CC BY
56
УДК: 578. 828 НШ-06:616.36-002]-07
ДИАГНОСТИКА ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА С У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ЛИЦ КАЧЕСТВЕННЫМ МЕТОДОМ ПЦР ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ СГУСТКА КРОВИ
У ВИЧ-инфицированных пациентов часто встречается микст-инфекция, например, сочетание ВИЧ-инфекции и вирусного гепатита С. Вирусный гепатит С не всегда удаётся диагностировать на ранних сроках заболевания. В статье представлена методика диагностики вирусного гепатита С у ВИЧ-инфицированных пациентов с отрицательными показателями иммуноферментного анализа на антитела к гепатиту С, отрицательными результатами исследования сыворотки крови методом ПЦР на РНК гепатита С, без повышения печеночных трансаминаз. Из 95 обследуемых пациентов с диагнозом ВИЧ-инфекция у 7 в сгустке крови методом ПЦР обнаружена РНК ИСУ, у всех наблюдались низкие показатели вирусной нагрузки ВИЧ-инфекции и иммунорегуляторного индекса.
Ключевые слова: гепатит «С», ВИЧ-инфекция, иммунорегулятор-ный индекс, вирусная нагрузка ВИЧ.
Введение. Заболеваемость ВИЧ-инфекцией является актуальной проблемой, связанной с активным распространением данного заболевания. Так, по данным ВОЗ (2011 г.) ВИЧ-инфекция остается одной из наиболее значимых болезней современного мира. На конец 2011 года во всем мире зарегистрировано 34 миллиона ВИЧ-инфицированных. По оценкам ВОЗ, 0,8% людей в возрасте от 15 до 49 лет заражены ВИЧ-инфекцией. Ежегодно 2,7 млн. человек заражаются ВИЧ-инфекцией и 300 тысяч умирают от СПИДа [1, 2]. В настоящее время у ВИЧ-инфицированных лиц регистрируется повышение заболеваемости парентеральными вирусными гепатитами С [3].
Ко-инфекция ВИЧ+вирус гепатита С (И1У+ИСУ) широко распространена во всем мире. Это связано, в первую очередь, с общими путями передачи обеих инфекций. Основными группами риска для возникновения ко-инфекции являются инъекционные наркоманы [4, 5]. У многих пациентов гепатит С протекает в скрытой форме, переходя в хроническую [6]. Отличительной особенностью хронического вирусного гепатита С (ХВГС) является медленное развитие заболевания. ХВГС относится к группе вирусных инфекций с многолетним торпидным течением инфекционного процесса. Для него характерна определенная стадийность процесса - острая и латентная, которая может протекать до 15 лет с последующим быстрым прогрессированием и переходом в хронический вирусный гепатит [7]. Вирус гепатита С обладает слабой иммуноген-ностью, что определяет замедленный, неинтенсивный Т-клеточный и гуморальный ответ иммунной системы на внедрение инфекции, так как он подавляет хелперную и цитотоксическую активность Т-лимфоцитов, особенно у ВИЧ-инфицированных людей. [8]. Благодаря изменчивости генома внутри одного генотипа образуется большое количество мутантных вариантов вируса, которые замедляют ответ, и антитела-маркеры вирусного гепатита С определяются только на стадии хронического процесса [9]. Все это свидетельствует о необходимости разработки новых способов диагностики вирусного гепатита С, особенно у иммунокомпрометированных ВИЧ-инфицированных пациентов.
Цель исследования: оценка ранней диагностики вирусного гепатита С у ВИЧ-инфицированных лиц с отрицательными показателями иммуноферментного анализа (ИФА) и (ПЦР) в сыворотке крови на РНК вирусного гепатита С путем исследования сгустка крови качественным методом ПЦР на РНК вируса гепатита С.
Материалы и методы исследования. Исследование проводилось в «Курском областном центре по профилактике и борьбы со СПИДом и инфекционными заболеваниями» и «Курской областной клинической инфекционной больнице имени Н.А. Семашко». Сорока двум ВИЧ-инфицированным пациентам с диагнозом ВИЧ-инфекция стадия 4А назначалась анти-ретровирусная терапия (АРВТ) препаратами зидовудин, зальцитабин, абакавир, диданозин. Пятидесяти обследуемым с диагнозом ВИЧ-инфекция стадия 3 АРВТ не проводилась. У всех обследуемых определялась вирусная нагрузка ВИЧ-инфекции и иммунорегуляторный индекс (ИРИ), потому что они коррелируя с прогрессией данной инфекции, свидетельствуют о результативности терапии [10]. Так же оценивались печеночные трансаминазы.
У пациентов забиралась венозная кровь в стерильную пробирку путем венепункции. После ее отстаивания сыворотка крови отделялась. Далее исследованию подвергался сгусток кро-
Л.Г. АИСТОВА П.В. КАЛУЦКИЙ В.Я. ПРОВОТОРОВ
Курский государственный медицинский университет
e-mail: [email protected]
ви качественным методом ПЦР с использованием комплекта реагентов для проведения реакции обратной транскрипции РНК вируса гепатита С (HCV): «МАГНО-сорб» Вариант 1000 «NucliSENS® easyMAG» («bioMerieux», Франция), фирмы «ИнтерЛабСервис». Подсчет CD4+- и СБ8+-лимфоцитов производился на проточном цитофлуориметре BD FACSCount Becton Dickinson Biosciences, CША. Печеночные трансаминазы определяли по оптической плотности гидра-зонов 2-оксоглутаровой и пировиноградной кислоты в щелочной среде.
При статистической обработке данных использовался параметрический t-критерий Стьюдента, где статистически значимыми считались различия значений p<0,05, и параметрический метод Пирсона.
Результаты исследования и их обсуждение. При исследовании сгустка крови качественным методом ПЦР из 95 обследуемых ВИЧ-инфицированных у 7 пациентов обнаружена РНК HCV, при этом у 4 из них наблюдалась низкая вирусная нагрузка ВИЧ-инфекции - менее 12 копий/мл. У 3 пациентов с 4Б стадией ВИЧ-инфекции, находящихся на антиретровирусной терапии, вирусная нагрузка ВИЧ составляла: 2,4 копий/мл, 5,4 копий/мл и 1,5 копий/мл соответственно. Уровень АЛТ у этих пациентов колебался в пределах 20-40 г/л, АСТ 18-36 г/л. В 7 случаях, с вероятностью 95%, в сгустке крови была обнаружена РНК гепатита С, а средний уровень вирусной нагрузки ВИЧ-инфекции в генеральной совокупности колебался от 7,18 до 9,18 копий/мл (рис. 1)
10 9 8
с
0
го
m >
Ci !_ ГО
1
ГС
го
I
и >
Ci
4
7,18
Рис. 1. Распределение показателей среднего уровня вирусной нагрузки ВИЧ у ВИЧ-инфицированных лиц,
с положительной ПЦР на РНК ИСУ в сгустке крови
7
6
5
3
2
При аналогичной оценке результатов исследования достоверности по критерию Пирсона средний уровень вирусной нагрузки ВИЧ-инфекции в сгустке крови во всех случаях находился в пределах от 8,08 до 8,28 копий/мл (рис. 2).
8,28
8,3
8,25
8,2
д
IS 8,15
5
С О 8,1
m 8,05
0 5
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
пациенты
70 75 80 85 90 95 100 105
Рис. 2. Распределение показателей генеральной совокупности вирусной нагрузки ВИЧ-инфекции у ВИЧ-инфицированных лиц с положительной ПЦР на РНК ИСУ в сгустке крови
Из 7 пациентов с ВИЧ-инфекцией с положительными результатами на вирусный гепатит С иммунорегуляторный индекс в 3 случаях с диагнозом ВИЧ-инфекция стадия 4Б, получавших антиретровирусную терапию, находились в пределах от 0,36 до 0,40, а в 4 случаях у пациентов без антиретровирусной терапии с диагнозом ВИЧ-инфекции стадия 3 он колебался от 0,53 до 0,84. В генеральной совокупности показатели ИРИ находились в пределах от 0,58 до 0,62 (рис. 3)
0,605
0,6
0,595 Е^ 0,59
х 0,585
ш
со
Ц 0,58
0.575.
0 57
Рис. 3. Распределение показателей ИРИ у ВИЧ-инфицированных лиц с положительной РНК на ИСУ в сгустке крови
Таким образом, у 7 из 95 ВИЧ-инфицированных лиц, исследуя сыворотку крови стандартными методами ИФА и ПЦР на вирусный гепатит С и отрицательных результатах, в сгустке крови этих пациентов качественным методом ПЦР была обнаружена РНК гепатита С. При этом у 4 ВИЧ-инфицированных пациентов вирусная нагрузка была менее 12 копий/мл. У троих пациентов в стадии заболевания 4Б, находящихся на антиретровирусной терапии, вирусная нагрузка ВИЧ-инфекции колебалась от 1,5 копий/мл до 5,4 копий/мл, что в генеральной совокупности составило от 7,18 до 9,18 копий/мл, с вероятностью 95%. При аналогичной оценки вирусной нагрузки ВИЧ-инфекции, в этой группе пациентов используя параметрический метод Пирсона, вирусная нагрузка ВИЧ-инфекции была от 8,08 до 8,28 копий/мл. На фоне проведения антиретровирусной терапии у ВИЧ-инфицированных лиц, иммунорегуляторный индекс находился в пределах от 0,36 до 0,84, что в генеральной совокупности колебалось от 0,58 до 0,62. Несмотря на наличие вируса гепатита С в крови, уровень АЛТ у ВИЧ-инфицированных пациентов был в пределах от 20 до 40 г/л, а АСТ от 18 до 36 г/л, не отличаясь тем самым от показателей клинически здоровых людей.
