ДИНАМИКА РОСТА ТИТРА МИКРОБНЫХ КЛЕТОК ШТАММОВ BRADYRHIZOBIUM JAPONICUM И SINORHIZOBIUM FREDII ПРИ ГЛУБИННОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ В ЛАБОРАТОРНОМ ФЕРМЕНТЕРЕ Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

Вестник ДВО РАН. 2021. № 3

УДК:631.524.824:631.811.98:631.468:631.316:663.14.033

DOI: 10.37102/0869-7698_2021_217_03_15

А.И. СОРОКИНА, М.В. ЯКИМЕНКО, С.А. БЕГУН

Динамика роста

титра микробных клеток штаммов Bradyrhizobium japonicum и Sinorhizobium fredii при глубинном культивировании в лабораторном ферментере

Представлены результаты исследований динамики роста бактериальных клеток штаммов Bradyrhizobium japonicum (Jordan, 1982) и Sinorhizobium fredii (Scholia, Elkan, 1984) в жидкой культуре в течение 24, 48, 72 ч глубинного культивирования, усваивающих широкий спектр источников углеродного питания. Наиболее технологичными по способности накапливать высокий титр КОЕ/мл в условиях глубинного культивирования оказались штаммы B. japonicum ТМ-455, БМ-88, ТМ-469, БМ-91 и S. fredii ОБ-46, 071, ТБ-496, СБ-38. При 72-часовом культивировании в лабораторном ферментере серии TN-50L при температуре культивирования +28 °С, вращении мешалки 70 об/мин и рНсреды 6,73 — 6,77 получен максимальный титр активных клеток штаммов B. japonicum СМ-42 и S. fredii ББ-49, составивший 8 • 109 КОЕ/мл и 17 • 109 КОЕ/мл соответственно.

Ключевые слова: ризобии, штамм, B. japonicum, S. fredii, глубинное культивирование, титр, источники углерода, питательная среда.

Dynamics of growth of microbial cell titer of Bradyrhizobium japonicum and Sinorhizobium fredii strains during submerged cultivation in a laboratory fermenter. A.I. SOROKINA, M.V. YAKIMENKO, S.A. BEGUN (Federal Scientific Center "All-Russian Research Institute of Soybeans", Blagoveshchensk).

The results of studies of the dynamics of growth of bacterial cells of Bradyrhizobium japonicum (Jordan, 1982) and Sinorhizobium fredii (Scholla, Elkan, 1984) strains in liquid culture for 24, 48, 72 hours of submerged cultivation, assimilating a wide range of carbon sources, are presented. The most technological in ability of accumulation high titer CFU/ml in conditions of submerged cultivation are the strains of B. japonicum TM-455, BM-88, TM-469, BM-91 and S. fredii OB-46, 071, TB-496, SB-38. The maximum titer of active cells of B. japonicum CM-42 and S. fredii ББ-49 strains was obtained during 72-hour cultivation in a laboratory TN-50L series fermenter, at a cultivation temperature +28°C, stirrer rotation at 70 rpm and pH . 6.73—6.77, which amounted to 8 • 109 CFU/ml and 17 • 109 CFU/ml,

Г r medium

respectively.

Key words: rhizobia, strain, B. japonicum, S. fredii, submerged cultivation, titer, carbon sources, nutrient medium.

Введение

В современных экономических условиях стала очевидной необходимость био-логизации сельскохозяйственного производства для повышения плодородия почв и получения высоких урожаев [9, 14, 20]. Один из способов достижения этой цели - частичное или полное замещение агрохимикатов препаратами симбиотических микроорганизмов,

* СОРОКИНА Арина Игоревна - кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник, ЯКИМЕНКО Мария Владимировна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник, БЕГУН Степан Алексеевич - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник (Федеральный научный центр «Всероссийский научно-исследовательский институт сои», Благовещенск). *Е-таП: mariy-y@yandex.ru

