CC BY
57
Выводы. 1. На начальном этапе формирования атероскле-ротического поражения сосудистого русла приоритетным показателем является уровень оксистата, который инактиви-рует NO.
2. В зависимости от степени снижения концентрации NO и роста оксистата на следующих этапах формирования ате-росклеротического поражения сосудистого русла отмечен приоритет и рост двух показателей - ФРЭС и МСР-1. Менее значимыми оказались ИЛ-6, ИЛ-8.
3. Нарастание концентрации эндотелина-1 в сыворотке крови начинается только при наличии деструктивно-дистрофических изменений сосудистой стенки, что проявляется ростом концентраций ФРЭС и МСР-1 в сыворотке крови.
ЛИТЕРАТУРА
1. De Rosa S., Cirillo Р., Рaglia A., Sasso L., Di Ра1та V., Chiariello M. Reactive oxygen species and antioxidants in the pathophysiology of cardiovascular disease: does the actual knowledge justify a clinical approach. Curr. Vasc. Pharmacol. 2010; 8(2).
2. Shah A., Passacquale G., Gkaliagkousi E., Ritter J., Ferro A. Биосинтез оксида азота в тромбоцитах при сердечной недостаточности: роль окислительного стресса. Cardiology. Research. 2011; 91: 625-31.
3. Pena J.M., MacFadyen J., Glynn R.J. et al. High-sensitivity C-reactive protein, statin therapy, and risks of atrial fibrillation: an exploratory analysis of the JUPITER trial. Eur. Heart J. 2012; 33(4): 531-7.
4. Griendling K.K., Sorescu D., Ushio-Fukai M. NAD(p)H oxidase: role in cardiovascular biology and disease. Circ. Res. 2000; 86: 494-501.
5. Puddu G.M., Cravero E., Arnone G. et al. Molecular aspects of atherogenesis: new in-sights and unsolved questions. J. Biomed Sci. 2005; 18: 373-88.
6. Shah P.K. Cellular and molecular mechanisms of plaque rupture. In: Khachigian L.M., ed. High-risk atherosclerotic plaques: mechanisms, imaging,models, and therapy. New York: CRC Press; 2005: 1-19.
7. Wang X., Connolly T.M. Biomarkers of vulnerable atheromatous plaques: translational medicine perspectives. Adv. Clin.Chem. 2010; 50: 1-22.
REFERENCES
1. De Rosa S., Cirillo Р., Рaglia A., Sasso L., Di Рalma V., Chiariello M. Reactive oxygen species and antioxidants in the pathophysiology of cardiovascular disease: does the actual knowledge justify a clinical approach. Curr. Vasc. Pharmacol. 2010; 8(2).
2. Shah A., Passacquale G., Gkaliagkousi E., Ritter J., Ferro A. Биосинтез оксида азота в тромбоцитах при сердечной недостаточности: роль окислительного стресса. Cardiology. Research. 2011; 91: 625-31.
3. Pena J.M., MacFadyen J., Glynn R.J. et al. High-sensitivity C-reactive protein, statin therapy, and risks of atrial fibrillation: an exploratory analysis of the JUPITER trial. Eur. Heart J. 2012; 33(4): 531-7.
4. Griendling K.K., Sorescu D., Ushio-Fukai M. NAD(p)H oxidase: role in cardiovascular biology and disease. Circ. Res. 2000; 86: 494501.
5. Puddu G.M., Cravero E., Arnone G. et al. Molecular aspects of atherogenesis: new in-sights and unsolved questions. J. Biomed. Sci. 2005; 18: 373-88.
6. Shah P.K. Cellular and molecular mechanisms of plaque rupture. In: Khachigian L.M., ed. High-risk atherosclerotic plaques: mechanisms, imaging,models, and therapy. New York: CRC Press; 2005: 1-19.
7. Wang X., Connolly T.M. Biomarkers of vulnerable atheromatous plaques: translational medicine perspectives. Adv. Clin.Chem. 2010; 50: 1-22.
Поступила 10.10.13
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
УДК 616.13-004.6-07:616.155.34-008.1
Мишланов В.Ю., Суханов С.Г., Сандаков П.Я., Ронзин А.В., Владимирский В.Е., Сыромятникова Л.И., Половинкина Т.А., Середенко Н.Н., Харузина О.В.
