CC BY
31
Краткое сообщение
ной формы со светлыми ядрами. Для исследования кератиноци-тов использовали монослойные культыры без очагов стратификации. Различий в характере монослоя и клеточной структуры на этапе исследования при световой микроскопии не было. После контроля с помощью инвертированного микроскопа культуры без обработки передавались для атомно-силовой микроскопии.
Атомно-силовая микроскопия позволила получить трехмерное изображение цитоплазматической мембраны клеток. На поверхности мембраны контурировались глобулы и эллипсоиды, мембранные выросты. Изображение мембраны соответствовало гипотетическим представлениям. Для объективизации проводили матобработку результатов исследования поверхности мембран. Оценивали максимальные величины микровыростов (Rmax, nm), перепада высот (Rmean, nm). При статобработке выявлены достоверные различия между характеристиками клеток, полученных из псориатического очага и и стандартными культурами. Микровыросты цитоплазматической мембраны фибробластов были максимальными в клетках, полученных из псориатических очагов (402±82 нм) по сравнению со стандартными культурами фиброб-ластов (139±43 нм), р<0,05. Перепад высот рельефа мембраны фибробластов из псориатических очагов был более выражен в клетках кожи больных псориазом по сравнению со стандартными штаммами (187±30 нм и 76±21 нм соответственно, р<0,05).
При исследовании кератиноцитов, полученных в культуре клеток, выявлены следующие особенности: микровыросты цитоплазматической мембраны были максимальными в клетках, полученных из псориатических очагов (в среднем 491 нм), в то время как в стандартных штаммах - 187 нм. С помощью АСМ удалось получить 3-мерное изображение цитоплазматической мембраны клеток кожи без их предварительной обработки реагентами. Выявлены достоверные отличия характеристик поверхности мембран фибробластов, полученных из псориатического очага по сравнению с таковыми для мембран фибробластов здоровых штаммов. Обнаружены достоверные отличия структуры поверхности мембраны кератиноцитов из очага поражения кожи больных псориазом по сравнению со стандартными культурами. Выявленные особенности характеристик рельефа цитоплазматической мембраны культивированных клеток кожи из псориатических очагов были однотипны для культуральных штаммов, полученных от больных, что может говорить о связи этих изменений с повреждением генома клеток при псориазе.
Результаты демонстрируют возможность использования АСМ для изучения нативных клеточных культур, в т.ч. культур клеток кожи - кератиноцитов и фибробластов. Достоинством этого метода является возможность изучения микрорельефа поверхности биомембран без предварительной обработки, деформирующей клеточные структуры. Выявлены отличия микрорельефа биомебран клеток при псориазе по сравнению с биомембранами клеток здоровой кожи. Вопрос об использовании АСМ для исследования особенностей рельефа биомембран клеток при патологии кожи (рубцы, дистрофические поражения кожи и т.д.) заслуживает дальнейшего изучения.
Литература
1. Бакстон П. Дерматология /Пер. с англ.- М.: БИНОМ, 2005.- 176 с.
2. Павлова О.В. // Вест. дерматол. и венерол.- 2005.- №6.-С.36-39.
3. Miura H. et al. // Arch Dermatol Res.- 2000.- Vol. 292, №12.- Р. 590-597.
4. Dimon-Gadal S. et al.H J. Invest Dermatol.- 2000.- Vol 114, №5.- Р.984-989.
5. Fransson J. et al. // Arch Dermatol Res.-1999.- Vol 291, №10.- Р.538-541.
6. TakeuchiM. et al. // Biophys J.- 1998.- №5.- Р.2171-2183.
7. Almqvist N. et al. // Micron.- 1994.- №3.- Р.227-232.
8. Ushiki T. et al. // Arch Histol Cytol.- 1996.- №5.- Р.421.
9. Rheinwald J.G, Green H.H Cell. 1975.- №5.- Р.331-344
10. Rheinwald J.G., GreenH. // Nature.- 1977.- №5.- Р.42.
УДК 547.995.15
ЛАЗЕРОФОРЕЗ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ В ПРОФИЛАКТИКЕ И ВОССТАНОВИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ НАРУШЕНИЙ ФУНКЦИЙ КОЖИ
Е.А.РЯЗАНОВА, А.А.ХАДАРЦЕВ*
Введение. Способ лазерофореза основан на способности лазерного излучения возбуждать клеточные мембраны, увеличивая их проницаемость и активируя продвижение биоактивных веществ, используемых для профилактики, во внутренние среды организма. Одним из таких веществ, широко используемых в дерматологической практике, является гиалуроновая кислота.
Объект и методы исследования. У 57 женщин в возрасте 32-35 лет с жалобами на сухость кожи и появление морщин проведено термовизионное исследование кожи на матричном тепловизоре до и после 15-дневного курса фитолазерофореза с
1,5% гелем гиалуроновой кислоты. Оценивалось состояние кожных пор. Для изучения микроциркуляции кожи использовался метод лазерной допплеровской флоуметрии.
Полученные результаты. При лазерной допплеровской флоуметрии до лечения выявлено изменение показателей, свидетельствующее о нарушении микроциркуляции кожи. Анализ тепловизионной картины состояния кожных пор также свидетельствовал об ухудшении ик функционирования. После проведенной терапии (лазерофорез с 1,5% гелем гиалуроновой кислоты в течение 10 минут ежедневно, на курс 15 процедур) установлено достоверное улучшение показателей микроциркуляции кожи, функционирования кожных пор. Известно синтоксическое действие гиалуроновой кислоты, состоящее в активации синтоксиче-ских программ адаптации (преобладания антисвертывающей, парасимпатической, антиоксидантной систем). Положительный эффект лазерофореза сопряжен с активирующим действием лазерного излучения и улучшением пластического обеспечения интерцеллюлярного ретикулума гиалуроновой кислотой.
Заключение. Способ лазерофореза гиалуроновой кислоты может использоваться в восстановительной терапии при патологии кожи, а также для профилактики. Существенно использование лазерной допплеровской флоуметрии и тепловизионного исследования для ранней диагностики и контроля терапии.
УДК 618.14
ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОВОСПАЛИ-ТЕЛЬНЫХ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ В ЛОХИЯХ ДЛЯ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОМЕТРИТА ПОСЛЕ КЕСАРЕВА СЕЧЕНИЯ
Л.Д. БЕЛОЦЕРКОВЦЕВА, В.В. ДАНИЛОГОРСКАЯ, С.Е. ИВАННИКОВ, Л.В. КОВАЛЕНКО*
Введение. Ныне эндометрит после кесарева сечения (КС) является наиболее частым гнойно-воспалительным осложнением послеродового периода. В структуре послеродовых инфекций удельная частота эндометрита варьируется в пределах 6,6-45% [3]. Цитокины - важнейшие факторы иммунопатогенеза воспалительных заболеваний. Поэтому исследователи используют определение концентраций цитокинов для диагностики воспалительных послеродовых осложнений [1, 5]. В зависимости от влияния на воспалительный процесс различают два вида цитокинов: провоспалительные (1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8, ТОТ-а) и противовоспалительные (1Ь-4, 1Ь-10). Инициация воспалительного ответа контролируются провоспалительными цитокинами, продуцирующимися макрофагами, нейтрофилами и Т-клетками в ответ на стимуляцию бактериальными антигенами. Провоспалительные цитокины играют защитную роль, обеспечивая рекрутирование в очаг инфекции эффекторных клеток (нейтрофилов, макрофагов), стимулируя их фагоцитарную, бактерицидную активность и индуцируя запуск антигенспецифического иммунного ответа [4].
Защитная роль провоспалительных цитокинов проявляется тогда, когда эти медиаторы работают локально, в очаге воспа-
* ГУП НИИ новых медицинских технологий, г. Тула Сургутский государственный университет, кафедра акушерства и гинекологии, лаборатория клинической и экспериментальной перинатологии
Л.Д. Белоцерковцева, В.В. Данилогорская, С.Е. Иванников и др.