которые в природе успешно обеспечивают своих хозяев питательными веществами и защищают их от биотических и абиотических стрессов [7, 19, 21]. В связи с этим особенно актуально применение биопрепаратов, которые содержат клубеньковые бактерии семейства Rhizobiaceae, вступающие в симбиоз с корневыми системами бобовых растений и снабжающие растение азотом, фиксированным ими из воздуха [4, 8, 22]. Опыт применения подобных препаратов свидетельствует о том, что это наиболее простой, экономичный и совершенно безопасный для человека, животных и других компонентов биоценозов способ увеличения продуктивности растений [5, 11, 13]. Кроме того, использование сельхозпроизводителями ризобиальных препаратов способствует повышению качества выращиваемой продукции, улучшению свойств почвы [1, 26, 27]. Для достижения максимального эффекта от ризобиальных препаратов необходимо постоянно вести поиск новых высокоэффективных, обладающих повышенной конкурентной способностью штаммов клубеньковых бактерий, на основе которых готовят инокулянты [10, 16, 23]. Кроме того, ризобии, составляющие основу биопрепаратов, должны обладать способностью накапливать достаточное количество активных бактериальных клеток при культивировании в производственных условиях, так как одним из критериев качества микробиологических препаратов является высокий титр КОЕ, который для ризобиальных препаратов должен быть не менее 107 - 107мл [2, 17, 18].

Особенностью Дальневосточного региона является наличие в почвах активных природных популяций ризобий, что дает возможность отбирать наиболее ценные по хозяйственно полезным свойствам штаммы. В историческом плане это явление связано с повсеместным распространением в регионе дикорастущей сои и ее симбиотических взаимоотношений с определенной группой почвенных микроорганизмов [24]. В наших предыдущих исследованиях был изучен рост штаммов B.japonicum и S. fredii из коллекции ФГБНУ ФНЦ ВНИИ сои на средах с различными источниками углерода и отобраны культуры с универсальными способностями роста (усваивающие все предложенные источники), что предполагает их успешное культивирование в промышленных условиях [25].

Цель работы - изучить динамику роста бактериальных клеток в жидкой культуре в течение 24, 48, 72 ч глубинного культивирования штаммов B. japonicum и S. fredii, усваивающих широкий спектр источников углеродного питания.

Объекты и методы

Исследования проведены в Федеральном научном центре «Всероссийский научно-исследовательский институт сои» (г. Благовещенск). Объекты исследований - штаммы ризобий сои Bradyrhizobium japonicum (Jordan, 1982) 648а, ТМ-455, БМ-91, БМ-88, ТМ-469, МС-63 и Sinorhizobium fredii (Scholia, Elkan, 1984) 071, ОБ-46, КБ-11, СБ-43, ТБ-496, СБ-38, выделенные из природных популяций Дальнего Востока. В качестве стандартов использовали запатентованные штаммы СМ-42 (для B. japonicum) и ББ-49 (для S. fredii).

Глубинное культивирование чистых культур ризобий сои амурской селекции, отобранных для исследований, проводили на питательной среде № 79 следующего состава, г/л: К2НРО4 - 0,5; NaCl - 0,1; МgSO4 • 7H2O - 0,2; CaCO3 - следы; дрожжевой экстракт - 1,0; маннит - 20,0; агар-агар - 20,0, где вместо маннита в качестве источника углерода использовали глюкозу (для штаммов B. japonicum) и сахарозу (для штаммов S. fredii) согласно ранее проведенным исследованиям [25]. Отработку параметров культивирования проводили на лабораторном ферментере TN-50L (максимально возможная скорость вращения мешалки 70 об/мин) объемом 50,0 л, мощностью воздушного компрессора 1,1 кВт (максимальное давление 0,7 МПа, объем производимого газа 0,11 м3). Для засева ферментера использовали 5-7-суточный посевной материал в количестве 10 % от объема питательной среды. Посевной материал готовили путем выращивания чистых культур на лабораторной

качалке в колбах объемом 250 мл с жидкой питательной средой (100 мл) в термостате при температуре +27-28 °С [3, 6, 12]. Титр КОЕ/мл и pH культуральной жидкости определяли через 24, 48, 72 ч культивирования, подсчет количества клеток изучаемых штаммов в инокуляте проводили методом серийных разведений и их пересевом методом Коха на плотную питательную среду [15].

Статистическую обработку полученных данных проводили методами дисперсионного и корреляционного анализа с использованием программы Statistica 10 (St3tSoft Inc., США).

Результаты и обсуждение

Таблица 1

Интенсивность роста штаммов видов В. ]аротснш, & /гвШ на питательной среде № 79 с различными источниками углеродного питания (7-е сутки после посева)

На первоначальном этапе в лабораторных условиях из коллекции ФНЦ ВНИИ сои были отобраны технологичные штаммы, усваивающие широкий спектр источников углеродного питания [25]. На 7-е сутки роста 85 % исследуемых штаммов В. ]аротсит на питательной среде без источника углеродного питания показали скудный рост штриха чистой культуры, 9 % - умеренный (табл.1).