Учитывая данные проведенных нами исследований можно сказать, что при отрицательных показателях ИФА и ПЦР на вирусный гепатит С в сыворотке крови у обследуемых ВИЧ-инфицированных лиц и обнаружение у них в сгустке крови качественным методом ПЦР РНК гепатита С, у всех пациентов отмечены достоверно низкие показатели иммунорегуляторного индекса и вирусной нагрузки ВИЧ-инфекции, что при нормальных показателях трансаминаз (АЛТ и АСТ) может указывать на латентное течение вирусного гепатита С. На показатели иммунного статуса и частоту обнаружения вирусного гепатита С в сгустке крови антиретровирус-ная терапия не влияет.
Литература
1. Антонова, Т. В. Вирусные гепатиты в вопросах и ответах: пособие для практикующих врачей / Т. В. Антонова, Д. А. Лиознов. — М.: ЛитТерра. - 2010. - 336 с.
2. Арямкина, О. Л. Острый и хронический вирусный гепатиты: распространенность, клиника, диагностика, лечение / О. Л. Арямкина, Е. С. Белозеров, Ю. И. Буланьков. — Ульяновск: УлГУ, 2009. — 117 с.
3. Анализ причин смертности больных опийной наркоманией / Бисалиев Р.Ф. [и др.] // Наркология. - 2010. - № 11. - С. 59-61.
4. Бобкова, М.Р. Возможные механизмы взаимного влияния инфекций, вызываемых ВИЧ и вирусом гепатита С / М.Р. Бобкова // ЖМЭИ. - 2008. - № 5. - С. 104-115.
5. Валентик, Ю .В. Профилактика ВИЧ/СПИД среди лиц, потребляющих наркотики / Ю. В. Вален-тик, Л. М. Савченко // Пособие для врачей. — Москва. - 2012. — С. 155-157.
6. Гусев, Д .А. Хронический гепатит С: течение, прогноз и лечение больных в военно-медицинских учреждениях: автореф. дисс.....докт. мед. наук : 14.00.10 / Д.А. Гусев; СПб. Военно-мед. акад. им.С.М. Кирова. - СПб, 2007. — 46 с.
7. Покровский, В. И. Клиническая классификация ВИЧ-инфекции / В. И. Покровский, В. В. Покровский, О. Г. Юрин // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2011. - № 1. - С. 710.
8. Подымова, С. Д. Болезни печени. Руководство для врачей. - М.: Медицина, 2009. - 766 с.
9. Рабочая группа по оценке распространенности ВИЧ - инфекции в Европе. Скрытая ВИЧ-инфекция: методы и необходимые данные для оценки количества людей и недиагностированной ВИЧ-инфекцией // AIDS. - 2011. - Т. 4. - № 3. - С. 235-242.
10. Учайкин, В. Ф. Инфекционная гепатология: пособие для врачей / В. Ф. Учайкин, Т. В. Чередниченко, А. В. Смирнов. - М.: ГЕОТАР-МЕДИА. - 2012. - 220 с.
DIAGNOSIS OF HEPATITIS C IN HIV-INFECTED PEOPLE MEAN BY PCR USING A BLOOD CLOT
In HIV-infected patients frequently revealed mixed infection, for example, the combination of HIV and hepatitis C. Hepatitis C virus infection is not always possible to diagnose in the early stages of the disease. In the article presents a methodology for diagnostics of hepatitis C in HIV-infected patients with a negative index-linked im-munosorbent assay for antibodies to hepatitis C, the negative results of the study of blood serum by PCR for RNA of hepatitis C without increasing hepatic transaminases. Out of 95 patients with the diagnosis of HIV infection is examined by PCR, in 7 of them in a blood clot is detected RNA HCV, and all of these patients had low levels of viral load of HIV infections and immunoregulatory index.
L.G. AISTOVA P.V. KALUTSKY V.Y. PROVOROTOV
Kursk StateMedical University e-mail: [email protected]
Key words: Hepatitis C of HIV infection, the immunoregulatory index, HIV viral load.
