CC BY
24
УДК 619 648:616.993192.1:636.92
Передера О.О., астрант ® Полтавська державна аграрна академгя
ДЕЗШВАЗ1ЙНА Д1Я БРОВАДЕЗУ-ПЛЮС НА ООЦИСТИ ЕЙМЕР1Й
КРОЛ1В
Дослгджено дт дезгнфгкуючого препарату „Бровадез-плюс" на ооцисти еймерт крол1в. Встановлено, що контакт з дослгджуваним препаратом викликав видимI деструктивы змти у морфологи паразита та призводив до статичного впливу на споруляцт ооцист
Ключовi слова: кролг, еймерюз, ооцисти
Вступ. Стратегия профилактики гельмiнтозiв тварин базусться на комплекс заходiв, що ефективно знешкоджують збудниюв на рiзних етапах !х розвитку [1-3]. Один iз найдieвiших профшактичних заходiв це дезiнвазiя, оскшьки знезараження навколишнього середовища - важливий фактор розриву ланок етзоотичного ланцюга гельмштозних хвороб, що сприяе запобiганню мазування кiнцевих живителiв [4-6]. Для кролiвницьких об'eктiв актуальне питання дезшфекцп та дезшвазп, оскiльки це одна з головних умов гшени утримання тварин та виробництва еколопчно безпечних продукив харчування [7, 8]. Серед застосовуваних методiв дезшвазп примiщень та предмета догляду за тваринами найбiльш значущими е хiмiчнi. Нинi з них найчаспше рекомендують: натрiю гщроокис, катю гiдроокис, вапно хлорне, йод однохлористий. формалiн та срчано-карболова сумш. Така незначна кiлькiсть препаратiв, запропонованих для практики, обумовлена двома крш^ями. По-перше, вони повиннi вiдповiдати певним вимогам, а саме: бути високоефективними в невисоких (2—5%) концентращях, мати оптимальну експозищю (3-6 год.) та високий пор^ еколопчно! безпеки i при цьому не проявляти токсичност щодо тварин й обслуговуючого персоналу. По-друге, поряд iз широким спектром дезiнвазiйноl ди проти збудниюв основних паразитозiв вони повинш водночас мати бактерициднi, вiрусоциднi та фунгщидш властивостi, щоб з мммальними фiнансовими i трудовими затратами забезпечувати весь комплекс лiкувально-профiлактичних заходiв. Проте значна кшьюсть збудниюв паразитозiв, яю перебувають у стадiях яйця, личинки, ооцисти i цисти, досить стшю до ди рiзних видiв дезiнвазiйних засобiв.
У зв'язку з вузьким колом речовин, що згубно дшть на ооцисти, актуальним залишаеться питання пошуку нових засобiв дезшвазп. Тому, нами було проведено визначення ди вiтчизняного дезiнфектанту Бровадез-плюс (виробництво НВФ „Бровафарма") на ооцисти еймерiй кролiв. Даний препарат виготовлений на основi четвертинно! амоншно! сполуки бензалконiуму хлориду. Лабораторш й науково-виробничi випробування свщчать, що воднi розчини Бровадезу-плюс у низьких концентращях не викликають корози металiв,
® Науковий кер1вник - д.б.н., професор Манжос О.Ф. Передера О.О., 2008
209
вщноситься до малотоксичних препараив та мають, вiрусоциднi властивост [9, 10]. # #
Матер1ал 1 методи. У першiй серп експерименту вивчалася дiя на неспорульваш ооцисти Е.Бйеёае, якi отримували методом послщовних промивань iз печiнки кролiв, хронiчно хворих на печiнкову форму еймерюзу.