ления. Избыточная и генерализованная продукция провоспали-тельных цитокинов приводит к развитию органных дисфункций. Для избежания избыточных проявлений системного воспаления в организме включаются механизмы негативного контроля, опосредованные продукцией противовоспалительных цитокинов. Основой патогенеза гнойно-воспалительных послеоперационных осложнений является запуск цитокинового каскада, который включает про- и противовоспалительные цитокины. Баланс между двумя противоположными группами определяет характер течения и исход гнойно-септических заболеваний [6]. Учитывая множественность, синергизм и плейотропность участвующих в этих реакциях цитокинов, отметим, что определение концентрации в крови какого-то одного из них (например, TNF-a или IL-4) не будет отражать состояние всего цитокинового баланса. В этом случае одномоментная оценка уровня ряда медиаторов из оппозитных групп может оказаться более корректной. Для измерения уровней цитокинов на системном уровне чаще используют плазму крови. Раз цитокины являются локальными медиаторами, целесообразно измерять их концентрацию в соответствующих тканях [2]. И если концентрация цитокинов в периферической крови при эндометрите после КС уже описана в литературе [1], то содержание цитокинов в лохиях изучено недостаточно.
Цель работы - определение уровня про- (EL-6, IL-8) и противовоспалительных цитокинов (IL-10) в лохиях для ранней диагностики эндометрита после КС.
Материалы и методы. Под нашим наблюдением находились 50 родильниц, родоразрешенных путем КС в модификации Stark. Основную группу (ОГ) составили 30 родильниц, послеоперационный период у которых осложнился развитием эндометрита. Диагноз устанавливали на основании клинических, лабораторных, УЗ- и данных морфологического исследования, соскобов из полости матки. Контрольную группу (КГ) составили 20 родильниц после КС, с неосложненным течением послеродового периода. Группы были сопоставимы по сроку родов, возрасту, осложнениям беременности и показаниям к операции. Для определения концентрации цитокинов использовали иммунофермент-ные наборы для количественного определения человеческого IL-
6, IL-8 и IL-10 в культуральной среде фирмы «BioSource» (Бельгия), группа компаний «BioChemMack». На автоматическом анализаторе «PersonalLab» (Италия). Математическая обработка цифрового материала выполнена на РС с использованием программы Microsoft Excel, определением критерия Стьюдента, различия считали статистически достоверными при р<0,05.
Результаты. Клиническими проявлениями заболевания в ОГ были: боли в нижних отделах живота различной интенсивности (91,1%), пастозность и болезненность матки при влагалищном исследовании (83,3%), патологический характер лохий (79,9%), повышение температуры тела (73,3%), в (39,9%) случаев сопровождающееся ознобами. У 19 родильниц (63,3%) заболевание протекало в стертой форме, у прочих (36,6%) клинические проявления септического осложнения были ярко выражены. В 29,9% случаев первые симптомы эндометрита развились на 2-3 сутки (вздутие живота, задержка отхождения газов, субфебриль-ная температура тела), в 69,9% - на 4-6 сутки послеоперационного периода (увеличение температуры тела, боли внизу живота, патологический характер лохий, пастозность и болезненность матки при влагалищном обследовании). Поэтому время установления диагноза и начало лечения распределилось между 3 и 5 сутками послеродового периода. У родильниц с нормальным пуэрперием и родильниц с эндометритом после КС, концентрация, соотношение и динамика цитокинов различны (табл. 1).
В КГ на 2-6 сутки послеоперационного периода было снижение концентрации IL-6 в лохиях на 12,7%. При развитии эндометрита после КС уровень IL-6 рос, превышая показатели КГ на 2, 4 и 6 сутки пуэрперия на 10,6%, 23,9% и 25,4% соответственно. Уровень IL-8 в лохиях при эндометрите после КС достоверно превышал таковой в КГ на 17,2%, 25,4% и 28,5% - на 2, 4 и 6 сутки пуэрперия, соответственно. Достоверный рост уровня IL-8 на 2 сутки пуэрперия говорит о развитии эндометрита, опережая клинические признаки (лихорадка, гнойное отделяемое, интоксикация) на 1-2 дня. Если за точку разделения между нормой и патологией на 2 сутки после КС принять уровень IL-8 в 600 пг/мл, то получится распределение пациенток - см. табл. 2.
