Динамическая оценка циркулирующей опухолевой ДНК в EGFR-позитивных неоплазиях на фоне противоопухолевой терапии Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Динамическая оценка циркулирующей опухолевой ДНК в EGFR-позитивных неоплазиях на фоне противоопухолевой терапии

Авторы:

(1) Горгуль Ю.А., gorgul.yuliy@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург

(2) Кулигина Е.Ш., kate.kuligina@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург

(3) Мартьянов А.С., aleksandr.s.martianov@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург

(4) Янус Г.А., octavedoctor@yandex.ru, ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России, Санкт-Петербург

(5) Моисеенко Ф.М., moiseenkofv@gmail.com, ГБУЗ Санкт-Петербургский клинический научно-практический центр специализированных видов медицинской помощи (онкологический) им. Н.П. Напалкова», Санкт-Петербург

(6) Жабина А.С., albina.zhabina@inbox.ru, ГБУЗ «Санкт-Петербургский клинический научно-практический центр специализированных видов медицинской помощи (онкологический им. Н.П. Напалкова», Санкт-Петербург

(7) Имянитов Е.Н., evgeny@imyanitov.spb.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург

Ключевые слова

рак легкого, жидкостная биопсия, цоДНК, мутации EGFR, ингибиторы тирозинкиназы

Актуальность

Анализ циркулирующей опухолевой ДНК (цоДНК) на основе детекции опухоль-специфических мутаций является многообещающим диагностическим инструментом для клинической онкологии. Известно, что концентрация цоДНК в плазме крови пропорциональна общей массе опухоли [4]. Исходя из этого вполне закономерным является тот факт, что цоДНК относительно легко обнаруживается у пациентов с распространенным опухолевым заболеванием, а уменьшение опухолевой массы в результате терапевтического воздействия, как правило, приводит к падению уровня цоДНК в периферической крови [1]. Действительно, терапевтический эффект, который часто достигается после нескольких недель или месяцев системной терапии, почти всегда сопровождается снижением концентрации циркулирующих маркеров, будь то опухолеспецифические белки или цоДНК [2, 3]. Что же касается событий, происходящих в неопластических очагах в первые часы после начала противоопухолевого воздействия, то они до сих пор остаются практически недоступными для изучения. В этой связи весьма заманчива идея использовать преимущества жидкостной биопсии (в частности, количественную оценку концентрации «опухолевых» мутаций в плазме), для немедленной визуализации динамики опухоли в течение 1-х суток после воздействия.

Цель

Оценить динамику уровня мутантных цоДНК в роли экспресс-маркеров для мониторинга ответа опухоли на терапию.

Материалы и методы

В исследование вошли 30 пациентов с диагнозом «немелкоклеточный рак легкого» (НМРЛ). От каждого больного получали 10 серийных образцов плазмы: перед приемом первой дозы препарата TKI («нулевая точка») и через 0,5, 1, 2, 3, 6, 12, 24, 36 и 48 ч после начала терапии. Из них внеклеточная ^eU-free) ДНК была экстрагирована с помощью набора QIAamp Circulating Nucleic Acid kit. Количество мутантных аллелей EGFR (делеции 19 экзона, замены L858R, T790M) измеряли с помощью цифровой капельной ПЦР (ddPCR) с использованием системы QX100 Bio-Rad. Реакции ddPCR проводили в трех повторах для каждого образца.

Результаты

EGFR-мутантная (EGFR+) ДНК была обнаружена в плазме у 25/30 (83%) субъектов. Пациенты с изначально детектируемой в плазме мутацией EGFR имели более короткий показатель выживаемости без прогрессии (ВБП), чем «плазма-негативные» больные (11,4 мес vs. 21,0 мес, p=0,238, тест Бреслоу для сравнения кривых Каплана-Мейера). Снижение концентрации мутантных фрагментов в плазме к 48-му часу приема EGFR-TKI было ассоциировано со значительно более длительным ВБП (14,7 мес в группе со снижением цоДНК vs. 8,5 мес в группе без снижения цоДНК, p=0,013, метод Каплана-Мейера).