Дезiнвазiйну активнiсть препарату визначали в концентрацiях 1, 2, 3, 6, 10% при експозищях 1, 2, 3, 6, 10 i 15 годин, шляхом зрошення ними ооцист. Робочi розчини вiдповiдних концентрацш готували згiдно до рекомендацiй виробника i розливали у пробiрки, яю були попередньо пронумерованi. У кожну з пробiрок вносили водну суспензш неспорульованих ооцист, до яко! додавали препарат у певнш концентраций Для контролю в однш пробiрцi знаходилася суспензiя ооцист, якi не контактували з Бровадезом-плюс. Пiсля витримки протягом визначеного вiдрiзку часу ооцисти вщмивали вiд препарату у дистильованiй водi i розмiщували у пластмасових емностях. Проби ставили на споруляцiю у термостат при температурi 26°С. У зв'язку з тим, що паразитам, видшеним iз печiнки необхiдно бшьше часу для екзогенного розвитку, вивчення морфологи ооцист розпочинали iз 5 доби тсля постановки проб на споруляцш.
У другiй сери дослвдв вивчали дiю даного препарату на змшану культуру ооцист еймерiй, що видшялися у хронiчно хворих кролiв з фекалiями. Останнi зрошувались 1, 2, 3 та 6, 10% водними розчинами Бровадезу-плюс, а в контролi - звичайною водою. Дезшвазшну дiю препарату визначали на 2, 3 i 5 добу тсля обробки.
Перед постановкою проб на спорулящю пщраховували по 100 ооцист у кожнш пробi. Процес споруляци вивчали мiкроскопiчно при збiльшеннях мжроскопу 8х 10; 8x20; 8x40. Кожну концентращю розчинiв дослiдного препарату при певнш експозици перевiряли в трьох повторностях.
Результати дослщження.
Одержанi результати свiдчать про те, що найвищий-вщсоток ооцист, якi розвивалися iз затримкою спостерiгався у пробах, оброблених 1% робочим розчином Бровадезу-плюс при експозици 6 годин; вш становив 13,0±1,0% (табл. 1). При збшьшенш експозици до 10 годин, даний показник зменшувався на 4,3% i дорiвнював 8,66±0,57%, а при подовженнi контакту ооцист з дезшвазшним засобом до 15 годин становив 9,0±1,53%. Тенденщя до зниження спостерiгалася i при обробщ еймерiй вищими концентрацiями дослщжуваного препарату. При застосуваннi 2, 3, 6, 10 i 20 вщсотково! концентрацil проби з найменшою експозищею мали по 11±1,0, 10,6±1,5, 9,0±1,73, 6,7±1,2, 4,0±1,0, 3,3±0,6 вiдсоткiв ооцист, що розвивалися iз затримкою. На 2-6% вщ цих показникiв вiдрiзнявся аналогiчний результат у пробах з 15 годинною експозищею, причому рiзниця була бшьш суттевою при нижчих концентращях (1%, 2%), нiж при бшьш високих (3%, 6%, 10%). А при 20% концентраци цей показник був нижчим утричi при 15 годиннш експозицil нiж при 6 годиннш.
Найбiльша кiлькiсть ооцист, яю закiнчили споруляцiю була у пробах, оброблених 1% розчином Бровадезу-плюс при експозици 6 годин (42,3±1,53). При збшьшенш експозици до 10 i 15 годин, кшькють паразиив, в яких
210
утворилося по 4 спороцисти, зменшувалася i становила 12,0±1,0 та 9,0±1,53% вщповщно. Знижувався вiдсоток таких еймерiй i при пщвищенш концентраци робочих розчинiв препарату. 1х значення у пробах складали 41,6±2,1, 37,7±2,1, 34,6±2,1 34,0±1,73 i 5,6±0,58 % при 2, 3, 6, 10 i 20 вщсотковому дослiджуваному розчинi при 6 годиннш експозици.