Таблица 1
Содержание цитокинов в лохиях при нормальном пуэрперии (1) и при эндометрите (2) после КС, пг/мл (М±т)
IL-6 IL-8 IL-10
2 1 484,5±51,8 581,2±35,8 410,2±33,3
2 541 3±54 1 701 0±45 4* 308 6±51 2
4 1 444,0+41,9 540,1±45,9 384 2±38 4
2 583 2+58 3 724 3±47 4** 592 2±64 7**
6 1 423,3+20,1 480,7±36,4 339,0±21,9
сутки 2 567,7±51,4* 671,1±54,8** 534,3±58,7**
Примечание: достоверность различий между контрольной и исследуемой группой * - при р<0,05; **- при р<0,01
Таблица 2
Содержание 1Ь-8 в лохиях при различном течении пуэрперия после КС (2 сутки послеоперационного периода)
Эндометрит не установлен Эндометрит установлен Всего
IL-8 < 600 пг/мл 15 9 24
IL-8 > 600 пг/мл 5 21 26
Всего 20 30 50
На 2-е сутки послеоперационного периода определение концентрации 1Ь-8 для диагностики воспалительных осложнений имеет чувствительность теста 69,9% и специфичность -75,0%. Такое распределение родильниц на 4-е сутки послеродового периода (при появлении клинических симптомов), и принятие за условную точку распределения нормы и патологии концентрацию 1Ь-8 550 пг/мл, позволяет вычислить, что на 4 сутки пуэрперия определение концентрации 1Ь-8 для диагностики эндометрита после КС имеет чувствительность 86,7% и специфичность - 85,0% (табл. 3).
Таблица 3
Содержание ОЬ-8 в лохиях при различном течении пуэрперия после КС (4 сутки послеоперационного периода)
Эндометрит не установлен Эндометрит установлен Всего
IL-8 < 550 пг/мл 17 4 21
3 26 29
20 3£
IL-8 принадлежит к семейству хемокинов. Отличительной чертой этих молекул является их «индуцибельность», т.е. они практически не экспрессируются в нестимулированных клетках. IL-8 играет важную роль в регуляции движения лимфоцитов, в миграции различных популяций лейкоцитов (нейтрофилы, грану-лоциты, моноциты) в место повреждения или внедрения инфекционного агента. Вероятно, у родильниц КГ выброс клетками IL-8 связан с механическим повреждением тканей [8].
Определение концентрации IL-10 в лохиях после КС выявило, что в ОГ на 2 сутки послеоперационного периода концентрация JL-10 на 25,1% ниже, чем в КГ. А на 4 и 6 сутки послеоперационного периода концентрация IL-10 у родильниц ОГ превышала таковую в КГ на 35,1% и 35,5%. Более выраженная воспалительная реакция у родильниц ОГ инициирует впоследствии больший выброс противовоспалительных цитокинов и более глубокую иммунодепрессию. Реорганизация системных реакций является одним из универсальных механизмов контроля, нацеленных на ослабление избыточных проявлений воспалительного ответа и восстановление исходного гомеостаза организма [6]. Оценка уровня цитокинов в лохиях показала, что при развитии эндометрита имеется достоверный рост концентрации IL-6, IL-8 и IL-10, представляющих группу медиаторов с про- и противовоспалительными свойствами. Если в КГ отношение IL-8/IL-10 составляло ~1,4 в течение всего послеоперационного периода, то в ОГ баланс про- и противовоспалительных цитокинов был иным. На 2 сутки послеродового периода отношение IL-8/IL-10 было 2,28, что говорит о смещении цитокинового баланса в сторону провоспалительных медиаторов (р<0,05). На 4 и 6 сутки соотношение IL-8/IL-10 снижалось до 1,22 и 1,26 соответственно за счет достоверного роста уровня противовоспалительного IL-10 (рис.).
Статья
ш
DВосток Запад DСевер
1 кв 2 кв 3 кв 4 кв
Рис. Соотношение концентрации IL-8/IL-10 в лохиях у обследованных родильниц на 2-6 сутки после кесарева сечения.
