Диагностика дефектов врожденного иммунитета при B-клеточных опухолях лимфатической системы

Назарова Елена Львовна; Шардаков В.И.; Демьянова В.Т.; Загоскина Т.П.; Зотина Е.Н.

2. Меньшиков В.В., Пименова Л.М., Волкова И.А., Миронова И.И., Зубрихина Г.Н. Стандартизованная аналитическая технология клинического лабораторного анализа мочи: определение количества форменных элементов в моче. В кн.: Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины. вып. 1. М.; 2012: 109-28.

3. Заказнов Н.П. и др. Теория оптических систем. Учебник для студентов приборостроительных специальностей вузов. М.: Машиностроение; 1992.

REFERENCES

1. Menshikov V.V., Pimenova L.M., Suhacheva N.I., Volkova I.A., Mironova I.I., Zubrichina G.N. Standardized Technology clinical

laboratory analysis of urine. Urine analysis. In: "Standardization of analytical technologies of laboratory medicine". Vol. 1, Moscow; Labora. 2012: 68-108. (in Russian)

2. Menshikov V.V., Pimenova L.M., Volkova I.A., Mironova I.I., Zubrichina G.N. Standardised analytical technology clinical laboratory urine analysis: definition of cell counts in urine. In: «Standardization of analytical technologies of laboratory medicine". Vol. 1, Moscow; Labora. 2012: 109-28. (in Russian)

3. Zakaznov N.P. et al. Theory of optical systems. Tutorial for students of the instrument-making professions high schools. Moscow: Mashi-nostroenie; 1992. (in Russian)

Поступила 11.02.14 Received 11.02.14

иммунология

УДк 616.42-006.441-092:612.017.1-078.33

Назарова Е.Л., Шардаков В.И., Демьянова В.Т., Загоскина Т.П., Зотина Е.Н.

диагностика дефектов врожденного иммунитета при B-клЕточных опухолях лимфатической системы

ФГБУН "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства'; 610027, г. Киров

Генетические особенности становятся ключевыми факторами риска развития многих новообразований у человека, включая В-клеточные опухоли лимфатической системы. Изучена связь полиморфных вариантов генов FCGR2A (Hisl66Arg), CD14 (C-159T), ILip(T-31C), IL2 (T-330G) и TLR2 (Arg753Gln) с развитием различных форм В-клеточных опухолей лимфатической системы у 80 пациентов. Выявлены статистически значимые отличия в частоте отдельных генотипов однонуклеотидных полиморфизмов генов FCGR2A, CD14, ILip, IL2 и TLR2 у больных с индолентными и агрессивными типами течения неходжкинских лимфом, а также множественной мие-ломы. Полученные результаты подтверждают гипотезу о том, что генетические варианты генов врожденного иммунного ответа влияют на происхождение и характер течения различных типов лимфопролиферативных заболеваний и маркеры могут стать дополнительными прогностическими характеристиками доброкачественного и агрессивного течения опухолей.

Ключевые слова: неходжкинские лимфомы; множественная миелома; полиморфизм генов; цитокины; толл-подобные рецепторы.

E.L. Nazarova, V.I. Shardakov, V.T. Demyanova, T.P. Zagoskina, E.N. Zotina

THE DIAGNOSTIC OF DEFECTS OF INBORN IMMUNITY UNDER B-CELL TUMORS OF LYMPHATIC SYSTEM The genetic characteristics are key risk factors of development of many human neoplasms including B-cell tumors of lymphatic system. The relationship between polymorphic variants of genes FCGR2A (His 1 66Agr), CD14 (C-159T), ILip (T-31C), IL2 (T-330G) and TLR2 (Arg753Gln) and development of various forms of B-cell tumors of lymphatic system in 80 patients was investigated. The statistically significant differences of rates ofparticular genotypes of single nucleotid polymorphisms of genes FCGR2A, CD14, IL1P, IL2 and TLR2 in patients with indolent and aggressive types of course of non-Hodgkin lymphoma and also multiple myeloma. The results prove hypothesis that genetic variants of genes of inborn immune response effect the origin and character of course of different types of lymphoproliferative diseases. The markers can become additional prognostic characteristics of benign and aggressive course of tumors.