ДЕОЕнзины-АЛьОА, пЕптиДы и БЕЛКи, синтЕзирУЕмыЕ и высвоБожДАЕмыЕ нейтрофилами при атеросклерозе разной локализации
ГБОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия им. академика Е.А. Вагнера» Минздрава России, 614990, Пермь
В последние годы появились научные публикации о нарушении содержания дефензинов-альфа в нейтрофилах у больных атеросклерозом. Растет интерес как к различным нарушениям белоксинтезирующей функции нейтрофилов, так и к биологическим эффектам, вызываемым дефензинами, другими пептидами и белками, принимающими участие в проти-вомикробной защите организма человека. С целью изучения содержания дефензинов-альфа (1—3), синтеза и высвобождения других белков и пептидов нейтрофилами определяли концентрации дефензинов-альфа, липопротеида (а) (ЛП (а), С-реактивного белка (CPB), предшественника мозгового натрийуретического пептида (proBNP), VII фактора свертывания крови и фактора Виллебранда (ФВ) в супернатантах лейкоцитарных культур у больных стенокардией напряжения и атеросклерозом нижних конечностей. Проведена оценка нагрузочного теста in vitro с фактором некроза опухоли а (ФНОа). Одновременно изучали сывороточные концентрации цитокинов и проатерогенных белков. Установлено, что у больных с ИБС наблюдается нарушение белоксинтезирующей функции нейтрофилов, проявляющееся в снижении синтеза дефензинов-альфа, увеличении синтеза ЛП (а), proBNP, СРБ и ФВ. Установлена патогенетическая роль ФНОа. Выявлено увеличение концентрации ИЛ-8 в сыворотке крови.
Ключевые слова: дефензины; проатерогенные белки и пептиды; нейтрофилы; атеросклероз; цитокины; регуляция.
Для корреспонденции:
Мишланов Виталий Юрьевич, д-р мед. наук, проф., зав. каф. пропедевтики внутренних болезней; e-mail: [email protected]
V.Yu. Mishlanov, S.G. Sukhanov, P.Ya. Sandakov, A.V. Ronzin, V.E. Vladimirskiy, L.I. Syromiyatnikova, T.A. Polovinkina, N.N. Seredenko, O.V. Kharuzina
THE A-DEFENSINS, PEPTIDES AND PROTEINS SYNTHESIZED AND LIBERATED BY NEUTROPHILS UNDER ATHEROSCLEROSIS OF DIFFERENT LOCALIZATION
The academician E.A. Wagner Perm state medical academy of Minzdrav of Russia, 614990 Perm, Russia
In recent years, the scientific publications about disorder the scientific publications appeared concerning derangement of content of a-defensins in neutrophils of patients with atherosclerosis. The interest increases both to different derangement of protein-synthesizing function of neutrophils and to biological effects caused by defensins and other peptides and proteins taking part in anti-microbial defense of human organism. With purpose to study content of a-defensins (1-3) and synthesis and liberation of other proteins and peptides by neutrophils the concentrations of a-defensins, lipoprotein (a), C-reactive protein, precursor of cerebral natriuretic peptide, coagulation factor VII and von Willebrand factor were determined in supernatants of leukocytal cultures in patients with exertional angina pectoris and atherosclerosis of lower extremities. The evaluation of loading test was implemented in vitro with a-tumor necrosis factor in vitro. Simultaneously, serum concentrations of cytokines and pro-atherogenic proteins were analyzed. It is established that in patients with ischemic heart disease derangement of protein-synthesizing function of neutrophils is observed. The derangement is manifested in the form of decrease of synthesis of a-defensins, increase of synthesis of lipoprotein (a), precursor of cerebral natriuretic peptide, C-reactive protein and von Willebrand factor. The pathogenic role of a-tumor necrosis factor is established. The increase of concentration of interleukin-8 in blood serum is revealed.
Keywords: defensins, pro-atherogenic protein, peptide, neutrophils, atherosclerosis, cytokines, regulation
Введение. На протяжении 100 лет определяющим фактором для научных исследований является присутствие холестерина (ХС) в области атеросклеротических бляшек. Теория Н.Н. Аничкова (1913) о накоплении ХС в сосудистой стенке подтверждается крупными многоцентровыми исследованиями, установившими зависимость между величиной содержания ХС в крови и риском развития сердечно-сосудистых заболеваний, а также риском смерти, вызванной этими причинами. Гиперхолестеринемия признана важным фактором риска, и ее оценка входит в наиболее популярные шкалы сердечно-сосудистого риска [1]. Тем не менее индивидуальная оценка концентрации общего ХС (ОХС) сыворотки крови не может быть рассмотрена в отрыве от других факторов, таких как возраст, пол, наличие артериальной гипертензии, курение и т. д. ХС всегда является составной частью сложных биохимических веществ, в которых его молекула связана с жирными кислотами [2]. Поэтому в течение многих десятилетий изучают вопрос об определении липопротеинов, имеющих атерогенное значение. Однако оценка концентрации липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), очень низкой плотности (ЛПОНП), высокой плотности (ЛПВП), индекса атерогенности не позволила устранить существующее клиническое противоречие.