При добавлении в питательную среду мальтозы, глюкозы, сахарозы, ман-нита интенсивность роста бактериальной массы изучаемых штаммов возрастала (рис. 1).

Наилучший рост штриха чистых культур В. ]аропкит был отмечен на средах с маннитом и глюкозой.

Штаммы & fredii практически не росли на питательной среде № 79 без углевода, но показали интенсивный рост бактериальной массы со всеми испытываемыми

Количество штаммов,

й давших рост на питательной среде № 79, шт.

B. japonicum S. fredii

& 5? Й « « g а од а од

« я § £ о л Я й я £ s а ш е 14 ^ п е ю маннит мальтоза глюкоза сахароза лактоза во е уг з е Ю маннит мальтоза глюкоза сахароза лактоза

Обильный 0 0 0 0 0 0 0 21 16 15 20 7

Хороший 0 4 2 2 3 0 0 15 18 13 16 26

Умеренный 4 24 17 22 15 4 1 7 8 13 6 8

Скудный 40 19 26 21 27 36 13 1 2 3 2 3

Нет роста 3 0 2 2 2 7 30 0 0 0 0 0

эо

so

70

S0

so

40

зо 20 10

S

i

l' i 58?®

И 47 :: ss №

»S;

it Si 1 i

9 9i; 1 im & Й

SH 5 " i'«i =; kIIII 5 4 4

ОбильныП хорош LUl ...HI 1,1 Скудный

■b-ej углевода я Млмнш я Мальтоза jjS Глюкоза i Сахароза $ Лактоза

HiTроста

Рис. 1. Интенсивность роста штаммов В. ]аротсит на питательной среде № 79 с различными источниками углеродного питания (7-суточная культура), %

источниками углеродного питания. Наибольшее количество штаммов S. fredii, показавших обильный и хороший рост (82 %), было в вариантах с добавлением в питательную среду маннита и сахарозы (рис. 2).

Обильный Хорошим Умеренным Скудный Нет роста

^ Бе]угл«вода ЗМанннт ЮМапьтоза ЗГлкнняв i Сахароза :5Лактоза

Рис. 2. Интенсивность роста штаммов fredii на питательной среде № 79 с различными источниками углеродного питания (7-суточная культура), %

Статистическая обработка полученных данных показала сильные различия в характеристиках роста штриха чистых культур на питательной среде при однородной популяции штаммов каждого вида (табл. 2, 3).

Таблица 2

Статистические данные роста штаммов вида B. japonicum на питательной среде № 79 с различными углеводами на 7-е сутки (n = 47)

Углевод Средняя арифметическая, х Размах вариации, R Стандартное отклонение, о Статистическая ошибка средней, m Коэффициент вариации, С^ %

Без углевода 1,02 4 5,7 0,83 37,73

Маннит 1,68 4 2.59 0,37 37,03

Мальтоза 1,40 4 4,30 0,63 45,66

Глюкоза 1,51 4 4,17 0,61 42,91

Сахароза 1,40 4 4,23 0,62 47,96

Лактоза 0,94 4 5,7 0,83 51,22

Дисперсия Sd 1,64

Таблица 3

Статистические данные штаммов вида S. fredii на питательной среде № 79

с различными углеводами (n = 44)

Углевод Средняя арифметическая, х Размах вариации, R Стандартное отклонение, о Статистическая ошибка средней, m Коэффициент вариации, Cv, %

Без углевода 0,33 4 4,92 0,74 152,46

Маннит 3,27 4 3,12 0,47 24,69

Мальтоза 3,09 4 3,13 0,47 27,43

Глюкоза 2,91 4 2,89 0,44 32,63

Сахароза 3,23 4 3,28 0,49 26,31

Лактоза 2,86 4 3,68 0,55 27,00

Дисперсия Sd = 1,32

Статистическая обработка полученных данных показала сильные различия в характеристиках роста штриха на питательной среде при однородной популяции штаммов каждого вида (табл. 2, 3).

Отобранные из 47 коллекционных штаммов В. japonicum семь штаммов, усваивающих широкий спектр источников углеродного питания, при 72-часовом культивировании в лабораторном ферментере имели титр КОЕ^Ш9/мл в различное время экспозиции ферментации, исключение составил штамм МС-63, при этом рН питательной среды колебалась в узких пределах (рНс е ы 5,96-7,76) (табл. 4).