Изменение цитокинового баланса у больных ОГ клинически значимо, что проявляется ростом уровня про- и противовоспалительных цитокинов и нарушением их соотношения. При проведении корреляционного анализа установлено, что у родильниц ОГ концентрация IL-8 и IL-10 находятся в прямой взаимосвязи (r = 0,62; p < 0,05). При этом повышенный уровень содержания IL-8 ассоциировался с клинической картиной заболевания; при классической картине заболевания увеличение уровня IL-8 >600 пг/мл отмечалось почти в 2 раза чаще, чем при стертой клинической картине (64% и 35%). Прямая корреляционная связь между уровнями про- и противовоспалительных цитокинов подтверждается [11, 12]. Рост уровня про- (IL-1, IL-6, IL-8, TNFa) и противовоспалительных цитокинов (IL-4, IL-10) при развитии гнойно-воспалительных заболеваний после хирургических операций является хорошо документированным фактом [7-9]. При нарушении баланса между про- и противовоспалительными цитокинами нарушается функционирование защитных механизмов, что ведет к иммунодепрессии и прогрессированию септического процесса.
Заключение. Количественная оценка концентрации цито-кинов в лохиях является ранним статистически достоверным признаком эндометрита после КС. Изменение уровня про- и противовоспалительных цитокинов на 1-2 суток опережает появление клинических симптомов эндометрита. Наиболее ранними и достоверными признаками для диагностики эндометрита после КС являются уровень IL-8 в лохиях и соотношение про- и противовоспалительных цитокинов IL-8/IL-10.
Литература
1. Кулаков В. И. // Акуш. и гин.- 2002.- №4.- С. 3-6.
2. Белокриницкая Т. Е., Витковский Ю. А. // Клин, лаб. ди-агн.- 1999.- №4.- С. 24, 33-35.
3. Сухих Г. Т. и др. // Вопр. гинекол., акушерства и перина-тологии.- 2004.- Т.4, №2.- С. 56-59.
4. Пальцев М. А., Иванов А. А. Межклеточные взаимодействия - М.: Медицина, 1995.- 224 с.
5. Демьянов А. В. И др. Цитокины и воспаление.- 2003.-Т.2.- С. 20-35.
6. Kupper T.S. // J. Invest. Dermat.- 1990.- Vol. 94.- P. 146.
7. BoneR. // Crit. Care. Med.- 1996.- Vol. 24.- P. 1125.
8. Gomez Jimenez J. et al. // J. Infect.Dis.- 1995.-№ 2.- P. 472.
9. Friedman G. et al. // J. Crit. Care.- 1997.- № 4.- P. 183-187.
10. Cogos, С.А. et al. // J. Infec. Dis.- 2000.- №1.- P. 176.
11. Marie C. et al. // Crit. Care Med.- 2000.- №7.-P. 2277.
12. Van Der Poll T., Van Der Venter S. // Infection Disease Clinics of North America.- 1999.- Vol.13, №2.- P. 413-426.
УДК 616. 12-073. 97
МУЛЬТИФРАКТАЛЬНАЯ ПРИРОДА СЕРДЕЧНОГО РИТМА ПЛОДА ПРИ ЕГО РАЗЛИЧНЫХ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СОСТОЯНИЯХ
Г.В. ГУДКОВ, Г.А. ПЕНЖОЯН, О.В. ТУРИЧЕНКО*
Введение. Анализ работ последних лет по различным аспектам изучения вариабельности сердечного ритма (ВСР) показывает, что помимо классических методов анализа во временной и частотной области существует устойчивая тенденция и все больший интерес к изучению ВСР с позиций нелинейного анализа [1, 2]. Сердечный ритм плода - результат функционирования сложной саморегулирующейся нейрофизиологической системы
управления, деятельность которой является причиной выраженной неоднородности и нестационарности его флуктуаций. В этой ситуации сравнение и классификация антенатальных кардиотоко-грамм становится сложной задачей, в решении которой традиционные методы (описательная статистика, спектральные и корреляционные методы) часто терпят неудачу [3, 4]. При традиционном рассмотрении шумоподобная «внутренняя» структура сердечного ритма обычно игнорируется из рассмотрения, поскольку считается, что этот шум случаен и в нем отсутствует значащая информация. Детальное же рассмотрение при помощи методов статистической физики и нелинейной динамики позволило выявить скрытую в этой шумоподобной вариабельности сложную масштабную структуру с фрактальными свойствами, чувствительно реагирующую на изменения адаптационных возможностей плода [5, 6]. В течение последних лет в международной печати активно обсуждается мультифрактальное поведение сердечного ритма, причем наиболее популярной техникой анализа является применение МФ-формализма (мультифрактального), базирующегося на непрерывном вейвлетном преобразовании (НВП) [8-9]. Эажно, что ни моно-, ни МФ-поведение сердечного ритма нельзя объяснить с позиций физиологического регулирования, основанного на принципе гомеостаза, поэтому представляют интерес механизмы формирования такого поведения [10].
