Научная статья на тему 'Диагностический метод окраски свежего мяса по Гансу Кристиану Граму'

Диагностический метод окраски свежего мяса по Гансу Кристиану Граму Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

CC BY
458
31
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ГНИЕНИЕ / ГНИЛОСТНЫЕ МИКРОБЫ / ОКРАСКА ПО ГРАМУ / СВЕТОВОЙ МИКРОСКОП / МЯСО

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Кулясов Пётр Александрович, Мушаева Альбина Игоревна, Новиченко Екатерина Дмитриевна, Юдина Елизавета Александровна, Имашев Камбар Азаматович

Исследование проведено с целью микробиологического анализа мяса и мясных продуктов, рекомендуемых для употребления в пищу, на наличие в них гнилостной микрофлоры. Рассмотрены основные причины гниения мяса и мясных продуктов. Микробиологическим путём и методом окраски по Граму было достоверно установлено, что возбудителем гниения следует считать гнилостных микробов. Основным виновником гнилостного распада свежего мяса при небрежном его хранении с нарушением соблюдения ГОСТа следует считать сапрофитную гнилостную микрофлору, зародыши которой в большом количестве находятся в воздушной среде. Показано, что гнилостные микробы при соблюдении правильности использования красителей хорошо окрашиваются сложным диагностическим методом по Граму в красный цвет (грамотрицательные бактерии). Процесс гниения мяса и мясных изделий протекает только при наличии тепла и обильной влажности. В условиях резко континентального климата для дальнейшего сохранения свежего мяса от порчи и для предупреждения возникновения разложения мясных ингредиентов необходимо создать оптимальную среду с минусовой температурой.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Кулясов Пётр Александрович, Мушаева Альбина Игоревна, Новиченко Екатерина Дмитриевна, Юдина Елизавета Александровна, Имашев Камбар Азаматович

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

DIAGNOSTIC METHOD FOR FRESH MEAT STAINING BY HANS CHRISTIAN GRAM

The study was conducted with the aim of microbiological analysis of meat and meat products, recommended for human consumption, for the presence of putrefactive microflora in them. The main causes of rotting meat and meat products are considered. It was reliably established by microbiological and Gram stain methods that putrefactive microbes should be considered as the causative agent of decay. The main culprit of the putrefactive decay of fresh meat in its careless storage with violation of compliance with GOST should be considered a saprophytic putrefactive microflora, the germs of which are in large numbers in air. It is shown that putrefactive microbes, while respecting the correct use of dyes, are well stained with a complex Gram diagnostic method in red (gram-negative bacteria). The process of rotting meat and meat products takes place only in the presence of heat and abundant humidity. In the conditions of a sharply continental climate, in order to further preserve fresh meat from spoilage and to prevent the decomposition of meat ingredients, it is necessary to create an optimal environment with a minus temperature

Текст научной работы на тему «Диагностический метод окраски свежего мяса по Гансу Кристиану Граму»

являются нуклеинат натрия и экстракт плаценты, широко применяется в комплексной терапии инфекций [4] и паразитарных заболеваний [6—8], а также при лечении отравлений и интоксикаций самой различной этиологии у собак и кошек [9—11]. Энтерофурил используется в ветеринарии при лечении диареи инфекционного характера. Предлагаемая схема профилактики выглядит следующим образом: за неделю до транспортировки щенкам вводят фоспренил (подкожно 0,5 мл, 2 раза в день, 7 дней) и гамавит (2 раза в день, 7 дней); в день отъезда щенкам разово выпаивают фоспренил (5 мл на гол.) и энтерофурил (1,5 мл); за 2 недели до поездки щенки приучаются к поилке (объёмом 1 л), которая будет использоваться во время транспортировки. В поилку заливается чистая кипяченая вода с добавлением 20 мл фоспренила; сразу по приезде щенкам разово выпаивают фоспренил (5 мл на гол.), энтерофурил (1,5 мл 3 раза в день, 3 дня) и делают подкожные инъекции гамавита (1 мл 2 раза в день, 5 дней); клетки для содержания щенков промывают горячим раствором соды и ошпаривают кипятком 1 раз в день.

С использованием данной профилактической схемы была осуществлена последовательная транспортировка ещё трёх групп щенков мальтийской болонки, по 5 особей в каждой (возраст животных 1,5-2 мес., вес 500-800 г).

У щенков III гр. клинических признаков заболевания отмечено не было. По результатам анализа кала один щенок из пяти имел 15 саркоцист в поле зрения, но остался клинически здоровым, без признаков диареи. Клинические проявления кокцидиоза были замечены в IV гр. у одного щенка и в V гр. у одного щенка.

Заболевшим был проведён курс фоспренила (подкожно 0,5 мл 2 раза в день, 10 дней). Также им вводили гамавит (1,0 мл подкожно 2 раза в день, 10 дней). В обоих случаях заболевание прошло легко, капельницы не потребовались. Однопомётники остались клинически здоровы.

В качестве контроля (V гр.) использовали помёт той же породы, которую транспортировали вместе с III гр. В данной группе пяти щенкам-

однопомётникам не проводили предварительную медикаментозную подготовку (животные предназначались другому владельцу). В итоге по приезде четыре щенка из пяти погибли с симптомами кокцидиоза. Фоспренил в схеме лечения не применялся.

Вывод. Предлагаемая профилактическая схема позволяет предохранить щенков от заболевания кокцидиозом при длительной транспортировке и высокой вероятности контакта с возбудителем инфекции. В отдельных случаях развития заболевания последнее протекает в облегчённой форме и (при рекомендуемом лечении) не передается окружающим.

Литература

1. Маслюк Е.В., Бажибина Е.Б. Статистическое исследование заболеваемости кокцидиозом собак, кошек и других животных в городе Москве // Материалы XVI Московского международного конгресса по болезням мелких домашних животных. М., 2008.

2. Санин А.В., Липин А.В., Зинченко Е.В. Ветеринарный справочник традиционных и нетрадиционных методов лечения собак. 3-е изд., испр. и дополн. М.: Центрполиграф, 2006, 580 с.

3. Санин А.В., Манько В.М. Неспецифический иммунитет // Гематология и трансфузиология. 1993. № 4. C. 11—18.

4. Санин А.В. Иммуномодуляторы в ветеринарной практике — применение и противоречия / А.В. Санин, А.Н. На-ровлянский, С.В. Ожерелков [и др.] // Ветеринарная клиника. 2008. № 10. С. 10-12.

5. Пронин А.В. Фоспренил и профилактика птичьего гриппа / А.В. Пронин, А.Н. Наровлянский, П.Г. Дерябин [и др.] // Ветеринария Кубани. 2006. № 2. С. 27-28.

6. Саличев А.В. Рандомизированное контролируемое двойное слепое исследование антитоксического действия гамавита и гамавитфорте в эксперименте in vivo с применением Имидокарба дипропионата / А.В. Саличев, С.В. Ожерелков,

A.В. Изместьева [и др.] // Ветеринария Кубани. 2011. № 6. С. 22-25.

7. Санин А.В. Особенности применения иммуномодуляторов при паразитарных инвазиях / А.В. Санин, О.Ю. Сосновская,

B.Ю. Санина [и др.] // Ветеринария Кубани. 2010. № 2.

C. 15-18.

8. Фурман И.М. Новый подход к лечению пироплазмоза у собак / И.М. Фурман, О.А. Федорченко, И.Г. Гламаздин [и др.] // Ветеринар. 2005. № 1. C. 24-25.

9. Переслегина И.О. Комплексная терапия хронического отравления и сопутствующей патологии у собаки: клинический случай // Школа науки. 2018. № 9. С. 26-27.

10. Переслегина И.О., Кожевникова Т.Н. Эффективность применения Гамавита при токсокарозе у кошек // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2018. № 6 (74). С. 162-163.

11. Сосновская О.Ю., Кожевникова Т.Н., Санина А.А. Антитоксическое действие Гамавита при экспериментальной нейротоксической энцефалопатии, вызванной протозоо-цидным препаратом // Школа науки. 2018. № 10. C. 23-24.

Диагностический метод окраски свежего мяса по Гансу Кристиану Граму

П.А. Кулясов, к.в.н., А.И. Мушаева, бакалавр, Е.Д. Нови-ченко, бакалавр, Е.А. Юдина, бакалавр, К.А. Имашев, бакалавр, ФГБОУ ВО Калмыцкий ГУ

С начала XV и до XIX вв. включительно в научной среде велись ожесточённые споры о причинах возникновения брожения, гниения и известных на тот период времени инфекционных

патологий. Знаменитый немецкий химик Юстус Либих утверждал, что первоисточником всех вышеперечисленных процессов является химическая реакция, происходящая как между компонентами забродившей жидкости и приводящая её к порче, так и химические изменения в самом живом или мёртвом теле. Другой химик-мыслитель француз Луи Пастер утверждал, что возможной причиной

этих явлений является наличие индивидуального для каждого отдельно взятого природного процесса в живой и мёртвой среде биологического возбудителя. Пытаясь опровергнуть нерушимую догму авторитетного немецкого химика, Луи Пастер показал биологическую роль бродильных и гнилостных процессов. Позже его высказывания были доказаны как им самим, на основании лично выполненных экспериментов, так и другими выдающимися учёными. Были найдены живые биологические возбудители всех видов брожения — дрожжевые грибки и бактерии, гниения — гнилостные микробы, а также инфекционных болезней — патогенная микрофлора и фильтрующие вирусы [1, 2].

Гниение, или разложение — это микробиологический процесс распада производных животных и растений под влиянием микроскопических микробов и дрожжей с выделением конечных продуктов их жизнедеятельности — скатола, индола, сероводорода и меркаптана, вплоть до аммиака. При гнилостном распаде любой животный продукт в условиях повышенной температуры внешней окружающей среды и оптимальной влажности начинает скоротечно портиться, от него исходит неприятный гнилостный запах испорченного мяса за счёт постоянно увеличивающегося числа гнилостных микробов, и он способен находиться в таком состоянии долгий период времени. Возбудителем гниения мясных продуктов животного происхождения является живой биологический возбудитель — гнилостный микроб [3, 4].

В Калмыцком государственном университете им. Б.Б. Городовикова было проведено исследование микробной обсеменённости свежего мяса и полученных из него мясных изделий.

Цель исследования — микробиологический анализ мяса и мясных продуктов, рекомендуемых для употребления в пищу, на наличие в них гнилостной микрофлоры.

Материал и методы исследования. Микробиологическими методами было исследовано товарное свежее мясо, полученное от убойных животных (крупный рогатый скот) на убойном пункте, с целью выявления причин гнилостного распада мышечных волокон.

Для проведения исследования брали несколько чистых стеклянных ёмкостей объёмом 250 мл, помещали в каждую из них несколько мелко нарезанных кусочков мяса, заливали до половины дистиллированной водой, закрывали сверху ватной пробкой, ставили в термостат на 24 часа при температуре 25°С. Термостат представляет собой металлическое оборудование, в котором длительный период времени поддерживается постоянная плюсовая температура, что даёт возможность за короткий срок вырастить чистые микробные культуры [5].

Для диагностики живого возбудителя использовали широко известный метод окрашивания по Граму, упрощённый современный вариант окраски

красителями, когда вместо генцианвиолета для красочности изображения применили метиленовый синий, а фуксин Пфейффера поменяли на красный краситель — сафранин.

Вначале из смеси Никифорова (равные части 96-процентного этилового спирта и наркотического эфира, 1:1) металлическим пинцетом доставали предметное стекло и подносили его к пламени огня спиртовки [6]. Происходило фламбирование стекла от микробов (полное сгорание этилена и эфира на огне). Далее предметное стекло размещали на мостике кюветки и после его лёгкого остывания наносили на его верхнюю поверхность несколько капель микробного бульона, размером с однорублёвую монетку. Добивались того, чтобы пятно было как можно шире, так как чем шире будет пятно, тем больше можно обнаружить микробов.

Держа пинцетом за свободный край предметное стекло, производили аккуратное высушивание препарата над пламенем огня спиртовки, культурой вверх. После его высыхания помещали предметное стекло обратно на мостик стеклянной кюветки и на высохшее пятно накладывали ровный квадратик белой фильтровальной бумаги. Можно использовать квадратики фильтровальной бумаги, заранее окрашенные красителем по методу Синева или метиленовой синькой [7—9].

Окраску фильтровальной бумаги и подготовку препаратов к исследованию осуществляли по определённой схеме.

1. Окрашивание метиленовой синькой (метиленовый синий) — на 2 мин. Исходное время отмеряли песочными часами или секундной стрелкой наручных часов.

2. Окрашивание раствором Люголя — на 2 мин. (состав: 1 г кристаллического йода, 2 г калия йодида, 300 мл дистиллированной воды. Раствор готовят заранее: 1 г йода и 2 г йодистого калия растворяют в 10 мл дистиллированной воды, ставят на сутки (24 часа) в термостат, после чего добавляют 290 мл воды).

3. Обработка спиртом этиловым 96-процентной концентрации — 30 сек.

4. Первый промыв — обильно дистиллированной водой.

5. Окрашивание фуксином Пфейффера — 2 мин. (состав: фуксин Циля, 1 мл + 9 мл дистиллированной воды). Фуксин Пфейффера готовится из фуксина Циля (фуксин основной кристаллический красный — 1 г, спирт этиловый 96-процентной концентрации — 10 мл, карболовая кислота (фенол) кристаллический порошок — 5 г, глицерин (тягучая жидкость) — 5 мл и дистиллированная вода — 100 мл). Вместо фуксина Пфейффера рекомендуется использовать красный краситель сафранин.

6. Второй промыв — обильно дистиллированной водой.

7. Фиксация микробного препарата. Проводится с целью убить возбудителя болезни, т.к. мёртвые

микробы лучше окрашиваются, удержать культуру возбудителя на предметном стекле. Фиксация бывает физической (над пламенем огня спиртовки) и химической (раствор Никифорова — 96-процентный этиловый спирт + наркотический эфир). Нами проведена физическая фиксация мазка.

Чтобы избежать быстрого растрескивания высыхающего красителя, нельзя близко приближать мазок к пламени огня спиртовки. Если это правило будет нарушено, то при микроскопии под световым микроскопом в поле видимости окуляра (7х, 10х, 15х) будут чётко видны тонкие и заострённые с обоих противоположных концов прямые палочки тёмного цвета, слегка изогнутые с концов (рис. 1).

8. Изучение с помощью светового бинокулярного микроскопа (окуляр 10х умножается на иммерсионный объектив 100х = увеличение 1000 раз) микробной культуры на предметном стекле, используя иммерсионное (кедровое) масло так, чтобы одна его капля попала на мазок микробной

Рис. 1 - Неправильно фиксированный микробный мазок, сожжённый на пламене огня спиртовки

культуры. Линза иммерсионного объектива 100х должна коснуться поверхности капли иммерсионного (кедрового) масла, лежащего на мазке микробной культуры предметного стекла, и погрузившись в него, дать изображение микробов, которые могут быть палочковидными или цилиндрическими. Грамотрицательные окрашиваются в красный (розовый) цвет.

9. Получение фотографий и нанесение на них обозначений, учитывая масштаб и объём изображения (рис. 2).

Результаты исследования. Путём проведения эксперимента с применением диагностической окраски мясного бульона (МБ) при увеличении светового микроскопа до 1000-1500-кратности раз было отмечены множество мельчайших гнилостных микроорганизмов палочковидной формы. Они являлись основными виновниками порчи свежего сырого мяса при нахождении его в ненадлежащих условиях, связанных с нарушением требований ГОСТа по хранению и транспортировке мяса и мясных изделий.

Окрашивают по методу Грама в основном сапрофитные микробы непатогенного характера. Палочковидные микробы живут совместно с другими живыми организмами (растениями или животными), выполняя двойную функцию: приносят ощутимый вред или характерную пользу. Микробная клетка имеет настолько малый микроскопический размер, что увидеть её возможно только с помощью светового или электронного микроскопов с определённым набором окуляров и объективов. При благоприятных для своей жизнедеятельности условиях внешней окружающей среды и внутренней среды микробы быстро размножаются в короткий срок (24 часа), образуя огромные колонии, достигающие в своем количестве сотни миллионов отдельных экземпляров.

Выводы

1. Основным виновником гнилостного распада свежего мяса при небрежном его хранении с

А Б

Рис. 2 - Окрашенные по методу Г. Грама в красный цвет палочковидной формы микробы мяса:

А - 1000-кратное увеличение светового микроскопа; Б - 1500-кратное увеличение светового микроскопа

нарушением соблюдения ГОСТа следует считать сапрофитную гнилостную микрофлору, зародыши которой в больших количествах находятся в воздушной среде.

2. Гнилостные микробы при соблюдении правильности использования красителей хорошо окрашиваются сложным диагностическим методом по Граму в красный цвет (грамотрицательные бактерии).

3. Процесс гниения мяса и мясных изделий протекает только при наличии тепла и обильной влажности.

4. В Республике Калмыкия резко континентальный климат, переходящий от влажности в осенне-зимний период в длительную засуху в весенне-летний период, что вызывает быструю порчу мяса и мясных изделий.