Нейтрофилы в условиях межклеточного контакта или стимуляции провоспалительными цитокинами синтезируют и высвобождают пептиды и белки, связывающие ХС [3]. Предполагается, что такая способность клеток реализуется не в кровотоке, а в очаге воспаления или сосудистой стенке. Методика определения синтезируемых нейтрофилами цито-кинов и пептидов применяется в нескольких научных лабораториях, не стандартизована, трудоемкая и экономически затратная, что является причиной недостаточного изучения участия отдельных пептидов в атерогенезе. Вместе с тем предложен метод регистрации общего количества белков и пептидов, синтезируемых и высвобождаемых нейтрофила-ми, которые связывают ХС, - определение липидвысвобож-дающей способности лейкоцитов (ЛВСЛ). Метод не требует больших экономических затрат, технически простой, выполняемый в течение 3 сут (в модификации 2 рабочих дня) и доказавший диагностическую ценность у больных с различными формами атеросклероза или факторами риска развития этого заболевания [4, 5].
Цель исследования - оценить содержание дефензинов-альфа(1-3), синтез и высвобождение других белков и пептидов нейтрофилами у больных атеросклерозом разной локализации, а также концентрации дефензинов и белков сыворотки крови, ассоциированных с атеросклерозом.
Материалы и методы. Обследовано 57 больных с ише-мической болезнью сердца (ИБС) в форме стенокардии напряжения II-III функционального класса, 65 больных обли-
терирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей (ОАНК), 20 практически здоровых лиц.
Диагноз ИБС был установлен на основании жалоб (стенокардия напряжения или одышка, усиливающаяся при физической нагрузке), изменений на ЭКГ, у 25 (43,9%) больных - по результатам коронарографии. Диагноз ОАНК ставили на основании данных анамнеза (перемежающаяся хромота), фи-зикальных признаков нарушения артериального кровотока, данных допплерографии, дуплексного сканирования артерий нижних конечностей, у 92,3% больных выполнено оперативное лечение, диагноз верифицирован морфологически.
Группы больных и здоровых лиц были сопоставимы по возрасту (от 40 до 77 лет), во всех группах преобладали мужчины (86% с ИБС, 94% с ОАНК). У 95,4% больных ИБС протекала одновременно с артериальной гипертензией II стадии, повышением артериального давления (АД) I—II степени. Гипотензивная терапия включала применение ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) и бета-адреноблокаторов (лозартан 10—20 мг/сут и/или бисопролол 5—10 мг/сут или карведилол 12,5 мг/сут). У 94,5% больных с ИБС наблюдалась хроническая сердечная недостаточность (ХСН) II—III функционального класса.
Больные ОАНК в 66,1% случаев имели сопутствующие заболевания сердечно-сосудистой системы в форме ИБС и/ или артериальной гипертензии. Хроническая артериальная недостаточность у 76,9% больных соответствовала Пб стадии, у 13,9% — III и IV стадиям, у 9,2% — I стадии. Обследование больных проводили в кардиологическом отделении МАУЗ ГКБ № 4 Перми и Федеральном центре сердечнососудистой хирургии Перми.
Специальные методы исследования заключались в определении концентрации интерлейкинов 6 и 8 (ИЛ-6, ИЛ-8, тест-наборы фирмы "Вектор-Бест-Урал", Новосибирск), фактора некроза опухоли а (ФНОа, тест-набор фирмы "Вектор-Бест-Урал", Новосибирск), дефензинов-альфа (1—3) с помощью тест-набора фирмы "Hycult Biotech" (HDA1—3), липопротеи-на (а) (ЛП (а), набор фирмы "Assa Pro"), С-реактивного белка (СРБ, тест-набор фирмы "Вектор-Бест-Урал", Новосибирск), предшественника мозгового натрийуретического пептида (proBNP, набор фирмы "Biomedica Slovakia"), фактора Виллебранда (ФВ, набор фирмы "Technozym") в сыворотке крови. Концентрацию ОХС в сыворотке крови определяли холестериноксидазным методом с помощью набора фирмы "Human". Кроме того, определяли ЛВСЛ по методу А.В. Туева и В.Ю. Мишланова (2000) [4], концентрации HDA1—3, СРБ, proBNP, ФВ, VII фактора свертывания крови (VII-F, набор фирмы "Assa Pro"), ЛП (а) в супернатантах 3-суточных культур нейтрофилов.
Исследование ЛВСЛ проводилось в иммунологической лаборатории ЦНИЛ ГБОУ ВПО «ПГМА им. акад. Е.А. Ваг-
нера» Минздрава России по авторскому методу А.В. Туева и В.Ю. Мишланова [4]. Для этого из венозной крови больного в стерильных условиях выделяли лейкоцитарную взвесь, используя метод отстаивания в центрифужных пробирках смеси венозной крови и раствора полиглюкина в соотношении 5:3. Суспензию лейкоцитов тщательно отмывали от поли-глюкина сначала путем осторожного ресуспендирования в физиологическом растворе хлорида натрия с последующим центрифугированием для осаждения клеток, затем отмывку производили в питательной среде Игла. После отмывки лейкоциты ресуспендировали в питательной среде. Проводили количественный подсчет выделенных клеток и готовили взвесь, содержащую 50 000 лейкоцитов в 1 мкл среды. Соотношение лейкоцитов в выделенной суспензии приближалось к таковому в цельной крови при значительном преобладании нейтрофилов (60—80%). После строгого количественного учета 400 мкл суспензии лейкоцитов культивировали при 37°С в течение 3 сут в неполной питательной среде в пени-циллиновых флаконах. Через 3 сут в надосадочной жидкости определяли содержание ОХС холестериноксидазным методом (тест-набор фирмы «Human»).
Выполняли тест с ФНОа in vitro. ЛВСЛ определяли в опытной (с добавлением 20 мкл раствора ФНОа в конечной концентрации 0,005 мкг/мл) и контрольной (с добавлением 20 мкл питательной среды) пробах культур лейкоцитов. Опытный и контрольный образцы инкубировали 62 ч при 37°С в термостате. После инкубации взвесь осторожно ресу-спендировали с помощью ручного дозатора объемом 200 мкл, центрифугировали 5 мин при 400 g. После этого осторожно забирали надосадочную жидкость и определяли в ней концентрацию ОХС холестериноксидазным методом с помощью набора реактивов фирмы "Human". Полученные результаты (в ммоль/л) обозначали как индуцированную ФНОа (опытный образец) и спонтанную ЛВСЛ (контрольный образец).
Статистическую обработку материала проводили при помощи программного пакета Statistica 8.0. Характеристика групп дана с использованием значений средней величины и среднего квадратического отклонения X±o). Сравнение двух независимых выборок осуществляли с использованием t-критерия для независимых наблюдений и непараметрического критерия Манна—Уитни. Различия считали достоверными при p < 0,05. Выполняли корреляционный анализ и рассчитывали коэффициент Спирмена.
Результаты и обсуждение. В группе больных с ИБС концентрация ОХС > 4 ммоль/л отмечена у 90%, ЛПНП > 1,8 ммоль/л — у 33% больных. Средняя концентрация ОХС составила 5,1 ± 1,17 ммоль/л.
В группе больных ОАНК концентрация ОХС > 4 ммоль/л зарегистрирована у 86% больных, средняя величина показателя составила 5,3 ± 1,03 ммоль/л.
ЛВСЛ > 0,15 ммоль/л наблюдалась у 51,7% обследованных больных с ИБС. Средняя величина ЛВСЛ в этой группе достоверно превышала значение в группе здоровых лиц. ЛВСЛ > 0,15 ммоль/л отмечена у 40% больных ОАНК (табл. 1).
Коэффициент корреляции между величинами ЛВСЛ и концентрации ОХС в группе больных с ИБС составил -0,6437 (р = 0,0046), в группе больных ОАНК—0,1680 (р = 0,3837).
Определены средние величины концентрации белков в супернатантах культур лейкоцитов. В группе практически здоровых лиц максимальный удельный вес имели дефензины и ЛП (а). У больных с ИБС была увеличена продукция нейтрофилами молекул proBNP, СРБ, ФВ, ЛП (а) и снижен синтез дефензинов. У больных ОАНК на-
ряду с ЛП (а) отмечено увеличение продукции СРБ и ФВ и нормальное содержание дефензинов-альфа в супернатантах лейкоцитарных культур (табл. 2).