В этом плане можно рассмотреть две возможности. Первая - мультифрактальность (МФ) сердечного ритма является следствием ответа механизмов нейрофизиологического управления на фрактальные стимулы, связанные с биофизической активностью плода. При их отсутствии сердечный ритм должен прекратить демонстрировать МФ-поведение. Вторая - механизмы нейрофизиологического управления устроены так, что в норме производят МФ-динамику сердечного ритма даже без внешнего раздражающего шума, т.е. МФ является внутренней особенностью нормально функционирующих регуляторных механизмов.
Цель - проверка гипотез происхождения МФ-поведения сердечного ритма плода в антенатальном периоде.
Материалы. Для подтверждения одной из гипотез происхождения МФ сердечного ритма плода проводили антенатальную кардиотокографию в 2 группах беременных: в 1-й - при функциональной активности здорового плода, во 2-й - при парасимпатической блокаде сердечной деятельности плода в ходе кордо-центеза. 80 пациенток составили 1-ю группу в сроках гестации 30-35 недель, у которых при ретроспективной оценке имелся благоприятный исход беременности и гладкое течение периода ранней адаптации у новорожденного. Во 2-ю группу включены 22 женщины с резус-сенсибилизацией, которым в 30-33 недели проводили лечебно-диагностический кордоцентез. Трансабдоминальный кордоцентез вели под постоянным УЗ- и кардиомони-торным наблюдением за состоянием плода при помощи УЗ-аппарата «АЬ0КА-500» 2-игольным методом [11]. Показанием к кордоцентезу был титр резус-антител >1:8 и отягощенный акушерский анамнез. Исходное функциональное состояние плода по данным УЗИ и кардиотокографии расценивали как удовлетворительное (>7-8 баллов по Фишеру). Во всех случаях был благоприятный исход беременности: 15 (68,2%) женщин родоразрешены в доношенном сроке (из них 7 - кесаревым сечением), остальные - досрочно в сроках гестации 33-36 недель операцией кесарева сечения из-за внутриутробного страдания плода.
В 1-й группе длительность кардиомониторинга составляла 40-90 минут, при этом на записях можно было отчетливо выделить два типа вариабельности, одна из которых соответствовала периоду активного состояния плода, а другая - покою. Кардио-ритмограммы, соответствующие различным фазам активности плода, обрабатывались по отдельности, причем продолжительность каждого участка записи составляла >20 минут. У беременных 2-й группы кардиомонинг плода проводился до манипуляции и после введения в вену пуповины миорелаксанта (ардуан - 0,1 мл/кг веса плода) и атропина (в той же дозировке для купирования брадикардии у плода). Участки записи анализировались по отдельности, их длительность была >20 минут. Регистрация сердечного ритма плода велась при помощи фетального кардиомонитора «Согоше1;пс8-120» в положении беременной лежа на спине (или на боку) трансабдоминально с использованием УЗ-датчика 1,15 МГц. Фетальный ритм сердца выделялся из допле-ровского сигнала высокоточным автокорреляционным методом [12] и далее обрабатывался на компьютере. Файл данных пред-
* Кубанский мединститут, г.Краснодар, Краевой Перинатальный центр,