Keywords: non-Hodgkin lymphoma; multiple myeloma; polymorphism of gene; cytokine; toll-similar receptors

Для корреспонденции: Назарова Елена Львовна, науч. сотр. Адрес: 610027, Киров, ул. Красноармейская, 72 E-mail: nazarova.yelena@mail.ru

Таблица 1

Анализ полиморфных вариантов генов ГСОЕ2Л, СЭ14, Л1Р, 1Ь2 и ТЬЕ2 в группах больных с индолентными и агрессивными формами нхл

Генотип 1-я группа 2-я группа X2 P OR 95% CI

GG 0,667 FCGR2A (His166Arg) 0,467 0,44 09-2,11

GA 0,083 0,533 8,28 0,02 12,57 1,28-123,49

AA 0,250 0,000 0,09 0,00-1,89

CC 0,563 CD14 (C-159T) 0,545 0,93 0,28-3,11

CT 0,250 0,364 1,25 0,53 1,71 0,45-6,52

TT 0,313 0,273 0,43 0,08-2,44

CC 0,167 IL1fi(T-31C) 0,267 1,82 0,27-12,17

CT 0,833 0,667 1,35 0,51 0,40 0,06-2,57

TT 0,000 0,067 2,59 0,10-69,34

TT 0,667 IL2 (T-330G) 0,467 0,44 0,09-2,11

GG 0,167 0,400 1,76 0,42 3,33 0,53-20,91

TG 0,167 0,133 0,77 0,09-6,45

GG 0,750 TLR2 (Arg753Gln) 0,800 1,33 0,22-8,22

GA 0,250 0,200 0,10 0,95 0,75 0,12-4,62

AA 0,000 0,000 0,81 0,01-43,60

Таблица 2

анализ полиморфных вариантов генов ГСОЕ2Л, СЭ14, Л1Р, 1Ь2 и ТЬЕ2 в группах больных с индолентными формами нхл и мм

Генотип 1-я группа 3-я группа X2 P OR 95% CI

GG 0,467 FCGR2A (His166Arg) 0,500 0,88 0,22-3,45

GA 0,533 0,333 3,29 0,19 2,29 0,56-9,37

AA 0,000 0,167 0,14 0,01-3,00

CD14 (C-159T)