Таблица 4

Динамика роста активных клеток штаммов В. }аротсиш при глубинном культивировании в ферментере

Штамм Период ферментации, ч | рН среды Титр КОЕЮ7 / мл | Титр КОЕЮ9/ мл

24 6,83 1 1

СМ-42 48 6,89 13 2

72 6,77 37 8

24 7,76 7 1

648а 48 7,35 1 -

72 6.89 1 -

24 7,30 1 1

ТМ-455 48 6.93 1 1

72 6,81 3 1

24 7,33 4,3 -

БМ-91 48 7.14 3,6 -

72 6,00 6,6 1

24 7,38 - -

БМ-88 48 7,20 1 1

72 7,15 3 1

24 7.24 - -

ТМ-469 48 6,73 1 1

72 6.27 - -

24 7.28 1 -

МС-63 48 6,75 - -

72 5,96 - -

Примечание. Прочерк - нет роста.

Наблюдения за ростом изучаемых штаммов В. japonicum в процессе глубинного культивирования показали, что штамм ТМ-455 сохранял титр 1 • 109 КОЕ/мл на протяжении всего времени ферментации, у штамма 648 максимальный титр бактериальных клеток был отмечен при 24-часовом культивировании и рН 7,76. Штаммам БМ-88, ТМ-469

А среды ^ ^

и БМ-91 понадобилось больше времени для наращивания биомассы необходимой концентрации в ферментере, они показали титр 1 • 109 КОЕ/мл только через 48 и 72 ч культивирования соответственно. Штамм МС-63 уже при 24-часовом культивировании показал хороший титр 1 • 107 КОЕ/мл при рНсреды 7,28, но в дальнейшем рост микробных тел этого штамма прекратился. Штамм МС-63 оказался наиболее чувствительным к снижению активной кислотности субстрата. Максимальный титр клеток штамма-стандарта В. japonicum СМ-42 получен при 72-часовом глубинном культивировании и рНсреды 6,77, он составил 8 • 109 КОЕ/мл.

Титр КОЕ-Ш7 штаммов & fredii в среднем был выше по сравнению с показателями штаммов В. japonicum (табл. 5). Наибольший титр клеток клубеньковых бактерий в этом разведении через 72 ч культивирования получен у штаммов 071 (26,6 • 107 КОЕ/мл при рН 6,59) и ББ-49 (40 • 107 КОЕ/мл при рН 6,73).

среды среды

Максимальный титр клеток штамма fredii КБ-11 получен при 24-часовом культивировании и рНсреды 6,77, он составил 61 • 107 КОЕ /мл. Увеличение времени ферментации привело к снижению титра активных клеток штамма КБ-11. Через 72 ч культивирования титр клеток штаммов fredii ТБ-496 при рН 5,51 и ОБ-46 при рН 6,20 составил

среды среды

1 • 109 КОЕ/мл, штамма 071 - 2 • 109 КОЕ/мл при рН 6,59. Штамм ТБ-496 сохранял титр

среды

1 • 109 КОЕ/мл на протяжении всего времени ферментации. У штамма СБ-43 в условиях

Таблица 5

Динамика роста активных клеток штаммов /тейп при глубинном культивировании

в ферментере

Штамм Период ферментации, ч рН среды Титр КОЕ107/мл Титр КОЕ109/мл

24 6,74 - -

ББ-49 48 6,55 4 2

72 6,73 40 17

24 7,04 - -

071 48 6,69 4 1

72 6,59 26.6 2

24 7,70 3,5 -

ОБ-46 48 7,24 1 1

72 6,20 1 1

24 6,77 61 -

КБ-11 48 6,62 36 -

72 6,46 8 -

24 7,29 - -

СБ-43 48 7,02 - -

72 7,07 - -

24 7,35 3 1

ТБ-496 48 6,06 2,3 1

72 5,51 3 1

24 7,61 1 -

СБ-38 48 7,21 37,6 2

72 7,09 46,6 3

Примечание. Прочерк - нет роста.

Таблица 6

Корреляционная зависимость титра КОЕ штаммов от времени ферментации, г

В. }аротеит & fredii

Штамм КОЕ-Ю'/мл КОЕ-Ю9/мл Штамм КОЕ-Ю7/мл КОЕ-Ю9/мл

ТМ-455 -0,87 =1 071 -0,93 = 1

БМ-91 -0,73 - 0,87 ОБ-46 --0,87 -0,87

СМ-42 -0,99 -0,93 КБ-11 --0,99 0

648, --0,87 --0,87 ББ-49 -0,91 -0,92

БМ-88 -0,98 -0,87 СБ-43 0 0

ТМ-469 0 0 ТБ-496 0 0

МС-63 --0,87 0 СБ-38 -0,95 -0,98

глубинного культивирования рост микробных клеток в разведении 107 и 109 отсутствовал. Возможно, это связано с изменением метаболизма бактерий при глубинном культивировании, но в любом случае необходимо подбирать для штамма иные условия культивирования. Наилучший показатель количества микробных единиц (17 • 109 КОЕ/мл) при глубинном культивировании в лабораторном ферментере установлен у штамма & fredii ББ-49 через 72 ч культивирования и рН 6,73.