Выводы

Настоящее исследование демонстрирует, что клинический ответ на TKI можно с определенной долей уверенности предсказать с помощью анализа немедленных изменений концентрации мутантной цоДНК в плазме.

Список литературы

1. Ebert E . B . F. , T McCulloch, K . H . Hansen, et al . Clearing of circulating tumour DNA predicts clinical response to osimertinib in EGFR mutated lung cancer patients // Lung Cancer. 2020 May;143:67-72 .

2 . Fukuhara T, Saito H, Furuya N, et al . Evaluation of plasma EGFR mutation as an early predictor of response of erlotinib

plus bevacizumab treatment in the NEJ026 study // EBioMedicine . 2020 Jul;57:102861.

3 . Reece M, Saluja H, Hollington P, et al . The Use of Circulating Tumor DNA to Monitor and Predict Response to Treatment

in Colorectal Cancer // Front Genet . 2019 Nov 21;10:1118 .

4 . Strijker M . , E . C . Soer, M . de Pastena, et al . Circulating tumor DNA quantity is related to tumor volume and both predict

survival in metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma // Int J Cancer. 2020 Mar 1;146(5):1445-1456.

Оценка корреляции уровней экзосомальных опухоль-ассоциированных miR-24 и miR-101 в плазме крови и асцитической жидкости у пациенток с диссеминированным раком яичников

Авторы:

(1) Джугашвили Екатерина Игоревна, e.dzhugashvili@g.nsu.ru, Лаборатория молекулярной патологии Института медицины и психологии В. Зельмана НГУ, Новосибирск

(2) Юнусова Наталья Валерьевна, bochkarevanv@oncology.tomsk.ru, Лаборатория биохимии опухолей НИИ онкологии Томского НИМЦ, Томск

(3) Яловая Алена Игоревна, a.yalovaya@g.nsu.ru, Лаборатория молекулярной медицины ФГБУН Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск

(4) Григорьева Алина Евгеньевна, feabelit@mail.ru, Группа микроскопических исследований ФГБУН Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск

(5) Тупикин Алексей Евгеньевич, ЦКП «Геномика» СО РАН, Новосибирск

(6) Середа Елена Евгеньевна, shashova7ssmu@gmail.com, Лаборатория биохимии опухолей НИИ онкологии ФГБНУ «Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН», Томск

(7) Коломиец Лариса Александровна, KolomietsLA@oncology.tomsk.ru, Отделение гинекологии НИИ онкологии ФГБНУ «Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН», Томск

Ключевые слова

экзосомы, плазма, асцит, опухоле-ассоциированные микроРНК, miR-24-3p, miR-101, рак яичников

Актуальность

Рак яичников (РЯ) — злокачественное новообразование женской репродуктивной системы с высокой летальностью [1]. Применяющиеся для скрининга РЯ онкомаркеры не обладают высокой чувствительностью и специфичностью. В связи с этим перспективным направлением является исследование механизмов канцерогенеза РЯ и поиск новых биомаркеров жидкой биопсии для ранней диагностики новообразований. Известно, что все клетки в организме, в том числе опухолевые, секретируют во внеклеточное пространство экзосомы, отражающие их молекулярный портрет [2].

Цель

Исследование относительного уровня опухоль-ассоциированных микроРНК в экзосомах из плазмы крови и асцитической жидкости первичных больных с диссеминированным РЯ ПШ-ПГС стадии и оценка диагностического потенциала микроРНК miR-24-3p и miR-101.

Материалы и методы

Для сравнения диагностической значимости экзосом из плазмы крови здоровых женщин (п=39) и из плазмы крови и асцитической жидкости первичных больных с диссеминированным РЯ ПШ-ПГС стадии (п=20) была выделена микроРНК и оценен относительный уровень опухоль-ассоциированных miR-24 и miR-101. Экзосомы из плазмы крови и асцитической жидкости выделяли методом ультрафильтрации с последующим ультрацентрифугированием. Морфологию выделенных везикул подтверждали трансмиссионной электронной микроскопией, наличие экзосомальных тетраспанинов — цитофлуориметрией. Биоинформатический поиск