CC BY
47
Материал и методы. Периферическую кровь белых беспородных крыс, помещённую в контейнер с глюгициром, облучали сочетанием света и магнитного поля (МП) при помощи индуктора аппарата «Градиент-3». Применяли магнитное поле с неизменной индукцией 5 мТл и частотой 0,3 Гц и световой поток в дозе 1,5 мкд и 2,5мкд красного и синего цвета, экспозицией 2 мин. В мазках фоновой и облучённой крови через 20, 40, 45 мин и 24 ч подсчитывали лейкоцитарную формулу на 200 клеток с расчётом тестов интоксикации по А.В.Самохину. Дезинтоксикационные эффекты учитывались нами по трем индексам: ИСЛК-«индекс сдвига лейкоцитов крови» позволял судить об аутоиммунных процессах; ЛИ-«лимфоцитарный индекс», позволяющий судить о противовоспалительном потенциале; ЛИИ-«лимфоцитарный индекс интоксикации», наиболее значимый в проявлениях различных типов интоксикации.
Результаты. Выявлено наличие различной чувствительности форменных элементов крови к изучаемым воздействиям. Относительный состав форменных элементов крови изменялся не только при различных воздействиях, но и в зависимости от времени, прошедшего с момента облучения. Так, при применении режима МП+красный свет 2,5 мкд («большая» доза) 20 мин 100% образцов по тесту ИСЛК вошли в интервал зоны нормы, через 40 мин этот показатель снизился до 33%, а через сутки составил 0%, что может свидетельствовать о снижении интенсивности аутоиммунных процессов. Показатель ЛИ, при этой интенсивности красного света, стабильно входивший в зону нормы в 67% случаев через 20 мин, 40 мин и через сутки, так-
же снижался до 0%, что, вероятно, происходит в связи с перестройками физико-химических свойств облученной крови и относительным снижением числа лимфоцитов (ЛИ=лимфоцит/ нейтрофил). Индекс ЛИИ, входящий в зону нормы, в 66% случаев через 20 мин, через 40 мин снижался вдвое и через сутки оставался на этом уровне («33%). Снижение дозы красного света до 1,5 мкд приводило к тому, что и через сутки процент индексов, входивших в зону нормы, оставался довольно высоким: ИСЛК«80%; ЛИ«60% и ЛИИ«60%, т.е. положительные сдвиги в дезинтоксикационном потенциале были более стойкими вследствие уменьшения дозы. При применении синего света (1,5 мкд) в комплексном воздействии на кровь нарастание положительных сдвигов изучаемых тестов наиболее выражено через 40-45 мин. Индекс ЛИИ при этом воздействии входил в зону нормы в 100% случаев, т.е. стимуляция дезинтоксикаци-онных процессов была максимальной. Но через сутки эффекты нормализовались и составили 50% по всем трем индексам. Эффект влияния МП+красный свет, интенсивностью 1,5 мкд, оказался более длительным и нарастающим (суммарно «64% рассчитанных индексов входили в диапазон зоны нормы и через сутки).
Выводы. Для улучшения детоксикацион-ных показателей крови при проведении ХТ, с нашей точки зрения, целесообразно применение оптико-магнитного воздействия с красным светом 1,5 мкд, на что указывает изменение комплекса расчетных индексов интоксикации отражающих уровень аутоиммунных процессов противовоспалительного потенциала и других типов интоксикационных критериев.
ДИНАМИКА ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ФОТОХРОМОМАГНИТНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ
С.М. КЕЧЕДЖИЕВА, А.И. ШИХЛЯРОВА, Р.Г. ЛУГАНСКАЯ, Д.В. ЛЕОНТЬЕВА
ФГУ «Ростовский научно-исследоваетльский онкологический институт Росмедтехнологий»,
г. Ростов-на-Дону
Актуальность. Использование аутобиосред фузией стало альтернативным направлением
организма (кровь, лимфа, ликвор) для инку- лекарственной терапии опухолей. Показано, что
бации с цитостатиками и последующей реин- применение магнитных полей для обработки
аутокрови повышает степень связывания цитостатика с альбумином и мембранами эритроцитов и позитивно влияет на функциональное состояние и состав иммунокомпетентных клеток. Дальнейшая разработка подходов к оптимизации состояния клеточных систем аутокрови как важнейшего компонента аутобиохимиотерапии указывает на высокую чувствительность ключевых ферментных систем лимфоцитов к световому излучению, которое может быть использовано в комплексе с магнитами.