Концентрации биологических веществ в сыворотке крови также различались в обследованных группах больных. Выявлено увеличение концентрации HDA1-3, СРБ, ИЛ-8 у больных с ИБС. У больных ОАНК выявлено увеличение концентрации HDA1-3 и СРБ (табл. 3).
В проведенном экспериментальном исследовании (in vitro) установлено, что во всех 9 (100%) экспериментах добавление в культуральную среду ФНОа в дозе 0,005 мкг/ мл вызывало повышение ЛВСЛ. Средняя величина ЛВСЛ до внесения препарата составила 0,15 ± 0,051, после него -0,35 ± 0,237 ммоль/л. Различие между группами статистически достоверно (р = 0,027).
В группе больных с ИБС выявлена прямая достоверная ранговая взаимосвязь между величиной ЛВСЛ и концентрацией ФВ в супернатантах лейкоцитарных культур (r = 0,5679, p = 0,0429). У больных ОАНК также установлена прямая достоверная ранговая взаимосвязь между величиной ЛВСЛ и концентрацией СРБ в супернатантах лейкоцитарных культур (r = 0,5630, p = 0,0289). В общей группе больных с ИБС и ОАНК отмечена прямая взаимосвязь между величиной ЛВСЛ и концентрацией СРБ в супернатантах лейкоцитарных культур (r = 0,4591, p = 0,0140), а также между ЛВСЛ и концентрацией proBNP в сыворотке крови (r = 0,4380, p = 0,0470). В группе здоровых лиц выявлена достоверная обратная взаимосвязь между концентрацией HDA1-3 и ЛП (а) в супернатантах лейкоцитарных культур (r = -0,9005, p = 0,0001), что указывает на взаимоисключающий характер синтеза этих белковых факторов, связывающих молекулы ХС с образованием белково-липидных комплексов (БЛК), и подтверждает мнение о нарушении структуры ЛВСЛ при сердечно-сосудистых заболеваниях.
Высвобождение ХС лейкоцитами в условиях культивирования in vitro нельзя объяснить фагоцитирующей функцией нейтрофилов и моноцитов в сыворотке крови. Возможно, даже имеется обратная зависимость между двумя изучаемыми функциями нейтрофилов - белоксинтезирующей и фагоцитирующей. Тем не менее в предыдущих наблюдениях достоверных взаимосвязей между концентрацией ОХС в сыворотке крови и величиной ЛВСЛ не выявлено. Нельзя исключить, что концентрация ОХС в сыворотке крови в большей степени отражает нарушение рецепции апо-белков и активность
Таблица 1
ЛвсЛ и концентрации ОХс в сыворотке крови (в ммоль/л)
Показатель Здоровые ИБС ОАНК Л Рг Р3
ЛВСЛ 0,12 ± 0,024 0,16 ± 0,081 0,17 ± 0,135 0,040 0,1099 0,7636
ОХС 4,1 ± 0,86 5,1 ± 1,17 5,3 ± 1,03 0,001 < 0,0001 0,3115
Примечание. Здесь и в табл. 2, 3: р1 - достоверность различий между группами здоровых лиц и больных с ИБС; р2 - достоверность различий между группами здоровых и больных ОАНК; р - достоверность различий между группами больных с ИБС и ОАНК. 3
Таблица 2
концентрации белков proBNP и пептидов в супернатантах культур лейкоцитов (в нг/мл)
Белки и пептиды Здоровые ИБС ОАНК Р1 Р2 Р3
HDA1-3 115,9 ± 83,81 62,1 ± 46,52 136,9 ± 86,14 0,044 0,438 0,004
ЛП (а) 35,7 ± 11,75 48,1 ± 10,22 56,6 ± 7,84 0,051 0,0001 0,010
VII-F 2,8 ± 4,70 2,5 ± 2,97 0,1 ± 0,37 0,150 0,0326 0,045
СРБ 1,9 ± 2,08 5,1 ± 3,40 6,6 ± 6,43 0,004 0,001 0,120
ФВ 0,032 ± 0,016 0,040 ± 0,008 0,051 ± 0,016 0,047 0,075 0,150
proBNP 0,002 ± 0,0033 0,198 ± 0,319 0,003 ± 0,0041 0,043 0,12 0,026
Таблица 3
Концентрации белков и пептидов в сыворотке крови (в нг/мл)
Белки и пептиды Здоровые ИБС ОАНК Р1 Рг Р3
HDA1-3 0,16 ± 0,135 0,67 ± 0,923 0,43 ± 0,485 0,043 0,046 0,111
ИЛ-6 1,0 ± 0,26 1,5 ± 0,58 1,0 ± 0,19 0,074 0,232 0,048
ИЛ-8 4,7 ± 12,04 13,7 ± 34,31 3,5 ± 5,95 0,034 0,664 0,150
СРБ 10,3 ± 10,31 44,7 ± 42,70 46,9 ± 55,12 0,005 0,005 0,314
VII-F 11,6 ± 4,49 14,2 ± 9,01 8,7 ± 4,34 0,251 0,034 0,009
proBNP 4,1 ± 9,35 43,3 ± 86,98 13,5 ± 39,21 0,052 0,301 0,129
тканевой липопротеинлипазы [2]. Следовательно, результаты исследования свидетельствуют о вероятности существования как минимум двух различных путей накопления ХС в области атеросклеротической бляшки. Первый связан с процессами инфильтрации в соответствии с теорией, предложенной Н.Н. Аничковым, второй обусловлен миграцией воспалительных клеток крови в интиму артериальной стенки и белоксинтезирующей функцией нейтрофилов.
Сравнительный анализ результатов культуральных и серологических исследований показал, что концентрации HDA1-3, выявляемые в культурах клеток, в 100 раз превышают концентрации, обнаруживаемые в сыворотке крови. Выявлены противоположные изменения: снижение содержания HDA1-3 в нейтрофилах и увеличение сывороточной концентрации антимикробных пептидов в группе больных с ИБС. Возможной причиной полученного результата является различие источников высвобождаемых пептидов. Известно, что HDA1-3 синтезируются эпителиальными клетками кишечника и нейтрофилами [6]. Однако в период циркуляции в крови (около 8 ч) белоксинтезирующая функция нейтрофилов не осуществляется, так как отсутствует необходимый тесный межклеточный контакт, возникающий в костном мозге и после миграции нейтрофилов в очаг воспалительной реакции [7, 8]. Поэтому сывороточная концентрация дефензинов может не совпадать с активностью той или иной клеточной популяции. Существует также точка зрения о возможности дегрануляции нейтрофилов в крови. Тем не менее дефензи-ны, как правило, принимают участие в киллинге фагоцитированных микроорганизмов. Полученные результаты указывают на снижение бактерицидного потенциала нейтрофилов у больных с ИБС. Одновременно установлено изменение соотношения синтезируемых и высвобождаемых нейтрофилами белков и пептидов, участвующих в механизмах воспаления и атерогенеза, увеличение синтеза ЛП (а), СРБ, ФВ, а у больных с ИБС - молекулы proBNP.
Результаты корреляционного анализа показали, что изменения ЛВСЛ у больных атеросклерозом коронарных артерий и артерий нижних конечностей связаны с составом синтезируемых и высвобождаемых белков. Установлены некоторые механизмы регуляции, участвующие в изменении функциональной активности нейтрофилов, - стимуляция ФНОа. Эти результаты совпадают с известными данными о стимулирующем действии провоспалительных цитокинов, опосредованном увеличении активности нуклеарного фактора кВ. Но указанные стимуляторы не активны в отношении синтеза дефензинов-альфа. Возникает предположение о стимулирующем влиянии ФНОа на синтез других пептидов и белков, роль которых в атерогенезе уже хорошо известна (апо(а), ФВ, VII фактор свертывания крови, proBNP).
Проблема нарушения белоксинтезирующей функции нейтрофилов у больных атеросклерозом в научных публикациях практически не обсуждалась и представляется относительно новым взглядом на патогенез атеросклероза и многих сердечно-сосудистых заболеваний. Информация о нарушениях синтеза дефензинов активно накапливается с 80-х годов прошлого века, и можно говорить о единич-
ных публикациях, посвященных проблеме сердечно-сосудистых заболеваний [5]. Интерес представляет тот факт, что многие синтезируемые нейтрофилами белки и пептиды обладают способностью связывать молекулы ХС, образовывать БЛК. Определение таких комплексов можно осуществлять как с учетом образующих их пептидов и белков, так и без учета качественного состава, только по концентрации ОХС в супернатантах культур лейкоцитов. Исследования, посвященные изменениям ЛВСЛ, проводились нами с конца 90-х годов XX века. Были получены данные о роли нарушения функциональной активности нейтрофилов у пациентов с нестабильной стенокардией, ишемическим мозговым инсультом, другими заболеваниями [3, 4]. Таким образом, новые данные конкретизируют нарушение белоксинтезирующей функции нейтрофилов у больных атеросклерозом разных локализаций и открывают перспективы продолжения научного поиска для определения маркеров для оценки течения и эффективности терапии сердечно-сосудистых заболеваний.
