибка доли (P±m) [5].
Р е з у л ь т а т ы и о б с у ж д е н и е. На территории Омской области первый случай диро-филяриоза был зарегистрирован в 1999 г. у ребенка 10 лет, не выезжавшего за пределы области. Гельминт удален из опухолевидного образования на левом плече. Если в первые годы наблюдения регистрировались единичные случаи (с 1999 по 2006 гг. выявлено 4 случая диро-филяриоза), то за период 2013 г. — февраль 2017 г. зарегистрировано 16 случаев. Возраст ин-вазированных лиц — от 21 года до 85 лет, при этом более 62% случаев приходится на лиц, старше 50 лет (10 чел).
У 11 человек заражение расценено как местное, пациенты не выезжали за пределы Омской области, при этом 8 человек — городские жители. Трое из них — владельцы дачных участков, один проживает в частном секторе. Сельские пациенты были жителями Любинского, Таврического и Черлакского районов Омской области. Среди зараженных дирофиляриями преобладали женщины — 8 человек. Паразит локализовался преимущественно в органе зрения (7 чел), в четырех случаях — под кожей на различных участках тела (передняя поверхность грудной клетки, левая рука, голова). Удаленные нематоды были идентифицированы как D. repens, самки (незрелые) и самцы выявлялись с одинаковой частотой.
Прогрессивный рост числа местных случаев дирофиляриоза, в том числе среди городского населения, свидетельствует о вероятной циркуляции возбудителя дирофиляриоза на территории г. Омска.
При обследовании домашних собак микрофилярии дирофилярий выявлены у 15 (3,2±0,8%) животных, из них 8 собак, по утверждениям владельцев, не вывозились за пределы Омской области. Возраст инвазированных животных колебался от 2 до 12 лет. В четырех случаях собаки содержались в теплое время в вольерах (две — в городе, две — в Омском и Любинском районах области), одна собака была взята из приюта за месяц до обследования, еще в трех случаях собак содержали в благоустроенных квартирах и выгуливали на поводке, а также вывозили на дачные участки или в рекреационную зону области. В пробах крови собак с парази-тологическим подтверждением дирофиляриоза, была выявлена ДНК D. repens, кроме того, у двух собак обнаружена также ДНК D. immitis. В образцах крови собак с отрицательным результатом паразитологического исследования, ПЦР также была отрицательной. При сравнении нуклеотидных последовательностей фрагментов ДНК дирофилярий из 5 проб крови, была получена 99,0—99,8% идентичность с последовательностями D. repens, депонированными в GenBank.
ДНК D. repens выявлена в комарах, собранных в четырех из пяти точек города. Максимальное число зараженных пулов комаров (12 из 18) наблюдалось в партиях переносчиков, собранных в Кировском административном округе на территории частных домовладений, с большим числом собак и расположенной вблизи водоема. В этих сборах содержались комары только рода Anopheles. Параллельно исследовали комаров рода Anopheles, собранных на этой же территории в 2010 г. В одном из двух пулов были выявлены последовательности ДНК, характерные
Обороты развития личинок дирофилярий до инвазионной стадии в комарах в сезоны 2015—2016 годов (г.Омск)
Обороты инвазии в переносчике
2016 г
2015 г
Первый оборот инвазионных личинок дирофи-лярий в комарах
Второй оборот инвазионных личинок дирофи-лярий в комарах
Третий оборот инвазионных личинок дирофи-лярий в комарах
срок цикла длительность цикла сумма эффективных температур
срок цикла длительность цикла сумма эффективных температур
срок цикла длительность цикла сумма эффективных температур
01.05.15-21.06.15
52 дня 135,6 градусо/суток
22.06.15-18.07.15
27 дней 135,5 градусо/суток
19.07.15-10.09.15
54 дня 134,4 градусо/суток
18.05.16-22.06.16
36 дней 133,6 градусо/суток
23.06.16-16.07.16 24 дня
133.1 градусо/суток
17.07.16-13.08.16 28 дней
131.2 градусо/суток
для D. repens. Кроме того, часть комаров из этой партии исследовали по 1 экземпляру. Зараженность переносчиков, по результатам ПЦР, составила 37,8+8,1%. ДНК дирофилярий выявлена также в двух из 14 партий комаров, собранных в 2016 г. в зонах отдыха горожан Советского и Октябрьского административ-
ных округов, а также в двух из 19 пулов комаров, собранных в пойме р.Иртыш возле жилого массива (в сборах преобладали комары рода Aedes). При исследовании с видовыми праймера-ми комаров из коллекции 2010 г., собранных на территории лесопарковой зоны отдыха Октябрьского округа, ДНК D. repens была обнаружена в 6,4±4,5% пулов (в двух пулах из 31 исследованных). Зараженность комаров из пригородной зоны (поселок, расположенный на р. Иртыш в 20 км от города) по результатам ПЦР, составила 2,5±1,7%. В положительных пробах выявлена ДНК D. repens. В пробах комаров (рода Aedes), отловленных в 2010 г. на территории детских оздоровительных лагерей в Омской области, ДНК дирофилярий не выявлена. Однако отрицательные результаты могут быть связаны с недостаточным числом исследованных переносчиков (41 экз.). Секвенирование проб, положительных с праймерами к D. repens, подтвердило видовую принадлежность возбудителя. Микс-ин-вазия D. repens и D. immitis обнаружена в одном пуле из комаров, отловленных в парковой зоне Октябрьского административного округа города.
В последнее десятилетие стали появляться сообщения о росте зараженности дирофиляри-ями как животных, так и людей в умеренных климатических регионах, где ранее регистрировались единичные случаи дирофиляриоза [2—4, 9]. Развитию ситуации способствуют глобальные изменения климата, миграционные процессы, в том числе рост пассивной миграции животных (ввоз, вывоз, участие в выставках), большое число бродячих собак и кошек, рост численности комаров в следствие недостаточности мероприятий по борьбе с переносчиками. Повышение температур воздуха и почвы ведет к увеличению периода активности комаров, ускорению развития личинок у комаров, а значит, к росту числа оборотов инвазии [11].
По данным Гидрометцентра ФГБУ «Обь-Иртышское УГМС» [omsk-meteo.ru], в г. Омске прослеживается тенденция к потеплению. Отмечается рост средней годовой температуры до + 1,89°С в период 2001—2010 гг. в сравнении с периодом 1901—1910 гг., когда этот показатель составлял +0,14°С.
Развитие личинок дирофилярий в комарах происходит при температуре выше +14°С [8], длительность их развития находится в прямой зависимости от набора эффективных температур, составляющих 130 градусо-суток.
Для оценки потенциала очагов дирофиляриоза на территории г. Омска, мы рассчитали число оборотов инвазии в летние периоды 2015—2016 годов (см. таблицу).
Как видно из таблицы, в течение последних двух лет, сезон передачи инвазии в городе продолжался с 20-х чисел июня до сентября. И хотя г. Омск географически располагается в зоне низкого риска заражения дирофиляриями, за сезон в нем происходило 3 оборота инвазии, что необходимо учитывать при оценке потенциала очагов. Продолжительность оборота колебалась от 24 до 54 дней в зависимости от температуры окружающей среды.
Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют, что на территории г. Омска сформированы и функционируют очаги дирофиляриоза. Необходимо проведение дальнейших исследований как на территории города, так и всей Омской области с целью изучения зараженности дирофиляриями окончательных хозяев, видового состава переносчиков, их эффективности, а также генетической вариабельности самих возбудителей дирофиляриоза.
В ы в о д ы. 1. Впервые на территории г.Омска выявлены очаги дирофиляриоза. Зараженность домашних собак составила 3,2±0,8%. ДНК дирофилярий обнаружена в переносчиках, отловленных в различных районах города. В отдельных точках зараженность комаров составила 37,8+8,1%.
2. Методами ПЦР и секвенирования в окончательных хозяевах (собаках) и переносчиках (комарах) выявлено 2 вида дирофилярий: D. repens и D. immitis.
3. Учитывая нарастающий риск заражения населения Омской области дирофиляриями, необходимо продолжение исследований, направленных на изучение структуры очагов диро-филяриоза с целью разработки эффективных профилактических мероприятий.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ганушкина Л.А., Ракова В.М., Иванова И.Б., Супряга В.Г., Сергиев В.П. Энтомологический мониторинг территории для оценки возможности передачи дирофилярий.//Мед. паразитол. 2014; 3: 9—12. [Ganushkina L.A., Rakova V.M., Ivanova I.B., Supriaga V.G., Sergiev V.P. Entomological monitoring of the territory to assess the possibility of transfer of dirofilaria.//Med. Parazi-tol. 2014; 3: 9—12 [in Russian].
2. Дарченкова Н.Н., Супряга В.Г., Гузеева М.В., Морозов Е.Н., Жукова Л.А., Сергиев В.П. Распространение дирофиляриоза человека в России.//Мед. паразитол.
kova N.N., Supriaga V.G., Guzeeva M.V., Morozov E.N., Zhukova L.A., Sergiev V.P. Distribution of human dirofilariasis in Russia. //Med. Parazitol. 2009; 2: 3—7 [in Russian].
3. Жукова Н.Н., Макеева Л.С., Яковлева Н.В. Дирофиляриоз в Амурской области.//Дальнево-сточн. журн. инфекц. патол. 2012; 21: 175—177. [Zhukova N.N., Makeeva L.S., Yakovleva N.V. Dirofilariasis in the Amur Region.//Far Eastern J. Infect. Pathol. 2012; 21: 175—177 [in Russian].
4. Ракова В.М. Дирофиляриоз: современные аспекты исследований.//Мед. паразитол. 2016; 4: 47—52. [Rakova V.M. Dirofilariasis: modern aspects of research//Med. Parazitol. 2016; 4: 47—52 [in Russian].
5. Савилов Е.Д., Мамонтова Л.М., Астафьев В.А., Жданова С.Н. Применение статистических методов в эпидемиологическом анализе. М. МЕДпресс-информ. 2004. 111 с. [Savilov E.D., Mamontova L.M., Astafiev V.A., Zhdanova S.N. Methods of statistics in epidemiological analysis. Med. press-inform. 2004. 111 p. [in Russian].
6. Тагильцев А.А., Тарасевич Л.Н., Богданов И.И., Якименко В.В. Изучение членистоногих убежищного комплекса в природных очагах трансмиссивных вирусных инфекций. Томск. Томского ун-та. 1990. 105 с. [Tagilcev A.A., Tarasevich L.N., Bogdanov I.I., Yakimenko V.V. The study of arthropods of the shelter complex in natural foci of vector-borne viral infections. Tomsk. Tomsk State University Press. 1990. 105 p. [in Russian].
7. Ястреб В.Б., Архипов И.А. Рекомендации по диагностике, лечению и профилактике дирофиляриоза собак в Московском регионе.//Росс. паразитол. журн. 2008; 4: 109—114. [Yastreb V.B., Archipov I.A. Recommendations for diagnosis, treatment and prevention of dog dirofilariasis in the Moscow region.//Russian parasitological journal. 2008; 4: 109—114 [in Russian].
8. Genchi C, Rinaldi L, Mortarino M., Genchi M, Cringoli G. Climate and Dirofilaria infection in Europe.//Vet. Parasitol. 2009; 163: 286—292.
9. Genchi C, Mortarino M., Rinaldi L, Cringoli G, Traldi G, Genchi M. Changing climate and changing vector-borne disease distribution: the example of Dirofilaria in Europe.//Vet. Parasitol. 2011. Mar 22; 176 (4): 295—299.
10. Hyun-Wook Oh, Hyung-Kyou, Myung-Jo You, Mineo Hayasaki, Kun-Ho Song. Ectopic migration of an adult heartworm in a dog with dirofilaiasis.//Korean J. Parasitol. 2008; 46: 171—173.
11. Simon F, Siles-Lucas M, Morchon R, Gonzalez-Miguel J., Mellado I., Carreton E. Human and animal dirofilariasis: the emergence of a zoonotic mosaic. Clin. Microbiol. Rev. 2012; 25 (3): 507—44.
Поступила 27.06.17
© Р.С.АРАКЕЛЬЯН, В.Ф.ПОСТНОВА, 2018
Р.С.Аракельян, В.Ф.Постнова
КЛИНИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ДИРОФИЛЯРИОЗА У ДЕТЕЙ В АСТРАХАНСКОМ РЕГИОНЕ
:ФГБОУ ВО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, г.
Астрахань, 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области», г. Астрахань
Проанализировано 13 эпидемиологических карт детей с диагнозом «Дирофиляриоз», проживающих на территории Астраханской области и г. Астрахани.
Заболевание регистрировалось во всех возрастных группах от 4 до 17 лет, наиболее часто встречаясь у детей дошкольного возраста — 69,2%. Паразит локализовался на различных частях тела, наиболее часто встречаясь в области век — 30,8%. Клинически дирофиляриоз проявлялся болью и гиперемией в месте локализации паразита, отеком близлежащих тканей и небольшим зудом в пораженной области — 100%. Кроме этого, большая часть детей — 92,3% отмечали миграцию паразита под кожей.
Окончательный диагноз «Дирофиляриоз» был установлен только после извлечения паразита.
Выводы. Заболевание регистрируется во всех возрастных группах, в т.ч. и у детей в возрасте от 4 до 17 лет. Клинически дирофиляриоз проявлялся образованием подкожной опухоли, гиперемии и боли в пред-