CC 0,545 0,286 3,00 1,03-8,73

CT 0,364 0,464 5,10 0,02 0,66 0,24-1,84

TT 0,091 0,250 0,30 0,07-1,30

CC 0,267 IL1fi(T-31C) 0,444 0,45 0,10-1,99

CT 0,667 0,389 2,61 0,27 3,14 0,75-13,16

TT 0,067 0,167 0,36 0,03-3,85

TT 0,467 IL2 (T-330G) 0,278 2,28 0,54-9,67

GG 0,400 0,611 1,54 0,46 0,42 0,10-1,72

TG 0,133 0,111 1,23 0,15-9,97

GG 0,800 TLR2 (Arg753Gln) 1,000 0,10 0,00-2,04

GA 0,200 0,000 3,96 0,05 10,36 0,49-218,51

AA 0,000 0,000 1,19 0,02-63,73

В-клеточные опухоли лимфатической системы (В-ОЛС) - наиболее часто диагностируемые гематологические заболевания, имеющие сложный мультифакторный генез. В последние годы во всем мире накапливаются данные, свидетельствующие о том, что немаловажную роль в этиологии В-ОЛС играет генетическая предрасположенность. Случай-контролируемые исследования подтверждают полигенную модель такой предрасположенности, основанную на сочетании в одной клеточной линии нескольких неблагоприятных аллелей генов [1]. К настоящему времени выявлена ассоциация В-ОЛС с полиморфными вариантами ряда генов, в частности генов биотрансформации ксенобиотиков, программируемой клеточной гибели и репарации ДНК [2, 7]. Для В-ОЛС особое значение имеют полиморфные варианты генов, вовлеченные в регуляцию работы иммунной системы. В ряде исследований указывается на то, что единичные оли-гонуклеотидные полиморфизмы (single nucleotide polymorphism - SNP) в генах цитокинов, хемокинов, а также генов рецепторов врожденного иммунитета могут быть факторами риска развития неходжкинских лимфом (НХЛ) в целом или их отдельных гистологических вариантов, а в ряде случаев они могут влиять на клиническое течение заболевания [1, 4, 5, 7, 8, 10].

Полиморфизм генов врожденного иммунитета может приводить к изменению экспрессии рецепторов или интенсивности синтеза сывороточных форм протеинов, что является причиной индивидуального течения патологического процесса, ответа на терапию и исхода заболевания [3, 4, 7]. В доступной литературе представлено ограниченное число исследований по оценке информативности генетических вариантов полиморфных маркеров генов иммунного ответа как предикторов развития различных форм В-ОЛС [4, 7]. Полученные результаты неоднозначны и варьируют в различных популяциях, что указывает на вклад в развитие данной патологии этнической принадлежности человека [6, 10].

Цель настоящего исследования - оценка частоты различных полиморфных вариантов генов FCGR2A, CD14, ILlfi, IL2 и TLR2 у больных В-ОЛС и поиск связи выявленных генотипов с риском развития различных типов лимфопролифера-тивных заболеваний.

Материалы и методы. Обследовано 80 больных В-ОЛС, идентифицирующих себя как русские, в возрасте от 22 до 79 лет (медиана возраста 59 лет). Среди них было 46 (57,5%) мужчин и 34 (42,5%) женщины. Пациенты были разделены на 3 группы: в 1-ю группу вошли 36 (45%) больных, страдающих индолентными формами НХЛ, во 2-ю - 16 (20%) больных с агрессивным течением НХЛ и в 3-ю - 28 (35%) больных с множественной миеломой (ММ). Материалом исследования являлась дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК), выделенная из лейкоцитов периферической крови стандартным способом фенольно-хлороформной экстракции. Геномное тестирование полиморфных участков исследуемых генов проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с аллельспецифичными праймерами производства НПФ "Ли-тех" (Россия) на амплификаторе "ДНК-технология" (Россия) и электрофоретической детекцией продуктов реакции в агарозном геле. Распределение генотипов по исследуемым полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вейнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий %2 Пирсона с поправкой Иейтса на непрерывность. Дополнительно оценивали показатель отношения шансов (odds ratio - OR) с вычислением границ 95% доверительного интервала (95% CI). Значение OR = 1 свидетельствовало об отсутствии ассоциации риска развития заболевания с наблюдаемым генотипом. При значении OR<1 говорили об отрицательной ассоциации (фактор пониженного риска развития заболевания), а OR > 1 рассматривали как положительную ассоциацию заболевания с признаком (фактор повышенного риска). Для расчета результатов использовали пакеты программ MS Office Excel 2003 STATISTICA V.12,

Таблица 3

Анализ полиморфных вариантов генов ГСОЕ2Л, СЭ14, Л1Р, 1Ь2 и ТЬЕ2 в группах больных с агрессивной формой нхл и мм

Генотип 2-я группа 3-я группа z2 p OR 95% CI

GG 0,667 FCGR2A (His166Arg) 0,500 2,00 0,44-9,10

GA 0,083 0,333 2,53 0,28 0,18 0,02-1,76

AA 0,250 0,167 1,67 0,28-10,09

CD14 (C-159T)