Выводы. 1. Установлены нарушения белоксинтезирую-щей функции нейтрофилов у больных с ИБС: снижение содержания и высвобождения дефензинов-альфа и увеличение содержания провоспалительных и проатерогенных белков и пептидов в супернатантах лейкоцитарных культур.
2. Больные с ИБС и ОАНК имеют разный спектр белков, синтезируемых нейтрофилами. У больных с ИБС БЛК включают ЛП (а), СРБ, ФВ, proBNP. У больных ОАНК БЛК включают ЛП (а), СРБ, ФВ.
3. Сывороточные концентрации проатерогенных белков не всегда отражают активность белоксинтезирующей функции нейтрофилов. Установлено одновременное снижение содержания дефензинов-альфа в нейтрофилах и увеличение их концентрации в сыворотке крови у больных с ИБС.
4. Изменение соотношения синтезируемых и высвобождаемых нейтрофилами белков и пептидов, связывающих ХС с образованием БЛК, а также увеличение общей ЛВСЛ могут быть важными механизмами патогенеза атеросклероза различных локализаций.
5. Цитокины участвуют в регуляции ЛВСЛ, установлено увеличение сывороточной концентрации ИЛ-8, а также стимулирующее влияние ФНОа in vitro и его активное участие в механизмах синтеза провоспалительных и проатерогенных белков нейтрофилами у больных с ИБС.
Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований, грант РФФИ урал_а № 1104-96017, и субсидии Правительства Пермского края, соглашение № С-26/631 от 19.12.2012.
ЛИТЕРАТУРА
1. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. Российские рекомендации, V пересмотр. Российский кардиологический журнал. 2012; 4 (Приложение).
2. Титов В.Н. Жирные кислоты, липиды (транспортные формы жирных кислот) и аполипопротеины (липидпереносящие макромолекулы) - единая функциональная система. Клиническая и лабораторная диагностика. 2007; 1: 3-9.
3. Higazi A.A., Nassar T., Ganz T., Rader D.J., Udassin R., Bdeir K. et al. The alpha-defensins stimulate proteoglycan-dependent catabolism of low-density lipoprotein by vascular cells: a new class of inflammatory apolipoprotein and a possible contributor to atherogenesis. Blood. 2000; 96(4): 1393-8.
4. Туев А.В., Мишланов В.Ю. Способ диагностики прогрессирующей стенокардии у больных ишемической болезнью сердца. Патент РФ № 2194995 от 20.12.2002.
5. Мишланов В.Ю., Туев А.В., Шутов А.А., Байдина Т.В., Сюткина О.В., Обухова О.В. Метод липидвысвобождающей способности лейкоцитов в диагностике механизмов атерогенеза у больных
ишемической болезнью сердца и атеротромботическим вариантом мозгового инсульта. Клиническая лабораторная диагностика. 2006; 5: 9-12.
6. Wehkamp J., Fellermann K., Herrlinger K.R., Bevins C.L., Stange E.F. Mechanisms of disease: defensins in gastrointestinal diseases. Nat. Clin. Pract. Gastroenterol. Hepatol. 2005; 2(9): 406-15.
7. Hattar K., Franz K., Ludwig M. et al. Interactions between neutrophils and NSCLC cells in vitro effects on neutrophil inflammatory mediator generation and tumour cell proliferation. J. Clin. Oncol. 2009; (Suppl.): abstr. e22148.
8. Hattar K., Heygster D., Eul B., Banat A., Fink L., Draing C. et al. Amplification of LPS and LTA induced cytokine synthesis in NSCLC/ neutrophil co-cultures. J. Clin. Oncol. 2008; (Suppl.): abstr. e22198.
REFERENCES
1. Lipid metabolism management for atherosclerosis prophylaxis and treatment. Russian recommendation, V edition. Rossiskiy kardiologicheskii zhurnal. 2012; 4 (Suppl.). (in Russian)
2. Titov V.N. Lipid acids, lipids (lipid acids transport forms) and apo-lipoproteins (lipid caring molecules) - one functional system. Klin-icheskaja laboratornaja diagnostika. 2007; 1: 3-9. (in Russian)
3. Higazi A.A., Nassar T., Ganz T., Rader D.J., Udassin R., Bdeir
K. et al. The alpha-defensins stimulate proteoglycan-dependent catabolism of low-density lipoprotein by vascular cells: a new class of inflammatory apolipoprotein and a possible contributor to atherogenesis. Blood. 2000; 96(4): 1393-8.