среды

У большинства штаммов вида В. ]аротсит и & fredii титр КОЕ/мл зависел от времени экспозиции в ферментере. У штаммов 648а, МС-63, КБ-11 и ОБ-46 выявлена отрицательная корреляционная зависимость. Это связано с тем, что титр КОЕ/мл с увеличением времени экспозиции снижался. У штамма СБ-43 в титрах КОЕ-Ш7/мл и КОЕ-Ш9/мл рост микробных клеток отсутствовал, а у штамма ТБ-496 зависимости от времени ферментаци и титром КОЕ не выявлено (табл. 6).

Заключение

В результате исследования коллекционных штаммов В. ]аропкит и & fredii, усваивающих широкий спектр источников углеродного питания, выявлено, что наиболее технологичными по способности накапливать высокий титр КОЕ/мл в условиях глубинного культивирования оказались штаммы В. japonicum ТМ-455, БМ-88, ТМ-469, БМ-91 и &. fredii ОБ-46, 071, ТБ-496, СБ-38. Максимальный титр клеток ризобий получен при культивировании в лабораторном ферментере серии TN-50L (время культивирования 72 ч, температура +28 °С, рН 6,73-6,77, скорость вращения мешалки 70 об/мин) штаммов В. japonicum СМ-42 и Х^ей/' ББ-49, он составил 8 • 109 КОЕ/мл и 17 • 109 КОЕ/мл соответственно.

Эти культуры можно использовать при производстве ризобиальных препаратов под сою.

ЛИТЕРАТУРА

1. Волобуев О.Г. Симбиотическая азотфиксация как фактор экологической безопасности почвы // Вестн. РУДН. Серия: Экология и безопасность жизнедеятельности. 2011. № 1. С. 53-60.

2. Гаврилова Н.Н., Саданов А.К., Дадонова Т.Д., Ратникова И.А. Технологии производства биопрепаратов на основе клубеньковых бактерий // Изв. Нац. акад. наук Респ. Казахстан. Серия биол. и мед. 2015. № 1. С. 78-83.

3. Гарипова С.Р. Развитие методологических подходов к разработке микробных препаратов для повышения продуктивности и устойчивости сельскохозяйственных растений // Вестн. Оренбург. ун-та. 2009. № 10. С. 437-439.

4. Глянько А.К., Ищенко А.А., Филинова Н.В. Бобово-ризобиальный симбиоз: некоторые современные знания // Вестн. Харьк. нац. аграр. ун-та. Серия: Биология. 2017. Вып. 3 (42). С. 6-22.

5. Каримова Е.Р., Худайгулов Г.Г. Изучение влияния биопрепарата на основе клубеньковых бактерий Rhizobium lupine на бобовые и злаковые культуры // Вестн. ЮУрГУ. Серия: Пищевые биотехнологии. 2018. Т. 6, № 2. С. 52-57.

6. Картыжова Л.Е., Семенова И.В., Короленок Н.В., Алещенкова З.М., Романова Л.В. Эффективный штамм медленнорастущих клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum 84 KL - основа биоудобрения Соя Риз // Весщ Нацыянальнай Акадэми Навук Беларуси Серия бiялагiчных навук. 2014. № 2. С. 107-112.

7. Кожемяков А.П., Лактионов Ю.В., Попова Т.А., Орлова А.Г., Кокорина А.Л., Вайшля О.Б., Агафонов Е.В., Гужвин С.А., Чураков А.А., Яковлева М.Т. Агротехнологические основы создания усовершенствованных форм микробных биопрепаратов для земледелия // Сельскохозяйственная биология. 2015. Т. 50, № 3. С. 369-376.

8. Кокорина А.Л., Кожемяков А.П. Бобово-ризобиальный симбиоз и применение микробиологических препаратов комплексного действия - важный резерв повышения продуктивности пашни: лекция. СПб.: Изд-во СПбГАУ, 2010. 50 с.