Цель исследования. Изучение влияния комбинированного фотохромомагнитного и сверхнизкочастотного магнитного излучения на функциональную активность ферментов энергетического метаболизма лимфоцитов крови на различных этапах после проведения воздействия.
Материал и методы. Работа была выполнена на 30 белых беспородных крысах, у которых осуществлялся забор крови из наружной яремной вены в объеме 2 мл. Для воздействия на кровь использовали комбинированный микропроцессорный физиотерапевтический аппарат электро-магнито-светотерапии «Градиент-3» (НПФ «Пульс» при ВНИИ «Градиент» г. Ростов-на-Дону), обладающий возможностью сочетанного лечебного действия несколькими физическими факторами. Для обработки крови использовали одновременное формирование на рабочей поверхности индуктора аппарата «Градиент-3» светового потока (с длиной волны 670 нм (красный свет) в дозе 1-5 Дж/см2) и магнитного поля (с индукцией 10 мТл, частотой 7,8 Гц, экспозицией 3 мин). Флаконы с образцами крови устанавливали в емкости, не пропускающие свет окружающей среды, а воздействие начинали сразу после закрытия отверстия индуктором аппарата. После фотохромомагнитной обработки быстро изготавливали тонкие мазки крови и фиксировали в ацетон-трилоне, вслед за окрашиванием мазков нитротетразолиевым фиолетовым по Нарциссо-ву производили подсчет гранул формазана в 50 клетках, определяя активность сукцинатдегидро-геназы (СДГ) и а-глицерофосфатдегидрогеназы (а-ГФДГ). Аналогичные исследования проводили спустя 40 мин и 24 ч после фотохромомагнитного воздействия.
Результаты. При рассмотрении в качестве основных характеристик поведения фермент-
ных систем лимфоцитов в ответ на комбинированное воздействие красного света и магнитного поля таких параметров, как соотношение СДГ/а-ГФДГ, а также определение количества лимфоцитов с высоким содержанием депозитов — Jакт и крайне низким - Jo (опустошенные лимфоциты, «нуллеры»), оказалось, что динамика ферментативной активности имеет нелинейный характер. Сразу после воздействия коэффициент Ja/Jo для СДГ возрастает с уровня 1,38 у.е. до 2,08 у.е. Одновременно с повышением активности ключевого фермента энергодающего цикла Кребса возникал дефицит активности сопряжения с анаэробным процессом гликолиза- а- ГФДГ, о чем свидетельствовало снижение коэффициента Ja/Jo 0,94 у.е. до 0,66 у.е. Разница между показателями К Ja/Jo для СДГ и а-ГФДГ увеличилась в 3 раза. Через 40 мин после проведения фотохромомагнитного сеанса реакция ферментных систем стала менее выраженной для СДГ. Коэффициент соотношения Jакт/Jо снизился до 1,7 у.е., что указывает на гипоэр-гетический сдвиг, который можно объяснить изменением равновесия между транспортом и диффузией субстратов окисления, в том числе ионов кальция, калия, водорода в митохондрии, а главное — эндогенной янтарной кислоты. В то же время реципрокно наблюдалось увеличение активности а-ГФДГ до уровня 1,07 у.е., что обеспечивало активацию гликолиза. Исследования, проведенные через 24 ч от момента воздействия, убедительно свидетельствовали о продолжении развития темновой фазы фотохромомагнитного эффекта ферментативной активности лимфоцитов. Так, значения активности СДГ свидетельствовали о возрастании гетерогенности пула, с подавляющим числом лимфоцитов, заполненных гранулами формазана, что отразилось на увеличении коэффициента соотношения Ja/Jo до 2,9 у.е. Это отражало возрастание участка эндогенной янтарной кислоты как активного субстрата сукцинатдегидрогеназной системы и, по выражению М.Н. Кондрашовой (1978), «тягловой» силы анаэробной работы митохондрий. Вместе с возрастанием активности СДГ, превысившей в 1,7 раза уровень в предыдущей временной точке (40 мин) после воздействия, отмечалось поддержание активности а-ГФДГ, соответствующей 1,2 у.е., что незначительно (на 10%) опережает предыдущие данные. При
этом разница между показателями К Ja/Jo СДГ ствует модификации крови. Эти воздействия
и а-ГФДГ возросла в 2,4 раза. способны упредить нарушения энергетического
Выводы. Использование комбинированных метаболизма лимфоцитов.