Таблиця 1
Вплив розчишв Бровадезу-плюс на процес споруляци Е. $Нес1ае ( М±т)
на 5 добу споруляцi'l'
Кшьшсть ооцист Час, год. Концентращя препарату Контроль
1% 2% 3% 6% 10% 20%
Процес споруляци проходив 1з затримкою (%) 6 13,0 ±1,0 11 ± 1,0 10,6 ±1,5 9,0± 1,73 6,7 ±1,2 4,0 ± 1,0 3,3 ± 0,6
10 8,66 ±0,57 8,0 ±1,0 8,0 ±1,0 5,67 ±1,53 4,3 ± 1,5 3,0 ± 0,6 3,3 ± 0,6
15 6,0 ± 1,0 7,3 ±1,53 8,6 ±2,1 5,67 ±1,5 4,0 ± 1,0 1,3 ± 0,6 3,3 ± 0,6
Як1 закшчили споруляцш (%) 6 42,3 ±1,53 41,6± 2,1 37,7± 2,1 34,6 ±2,1 34,0± 1,73 5,6± 0,58 75,3 ± 1,2
10 12,0 ± 1,0 11,7± 2,1 10,7± 1,53 9,0± 1,0 8,7± 0,58 6,0 ± 1,0 76,7 ± 2,1
15 9,0± 1,53 9,3± 1,2 5,0 ± 1,0 3,3 ± 0,57 1,3 ± 0,57 - 73,3 ± 1,5
Процес споруляци не проходив (%)• 6 28,3 ± 1,3 31,0 ± 2,08 35,0 ± 1,0 39,3± 1,53 42,0± 2,5 76,0 ± 2,0 4,4 ± 0,6
10 64,3 ± 2,08 65,7 ± 3,05 67 ± 2,0 71,3 ± 3,05 73,7 ± 1,53 81,0 ± 1,0 3,3 ± 0,6
15 67,3± 1,53 70,66± 2,5 75,7± 1,53 74,3± 1,53 78,6± 1,15 82,6± 1,52 7,3 ± 3,0
Кшьшсть ООЦИСТ 3 атиповою будовою (%) 6 16,3± 1,5 17,7± 2,3 16,7± 2,1 17,0 ± 2,6 17,3 ± 4,0 14,3 ± 1,15 17,0 ± 1,0
10 15,0± 2,6 14,7± 3,1 14,3± 2,31 14,0 ± 0,5 11,0± 4,6 10,3± 1,5 16,7 ± 0,6
15 18,0± 1,73 12,7 ± 0,6 14,0 ± 2,64 16,6± 1,52 16,0± 2,6 16,0± 1,73 16,1 ± 0,5
Суттево зменшувалася кшькють паразит1в, що розвивалися при подовженш часу контакту ооцист з робочими розчинами препарату до 15 годин. При ди розчишв 2, 3, 6 1 10% даш показники становили вщповщно 9,3±1,2, 5,0±1,0, 3,3±0,57, 1 1,3±0,57%, а при ди 20% розчином паразити у яких вщбувався розвиток були вщсутш.
Вщсоток ооцист, якi не вступали у процес споруляци, був найвищим у пробах з 1% розчином i 6 годиннш експозици. Вiн складав 28,3±1,3%. При 15 годиннiй експозици даний показник збшьшувався до 67,3±1,53%. Подiбна
211
тенденщя збер^алася при обробщ ооцист робочими розчинами вищих концентрацш.
При застосуванш 2% розчину Бровадезу-плюс при експозици 6 i 15 годин, рiзницi мiж кiлькiстю паразитiв, що не спорулювали становила 38%, а самi значення складали 31,0±2,08 та 70,66% вщповщно. Обробка паразитiв 3, 6, 10 i 20% робочими розчинами давали подiбнi результати. Найнижче значення фжсували у пробах з 6 годиннш експозицieю, вони складали 35,0±1,0, 39,3±1,53, 42,0±2,65 та 76,0±2,0% вiдповiдно, а при 10 годиннш 1х значення доршнювали 65,7±3,05, 67±2,0, 71,3±3,05, 73,7±1,53 та 81,0±1,0%. У пробах з аналопчними концентрацiями, де контакт паразиив з робочим розчином Бровадезу-плюс продовжувався до 15 годин аналогiчнi значення пщвищувалися на 6-Ю % i становили 70,66±2,5, 75,7±1,53, 74,3±1,53, 78,6±1,15 i 82,6±1,52%, вiдповiдно.