CC 0,563 0,286 3,21 0,89-11,60

CT 0,250 0,464 3,40 0,18 0,38 0,10-1,49

TT 0,188 0,250 0,69 0,15-,16

CC 0,167 IL1fi(T-31C) 0,444 0,25 0,04-1,48

CT 0,833 0,389 6,18 0,05 7,86 1,31-47,05

TT 0,000 0,167 0,18 0,01-3,76

TT 0,667 IL2 (T-330G) 0,278 5,20 1,07-25,31

GG 0,167 0,611 5,96 0,05 0,13 0,02-0,76

TG 0,167 0,111 1,60 0,19-13,24

GG 0,750 TLR2 (Arg753Gln) 1,000 0,07 0,00-1,57

GA 0,250 0,000 5,00 0,03 13,63 0,64-292,12

AA 0,000 0,000 1,48 0,03-79,61

а также «Калькулятор для расчета статистики в исследованиях "случай-контроль"» (http:gen-exp.ru/calculator_or.php). Статистически значимыми считали различия прир < 0,05.

Результаты и обсуждение. Проведен сравнительный анализ частот генотипов FCGR2A (His166Arg), CD14 (С-159Т), ШР(Т-31С), (Т-3300) и ТЬК2 (Arg753Gln) у больных с индолентными и агрессивными формами НХЛ, а также ММ. В табл. 1. представлены результаты генотипирования в группах больных с индолентными (1-я группа) и агрессивными (2-я группа) НХЛ, частоты генотипов отображены в долях единицы.

Данные, приведенные в табл. 1, свидетельствуют об увеличении частоты генотипа ОЛ гена РСОК2Л у пациентов с агрессивными формами НХЛ в сравнении с индолентным типом течения (53,3% vs. 8,3%; р = 0,02; OR=12,57; 95% С1 1,28-123,49). Продуктом гена РСОК2Л является низкоа-финный рецептор к иммуноглобулину G, обеспечивающий реализацию цитотоксического противоопухолевого ответа в отношении клона опухолевых клеток. Можно заключить, что появление минорного аллеля А, а следовательно, гетерозиготное носительство Ш8166Лт§ гена РСОК2Л предрасполагает к повышенному риску развития агрессивного течения НХЛ. Достоверных различий при исследовании частот генотипов генов CD14, 1Ь2 и ТЬК2 не выявлено.

В табл. 2 представлено распределение частот генотипов изучаемых генов в группах больных с индолентными формами НХЛ (1-я группа) и с ММ (3-я группа)

Приведенные данные свидетельствуют о том, что частота генотипов СС гена CD14 (р = 0,02; OR = 3,00; 95% С1 1,03-8,73) и ОЛ гена ТЬК2 (р = 0,05; OR = 10,36; 95% С1 0,49-218,61) у пациентов с индолентными НХЛ превышала таковую у больных с ММ (54,5% vs. 28,6%, 20% vs. 0% соответственно). Гомозиготный генотип СС гена CD14 в точке полиморфизма С-159Т и гетерозиготность по замене аргини-

на на глицин в позиции 753 сочетались с предрасположенностью к развитию индолентного течения НХЛ по сравнению с частотой развития ММ. Достоверности различий в частотах генотипов генов FCGR2A, IL1[S и IL2 не выявлено.

В табл. 3 представлены результаты исследования полиморфизмов исследуемых генов у больных с агрессивными НХЛ (2-я группа) и с ММ (3-я группа).

Как видно из табл. 3, различия в группах заключались в преобладании генотипа TT гена IL2 (66,7% vs. 27,8%; p = 0,05; OR = 5,20; 95% CI 1,07-25,31), СТ гена IL1fi (83,3% vs. 38,9%;p = 0,05; OR = 7,86; 95% CI 1,31-47,05) и GA гена TLR2 (25% vs. 0%; p = 0,03; OR = 1,36; 95% CI 0,64-292,12) при агрессивном течении НХЛ в отличие от данных у больных с ММ. Следовательно, развитие агрессивного клинического течения НХЛ ассоциировано с гомозиготным носительством TT гена IL2 и гетерозиготностью СТ и GA генов IL1[S и TLR2 соответственно.