методов квантовой и магнитотерапии способ-
ТОКСИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ПАКЛИТАКСЕЛА И ПУТИ ИХ СНИЖЕНИЯ
О.В. КОЛОТОВА, Е.П. ФЕДОРОВА, Л.А. ЕРМОЛАЕВА
НИИ фармакологии
Актуальность. Химиотерапия в современной онкологии наряду с оперативным способом и лучевым воздействием является одним из важнейших компонентов лечения. Несмотря на достигнутый прогресс в создании современных противоопухолевых препаратов, таких как пакли-таксел, остается значимой проблема повреждения клеток здоровых тканей, вследствие низкой селективности антибластомных средств. Актуальным является поиск корректоров природного и синтетического происхождения, снижающих побочное токсическое действие цитостатиков.
Цель. Данное исследование посвящено изучению гено-, гемато- и гепатотоксичности паклитаксела, а также возможности коррекции выявленных эффектов.
Материал и методы. Эксперименты проведены на 80 мышах самцах и самках линии СВА/CaLac и 100 беспородных крысах-самках. Паклитаксел мышам вводили однократно вну-трибрюшинно в максимально переносимой дозе (МПД) 40,0 мг/кг, крысам однократно внутривенно в МПД - 5,0 мг/кг. В качестве позитивного контроля мышам вводили однократно внутрибрюшинно циклофосфан в дозе 20 мг/кг, в качестве негативного контроля использовали физиологический раствор. Для снижения токсичности мышам вводили тиофан (полифунк-циональный антиоксидант) в дозе 30 мг/кг и экстракт шлемника байкальского в дозе 40 мг/ кг внутрижелудочно однократно или курсом в течение 5 дней. Для оценки цитогенетических нарушений через 6, 12, 24, 48 ч и на 5, 14 сут, исследовали состояние хромосом метафазных пластинок костного мозга (содержание поврежденных метафаз, число аберратных хромосом, полиплоидные клетки) по модифицированному
СО РАМН, г. Томск
методу Форда. Изучение показателей кроветворных органов проводили стандартными гематологическими методами. Показатели форменных элементов в периферической крови определяли на гематологическом анализаторе Abacus. Цитологичекие препараты окрашивали комбинированно фиксатором-красителем Май-Грюнвальда и азур-П-эозином по Нохту. Исследования печени крыс проводили с помощью морфологических и биохимических методов. Результаты обрабатывали, используя критерий Вилкоксона-Манна-Уитни.
Результаты. Установлено, что предварительное введение тиофана предохраняет генетические структуры от повреждающего действия паклитаксела. Снижалась до уровня контрольных значений доля поврежденных клеток и общее количество аберрантных хромосом как при однократном, так и при курсовом введении самцам и самкам мышей линии СВА/СаLac.
В тесте по учету соматического мозаицизма на Dr.melanogaster выявлено защитное действие тиофана на развивающийся организм, т.к. снижалось количество особей, несущих мутантные признаки, возникающие после введения паклитаксела и циклофосфана. Протекторные эффекты экстракта шлемника байкальского на генетический аппарат клеток были более выражены по сравнению с тиофаном и проявлялись как при введении паклитаксела, так и при введении циклофосфана.
Введение паклитаксела в МПД в ранние сроки у крыс вызывало развитие гипоплазии костного мозга: снижение содержания незрелых и зрелых гранулоцитов, эритронормобластов и лимфоцитов. В периферической крови отмечено развитие умеренной панцитопении:
