CC BY
10Оригiнальнi досл '!дження
удк:61б.24.5+б1б-85
Динамика остеопротегерин-опосредованного синтеза TNF-a клетками эпителия бронхов под влиянием липофлавона у больных ХОЗЛ, перенесших туберкулез легких
Н.В. Обухова
ГУ «Донецкий государственный медицинский университет, Донецк
Ключевые слова: остеопротегерин, Т^-а, бронхиальный эпителий, хроническое обструктивное заболевание лёгких, туберкулёз лёгких
К факторам, способствующим углублению цитокинового дисбаланса у больных хроническим обструктивном заболевании легких (ХОЗЛ) относят, в частности, перенесенный туберкулез (ТВС) легких, выступающий в качестве клинического маркера резкого снижения многочисленных защитных «барьеров» системы органов дыхания [2]. Попытки использования терапевтической «анти-Т№-стратегии» у больных ХОЗЛ, перенесших ТВС (или со скрытым ТВС), как указывают Hamdi H. и соавт. (2006) [3], Saliu O. и соавт. (2006) [5] вскрыли главное осложнение анти-Т№-терапии - реактивацию скрытой ТВС инфекции. Так, было установлено, что под влиянием TNF-антагонистов (etanercept, infliximab, adalimumab) уменьшается субпопуляция и функциональная активность «антимикобакте-риальных CD4+ Т-клеток памяти, способных подавлять микобактерии путем синтеза IFN-y [3, 5]. В этой связи особый интерес, по нашему мнению, заслуживает использование в лечении больных ХОЗЛ, перенесших туберкулезный процесс, препаратов с антицитокиновой активностью, не относящихся непосредственно к анти-Т№-препаратам.
В свете вышеизложенного можно предположить, что дальнейший поиск методов коррекции дисбаланса цитокинового гомеостаза - важного патогенетического механизма прогрессирования ХОЗЛ, можно отнести к актуальным проблемам современной пульмонологии.
Основной целью исследования явилось научное
обоснование целесообразности использования и оценка клинической эффективности оптимизированной базисной терапии для коррекции регионарного (эндобронхиального) остеопротегерин-зави-симого дисбаланса цитокинового гомеостаза при хроническом обструктивном заболевании легких у лиц, перенесших ТВС легких. В настоящей работе нами представлены результаты изучения у подобных больных регионарного (в индуцированной мокроте) уровня остеопротегерина, а также модулирующего влияния липофлавона на остеопроте-герин-опосредованную лимфоидную (лейкоцитарную) регуляцию синтеза TNF-a клетками эпителия бронхов.
Материал и методы
Под наблюдением состояло 83 больных ХОЗЛ (III степени тяжести, стабильное течение), которых распределили следующим образом: в 1-ю группу вошли 41 больной ХОЗЛ, 2-ю группу составили 42 больных ХОЗЛ, перенесшие различные формы ТВС легких. Контролем служили 14 здоровых лиц, у которых бронхоальвеолярные смывы получали при диагностической бронхоскопии, проводимой по поводу спорных клинических ситуаций (призывники), и у которых после комплексного обследования патологические изменения в бронхолегочной системе найдены не были.
Концентрацию остеопротегерина в индуцирован-
ной мокроте (которую собирали после многократной ингаляции гипертонического раствора хлорида натрия через небулайзер) определяли иммунофер-ментным методом с использованием коммерческих наборов Human Osteoprotegerin (OPG) ELISA Kit компании Biomedica Medizinprodukte GmbH & Co KG (Австрия). Оценка результатов осуществлялась фотометрически.
Для культивации клеток эпителия бронхов использован метод краткосрочных органных культур, обеспечивающий культивирование клеток in vitro. Культивация проводилась в присутствии антибиотиков (бензилпенициллина натриевой соли 1000 ЕД и стрептомицина сульфата 0,01 г на 1 мл культуральной среды). Клетки эпителия бронхов получали из мокроты. Пареллельно проводились несколько экспериментов - опыт 1: введение в культуральную среду взвееи LPS-индуцированных аутологичных мононукнеарных лейкоцитов — уровень цитокина в культуральной среде; опыт 2: пре-инкубация мононуклеаров с остеопротегерином (20000 пг/мл среды; использовался Osteoprotegerin (OPG) human, recombinant, Sigma-Aldrich, США) -я отмывание клеток — в нулотуральную среду; опыт 3: преинкубация мононуклеаров с остеопротегерином (20000 пз/мл среды) — отмывание клеток — инкубация клетокс оипофлавоном -о отмывание клеток — в культуралоную среду.
Мононуклеарные лейкециты выделяли из ге-паринизированной крови центрифугированизм на градиенте плотности фиколл-вер ографина. LPS получали из штаммов 1°. coli K 30 и C 600(lux) (R-мутанты) по методу Westphal О. (1984) 46]. Мя.-кий гидролиз наеивного LP0 проводило уксусной кислотой!. Концентрацию циыокинов определяли метедом твердофнзного иммуноферментногз анализа. Для определения уровня уровня TNF-a были использованы тест-системы и реагенты тест-
системы ProCon НПО «Протеиновый контур» (Россия).
Результаты и обсуждение
Накопленные в последнее десятилетие научные факты позволили сформулировать научную концепцию остеопротегерин-зависимых механизмов формирования остеопенического синдрома у больных ХОЗЛ [6]. С другой стороны, у больных ХОЗЛ выявлена системно-регионарная дискретность содержания остеопротегерина: снижение в системном кровотоке, «регламентируемое» степенью тяжести заболеваноя, е также существенное повышение ре-оионарного (эндобронхиального) содержания цитокина. Механизмы разнонапрзвленней динамики еодержания остеопротеоернна в о(вшгм кровотоке и in loko morbi (на уревне тканей бронхов) остеются предметом научной дискуссии [6].
При исследовании уровня остеопротегерина в индуцированной мокроте нами установлено, что в группе здоровых лиц исследованный покаеатель составляет 2565,45 ± 109,28 пг/мл на еду. белка, а у бтльных 1-й и 2-й групп уровень цитокина в инду-циреваниой мокрете повышен шотиотзтвензо е 55,63 раз и 7,4- раза (р < 0,001). При этом уровень остео-протегериоа в индузированной мекротг у 6оль-ных 2-й оруппы на 32,3% (р1 < 0,001) вышг, чем у болтные 1-й группы. Тееим образом, перенесенный ТВС легких является «фактором отягощения» риска формирования остеопенического синдрома у больных ХОЗЛ. Ранее повышение уровня остеопротегерина в индуцированной мокроте у больных ХОЗЛ выявлено To M. и соавз. (2011) [4-].
Нами также установлено (рис.), что под влиянием пр.иткубацти LPS-индуцированных аутолооиеных мононуклеарных лейкоцитов с 20000 пг/мл ереды человеческего остеопротегерина (опыт 2) уровень
пг/мл
40
1-я группа
2-я группа
30 20 10
*-отмечено достоверное различие в сравнении с опытом 2 Рис. 1. Влияние липофлавона на остеопротегерин-зависимую лимфо-идную (лейкоцитарную) регуляцию синтеза провоспалытельного ¡цитокина TNF-a клетками эпителия бронхов у больных 1-й и 2-й групп
124
Ктж 200з, рот.
TNF-a в супернатанте культуральной среды культуры клеток бронхиального эпителия у больных 2-й группы (в опыте 2) статистически значимо выше, чем у больных 1-й группы. В опыте 2 исследованный показатель у больных как 1-й, так и 2-й групп существенно возрастает (в сравнении с опытом 2) соответственно на 75,6% и 43,9% (р < 0,001), что документирует наличие у больных ХОЗЛ остеопро-тегерин-зависимого мононуклеаро-опосредован-ного механизма синтеза TNF-a клетками эпителия бронхов. В опыте 3 выявлено, что инкубация клеток с липофлавоном частично «отменяет» ингибирую-щее влияние остеопротегерина на синтез провос-палительного цитокина TNF-a клетками эпителия бронхов только у больных 2-й группы: в сравнении с опытом 2 исследованный показатель снижается на 15,6% (р < 0,01).
Выводы
У больных ХОЗЛ (ХОЗЛ I-II стадии (степени тяжести течения) по GOLD), перенесших ТВС легких и с достоверно более высоким уровнем остеопро-тегерина в индуцированной мокроте выявлена возможность липофлавон-опосредованной коррекции остеопротегерин-зависимого лейкоцито-опосредо-
ванного синтеза клетками бронхиального эпителия уровня провоспалительного цитокина TNF-a.
Дано патофизиологическое обоснование целесообразности местного (ингаляции, эндобронхи-альное введение) использования липофлавона для коррекции дисбаланса цитокинового гомеостаза на регионарном (ткани бронхов) уровне у больных ХОЗЛ, перенесших ТВС легких и с повышенным уровнем остеопротегерина в индуцированной мокроте.
Литература
1. Захарова ИЯ. Эндотоксины - О-антигены кишечной палочки. -Киев: Наукова думка, 1980. - 207 с.
2. Тмченко О.Б. Кл1тко-1мунолог1чне обгрунтування комплексног терапй обструктивних захворювань легетв у хворих, котр1 перенесли туберкульоз легетв: автореф. дис... кандидата мед. наук: 14.01.27 -пульмонологгя / О.Б. Т1мченко. - Ялта, 2008. - 121 с.
3. Inhibition of anti-Tuberculosis T lymphocyte function with Tumor Necrosis Factor antagonists / H. Hamdi, X. Mariette, V. Godot [et al.] // Arthritis Res. Ther. - 2006. - Vol. 19, No. 8. - P. 114.
4. Osteoprotegerin in sputum is a potential biomarker in COPD / M. To, K. Ito, PM. Ausin [et. ail.] // CHEST. - 2011. - Vol. 140, N. 1. - P. 76 - 83.
5. Tumor-necrosis-factor blockers: differential effects on mycobacterial immunity / O.Y. Saliu, C. Sofer, D.S. Stein [etal.] // J. Infect. Dis. -2006. - Vol. 15, No. 194. - P. 486 - 492.
6. Westphal O. Bacterial endotoxins: chemical and clinical aspects / Weinheim. - 1984. - P. 1-10.
Динамша остеопротегерин-опосередкованого синтезу ТОТ-а клп'инами еттелш бронхiв пщ впливом лшофлавону у хворих на ХОЗЛ, котрi перенесли туберкульоз легешв
Н.В. Обухова
У хворих з хротчним обструктивним захворюванням легень (ХОЗЛ), котрi перенесли туберкульоз (ТВС) легень, вивчет регюнарний (в шдукованому мокротинш) р1вень остеопротегерину, а також модулюючий вплив лшофлавону на остеопротегерин-опосередковану лiмфоlдну (лейкоцитарну) регулящю синтезу ТОТ-а клггинами еттелта бронхш.
Установлено, що у хворих з хозл ьи стадй, перш за все - у хворих, котр перенесли ТВС легень i з достовiрно бшьш високим рiвнем остеопротегерину в шдукованому мокротит виявлена можливють лшофлавон-опосередковано! корекцп остеопротегерин-залежного лейкоцито-опосередкованого синтезу клпинами бронхiального еттелш рiвня прозапального цитокшу Т№-а. Указан факти розщнюються як патоф1зю-лопчне обгрунтування доцшьност мюцевого (шгаляцп, ендобронхiальне введення) використання у тадбних хворих лшофлавону для корекцй дисбслансу цитокшового гомеостазу на репонарному (тканини бронхiв) р1вш.
Ключевi слова: остеопротегерин, Т№-а, 6ронх1альний еттелш, хрошчне обструктив-не захворювання легень, туберкульоз легень.
Dynamics of osteoprotegerin-mediated synthesis by TNF-a cells of bronchi epithelium under influence oflipoflavon in patients with chronic obstructive pulmonary disease, who had pulmonary tuberculosis
N.V. Obuchova
Regional level of osteoprotegerin (in the inducted sputum) and also modulating influence of lipoflavon on osteoprotegerin-mediated lymphoid (leukocytic) regulation of synthesis by TNF-a cells of bronchi epithelium is studied in patients with chronic obstructive pulmonary diseases (COPD), who had pulmonary tuberculosis (PT). It is determined that in patients with COPD of the I-II stage, first of all - in patients, who had PT and with a higher level of osteoprotegerin in the inducted sputum is revealed opportunity of lipoflavon-mediated correction of osteoprotegerin-dependent leuko-cytic-mediated synthesis by cells of bronchi epithelium of a level of proinflammatory cytokine TNF-a. Indicated facts are considered as pathophysiologic basing of expediency of local use (inhalations, endobronchial introduction) in such patients of lipoflavon for correction of imbalance of cytokine homeostesis on a regional level (tissues of bronchi). Key words: osteoprotegerin, TNF-a, bronchial epithelium, chronic obstructive pulmonary diseases, pulmonary tuberculosis.
126
КТЖ 2012, №2