Необхiдно вщм^ити, що бiльшiсть ооцист починаючи з 3-1 доби дослiджень склеювалися мiж собою оболонками. У подальшому останш зазнавали руйнаци, а самi ооцисти утворювали клiтиннi конгломерати (рис. 1). Оскшьки проводити 1х точний тдрахунок було неможливо, ефективнiсть водних розчишв Бровадезу-плюс була дещо вища зафжсовано!, а пiдрахунок проводився переважно серед одиничних ооцист.
Кiлькiсть ооцист з атиповою будовою в середньому становила 16-17%.
• я
Рис.1. Руйнування оболонок ооцист та припинення Тх розвитку. Нативний мазок. Збшьшення 10x15
У другш частинi дослiду, присвяченого визначенню дезшвазшно! ди Бровадезу-плюс, виявляли вплив розчишв рiзноl концентрацп даного препарату на змшану культуру ооцист еймерiй кролiв (табл.2).
212
Таблиця 2.
Вплив розчишв Бровадезу-плюс на процес споруляцп зм1шано1 культури _ооцист еймерш крол1в_
Споруляц1я в1дбуваеться Концентрац1я препарату Контроль
1% 2% 3% 6% 10% —
2 доба 11,0 ±2,0% 9,3 ±1,53% спорулящя вщсутня спорулящя вщсутня спорулящя ввдсутня 75,3 ±2,52%
3 доба 8,0 ±0,57% 4,0 ±1,0% спорулящя вщсутня спорулящя вщсутня споруляц1я в1дсутня 82,6 ±1,52%
5 доба 5,0 ±1,0% 0,33 ±0,6%. спорулящя вщсутня споруляц1я в1дсутня споруляц1я ввдсутня 83,3 ±2,1%
У частини еймерш, яю вступали у процес екзогенного розвитку протягом перших дiб, у подальшому виявляли незворотнi морфолопчш змiни. Оболонки 1х спор руйнувалися, а самi ооцисти повнiстю або частково заповнювалися дрiбнодисперсним вмiстимим (рис. 2), серед якого можна було розрiзнити фрагменти структур.
»
аг
Рис. 2. Змши у морфологи ооцисти тсля контакту з Бровадезом-плюс. Нативний мазок. Збшьшення 10x20
1- руйнування зародкового шару ооцисти тсля початку споруляцп, 2-ооциста без ознак споруляцп.
Таким чином, при ди на ооцисти еймерiй 1% розчином Бровадезу-плюс на другу добу експерименту, у розвиток вступало 11,0±2,0%, але надалi кiлькiсть паразитiв з ознаками споруляцп зменшувалася i становила на 3 добу -8,0±0,57%, а на 5-ту - 5,0±1,0% таких ооцист. При застосуваннi 2% розчину „Бровадезу-плюс" 9,3±1,53% еймерiй. У подальшому частина ооцист зазнавала
Ж
213
руйнаци i на 3 добу ix кшьюсть становила 4,0±1,0%, а на 5 добу - 0,33±0,6%. При ди на паразиив розчинами вищих концентрацш робочого розчину „Бровадезу-плюс" розвиток еймерш не вiдбувався.
Висновки. 1. У результат експериментальних дослiджень встановлено, що згубний вплив на ооцисти прямо пропорцшно залежить вiд термiну ix контакту та концентрацп робочого розчину дослщжуваного препарату.