9. Коломиец Э., Сверчкова М., Мандрик-Литвинкович М. Экологически безопасные биотехнологии для сельского хозяйства // Наука и инновации. 2019. № 3 (193). С. 4-8.

10. Крутило Д.В. Эффективность штаммов Bradyrhizobium japonicum на фоне местных популяций ризобий сои // Вестн. Алтай. гос. аграр. ун-та. 2014. Т. 114, № 4. С. 42-47.

11. Лактионов Ю.В. Создание стабильной формы ростстимулирующих микробиологических препаратов и их эффективность // Сельскохозяйственная биология. 2011. № 3. С. 116-118.

12. Методы культивирования азотфиксирующих бактерий. Способы получения и применения препаратов на их основе: метод. рекомендации / под ред. А.В. Хотяновича. М.: ВНИИСХМ, 1991. 60 с.

13. Миннебаев Л.Ф., Кузина Е.В., Рафикова Г.Ф., Чанышев И.О., Логинов О.Н. Продуктивность бобово-ри-зобиального комплекса под влиянием ростстимулирующих штаммов микроорганизмов // Сельскохозяйственная биология. 2019. Т. 54, № 3. С. 481-493.

14. Петров В.Б., Чеботарь В.К., Казаков А.Е. Микробиологические препараты в биологизации земледелия России // Достижения науки и техники АПК. 2002. № 10. С. 16-20.

15. Практикум по микробиологии / под ред. Н.С. Егорова. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1976. 307 с.

16. Саданов А.К., Гаврилова Н.Н., Дадонова Т.Н., Ратникова И.А. Критерии отбора клубеньковых бактерий в состав биопрепаратов для обогащения почвы биологическим азотом и повышения урожайности бобовых культур // News of the National academy of sciences of the Republic of Kazakhstan. Series of biological and medical. 2015. Vol. 1, N 307. P. 115-124.

17. Сидоренко О.Д. Перспективы использования биологических препаратов на основе микроорганизмов // Изв. ТСХА. 2012. № 6. С. 70-79.

18. Сытников Д.М. Биотехнология микроорганизмов - азотфиксаторов и перспективы применения препаратов на их основе // Бютехнология. 2012. Т. 5, № 4. С. 34-45.

19. Тихонович И.А. Использование биопрепаратов - дополнительный источник элементов питания растений // Плодородие. 2011. № 3. С. 9-13.

20. Тихонович И.А., Проворов Н.А. Сельскохозяйственная микробиология как основа экологически устойчивого агропроизводства: фундаментальные и прикладные аспекты // Сельскохозяйственная биология. 2011. № 3. С. 3-9.

21. Ториков В.Е., Сорокин А.Е. Биологизация земледелия как основа современного сельскохозяйственного производства // Аграр. вестн. Урала. 2011. № 5 (84). С. 18-20.

22. Турина Е.Л. Высокопродуктивные растительно-микробные системы в агроценозах бобовых культур // Рос. с.-х. наука. 2015. № 3. С. 28-30.

23. Уранян Г.Р. Биопрепараты на основе Bradyrhizobium japonicum и проблемы их применения // Вестн. соврем. исслед. 2019. Вып. 2-7 (29) (февр.). С. 78-81.

24. Якименко М.В., Бегун С.А. Отличительные признаки быстро- и медленнорастущих клубеньковых бактерий сои, обитающих в дальневосточных почвах // Рос. с.-х. наука. 2020. № 6. С. 38-41.

25. Якименко М.В., Бегун С.А., Сорокина А.И. Оценка интенсивности роста штаммов Bradyrhizobium japonicum и Sinorhizobium fredii дальневосточной селекции на средах с различными углеводами // Достижения науки и техники АПК: спец. выпуск по материалам Междунар. науч.-практ. конф. «Научное обеспечение устойчивого развития агропромышленного комплекса» (16-17 июля 2020 г., ДальНИИСХ). 2020. Т. 34, № 6. С. 33-37.

26. Co-inoculation of Bradyrhizobium stimulates the symbiosis efficiency of Rhizobium with common bean / E. da C. Jesus, R. de A. Leite, R. do A. Bastos et al. // Plant Soil. 2018. N 425. P. 201-215.

27. Effects of inoculation by Bradyrhizobium japonicum strains on nodulation, nitrogen fixation, and yield of lablab purpureus in Algeria / A. Benselama, S. Tallan, S.M. Ounane et al. // Turkish Journal of Agricultural and Natural. Sciences Special Issue. 2014. N 2. P. 1870-1876.