Заключение. Выявленные статистически значимые различия в частоте отдельных генотипов однонуклеотидных полиморфизмов генов FCGR2A, CD14, IL1fi, IL2 и TLR2 у больных В-ОЛС могут свидетельствовать о роли генетической компоненты участия врожденного иммунного ответа в развитии В-ОЛС у русских пациентов. Полученные результаты подтверждают гипотезу о том, что генетические варианты генов врожденного иммунного ответа влияют на генез и характер течения различных типов лимфопролиферативных заболеваний. Эти маркеры могут стать дополнительными прогностическими факторами доброкачественного и агрессивного течения рассматриваемых онкогематологических заболеваний.

ЛИТЕРАТУРА

1. Воропаева Е.Н., Скворцова Н.В., Воевода М.И., Тарновский Р.В. Клиническое значение делеции гена CCR5 у больных не-ходжкинскими злокачественными лимфомами. Бюллетень СО РАМН. 2011; 2: 26-30.

2. Минина В.И. Генетический полиморфизм и хромосомные аберрации, индуцированные радиацией. Сибирский медицинский журнал. 2012; 3: 5-7.

3. Reyes-Gibby C.C., Wu X., Spitz M., Kurzrock R., Fisch M., Bruera E. et al. Molecular epidemiology, cancer-related symptoms, and cytokine pathway. Lancet Oncol. 2008; 9: 777-85.

4. Bidwell J., Keen L., Gallagher G., Kimberly R., Huizinga T., Mc-Dermott M.F. et al. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases. Genet. Immun. 1999; 1: 3-19.

5. El-Omar E.M., Ng M.T., Hold G.L. Polymorphisms in Toll-like receptor genes and risk of cancer. Oncogene. 2008; 27: 244-52.

6. Chang J.S., Wiemels J.L., Chokkalingam A.P., Metayer C., Barcellos L.F., Hansen H.M. et al. Genetic polymorphisms in adaptive immunity genes and childhood acute lymphoblastic leukemia. Cancer Epidemiol. Biomark. Prev. 2010; 19: 2152-63.

7. Cerhan J.R., Wang S., Maurer M.J., Ansell S.M., Geyer S.M., Cozen W. et al. Prognostic significance of host immune gene polymorphisms in follicular lymphoma survival. Blood. 2007; 12: 5439-46.

8. Morton L.M., Wang S.S., Cozen W., Linet M.S., Chatterjee N., Davis S. et al. Etiologic heterogeneity among non-Hodgkin lymphoma subtypes. Blood. 2008; 13: 5150-60.

9. Habermann T.M., Wang S.S., Maurer M.J., Morton L.M., Lynch C.F., Ansell S.M. et al. Host immune gene polymorphisms in combination with clinical and demographic factors predict late survival in diffuse large B-cell lymphoma patients in the pre-retuximab era. Blood. 2008; 7: 2694-702.

10. Purdue M.P., Lan Q., Wang S.S., Kricker A., Menashe I., Zheng Y.-Z. et al. A pooled investigation of Toll-like receptor gene variants and risk of non-Hodgkin lymphoma. Carcinogenesis. 2009; 2: 275-81.

REFERENCES

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

1. Voropaeva E.N., Skvortsova N.V., Voevoda M.I., Tarnovskiy R.V. The clinical significance of the deletion of the CCR5 gene in pa-

tients with non-Hodgkin's lymphomas. Byulleten'SO RAMN. 2011; 2: 26-30. (in Russian)

2. Minina VI. Genetic polymorphism and chromosomal aberrations induced by radiation. Sibirskiy meditsinskiyzhurnal. 2012; 3: 5-7. (in Russian)