2. Основна дiя препарату „Бровадезу-плюс" полягала у морфолопчних змiнаx переважно у дiлянцi мшропше; деструкци оболонок спор (здатнiсть руйнувати зародковий шар в процесi його дроблення, у результат чого кшьюсть ооцист з ознаками споруляци у пробах, оброблених даним дезшфектантом зменшувалася).
3. Спостерiгали ознаки локального руйнування зовшшньо' оболонки ооцист.
4. Отриманi результати свщчать про те, що кращi показники дп робочих розчинiв Бровадезу-плюс отримаш при застосуваннi i'x для обробки змшано' культури еймерiй кролiв. Такi данi можливо пов'язанi з тим, що формування ооцист Е. stiedae проходить у печiнцi - оргаш, багатому на iмуннi кл^ини. Це, у першу чергу, кл^ини Купфера, а також велика кшьюсть лiмфоцитiв, мiграцiя яких вiдбувалася впродовж усього розвитку паразита.
З шшого боку, згiдно з лiтературними даними, жовч сприяе розплавленню оболонок паразита, а неспорульоваш ооцисти Е. stiedae контактують з цieю рiдиною при пошкодженш паренxiми печiнки. Очевидно, для захисту вiд внутрiшнього середовища печшки ооцисти Е. stiedae повиннi у процес еволюци набувати окремих захисних меxанiзмiв, у першу чергу - до факторiв iмунного захисту макрооргашзму, а з iншого - вщ агресивного середовища даного органу.
Лггература
1. Бубнов В. Д. Дезинвазия животноводческих помещений при некоторых нематодозах: Автореф. дис. канд. вет. наук. — М., 1963.— 19 с.
2. Волков Ф.А. Изыскание средств и разработка химических методов дезинвазии помещений и почвы при гельминтозах свиней: Автореф. дис. канд. вет. наук. - М., 1975. - 23 с.
3. Кривошта Е.Е. Эпизоотология и профилактика при аскаридозе свиней: Автореф. дис. канд. вет. наук. — 1938. ~ 102 с.
4. Наумычева М.И. Стойкость яиц нематод к химическим веществам и другим физическим факторам: Автореф. дис. канд. вет. наук. - М., 1954. - с.
5. Черепанов А.А., Кумбов П.К., Григорьев А.Г., Перова Л.А. Методические рекомендации по испытанию и применению средств дезинвазии в ветеринарии. - М., 1999.- 17 с.
6. Radvan R., Merka V. // Sb. ved. pr. lek. fac. KU Hradci Kralove. - 1972. -H.15. -№ 5. -S. 485-490.
7. Ященко М.Ф., Коваленко В.Л. Превентивна дезшфекщя тваринницьких примщень // Ветеринарна медицина: Мiжвiд. темат. наук. зб. - X., - 2003.-№82.-С.691-693.
214
8. Новиков Н.Л., Черепанов А.А. Скрининг препаратов для обеззараживания твердых поверхностей в помещениях и на объектах животноводства // Матер, докл. науч. конф.: Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. - М., 2003.- Вып.4. - С.294-296.
9. Касач В., Фотша Т., Фотша Г., Дзюба В. Експериментальне випробування дезшфектанту Бровадез-плюс щодо збудниюв туберкульозу // Ветеринарна медицина Украши. - 2008.- №3. - С.39-40.
10. Березовський А.В., Фотша Г.А. Визначення параметрiв токсичност нового дезiнфектанту Бровадез-плюс // Науково-техшчний бюлетень iнституту бюлогп тварин державного науково-дослщного iнституту ветпрепаратiв та кормових добавок. - 2007. - Вип.8. - №3,4. - С.326-329.
Summary
The action of a disinfectant preparation "Brovadez-plus" on Eimeria's oocystes of rabbist has been studied. Is established, that the contact with studied preparation caused seen destructive changes in morphology of the parasite and influenced statically on process of oocystes' sporulation.
Rabbits, eimeriosis, oocystes
Стаття надшшла до редакцИ 10.04.2008
215