Литература

1. Кулясов П.А., Босхомджиева Е.Д. Лабораторный практикум по микробиологии и микологии // Элиста: Изд-во Калм. ун-та, 2018. 243 с.

2. Босхомджиева Е.Д. Лабораторный практикум по микробиологии: учебное пособие. Элиста: Изд-во Калм. ун-та, 2014. 80 с.

3. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. М.: Издательский центр «Академия», 2003. 464 с.

4. Егоров Н.С. Практикум по микробиологии: учебное пособие. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1976. 307 с.

5. Егоров Н.С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1983. 215 с.

6. Кулясов П.А., Санджиева Э.Ц., Лизинов И.В. Микробное и дрожжевое брожение зерновых и плодовоовощных культур растений // The scientific heritage 2017. N 13 (13). Budapest, Hungary. С. 9-16.

7. Мишустин Е.Н., Емцев В.Т. Микробиология. М.: Колос, 1970. 320 с.

8. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. М.: Агропромиздат, 1987. 239 с.

9. Черкес Ф.К. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.: Изд-во «Медицина», 1974. 222 с.

Ветеринарная служба Чкаловской области в 1946-1953 гг.

Ю.В. Кузнецова, к.и.н, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ

После Великой Отечественной войны медленными темпами шло развитие сельского хозяйства. Оно находилось в тяжёлом положении: уменьшились посевные площади, автомобильный и тракторный парки, а оставшаяся техника была сильно изношена. Колхозы, совхозы, МТС Чкаловской области ощущали недостаток рабочих и квалифицированных кадров, специалистов сельского хозяйства, в том числе и ветеринарных врачей. Например, в Люксембургском районе в 1946 г. не было ветврача и лечили скот малоквалифицированные ветработники [1, л. 17]. В 1947 г. для райветле-чебниц, зооветучастков и ветеринарно-санитарных учреждений Оренбургской области требовалось 271 ветврача (имелось 117), веттехников — 348 (имелось 230) [2, л. 136 об.].

Следует отметить и тот факт, что не всегда замещение свободных должностей происходило под контролем местных властей. Это приводило к тому, что отдельные районы области испытывали избыток, а другим не хватало ветеринарных врачей. Так, в 1950 г. в Ново-Орском районе 3 ветврача работали не по специальности [3, л. 59].

В Оренбургской области ощущался недостаток специалистов с высшим образованием. В 1947 г. в Оренбуржье имелись участки, укомплектованые ветврачами с высшим образованием на 22,7% и ветфельдшерами со средним образованием на 32,7% [4, л. 19].

Для восполнения убыли и повышения уровня подготовки ветеринарных врачей принимались следующие меры: организация обучения в высших и средних учебных заведениях, курсовая подготовка

и переподготовка. Помимо курсов организовывались семинары, производственные конференции по изучению экономических основ сельхозпро-изводства, агрономии, зоотехнии и ветеринарии. На них к чтению лекций привлекались квалифицированные специалисты и партийные работники.

В 1953 г. в Ак-Булакском районе в пяти колхозах организовали агротехнические курсы [5, л.1]. За 1945 г. в регионе провели 246 совещаний по вопросу ликвидации и выполнения плана профилактических мероприятий [6, л. 17]. В Дер-жавинском районе практиковались выступления передовиков сельского хозяйства и специалистов сельского хозяйства по радио, например, старший ветврач Леонов прочитал лекцию на тему «Борьба с заразными болезнями» [7, л. 34].

Перед ветеринарами и зооветспециалистами стояли две основные задачи: непрерывное увеличение поголовья скота и сохранение его от падежа; повышение продуктивности животных (получение от них больше молока, мяса, шерсти и других продуктов) путём организации кормовой базы, правильного ухода, кормления и содержания скота.

Противоэпизоотические планы составлялись согласно приказам Народного комиссариата земледелия РСФСР «О ходе профилактических и ветеринарно-санитарных мероприятий в колхозах РСФСР», «О мерах по борьбе с чесоткой лошадей» и приказов областного управления сельского хозяйства (№ 206 от 14 апреля 1947 г. «Об организации противоплазмовых мероприятий на весенне-летний период в колхозах области»; № 207 от 21 апреля 1947 г. «О проведении оздоровительных мероприятий против чесотки овец в колхозах области»; № 448 от 9 июля 1947 г. «О проведении прививок

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.