4. Tuev A.V., Mishlanov V.Ju. The method of progressive stenocardia diagnosis in the heart coronary disease patients. Patent RF № 2194995, 2002. (in Russian)
5. Mishlanov V.Ju., Tuev A.V., Shutov A.A., Baydina T.V., Syutkina O.V., Obukhova O.V. Method lipid-releasing leukocytes ability in the diagnosis of mechanisms atherosclerosis in patients with coronary heart disease and variant atherothrombotic stroke. Klinicheskaja laboratornaja diagnostika. 2006; 5: 9-12. (in Russian)
6. Wehkamp J., Fellermann K., Herrlinger K.R., Bevins C.L., Stange E.F. Mechanisms of disease: defensins in gastrointestinal diseases. Nat. Clin. Pract. Gastroenterol. Hepatol. 2005; 2(9): 406-15.
7. Hattar K., Franz K., Ludwig M. et al. Interactions between neutrophils and NSCLC cells in vitro effects on neutrophil inflammatory mediator generation and tumour cell proliferation. J. Clin. Oncol. 2009; (Suppl.): abstr. e22148.
8. Hattar K., Heygster D., Eul B., Banat A., Fink L., Draing C. et al. Amplification of LPS and LTA induced cytokine synthesis in NSCLC/ neutrophil co-cultures. J. Clin. Oncol. 2008; (Suppl.): abstr. e22198.
Поступила 02.10.13
© ОСОЧУК С.С., МАРцИНКЕВИЧ А.Ф., 2014 УДК 612.111.1:796.071].083
Осочук С.С., Марцинкевич А.Ф.
липидный состав мембран эритроцитов у спортсменов циклических видов спорта
Витебский государственный медицинский университет Минздрава Республики Беларусь, 210023, Витебск
Исследован состав липидов мембран эритроцитов у спортсменов циклических видов спорта с квалификацией от 1-го взрослого разряда до мастера спорта и лиц, не занимающихся спортом. Проведен количественный и качественный анализ фосфолипидных фракций и жирно-кислотного спектра сфингомиелина (СФМ) и фосфатидилхолина (ФХ). У спортсменов статистически значимо увеличено количество СФМ и ФХ, а также процентное содержание ФХ и снижено процентное содержание фосфатидилэтаноламина (ФЭА). Отношение СФМ/ФХ было ниже на 52,3%. В жирно-кислотном спектре СФМ и ФХ спортсменов оказалось сниженным процентное содержание С14:0 и С16:0, в ФХ отмечено увеличение содержания С16:1, в СФМ увеличилось содержание С18:3. Отношение сумм насыщенных к полиненасыщенным жирным кислотам (ПНЖК) было ниже у спортсменов. Полученные результаты говорят о существенных изменениях в мембранах эритроцитов, обусловленных регулярными физическими нагрузками и, вероятно, способствующих росту функциональной активности.
Ключевые слова: мембрана эритроцита; фосфолипиды; спорт. S.S. Osotchuk, A.F. Martsinkevitch
THE LIPID COMPOSITION OF MEMBRANES OF ERYTHROCYTES IN ATHLETES OF CYCLIC TYPES OF SPoRT
The Vitebsk state medical university of Minzdrav of Republic of Belarus, 210023 Vitebsk, Republic of Belarus
The lipid composition of membranes of erythrocytes in athletes of cyclic types of .sport with qualification from first adult class to Master of Sports and persons doing no sports was analyzed. The qualitative and quantitative analysis ofphospholipid fractions and fatty-acid specter of sphingomyelin and phosphatidylcholine was implemented. In athletes, amount of sphingomyelin and phosphatidylcholine and percentage content of phosphatidylcholine were significantly increased. The percentage content of kefalin was also decreased. The ratio of sphingomyelin/phosphatidylcholine was lower on 52.3%. In fatty-acid specter of sphingomyelin and phosphatidylcholine of athletes the percentage of C14:0 and C16:0 was decreased. In phosphatidylcholine increase of content of C16:1 was noted and in sphingomyelin content of C18:3 was increased. The ratio of sums of saturated fatty acids/ polyunsaturated fatty acids were lower in athletes. The study results testify significant alterations in membranes of erythrocytes caused by regular physical loads and probably favoring increase of functional activity.
Keywords: membrane of erythrocyte; phospholipid; sport.
Для корреспонденции:
Осочук Сергей Стефанович, д-р мед. наук, проф., зав. ЦНИЛ Адрес: 210023, Витебск, пр. Фрунзе, 27 E-mail: [email protected]
